柴惠霞

無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測在產(chǎn)前診斷中的臨床應用價值分析

柴惠霞

目的 分析無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測在產(chǎn)前診斷中的臨床應用價值，探討其臨床適用性。方法 選擇從2015-01—2016-12于某院行產(chǎn)前檢查的1 000例血清學產(chǎn)前篩查高風險，血清學篩查臨界風險及高齡孕婦患者作為研究組，采用無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測手段進行進一步篩查，對于檢查結果陽性的孕婦進行羊水穿刺細胞染色體核型分析；另選擇從2015-01—2016-12于某院行羊水細胞染色體核型分析的血清學產(chǎn)前篩查高風險，血清學篩查臨界風險及高齡孕婦1 000例作為對照組。觀察兩組患兒檢出率情況。結果 研究組500例孕婦中，共有450例孕婦同意進行產(chǎn)前診斷，產(chǎn)前診斷參與率為90.0%(450/500)，胎兒染色體非整倍體異常9例，占1.8%(9/500)，其中胎兒染色體非整倍體異常檢出8例，漏診1例，檢出率為88.9%(8/9)；所有孕婦同時采用無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測方法進行篩查，共有8名孕婦檢測結果陽性，其中21-三體綜合征異常胎兒6例，與羊水穿刺細胞染色體核型分析結果完全一致(100%)，18-三體綜合征異常胎兒2例，同樣與羊水穿刺細胞染色體核型分析結果完全一致(100%)。僅1例無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測陽性高齡產(chǎn)婦拒絕產(chǎn)前診斷，漏診1例21-三體綜合征異常胎兒；無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測方法敏感度為100%(8/8)，特異度為99.8%(499/500)，假陽性率為0.2%(1/500)，假陰性率為0。對照組500例孕婦中，共有440例孕婦同意進行產(chǎn)前診斷，產(chǎn)前診斷參與率為88.0%(440/500)；胎兒染色體非整倍體異常9例，占1.8%(9/500)，其中胎兒染色體異常診斷結果7例，漏診2例，檢出率為77.8%(7/9)。21-三體綜合征異常胎兒6例，18-三體綜合征異常胎兒1例。1例高齡產(chǎn)婦拒絕產(chǎn)前診斷，漏診1例21-三體綜合征異常胎兒，1例高齡體外受精-胚胎移植孕婦拒絕產(chǎn)前診斷，漏診分娩1例21-三體綜合征異常胎兒。結論 無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測手段的診斷靈敏度高，可以適當降低漏診率，適合臨床應用。

無創(chuàng)；胎兒染色體非整倍體基因檢測；產(chǎn)前診斷

產(chǎn)前診斷是指在出生前對胚胎或胎兒的發(fā)育狀態(tài)、是否患有遺傳性疾病等方面進行檢測診斷[1]。產(chǎn)前診斷可以掌握先機，一方面對可治性疾病，選擇適當時機進行宮內治療；此外對不可治療性疾病，能夠做到知情選擇[2]。產(chǎn)前診斷目前在檢測染色體疾病異常中發(fā)揮主要作用，在所有的活產(chǎn)兒染色體異常疾病中，以21-三體綜合最為常見[3]。在妊娠期初期通過有創(chuàng)性診斷方法 (常見的絨毛取材術、羊膜腔穿刺術和經(jīng)皮臍血管穿刺)獲取胎兒細胞，進行染色體核型檢測[4]。由于產(chǎn)前診斷方法存在流產(chǎn)，感染等并發(fā)癥可能，因此對于大規(guī)模人群，通常先采用篩查方法，發(fā)現(xiàn)高風險人群，進一步建議采取有創(chuàng)性產(chǎn)前診斷[5]。但是目前用于篩查方法，主要是血清學篩查法，通過結合孕婦的血液生化指標、孕婦的預產(chǎn)期、體質量、年齡和孕周等指標通過公式計算生出唐氏患兒的危險系數(shù)。該檢查方法影響因素較多，計算出的風險值誤差較大，假陽性和漏診率很高[6]。無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測是近些年來興起的一種產(chǎn)前篩查方法，正在臨床逐漸推廣，許多醫(yī)師認為無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測是產(chǎn)前篩查較為可靠地檢查手段[7]。故此我院結合自身條件開展了無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測方法的敏感性研究，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇從2015-01—2016-12于我院行產(chǎn)前檢查的1 000例血清學產(chǎn)前篩查高風險，血清學篩查臨界風險及高齡孕婦患者，采用無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測手段進行進一步篩查，對于檢查結果陽性的孕婦進行羊水穿刺細胞染色體核型分析，作為研究組，孕婦年齡24～35歲，平均(28.2±2.8)歲，孕周12～23周，平均(20.6±1.4)周；另選擇從2015-01—2016-12于我院行羊水細胞染色體核型分析的血清學產(chǎn)前篩查高風險，血清學篩查臨界風險及高齡孕婦1 000例作為對照組，孕婦年齡25～35歲，平均(28.6±2.4)歲，孕周15～23周，平均(20.5±1.5)周。同時排除：多胎妊娠孕婦；合并嚴重肝腎等重要臟器功能障礙的孕婦；罹患先天性疾病的孕婦。入選該研究孕婦及家屬均對該項研究表示知情同意，研究已獲得院倫理委員會的批準。兩組孕婦年齡及孕周比較，差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 方法 無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測方法：晨起抽取孕婦外周靜脈血5 mL，EDTA管抗凝，輕微上下?lián)u晃采血管4次后及時將采血管放入4℃冰箱中暫存，8 h內在將樣本采血管在2～8℃條件下1 600 r/s離心10 min，取上清液置于無菌離心管中。取部分上清液再次離心10 min，取得檢測血清樣本。使用人外周血基因組DNA提取純化試劑盒(華大基因生物科技有限公司)提取血漿游離DNA，在DNA片段的末端加上特定的接頭，使用PCR儀擴增，進行環(huán)化反應后獲得對應樣本的DNA文庫，提取血漿中游離DNA庫后進行質控。通過Illumina Hiseq 2 500高通量測序儀進行檢測，采用生物信息學工具放大并分析外周血中不同染色體水平的差異，統(tǒng)計胎兒染色體非整倍體疾病的發(fā)生風險。

產(chǎn)前診斷采用羊水穿刺細胞染色體核型分析：在超聲引導下，采用經(jīng)腹壁穿刺抽取羊水20 mL，置于無菌BD管內保存，由院實驗室內進行細胞培養(yǎng)及收獲和制片，分析染色體核型。

1.3 觀察指標 觀察兩組患兒檢出率情況。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 13.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以α=0.05為標準，P＜0.05時，差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 研究組胎兒的檢出情況 研究組500例孕婦中，共有450例孕婦同意進行產(chǎn)前診斷，產(chǎn)前診斷參與率為90.0%(450/500)，胎兒染色體非整倍體異常9例，占1.8%(9/500)其中胎兒染色體非整倍體異常檢出8例，漏診1例，檢出率為88.9%(8/9)；所有孕婦同時采用無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測方法進行篩查，共有8名孕婦檢測結果陽性，其中21-三體綜合征異常胎兒6例，與羊水穿刺細胞染色體核型分析結果完全一致(100%)，18-三體綜合征異常胎兒2例，同樣與羊水穿刺細胞染色體核型分析結果完全一致(100%)。僅1例無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測陽性高齡產(chǎn)婦拒絕產(chǎn)前診斷，漏診1例21-三體綜合征異常胎兒；無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測方法敏感度為100%(8/8)，特異度為99.8%(499/500)，假陽性率為0.2%(1/500)，假陰性率為0。具體無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測結果與羊水細胞染色體核型分析結果對比(表1)。

表1 無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測結果與羊水細胞染色體核型結果

2.2 對照組胎兒的檢出情況 對照組500例孕婦中，共有440例孕婦同意進行產(chǎn)前診斷，產(chǎn)前診斷參與率為88.0%(440/500)；胎兒染色體非整倍體異常9例，占1.8%(9/500)，其中胎兒染色體異常診斷結果7例，漏診2例，檢出率為77.8%(7/9)。21-三體綜合征異常胎兒6例，18-三體綜合征異常胎兒1例。1例高齡產(chǎn)婦拒絕產(chǎn)前診斷，漏診1例21-三體綜合征異常胎兒，1例高齡體外受精-胚胎移植孕婦拒絕產(chǎn)前診斷，漏診分娩1例21-三體綜合征異常胎兒。具體羊水細胞染色體核型分析結果(表2)。

表2 羊水細胞染色體核型結果

3 討論

產(chǎn)前診斷的目的不僅限于在出生前發(fā)現(xiàn)異常以便終止妊娠，事實上，產(chǎn)前診斷可以幫助臨床醫(yī)生能夠在胎兒出生前或出生后，把握適當?shù)臅r機對經(jīng)過產(chǎn)前診斷的胎兒或新生兒進行藥物或手術治療，其次可以給胎兒父母提供一個參考情況，能夠了解本次妊娠狀況，進而知情選擇[8]。目前產(chǎn)前診斷的方法主要是有創(chuàng)的產(chǎn)前診斷方法，臨床常見的是羊膜腔穿刺術，主要用于染色體異常的產(chǎn)前診斷。羊膜腔穿刺術是在孕16～22周時，在超聲引導下，抽取10～20 mL的富含胎兒脫落細胞羊水，進行胎兒染色體基因測序分析，來診斷21-三體綜合征和18-三體綜合征等染色體異常性疾病[9]。但是產(chǎn)前診斷因其有創(chuàng)，致流產(chǎn)，宮內感染等并發(fā)癥高風險，是引起診斷方法依從性低的主要原因[10]。采用無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測手段后，孕婦對產(chǎn)前診斷的依從性明顯升高，研究組500例孕婦中，共有450例孕婦同意進行產(chǎn)前診斷，產(chǎn)前診斷參與率為90.0%，明顯高于對照組，對照組500例孕婦中，共有440例孕婦同意進行產(chǎn)前診斷，產(chǎn)前診斷參與率為88.0%，但兩組人群的總產(chǎn)前診斷率差異無統(tǒng)計學意義，主要與納入的病例較少有關。產(chǎn)前依從性較低，對于染色體異常的檢出率也會降低，漏診率大大增高。在本次研究中可以發(fā)現(xiàn)研究組胎兒染色體非整倍體異常9例，占1.8%，其中胎兒染色體非整倍體異常檢出8例，漏診1例，檢出率為88.9%，漏診率為11.1%，而對照組胎兒染色體非整倍體異常9例，占1.8%，其中胎兒染色體異常診斷結果7例，漏診2例，檢出率為77.8%，漏診率22.2%，漏診率較高。

無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體檢測又稱無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測，根據(jù)國際權威學術組織美國婦產(chǎn)科醫(yī)師學院委員會指導認為，無創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測是應用最有效，最廣泛的技術名稱[11]。無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測技術僅需采取孕婦靜脈血，利用新一代DNA測序技術對母體外周血漿中的游離DNA片段(包含胎兒游離DNA)進行測序，并將測序結果進行生物信息分析，可以從中得到胎兒的遺傳信息，從而檢測胎兒是否患三大染色體疾病[12]。無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體檢測對孕婦和胎兒影響非常小，是大眾容易接受的關鍵性因素[13]。無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體檢測的主要現(xiàn)實依據(jù)是母體血漿中含有胎兒游離DNA。且胎兒染色體異常會帶來母體中DNA含量微量變化，通過深度測序及生物信息可分析檢測到該變化，為項目提供理論依據(jù)[14]。胎兒游離DNA主要來自胎盤，并在分娩后數(shù)小時內可以從母體血液中清除。在本次研究中研究組采用無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測方法進行篩查，共有8名孕婦檢測結果陽性，其中21-三體綜合征異常胎兒6例，與羊水穿刺細胞染色體核型分析結果完全一致(100%)，18-三體綜合征異常胎兒2例，同樣與羊水穿刺細胞染色體核型分析結果完全一致(100%)。無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測方法敏感度為100%(8/8)，特異度為99.8%(499/500)，假陽性率為0.2%(1/500)，假陰性率為0。結果可見無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體檢測的診斷靈敏度和特異性較強，臨床推廣價值較高。

目前無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體檢測手段的主要影響和擔憂的因素是胎兒游離DNA的濃度含量以及檢測的時效性。在臨床報道的檢測中出現(xiàn)的假陽性結果和檢測失敗的樣本大多數(shù)是由于胎兒游離DNA含量較少有關[15]。希望以后可以在方法學上通過進一步優(yōu)化生物信息學分析流程，可使無創(chuàng)基因檢測的準確率達到診斷要求，這將會是孕婦產(chǎn)前篩查的桃花源。

綜上所述，無創(chuàng)胎兒染色體非整倍體基因檢測手段的診斷靈敏度高，可以適當降低漏診率，適合臨床應用。

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Objective To analyze the clinical value of noninvasive fetal aneuploidy gene detection in prenatal diagnosis and to explore its clinical applicability.Methods 1 000 cases of prenatal high risk screening，the critical risk of serological screening and pregnant women above the average age for prenatal examination were selected from January 2015 to December 2016 in our hospital as the observation group.The method of non-invasive fetal chromosomal aneuploidy gene was used for further screening and Cerotype analysis of amniotic fluid cells were used in pregnant women with positive results.In addition，1 000 cases of prenatal high risk screening，the critical risk of serological screening and pregnant women above the average age were selected from January 2015 to December 2016 with Cerotype analysis of amniotic fluid cells in our hospital as the control group.The detection rate of the two groups was observed.Results 450 out of 500 cases of pregnant women in the observation group accepted prenatal diagnosis and the prenatal diagnosis participation rate was 90%(450/500).9 cases were found fetal chromosomal aneuploidy abnormal，accounting for 1.8%(9/500)，Among them，there were 8 cases of fetal chromosome aneuploidy abnormality and 1 cases was missed diagnosized，and the participation rate was 88.9%(8/9).All pregnant women were used noninvasive fetal chromosomal，aneuploidy detection method of gene screening，and a total of 8 pregnant women were tested positive，including 6 cases of tiresome 21-syndrome fetal abnormalities，consistent with chromosome cerotype analysis results of amniotic fluid puncture(100%)，2 cases of tiresome 18-syndrome fetal abnormalities，consistent with chromosome cerotype amniocentesis results(100%).Only 1 pregnant woman above the average age with non-invasive fetal chromosomal aneuploidy gene detection positive refused prenatal diagnosis，and 1 case of tiresome 21-abnormal fetus was missed diagnosed.The sensitivity of the detection method of non-invasive fetal aneuploidy gene was 100%(8/8)and the specificity was 99.8%(499/500).The false positive rate was 0.2%(1/500)and the false negative rate was about 0.440 out of 500 pregnant women in the control group，accepted prenatal diagnosis，and the participation rate of prenatal diagnosis was 88%(440/500).9 cases was found fetal chromosomal aneuploidy abnormal，accounting for 1.8%(9/500)，Among them，7 cases were diagnosed as fetal chromosome abnormality，and 1 patient was missed in the diagnosis of the disease.The detection rate was 77.8%(7/9).6 cases of tiresome 21-abnormal fetus and 1 case of 18-tiresome syndrome abnormal fetus were detected.1 case of pregnant woman above average age refused prenatal diagnosis，1 case of 21-tiresome syndrome abnormal fetus was missed in the diagnosis.1 case of pregnant woman above the average age undergoing in vitro fertilization and embryo transfer refused prenatal diagnosis and 1 case of 21-tiresome syndrome was missed and delivered.Conclusion With high diagnostic sensitivity，noninvasive fetal aneuploidy gene detection method can reduce the rate of missed diagnosis，and is suitable for clinical application.

Noninvasive；Detection of fetal chromosomal aneuploidy gene；Prenatal diagnosis

2017-03-17)

1005-619X(2017)07-0691-04

10.13517/j.cnki.ccm.2017.07.008

124008 遼河油田總醫(yī)院婦產(chǎn)科