劉 靜，張 瑞，李冠青，史永紅,3

(1.河北醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，河北 石家莊 050017;2.開灤總醫(yī)院腎內(nèi)科，河北 唐山 063000;3.河北省腎臟病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 050017)

SRT1720對(duì)高糖誘導(dǎo)的小鼠系膜細(xì)胞凋亡的影響

劉 靜1,2，張 瑞1，李冠青1，史永紅1,3

(1.河北醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，河北 石家莊 050017;2.開灤總醫(yī)院腎內(nèi)科，河北 唐山 063000;3.河北省腎臟病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 050017)

目的 觀察Sirt1激活劑SRT1720對(duì)高糖誘導(dǎo)的小鼠腎小球系膜細(xì)胞凋亡的作用。方法 體外培養(yǎng)小鼠腎小球系膜細(xì)胞，隨機(jī)分為正常糖組、正常糖+甘露醇組、高糖組及高糖+SRT1720組。采用原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)活性氧簇(ROS)產(chǎn)生；Western blot檢測(cè)caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK、Sirt1、p53、乙?；痯53及細(xì)胞色素C的表達(dá)；實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)Bax和Bcl-2 mRNA的表達(dá)。結(jié)果 與正常糖對(duì)照組相比，高糖組系膜細(xì)胞ROS產(chǎn)生和細(xì)胞凋亡明顯增加，cleaved caspase-3、p-p38 MAPK和乙?；痯53表達(dá)增高、Bax/Bcl-2比率明顯升高、Sirt1表達(dá)下降以及細(xì)胞色素C易位。SRT1720干預(yù)能夠明顯抑制高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞凋亡和ROS產(chǎn)生；下調(diào)cleaved caspase-3、乙酰化p53和p-p38 MAPK的表達(dá)；上調(diào)Sirt1的表達(dá)；減少Bax/Bcl-2比率和細(xì)胞色素C 易位。結(jié)論 SRT1720能夠抑制高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞凋亡，可能是通過減少ROS產(chǎn)生、保護(hù)線粒體功能、抑制p53乙?；约皃38MAPK信號(hào)通路激活而實(shí)現(xiàn)的。

SRT1720；小鼠腎小球系膜細(xì)胞；凋亡；氧化應(yīng)激；沉默信息調(diào)節(jié)因子2 相關(guān)酶1；p53

隨著人均壽命的延長(zhǎng)和生活習(xí)慣的改變，糖尿病(diabetes mellitus, DM)發(fā)病率逐年增加。糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥。腎小球系膜細(xì)胞的凋亡在DN發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用，其造成的系膜細(xì)胞缺失是導(dǎo)致糖尿病腎損傷的重要機(jī)制之一[1-2]。高糖(high glucose, HG)可通過誘導(dǎo)活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的產(chǎn)生，促進(jìn)腎小球系膜細(xì)胞凋亡[1]。我們的前期研究表明，抗氧化肽SS-31能夠明顯抑制高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞ROS產(chǎn)生以及細(xì)胞凋亡[3]。研究表明，腎臟特異性過表達(dá)沉默信息調(diào)節(jié)因子2 相關(guān)酶1 (silent mating type information regulation 2 homolog 1，Sirt1)能夠抑制順鉑引起的腎臟ROS產(chǎn)生[4]。Sirt1激活劑白藜蘆醇能夠抑制糖尿病腎臟細(xì)胞氧化應(yīng)激以及細(xì)胞凋亡[5]。SRT1720是一種Sirt1的激活劑，其在體內(nèi)的代謝時(shí)間比白藜蘆醇更長(zhǎng),它與Sirt1 之間的結(jié)合能力是白藜蘆醇的1 000倍左右[6]。研究表明，SRT1720對(duì)缺血/再灌注引起的腎臟細(xì)胞凋亡具有明顯保護(hù)作用[7]。然而，SRT1720對(duì)HG誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞凋亡的作用，還未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在探討SRT1720對(duì)HG誘導(dǎo)的小鼠腎小球系膜細(xì)胞凋亡的作用以及相關(guān)作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 小鼠系膜細(xì)胞(CRL-1927)來自美國(guó)菌種保藏中心(Manassas, VA)。D-glucose和Mannitol為Sigma公司產(chǎn)品；兔抗caspase-3、cleaved caspase-3、p38 MAPK和p-p38 MAPK為美國(guó)Cell Signaling公司產(chǎn)品；兔抗Sirt1、Bax、Bcl-2、p53、acetylated p53和細(xì)胞色素C抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；TUNEL試劑盒為美國(guó)Promega公司產(chǎn)品；SRT1720購(gòu)自美國(guó)Selleckchem公司；辣根酶標(biāo)記羊抗兔IgG購(gòu)自北京中杉金橋公司；聚偏二氟乙烯膜(PVDF)為美國(guó)Millipore公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和分組刺激實(shí)驗(yàn) 以含5%胎牛血清、2 mmol·L-1L-谷氨酰胺、100 kU·L-1青霉素和100 mg·L-1鏈霉素的DMEM-F12(3 ∶1)培養(yǎng)基，5% CO2、37℃培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞。待MMCs達(dá)75%～85%融合后，用無血清培養(yǎng)基同步24 h。將細(xì)胞分成4組： 正常糖組(5.6 mmol·L-1葡萄糖，NG)、正常糖+甘露醇組(5.6 mmol·L-1葡萄糖+24.4 mmol·L-1甘露醇,M)、高糖組(30 mmol·L-1葡萄糖，HG)、高糖+SRT1720組(30 mmol·L-1葡萄糖+10 μmol·L-1SRT1720, HG+SRT)。于刺激的不同時(shí)間收集細(xì)胞，進(jìn)行以下觀察。

1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 收集上清及貼壁細(xì)胞，用PBS洗2次，用體積分?jǐn)?shù)0.70的乙醇4℃固定24 h，PBS洗2次，碘化丙啶避光染色30 min，流式細(xì)胞儀觀察。

1.2.3 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP缺口標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 MMCs接種于8孔Lab-Tek?腔室玻片(美國(guó)Nalge Nunc公司)上，分組刺激48 h。根據(jù)說明書使用DeadEndTM熒光TUNEL系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)每個(gè)高倍視野中陽性染色細(xì)胞數(shù)和總細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞百分比。

1.2.4 Western blot檢測(cè) 細(xì)胞用冰冷PBS洗2遍，加入細(xì)胞裂解液(25 mmol·L-1Tris-HCl, 10 mmol·L-1EDTA，體積分?jǐn)?shù)0.01 NP-40，150 mmol·L-1氯化鈉，質(zhì)量濃度1 g·L-1苯甲基磺酰氟), 冰浴1 h，4 ℃、14 000 r·min-1離心25 min，Lowry法測(cè)定上清液蛋白濃度。分離線粒體和不含線粒體的胞質(zhì)蛋白。不含線粒體的胞質(zhì)蛋白用于檢測(cè)細(xì)胞色素C。細(xì)胞裂解蛋白50 μg，經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝膠電泳后，電轉(zhuǎn)移至PVDF膜；5%脫脂奶粉封閉PVDF膜2 h，分別加入caspase-3、cleaved caspase-3、p38 MAPK、p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2、p53、acetylated p53以及細(xì)胞色素C抗體，4℃過夜，洗膜后，加辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔抗體(1 ∶5 000稀釋)，37 ℃孵育1.5 h；洗膜后加ECL試劑。采用ODYSSEY雙色紅外激光成像系統(tǒng)(美國(guó)LICOR公司)掃描。用美國(guó)UVP公司LabWorks 4.5分析系統(tǒng)軟件對(duì)Western blot條帶進(jìn)行定量分析。

1.2.5 實(shí)時(shí)定量PCR(real-time PCR)檢測(cè) TRIzol法提取系膜細(xì)胞總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。所用引物均由上海生工生物技術(shù)公司合成。Bcl-2引物序列，正義5′-GGCGGAGAACAGGGTACGATAAC-3′, 反義5′-CGGGATGCGGCTGGATGGGG-3′；Bax引物序列，正義5′-GCTTGCTTCAGGGTTTCATCCA-3，反義5′-TGTCCACGGCGGCAATCATC-3′；18S rRNA引物序列，正義5′-ACACGGACAGGATTGACAGA-3′，反義5′-GGACATCTAAGGGCATCACAG-3′。擴(kuò)增條件為：預(yù)變性 95°C 30 s，進(jìn)入循環(huán)，95 ℃ 5 s，57～59 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)。以18S rRNA作為內(nèi)參照校正，用2-△△Ct法分析基因的相對(duì)表達(dá)。

1.2.6 FCM檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS 使用熒光探針5-(6)-羧基-2 ,7 -二氯熒光素(CM-DCHF-DA, Invitrogen) 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS含量。MMCs接種于6孔板內(nèi)，分組刺激48 h，洗滌細(xì)胞，胰酶消化，懸浮于PBS，最后加入含 10 μmol·L-1DCHF-DA的染液，37 ℃避光孵育30 min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 SRT1720對(duì)高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞凋亡的影響 TUNEL和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，與NG組相比，在高糖刺激48 h，小鼠系膜細(xì)胞凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增加(P<0.01)；與HG組相比，SRT1720干預(yù)能夠明顯減少高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡數(shù)(P<0.05，F(xiàn)ig 1)。此外，與正常對(duì)照組相比，滲透壓(甘露醇)對(duì)細(xì)胞凋亡無明顯影響。

2.2 SRT1720對(duì)高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞凋亡相關(guān)分子表達(dá)的影響 與NG組相比，HG糖組cleaved caspase-3表達(dá)和Bax/Bcl-2蛋白和mRNA比率明顯增加(P<0.01)；SRT1720干預(yù)能夠明顯抑制HG誘導(dǎo)的 cleaved caspase-3表達(dá)和Bax/Bcl-2蛋白和mRNA比率(P<0.05，F(xiàn)ig 2)。此外，甘露醇對(duì)系膜細(xì)胞cleaved caspase-3表達(dá)和Bax/Bcl-2蛋白和mRNA比率無明顯影響。

2.3 SRT1720對(duì)HG誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞線粒體細(xì)胞色素C釋放的影響 亞細(xì)胞提取物的Western blot結(jié)果顯示，HG刺激系膜細(xì)胞48 h，與正常糖對(duì)照組相比，高糖組胞質(zhì)中的細(xì)胞色素C水平明顯增加(P<0.01)；與高糖組相比，SRT1720干預(yù)組細(xì)胞胞質(zhì)中細(xì)胞色素C水平明顯降低(P<0.05，F(xiàn)ig 3)。甘露醇組與正常對(duì)照組相比，胞質(zhì)中細(xì)胞色素C水平無明顯差異。

2.4 SRT1720對(duì)HG誘導(dǎo)系膜細(xì)胞p53乙?；挠绊?在高糖刺激的48 h，與NG組相比，HG組乙?；痯53水平明顯升高(P<0.01)；與高糖組相比，SRT1720干預(yù)組乙酰化p53水平明顯降低(P<0.05，F(xiàn)ig 4)。甘露醇組與正常對(duì)照組相比，乙?；痯53水平無明顯差異。

Fig 1 Effect of SRT1720 on HG-induced apoptosis in MMCs(n=6)

Apoptosis was detected by TUNEL(A) and flow cytometry(B). NG: 5.6 mmol·L-1glucose; M: 5.6 mmol·L-1glucose+24.4 mmol·L-1mannitol; HG: 30 mmol·L-1glucose; HG+SRT: 30 mmol·L-1glucose+10 μmol·L-1SRT1720.**P<0.01vsNG;#P<0.05vsHG

2.5 SRT1720對(duì)HG誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞Sirt1表達(dá)以及ROS產(chǎn)生的影響 與NG組相比，HG組Sirt1蛋白水平表達(dá)明顯降低(P<0.01)；SRT1720干預(yù)能夠增加高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞Sirt1蛋白的表達(dá)(P<0.05，F(xiàn)ig 5A)。與NG組相比，高糖組系膜細(xì)胞ROS產(chǎn)生明顯升高(P<0.01)；SRT1720干預(yù)能夠明顯減少高糖誘導(dǎo)的ROS產(chǎn)生(P<0.05，F(xiàn)ig 5B)。與正常對(duì)照組相比，甘露醇對(duì)系膜細(xì)胞Sirt1表達(dá)和ROS產(chǎn)生無明顯影響。

Fig 2 Effect of SRT1720 on HG-induced activation of caspase-3 and expression of Bax and Bcl-2 in MMCs(n=6)

A:The protein expression of cleaved caspase-3, Bax and Bcl-2 was detected by Western blot; B: The mRNA expression of Bax and Bcl-2 was detected by real-time PCR. NG: 5.6 mmol·L-1glucose; M: 5.6 mmol·L-1glucose+24.4 mmol·L-1mannitol; HG: 30 mmol·L-1glucose; HG+SRT: 30 mmol·L-1glucose+10 μmol·L-1SRT1720.**P<0.01vsNG;#P<0.05vsHG

Fig 3 Effect of SRT1720 on HG-induced release of cytochrome C from mitochondria to cytoplasm in MMCs(n=6)

NG:5.6 mmol·L-1glucose; M:5.6 mmol·L-1glucose+24.4 mmol·L-1mannitol; HG: 30 mmol·L-1glucose; HG+SRT: 30 mmol·L-1glucose+10 μmol·L-1SRT1720.**P<0.01vsNG;#P<0.05vsHG

Fig 4 Effect of SRT1720 on HG-induced acetylated p53(Ac-p53) in MMCs(n=6)

NG: 5.6 mmol·L-1glucose; M: 5.6 mmol·L-1glucose+24.4 mmol·L-1mannitol; HG: 30 mmol·L-1glucose; HG+SRT: 30 mmol·L-1glucose+10 μmol·L-1SRT1720.**P<0.01vsNG;#P<0.05vsHG

Fig 5 Effect of SRT1720 on HG-induced Sirt1 expression and ROS production in MMCs(n=6)

A: The protein expression of Sirt1 was detected by Western blot; B: Intracellular ROS was detected by flow cytometry. NG: 5.6 mmol·L-1glucose; M: 5.6 mmol·L-1glucose+24.4 mmol·L-1mannitol; HG: 30 mmol·L-1glucose; HG+SRT: 30 mmol·L-1glucose+10 μmol·L-1SRT1720.**P<0.01vsNG;#P<0.05vsHG

2.6 SRT1720對(duì)HG誘導(dǎo)系膜細(xì)胞p38 MAPK激活的影響 在高糖刺激的48 h，與NG組相比，HG組p38 MAPK的磷酸化水平明顯升高(P<0.01)；與高糖組相比，SRT1720干預(yù)組p38 MAPK磷酸化水平明顯降低(P<0.05，F(xiàn)ig 6)。甘露醇組與正常對(duì)照組相比，p38 MAPK磷酸化水平無明顯差異。

3 討論

研究表明[8]，在糖尿病時(shí)，腎臟蓄積的大量ROS參與了糖尿病腎病的發(fā)病過程。系膜細(xì)胞是腎小球中的固有細(xì)胞之一，系膜細(xì)胞的凋亡在糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。研究表明，實(shí)驗(yàn)性糖尿病腎病腎小球固有細(xì)胞數(shù)量可通過細(xì)胞凋亡而減少，并且腎小球系膜細(xì)胞凋亡數(shù)與蛋白尿的程度密切相關(guān)[9]。高糖能夠明顯誘導(dǎo)體外培養(yǎng)系膜細(xì)胞的凋亡，而抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸、二亞苯基碘及維生素C能夠明顯抑制高糖誘導(dǎo)的小鼠系膜細(xì)胞的凋亡[1]。我們的研究也證實(shí)，抗氧化肽SS-31以及抗氧化劑tempol均能夠抑制高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞凋亡[3,10]。以上提示，氧化應(yīng)激參與了糖尿病狀態(tài)下腎臟系膜細(xì)胞的凋亡。

Fig 6 Effect of SRT1720 on HG-induced activation of p38 MAPK in MMCs(n=6)

NG: 5.6 mmol·L-1glucose; M: 5.6 mmol·L-1glucose+24.4 mmol·L-1mannitol; HG: 30 mmol·L-1glucose; HG+SRT: 30 mmol·L-1glucose+10 μmol·L-1SRT1720.**P<0.01vsNG;#P<0.05vsHG

Sirt1為哺乳動(dòng)物Sirtuins家族成員之一，是一種依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的去乙?；?，在人組織中廣泛表達(dá), 參與了細(xì)胞的生存、衰老、凋亡和代謝等生物學(xué)過程。研究表明，Sirt1的激活劑白藜蘆醇具有明顯的抗氧化功能[11]。以往的研究已證實(shí)，Sirt1與糖尿病腎病密切相關(guān)。腎小管細(xì)胞過表達(dá)Sirt1能夠改善糖尿病動(dòng)物的蛋白尿[12]。白藜蘆醇通過激活Sirt1對(duì)2型糖尿病小鼠腎臟具有明顯保護(hù)作用[5]。本研究結(jié)果顯示， Sirt1的激活劑SRT1720能夠明顯提高HG誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞Sirt1表達(dá)，抑制HG誘導(dǎo)的MMCs內(nèi) ROS產(chǎn)生、細(xì)胞凋亡、cleaved caspase-3表達(dá)、Bax/Bcl-2比率和細(xì)胞色素C的易位。這些結(jié)果表明，SRT1720抑制HG誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞凋亡可能是通過增加Sirt1表達(dá)、減少ROS和保護(hù)線粒體功能實(shí)現(xiàn)的。

p53是一個(gè)重要的抑癌基因，它可以通過乙?；せ?，激活的p53能夠誘導(dǎo)多種基因表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯或凋亡。Sirt1過表達(dá)能夠通過抑制p53的乙?；?，減少過氧化氫誘導(dǎo)的小鼠系膜細(xì)胞的凋亡[13]。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，Sirt1能夠直接和p53蛋白結(jié)合，從而抑制p53的乙?；约凹?xì)胞凋亡[14]。本研究結(jié)果顯示，高糖刺激系膜細(xì)胞48 h，細(xì)胞內(nèi)p53乙?；矫黠@升高，而SRT1720干預(yù)能夠抑制高糖誘導(dǎo)的p53的乙?；Ｒ陨辖Y(jié)果提示，SRT1720抑制高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可能部分是通過調(diào)控p53的乙?；瘜?shí)現(xiàn)的。

p38蛋白激酶(p38 MAPK)為絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員，是一個(gè)重要的信號(hào)分子，參與調(diào)控包括細(xì)胞凋亡在內(nèi)的許多細(xì)胞功能。Jung等[15]的研究顯示，給予FR 167653(一種p38 MAPK抑制劑)，能夠改善糖尿病腎小球和HG誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞凋亡。阻斷p38 MAPK通路能夠減少HG誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞凋亡、cleaved、caspase-3表達(dá)、Bax/Bcl-2比率[10]。以上說明，p38 MAPK信號(hào)通路與系膜細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。本研究顯示，SRT1720能夠明顯抑制HG誘導(dǎo)的p38 MAPK的活化，提示SRT1720抑制HG誘導(dǎo)的MMCs凋亡可能部分是通過調(diào)節(jié)p38 MAPK通路活化實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，SRT1720能夠抑制高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞凋亡，這種作用可能是通過激活Sirt1,減少ROS產(chǎn)生，保護(hù)線粒體功能，抑制p53乙?；约皃38 MAPK信號(hào)通路激活而實(shí)現(xiàn)的。

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Influence of SRT1720 on apoptosis of high glucose-induced mouse mesangial cells

LIU Jing1,2, ZHANG Rui1, LI Guan-qing1, SHI Yong-hong1,3
(1.DeptofPathology,HebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050017,China; 2.DeptofNephrology,KailuanGeneralHospital,TangshanHebei063000,China;3.HebeiKeyLabofKidneyDiseases,Shijiazhuang050017,China)

Aim To investigate the effect of Sirt1 activator SRT1720 on high glucose(HG)-induced apoptosis in mouse mesangial cells(MMCs).Methods Cultured mouse MMCs were divided into normal glucose group(NG), NG plus mannitol group(M), high glucose group(HG), HG plus SRT1720 group(HG+SRT). Apoptosis of MMCs was analyzed by DeadEndTMFluorometric TUNEL System and flow cytometry. Reactive oxygen species(ROS) production was observed by flow cytometry. The expression levels of caspase-3, cleaved caspase-3, Bax, Bcl-2, p38 MAPK, p-p38 MAPK, p53, acetylated p53 and cytochrome C protein were observed by Western blot. The mRNA levels of Bax and Bcl-2 were detected by real-time PCR. Results Compared with normal glucose group, the production of ROS, the number of cell apoptosis, the expression of cleaved caspase-3, p-p38 MAPK and acetylated p53 and ratio of Bax/Bcl-2 were significantly increased, the expression of Sirt1 was decreased, meanwhile, the release of cytochrome C from mitochondria to cytoplasm was significantly increased in MMCs in high glucose group. Treatment with SRT1720 inhibited HG-induced increase of ROS production, cell apoptosis, expression of cleaved caspase-3, acetylated p53 and p-p38 MAPK, ratio of Bax/Bcl-2 and release of cytochrome C, and reversed HG-induced Sirt1 expression.Conclusion SRT1720 could prevent HG-induced apoptosis maybe by decreasing ROS production, preserving mitochondrial function and inhibiting p53 acetylation and activation of p38 MAPK in MMCs.

SRT1720; mouse mesangial cells; apoptosis; oxidative stress; Sirt1; p53

2017-05-10,

2017-06-12

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81370825，81470966)

劉 靜(1977-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：腎臟病學(xué)，E-mail: lj_ts@sohu.com； 史永紅(1970-)，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：腎臟病理學(xué)，通訊作者，E-mail: yonghongshi@163.com

時(shí)間：2017-7-7 11:05 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170707.1104.048.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.08.024

A

1001-1978(2017)08-1164-06

R-332；R322.61；R329.25；R587.2；R977.3