尹家琛，溫 勇

南寧市第三人民醫(yī)院(南寧530003)

俞原配穴針灸用于改善心肌缺血再灌注效果及作用機理探討*

尹家琛，溫 勇

南寧市第三人民醫(yī)院(南寧530003)

目的：探討俞原配穴針灸用于改善心肌缺血再灌注效果及作用機理。方法：以30只Wistar大鼠為研究對象，分為3組：對照組、心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組，每組10只，對照組不做造模，心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組型冠狀動脈左前降支結(jié)扎建立心肌缺血再灌注模型，針灸治療組俞原配穴針灸治療3 d，觀察各組標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)下ST段電壓值、CK、AST、CK- MB、c- TnT、MDA、SOD、ET-1、NO變化。結(jié)果：造模缺血后30 min、再灌注30 min時心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組ST段電壓值均高于對照組(P<0.05)，針灸治療組ST段電壓值明顯低于心肌缺血再灌注模型組(P<0.05)；再灌注3d時心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組ST段電壓值、CK、AST、CK- MB、c- TnT、MDA、ET-1高于對照組(P<0.05)，SOD與NO低于對照組(P<0.05)，針灸治療組ST段電壓值、AST、CK- MB、c- TnT、MDA、ET-1低于心肌缺血再灌注模型組(P<0.05)，SOD與NO高于心肌缺血再灌注模型組(P<0.05)。結(jié)論：俞原配穴針灸能明顯改善心肌缺血再灌注損傷模型大鼠心肌缺血損傷，可能是通過降低心肌酶、抗氧化應(yīng)激、減輕血管內(nèi)皮損傷等作用途徑來起效的。

心血管疾病是引起中老年死亡的主要疾病之一，其中以高血壓、急性冠脈綜合癥等最為多見，嚴重威脅著人類的身體健康。急性冠脈綜合癥患者主要表現(xiàn)為冠狀動脈缺血表現(xiàn)，在冠狀動脈發(fā)生急劇減少時冠狀動脈相應(yīng)供血的心肌細胞會出現(xiàn)缺氧缺血，導(dǎo)致心肌細胞的不可逆損傷，心功能明顯下降。對心肌缺血的治療主要是改善及恢復(fù)血供，組織細胞壞死的進一步發(fā)展，早期再灌注是改善缺血心肌細胞存活的關(guān)鍵，但是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中溶栓、冠狀動脈搭橋術(shù)等在恢復(fù)冠狀動脈血供后還會引起缺血再灌注損傷(Myocardial ischemia-reperfusion injury，MIRI)[1- 2]，有報道顯示針灸內(nèi)關(guān)、心俞等穴位具有抗心肌缺血效應(yīng)[3-5]，有改善缺血再灌注損傷的作用，因此本研究對俞原配穴針灸用于改善心肌缺血再灌注效果及作用機理進行了探討，為臨床針灸治療心肌缺血再灌注損傷的臨床和理論研究提供實驗依據(jù)，現(xiàn)將實驗結(jié)果報告如下。

材料與方法

1 實驗動物 健康Wistar大鼠30只，SPF級，體重200-220g，雄性，均購自北京華阜康生物科技有限公司，動物合格證SCXK(京)2015-0009。隨機分為3組：對照組、心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組，每組10只。

2 實驗試劑及針刺工具 購自天津億明醫(yī)療器械有限公司的針灸毫針，華佗牌一次性針灸針，規(guī)格0.25mm×15mm；購自天津市鼎盛鑫化工有限公司生產(chǎn)的水合氯醛(批號20150212)；購自南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的肌酸激酶(CK，批號20150905)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST，批號20150205)、肌酸激酶同工酶(CK- MB，批號20141228)、肌鈣蛋白T(c- TnT，批號20150129)試劑盒；購自北京北免東雅生物技術(shù)研究所生產(chǎn)的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)，測定血漿內(nèi)皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)試劑盒。

3 造模方法 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，對照組不做處理，10%水合氯醛經(jīng)腹腔注射將心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組大鼠麻醉，大鼠麻醉成功后仰臥位下固定在解剖臺，頸部取正中切口暴露氣管后氣管插管，接呼吸機，將電極分別插在大鼠的四肢內(nèi)側(cè)皮下并與心電圖電極相連，在復(fù)制模型前先對大鼠進行心電圖檢測，如存在心電圖異常則進行剔除，沿著左側(cè)胸骨外緣切開暴露心臟，切開心包膜，以冠狀動脈主干為標(biāo)志找到左心耳，在左心耳下方2 mm處找到冠狀動脈左前降支，在根部上中1/3位置處穿過0號醫(yī)用縫合線(穿一小聚乙烯管)，拉緊縫線引起左前降支缺血，放松即可形成再灌注。觀察心電圖變化，心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組如出現(xiàn)左心室前壁發(fā)紺及膨脹，在標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)出現(xiàn)ST段抬高0.1 mv以上、T波高聳、心律不齊，則提示急性心肌缺血造模成功，造模成功30 min后開放左前降支血供形成再灌注。

4 治療方法 心肌缺血再灌注模型組不做治療。針灸治療組在再灌注后進行針灸治療，參考《動物針灸穴位圖譜》中對動物的穴位定位方法對針灸治療組大鼠進行取穴，大陵：在前肢內(nèi)側(cè)腕部橫紋正中；神門：在前肢內(nèi)側(cè)腕部橫紋尺骨邊緣；心俞：在第5胸椎棘突下旁開7 mm處；內(nèi)關(guān)：在前肢內(nèi)側(cè)距離腕關(guān)節(jié)3 mm左右尺橈骨縫間；厥陰俞：在第4胸椎旁開5 mm處。取好穴位后進行標(biāo)記，將穴位及周圍剔除毛，75%酒精消毒穴位處，用0.25 mm×15 mm毫針垂直或斜刺入穴位，捻轉(zhuǎn)輕手法得氣后留針30 min，取1 cm的艾條插在針柄末端，點燃艾條，共灸2柱，連續(xù)治療3 d。

5 檢測指標(biāo) ①各組心電圖變化。記錄造模前、造模缺血后30 min時、再灌注30 min時、再灌注3 d時各組標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)下ST段電壓值。②再灌注3 d時眼眶靜脈采集血標(biāo)本，測定造模前、造模后再灌注血清心肌酶CK、AST、CK- MB、c- TnT，測定血清抗氧化物質(zhì)MDA、SOD，測定血漿ET-1、NO。以上項目的檢測均按照試劑盒操作說明進行。

結(jié) 果

1 各組標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)下ST段電壓值比較 在造模前各組ST段電壓值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，造模缺血后30 min、再灌注30 min時心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組ST段電壓值均高于對照組(P<0.05)，心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組組間ST段電壓值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，再灌注3 d時心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組ST段電壓值均高于對照組(P<0.05)，針灸治療組ST段電壓值明顯低于心肌缺血再灌注模型組(P<0.05)，見表1。

2 各組再灌注前后心肌酶水平比較 在造模前各組心肌酶CK、AST、CK- MB、c- TnT比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，再灌注3 d時心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組心肌酶高于對照組(P<0.05)，針灸治療組心肌酶低于心肌缺血再灌注模型組(P<0.05)，見表2。

表1 各組標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)下ST段電壓值比較(mv)

注：* 表示與心肌缺血再灌注模型組同時間比較P<0.05，△表示與對照組同時間比較P<0.05，對照組不做造模，造模及再灌注不同時間是指與心肌缺血再灌注模型組和針灸治療組造模缺血后及再灌注后平行時間

表2 各組再灌注前后心肌酶水平比較

注：* 表示與心肌缺血再灌注模型組同時間比較P<0.05，△表示與對照組同時間比較P<0.05，對照組不做造模，造模及再灌注不同時間是指與心肌缺血再灌注模型組和針灸治療組造模缺血后及再灌注后平行時間

3 各組再灌注前后血清抗氧化物質(zhì)水平比較 在造模前各組MDA、SOD比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，再灌注3 d時心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組MDA高于、SOD低于對照組(P<0.05)，針灸治療組MDA低于、SOD高于心肌缺血再灌注模型組(P<0.05)，見表3。

4 各組再灌注前后血管內(nèi)皮功能水平比較 在造模前各組ET-1、NO比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，再灌注3 d時心肌缺血再灌注模型組、針灸治療組ET-1高于、NO低于對照組(心肌缺血再灌注模型組：t=5.52、t=5.95，針灸治療組：t=2.38、t=2.67，P<0.05)，針灸治療組ET-1高于、NO低于高于心肌缺血再灌注模型組(t=2.47、t=2.95，P<0.05)，見表4。

表3 各組再灌注前后血清抗氧化物質(zhì)水平比較(U/ml)

注：* 表示與心肌缺血再灌注模型組同時間比較P<0.05，△表示與對照組同時間比較P<0.05，對照組不做造模，造模及再灌注不同時間是指與心肌缺血再灌注模型組和針灸治療組造模缺血后及再灌注后平行時間

表4 各組再灌注前后血管內(nèi)皮功能水平比較

注：* 表示與心肌缺血再灌注模型組同時間比較P<0.05，△表示與對照組同時間比較P<0.05，對照組不做造模，造模及再灌注不同時間是指與心肌缺血再灌注模型組和針灸治療組造模缺血后及再灌注后平行時間

討 論

急性心肌缺血可出現(xiàn)心肌細胞的缺血壞死，表現(xiàn)為胸悶、胸前區(qū)疼痛等，由于血管堵塞局部細胞壞死，血管的再次疏通血供通暢的情況下會發(fā)生再次損傷，西醫(yī)認為心肌細胞再恢復(fù)血流的供血下產(chǎn)生了不可逆的損傷，在此過程中涉及到細胞信號復(fù)雜的相關(guān)機制，如細胞外信號分子、細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、細胞膜信號接收器等多方面的變化[7]。在心肌細胞生物膜損壞后可導(dǎo)致通透性增加，CK、AST、CK-MB、c-TnT等在心肌細胞內(nèi)含量最高，心肌細胞膜受損導(dǎo)致以上心肌酶從細胞內(nèi)溢出，引起血清心肌酶的升高，因此以上指標(biāo)常作為心臟疾病診治指標(biāo)。氧化應(yīng)激在心血管疾病中起到極為重要的作用，大量的臨床研究顯示活性氧自由基的產(chǎn)生是形成氧化應(yīng)激的基本機制[8]，SOD是分布在生物體內(nèi)的金屬酶，是有氧代謝細胞生存所必需得酶，能反應(yīng)自由基的含量，MDA是自由基在體內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的，可反應(yīng)出細胞損傷程度。TT-1是重要的血管內(nèi)皮損傷因子，為血管內(nèi)皮細胞所釋放，具有強大的縮血管和促進血管平滑肌增殖的作用，在ET-1水平較高時可引起細胞毒作用，在心肌細胞缺血缺氧時可釋放大量的ET-1，從而導(dǎo)致冠狀動脈缺氧進一步加重，再灌注損傷也會進一步加重。NO是舒張血管因子，在心血管疾病中能抑制血小板在損傷血管局部聚集，防止血小板粘附在血管壁，能誘導(dǎo)GMP機制來減少血管平滑肌細胞的分裂和增殖，阻止動脈粥樣硬化的發(fā)生，如心肌細胞缺血缺氧時血NO往往會降低，導(dǎo)致血管痙攣發(fā)生，引起病情加重。

祖國醫(yī)學(xué)中并無心肌缺血及冠心病等病名，但根據(jù)此病的臨床表現(xiàn)及特征，可將其歸納在“胸痹”、“心悸”、“心痛”等范疇，認為陽虛陰盛是其病機，缺血時間越長則陽虛陰盛會越重，而再灌注的存在可導(dǎo)致陽氣復(fù)來，臟器從陽虛陰盛到陽氣驟然來復(fù)，從一個極端到另一個極端，機體形成了陰盛格陽、陰陽格拒的病機。對心肌缺血再灌注損傷的防治祖國醫(yī)學(xué)有較多經(jīng)驗，臨床相關(guān)研究顯示葛根素等中藥對再灌注損傷有明顯改善作用[9]，針灸作為中醫(yī)學(xué)中的一個特殊分支，在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就有治療心病的相關(guān)記載，提出針灸可從手少陽三焦經(jīng)、手太陽小腸經(jīng)、手少陰心經(jīng)和手厥陰心包經(jīng)入手進行治療，也可從大陵、昆侖等腕踝取穴進行治療；《脈經(jīng)》中也提出針灸取穴可選用大陵、勞宮、中沖等，易與四時之氣相合取穴。臨床有研究顯示針灸治療心肌缺血再灌注損傷有較好療效，研究主要集中在對心功能、神經(jīng)遞質(zhì)、心肌酶、血管活性物質(zhì)等的影響方面，大量研究顯示針灸治療在改善心肌缺血再灌注過程中可能是通過模式心肌缺血預(yù)適應(yīng)-中介-效應(yīng)子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)模式來實現(xiàn)的[3-5]，如對造模大鼠內(nèi)關(guān)等穴針刺能促進腺苷和NO的釋放，能降低中介物質(zhì)蛋白激酶C的表達等。本研究對俞原配穴針灸用于改善心肌缺血再灌注效果及作用機理進行了探討，選取大陵、神門、心俞、內(nèi)關(guān)、厥陰俞為治療穴位，不對大鼠作針灸預(yù)處理，在形成心肌缺血再灌注后進行針灸治療，觀察了對缺血再灌注損傷的改善作用，研究結(jié)果顯示針灸以上穴位后大鼠心肌酶和ST段電壓值的恢復(fù)明顯，顯示受損心肌細胞明顯恢復(fù)，再灌注3d時針灸治療的大鼠CK、AST、CK- MB、c- TnT、MDA、ET-1低于心肌缺血再灌注模型組(未做針灸治療)，SOD與NO高于心肌缺血再灌注模型組，提示針灸治療的大鼠再灌注損傷相對較輕，結(jié)合前述相關(guān)文獻研究結(jié)果分析其對心肌缺血再灌注損傷的保護機制，筆者認為可能也是通過減輕血管內(nèi)皮損傷、抗氧化應(yīng)激等途徑來實現(xiàn)的。

綜上所述，俞原配穴針灸能明顯改善心肌缺血再灌注損傷模型大鼠心肌缺血，可能是通過降低心肌酶、抗氧化應(yīng)激、減輕血管內(nèi)皮損傷等作用途徑來起效的。

[1] Hausenloy D J, Yellon D M. Myocardial ischemia-reperfusion injury: a neglected therapeutic target[J]. The Journal of clinical investigation, 2013, 123(1): 92-100.

[2] Ibanez B, Heusch G, Ovize M,etal. Evolving therapies for myocardial ischemia/reperfusion injury[J]. Journal of the American College of Cardiology, 2015, 65(14): 1454-1471.

[3] Huang Y, Lu S F, Hu C J,etal. Electro-acupuncture at Neiguan pretreatment alters genome-wide gene expressions and protects rat myocardium against ischemia-reperfusion[J]. Molecules, 2014, 19(10): 16158-16178.

[4] Shen J, Lei X M, Song Y,etal. Electro-acupuncture on Nei Guan and Bai Hui: How Does It Affect GRP78 and Caspase-12 Gene Expression in Rats with Ischemia-Reperfusion Injury[J]. Journal of Acupuncture and Herbs, 2015, 3(1): 65-69.

[5] Wang C, Liu Z, Yan J. Effect Of Electro-Acupuncture Pretreatment At Neiguan Point On NO, NOS Of Rabbit Serum During Myocardial Ischemia-Reperfusion[J]. Planta Medica, 2016, 82(05): PB52.

[6] 唐麗敏, 賀永貴, 張義東, 等. 心肌缺血/再灌注損傷發(fā)生機制及其保護研究進展[J]. 中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志, 2013, 16(1): 159-161.

[7] 徐 盟. 心肌缺血再灌注損傷的主要機制與相關(guān)藥物治療的研究進展[J]. 實用藥物與臨床, 2014, 17(8): 1052-1056.

[8] 沈繼龍, 朱克軍, 顧紅軍, 等. 大鼠心肌缺血再灌注損傷不同時相氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的變化[J]. 臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志, 2013, 12(3): 177-178.

[9] 唐丹麗, 劉寨華, 隋 宇, 等. 中藥防治心肌缺血再灌注損傷炎癥反應(yīng)作用機制研究概況[J]. 中醫(yī)雜志, 2014, 55(11): 980-983.

[10] 王 超, 謝文娟,劉 密, 等. 針灸預(yù)處理對不同時間心肌缺血再灌注損傷兔血漿內(nèi)皮素, 血清肌酸激酶和心肌組織熱休克蛋白 70 表達的影響[J]. 針刺研究, 2014, 39(5): 372-376.

(收稿：2017-02-22)

Effect of acupuncture and moxibustion in rats with myocardial ischemia-reperfusion injury and mechanism of action

Yin Jiachen，Wen Yong

Department of Internal Medicine, the Third People's Hospital of Nanning(NanNing 530003)

Objective：To explore the effect of acupuncture and moxibustion in rats with myocardial ischemia-reperfusion injury and mechanism of action.Methods：Thirty Wistar rats were randomly divided into control group,model group,acupuncture and moxibustion treatment group,10 rats in each group.The control group did not do processing,the rats in model group and acupuncture and moxibustion treatment group were opened thoracic cavity and ligated anterior descending coronary,acupuncture and moxibustion treatment of 3 d were acupuncture and moxibustion treatment group,Under the observation of standard II lead ST segment voltage value,CK,AST,CK- MB,c- TnT,MDA,SOD,ET-1,NO.Results：30 min Ischemia and 30 min reperfusion,voltage value of model group and acupuncture and moxibustion treatment group higher than control group(P<0.05),acupuncture and moxibustion treatment group lower than model group(P<0.05).ST segment voltage value,CK,AST,CK- MB,c- TnT,MDA,ET-1,model group and acupuncture and moxibustion treatment group higher than control group in 3 d reperfusion(P<0.05),acupuncture and moxibustion treatment group lower than model group in 3 d reperfusion(P<0.05),SOD and NO,model group and acupuncture and moxibustion treatment group higher than control group in 3 d reperfusion(P<0.05),acupuncture and moxibustion treatment group lower than model group in 3 d reperfusion(P<0.05).Conclusion：Acupuncture and moxibustion on myocardial ischemia-reperfusion injurymodel in rats with anti-oxidative stress effect can reduce the changes of myocardial enzyme,reduce vascular endothelial injury,through the above a variety of ways to lessen ischemia-reperfusion injury.

Myocardial ischemia/ Chinese medicine therapy Rats Animal Experimentation

*廣西自治區(qū)醫(yī)療衛(wèi)生適宜技術(shù)研究與開發(fā)課題(S201409-02)

心肌缺血/中醫(yī)藥療法 大鼠 動物，實驗

R737.31

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.07.081