何 娟，陳衍斌，許 剛，張曉紅，劉 峰△，聶西周

1.陜西國際商貿(mào)學(xué)院中藥研究院(咸陽712046 )，2.陜西步長制藥有限公司(咸陽712000 )，3.陜西中醫(yī)藥大學(xué)(咸陽712046)

頭痛寧膠囊治療頭痛的實(shí)驗(yàn)研究*

何 娟1，2，陳衍斌2，許 剛2，張曉紅2，劉 峰1，2△，聶西周3

1.陜西國際商貿(mào)學(xué)院中藥研究院(咸陽712046 )，2.陜西步長制藥有限公司(咸陽712000 )，3.陜西中醫(yī)藥大學(xué)(咸陽712046)

目的：進(jìn)行頭痛寧膠囊治療頭痛的實(shí)驗(yàn)研究。方法：通過熱板實(shí)驗(yàn)、扭體反應(yīng)等方法考察頭痛寧膠囊對小鼠疼痛的影響；建立急性不完全性腦缺血模型，考察頭痛寧膠囊對大鼠腦組織含水量的影響；考察頭痛寧膠囊對去甲腎上腺素和5-HT引起大鼠離體腦基底動(dòng)脈收縮的影響。結(jié)果：頭痛寧膠囊高、中劑量組能夠顯著降低熱板所致小鼠疼痛反應(yīng)；頭痛寧膠囊各劑量組均顯著降低醋酸所致小鼠扭體次數(shù)，具有明顯鎮(zhèn)痛作用；頭痛寧膠囊顯著降低腦缺血模型大鼠腦組織含水量；對去甲腎上腺素、5-羥色胺引起的大鼠腦基底動(dòng)脈收縮有明顯的抑制作用。結(jié)論：頭痛寧膠囊具有明顯鎮(zhèn)痛作用，可用于各類頭痛的治療。

偏頭痛、緊張性頭痛以頭痛暴作、疼痛劇烈、或左或右、反復(fù)發(fā)作為特征的一種臨床常見病、多發(fā)病，屬于中醫(yī)學(xué)“頭風(fēng)”、“偏頭痛”范疇。疾病可發(fā)生在任何年齡，發(fā)病率約37%～78%，女性發(fā)病率較高。本病發(fā)作劇烈，遷延難愈，因而被歷代醫(yī)家視為疑難病癥。目前，偏頭痛、緊張性頭痛的發(fā)病機(jī)制和病因尚不明確，與神經(jīng)遞質(zhì)代謝紊亂、顱周肌肉、心理因素、缺血、炎性介質(zhì)釋放增多等均有一定關(guān)系[1-2]。頭痛寧膠囊由土茯苓、天麻、制首烏等六味藥材組成，具有熄風(fēng)滌痰，逐瘀止痛的功效，用于偏頭痛、緊張性頭痛屬痰瘀阻絡(luò)證，證見：痛勢甚劇，或攻沖作痛，或痛如錐刺，或連及目齒，伴目眩畏光，胸悶脘脹，惡心嘔吐，急躁易怒，反復(fù)發(fā)作。多年臨床實(shí)踐證明頭痛寧膠囊在治療各類頭痛均療效確切，安全性高，為進(jìn)一步明確頭痛寧膠囊治療頭痛的藥理作用及其機(jī)制，本研究對其進(jìn)行了藥效學(xué)方面的實(shí)驗(yàn)研究，為臨床合理應(yīng)用提供依據(jù)。

材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，雌雄兼用，體重18～22 g；SD大鼠，雌雄兼用，體重180～220 g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(軍)2012-0007。

2 試藥與儀器 頭痛寧膠囊(國藥準(zhǔn)字：20150914)、對乙酰氨基酚片(批號(hào)為141003)、鹽酸氟桂利嗪膠囊(西比靈，批號(hào)為130613770)、去甲腎上腺素(NE，分析純，美國Sigma 公司)、5-羥色胺(5-HT，分析純，美國Sigma 公司)、0.9%氯化鈉注射液(生理鹽水)，乙酸(分析純，99.5%)。熱板儀(RB-200，成都泰盟軟件有限公司)、電熱恒溫干燥箱(WHL-25AB，天津市泰斯特儀器有限公司)、電子天平(DV215CD，德國梅特勒公司)、八道生理記錄儀及其附件(RM-6000，日本NIHON KOHDEN公司)、等長張力換能器(TB-612T，日本NIHON KOHDEN公司)。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

3.1.1 對熱板所致小鼠疼痛的影響:選取實(shí)驗(yàn)用小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前1 d，將小鼠放在熱板儀上(溫度55 ℃)，挑選舔后足時(shí)間合格的小鼠(痛閾值處于5～30 s)，篩選供實(shí)驗(yàn)用小鼠80只。將小鼠隨機(jī)分成5組，每組16只，即頭痛寧膠囊低、中、高劑量組、空白對照組(生理鹽水)、陽性對照組(對乙酰氨基酚)。頭痛寧膠囊低、中、高三個(gè)劑量組分別灌胃給藥0.105 g/kg、0.21 g/kg、0.42 g/kg，空白對照組給予等體積的生理鹽水，陽性對照組選用對乙酰氨基酚為對照藥，劑量為0.2 mg /10 g。于給藥后30 min、60 min分別測定小鼠舔后足的時(shí)間。

3.1.2 對醋酸所致小鼠扭體的影響:取小鼠50只，體重18～22 g，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，每組10只，頭痛寧膠囊低、中、高三個(gè)劑量組分別灌胃給藥0.105 g/kg、0.21 g/kg、0.42 g/kg，陽性對照組給予0.2 mg/10g對乙酰氨基酚，空白對照組給予等體積的生理鹽水。每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7 d，末次給藥后30 min，給小鼠腹腔注射0.6 %冰醋酸溶液(臨用前配置)0.1 ml/10g，觀察并記錄注射醋酸溶液后20 min內(nèi)小鼠首次出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間和小鼠的扭體次數(shù)。

3.2 頭痛寧膠囊對大鼠腦組織含水量的影響:取健康SD大鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分成6組，每組10只。頭痛寧膠囊低、中、高三個(gè)劑量組分別灌胃給藥0.21 g/kg、0.42 g/kg、0.84 g/kg；陽性對照組選用西比靈為對照藥，劑量為0.332 mg/kg；假手術(shù)組和模型組分別給予等體積的生理鹽水，給藥體積皆為1 ml/100 g，連續(xù)給藥10 d，于第11天給藥后1 h，乙醚麻醉，打開大鼠頸部，結(jié)扎大鼠兩側(cè)頸總動(dòng)脈，形成急性不完全性腦缺血模型，假手術(shù)組不結(jié)扎大鼠兩側(cè)頸總動(dòng)脈。結(jié)扎手術(shù)3 h后，斷頭處死大鼠，開顱，取全腦，用電子天平秤定腦濕重，然后將腦放入干燥箱中，110 ℃烘72 h后，再次稱定腦干重，然后計(jì)算腦含水量，腦含水量=(腦濕重-腦干重)÷腦濕重×100 %。

3.3 對大鼠離體腦基底動(dòng)脈收縮的影響：取2.2項(xiàng)下低、中、高3個(gè)劑量組、模型組(空白)及陽性對照組(西比靈)的大鼠斷頭后，迅速取出大鼠腦基底動(dòng)脈，分離血管周圍組織，去除血管內(nèi)血液，并制成動(dòng)脈環(huán)，將動(dòng)脈環(huán)掛在充滿克氏液的浴槽中，溫度37 ℃，通入95% O2和5% CO2混合氣體，先分別加入去甲腎上腺素和5-羥色胺引起腦基底動(dòng)脈收縮，10 min后分別向浴槽中加入不同濃度的藥物，記錄給藥前激動(dòng)劑所誘導(dǎo)的血管收縮和給藥后的血管收縮變化情況，計(jì)算給藥后血管收縮抑制百分率[3]。抑制百分率(%)=(給藥前血管收縮-給藥后血管收縮)/給藥前血管收縮×100 %。

結(jié) 果

1 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

1.1 對熱板所致小鼠疼痛反應(yīng)的影響:給藥后，頭痛寧膠囊各劑量組與空白對照組比較，均能提高小鼠熱刺激所致疼痛的痛閾值，延長效果與給藥劑量有一定的量效關(guān)系，且高劑量組效果與陽性對照組相當(dāng)，結(jié)果見表1。

表1 對熱板所致小鼠疼痛的影響

注：與空白對照組比較△P<0.05，▲P<0.01

1.2 對醋酸所致小鼠扭體的影響:各劑量組與空白對照組比較均具有顯著鎮(zhèn)痛作用，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，各劑量組與空白對照組比較20min內(nèi)扭體次數(shù)均顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，結(jié)果見表2。

2 頭痛寧膠囊對大鼠腦組織含水量的影響 頭痛寧膠囊各劑量組和陽性對照組與空白對照組比較，大鼠腦濕重與腦干重?zé)o明顯差異，大鼠腦含水量均能顯著降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，表明頭痛寧膠囊能顯著降低大鼠腦含水量，結(jié)果見表3。

3 對大鼠離體腦基底動(dòng)脈收縮的影響 頭痛寧膠囊對腦基底動(dòng)脈收縮抑制作用隨劑量增加呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系，頭痛寧膠囊對去甲腎上腺素和5-HT引起腦基底動(dòng)脈收縮有抑制作用，均較空白對照組顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，結(jié)果見表4。

表2 對醋酸所致小鼠扭體的影響

注：與空白對照組比較，▲P<0.01

表3 對大鼠腦組織含水量的影響

注：與模型組比較▲P<0.01

表4 對大鼠離體腦基底動(dòng)脈收縮的影響

注：與空白對照組比較，▲P<0.01

討 論

頭痛，是一種常見病和多發(fā)病，物理、生化、精神和機(jī)械性質(zhì)等多種因素均可能誘發(fā)頭痛。頭痛發(fā)作機(jī)理極其復(fù)雜，是反復(fù)發(fā)作性頭部血管舒縮功能紊亂引起的[4]。頭痛的發(fā)病人群廣，患病率高，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。按照頭痛疾患的國際分類，將頭痛疾患分為：原發(fā)性頭痛，繼發(fā)性頭痛，腦神經(jīng)痛、中樞和原發(fā)性顏面痛及其他頭痛[5]， 其中又以原發(fā)性頭痛的人數(shù)最多，包括偏頭痛、緊張型頭痛、叢集性頭痛和其它類型原發(fā)性頭痛4類[6]。從中醫(yī)角度來看，頭部是人體的諸陽之會(huì)，頭痛病因可分為外感和內(nèi)傷兩大類，外部因素的侵襲和內(nèi)部五臟六腑的病化，都會(huì)產(chǎn)生頭痛。外感頭痛分為風(fēng)寒、風(fēng)熱、風(fēng)濕；內(nèi)傷頭痛分為肝陽上亢、痰濁內(nèi)擾、氣血虧虛、腎精虧虛、瘀血內(nèi)阻，原發(fā)性頭痛常歸為內(nèi)傷頭痛范疇。中醫(yī)中藥治療頭痛的歷史較為悠久，國內(nèi)患者長期以來對中藥信任度較高，使得中成藥在頭痛治療中的地位日趨重要。

頭痛寧膠囊處方是在前清孟文瑞《春腳集》中“立愈湯”的基礎(chǔ)上加減化裁而成，方中天麻甘平入肝，平肝潛陽，熄風(fēng)止痙，為平肝熄風(fēng)之要藥、“治風(fēng)之神藥”，土茯苓甘淡性平，入肝胃經(jīng)，除濕健脾、清熱解毒，兩藥共用為主。何首烏與天麻共用，兩藥直入肝膽經(jīng)，陰平陽秘，頭痛自除。當(dāng)歸補(bǔ)血活血，補(bǔ)肝血養(yǎng)肝陰，與首烏共為臣藥。防風(fēng)以舉為用，味輕而升，引諸藥直達(dá)頭面受病之所，用為佐藥；全蝎平肝熄風(fēng)，用為使藥。全方集升降攻補(bǔ)于一方，兼顧風(fēng)痰瘀虛，為治療偏頭痛證屬風(fēng)痰阻絡(luò)標(biāo)本同治之良方，可以用于治療風(fēng)火痰瘀引起的各種頭痛?，F(xiàn)代臨床應(yīng)用表明，頭痛寧膠囊治療偏頭痛、緊張性頭痛、叢集性頭痛、原發(fā)性血管性頭痛等各類頭痛均有良好的療效[7]；在治療偏頭痛方面更加顯著，有效率高于西比靈[8]；頭痛寧膠囊可通過調(diào)節(jié)體內(nèi)血漿NOS、5-羥色胺和谷氨酸的含量對緊張性頭痛發(fā)揮作用[9]。

本研究對頭痛寧膠囊的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了研究，結(jié)果表明頭痛寧膠囊高劑量組和陽性對照組能顯著提高小鼠熱刺激所致疼痛的痛閾值，各劑量組均能顯著降低小鼠因醋酸刺激所致的扭體次數(shù)，證明頭痛寧膠囊具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用。

腦缺血、炎癥介質(zhì)釋放增多等均可導(dǎo)致緊張性頭痛發(fā)病[2]，非特異性炎癥是腦缺血的病理生理反應(yīng)之一，在急性期可以加重缺血性腦損傷。本研究利用大鼠急性不完全性腦缺血模型，測定頭痛寧膠囊對大鼠腦組織含水量的影響，進(jìn)而反應(yīng)腦組織的水腫和炎癥介質(zhì)釋放程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，頭痛寧膠囊各劑量組與模型組的腦含水量百分率相比有顯著性差異，說明頭痛寧膠囊具有降低腦組織含水量的作用，可能具有降低炎癥介質(zhì)釋放，調(diào)節(jié)血管通透性的作用。

椎-基底動(dòng)脈發(fā)生病變時(shí)，腦部血流不暢，供血不足，常出現(xiàn)眩暈、頭痛等癥狀，頭痛多為跳痛，有時(shí)呈炸裂痛，多位于枕部，彎腰或憋氣時(shí)加重[3]。本實(shí)驗(yàn)考察了頭痛寧膠囊對大鼠離體腦基底動(dòng)脈收縮的影響，發(fā)現(xiàn)其對去甲腎上腺素和5-羥色胺引起的腦基底動(dòng)脈收縮具有明顯的抑制作用，有助于降低眩暈、頭痛的發(fā)生率，緩解頭痛癥狀。

本研究結(jié)果表明，頭痛寧膠囊具有良好的鎮(zhèn)痛作用，能夠降低腦缺血模型大鼠腦組織含水量，抑制去甲腎上腺素和5-羥色胺引起的腦基底動(dòng)脈收縮。研究為頭痛寧膠囊在臨床上治療各種類型頭痛提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1] 沈姍姍，胡志強(qiáng)．緊張型頭痛病因病機(jī)分析[J]．山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，36(1):5-6．

[2] 楊 月，李春紅．緊張型頭痛病因病機(jī)初探[J]．國醫(yī)論壇，2016，31(1):13-14．

[3] 趙林鋼，龍 軍，袁冬平．眩痛停方對離體犬基底動(dòng)脈收縮反應(yīng)的影響[J]．安徽醫(yī)藥，2013，17(11) :1845-1847．

[4] 李炳祺．對602例頭痛患者流行病學(xué)問卷調(diào)查[J]．現(xiàn)代醫(yī)院，2011，11(7):72-73.

[5] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)疼痛學(xué)分會(huì)頭面痛學(xué)組．中國偏頭痛診斷治療指南[J]．中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志，2011，17(2) :65-86．

[6] 葛鑫宇，陳寶田，于 林，等．原發(fā)性頭痛的西醫(yī)類型與中醫(yī)分型關(guān)系的探討[J]．現(xiàn)代醫(yī)院，2013，13(7):58-60．

[7] 聞梓鈞，董 明，耿 煜，等．頭痛寧膠囊對蛛網(wǎng)膜下腔出血所致頭痛的臨床觀察[J]．遼寧中醫(yī)雜志，2015，42(10):1916-1917．

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[9] 陳榮華，肖迎春．頭痛寧膠囊對緊張性頭痛模型大鼠神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J]．中醫(yī)雜志，2016，57(21):1869-1872．

(收稿：2017-01-23)

*陜西省科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2016SF-368)

陜西省創(chuàng)新藥物研究中心資助項(xiàng)目(2015SF2-09)

陜西省咸陽市中青年科技領(lǐng)軍人才資助項(xiàng)目(2015k04-30-9)

頭痛/中醫(yī)藥療法 動(dòng)物，實(shí)驗(yàn) 大鼠 @頭痛寧膠囊

R747.2

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.07.082

陜西省創(chuàng)新人才推進(jìn)計(jì)劃-重點(diǎn)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)計(jì)劃(2015KCT-19)

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