李玉鋒戴習(xí)林袁新程周迅胡彥杰丁福江

（1. 水產(chǎn)科學(xué)國家級實驗教學(xué)示范中心（上海海洋大學(xué)） 農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點實驗室（上海海洋大學(xué)） 水產(chǎn)動物遺傳育種中心上海市協(xié)同創(chuàng)新中心（上海海洋大學(xué)）；2. 上海申漕特種水產(chǎn)開發(fā)公司，上海 201516）

四個羅氏沼蝦抗病選擇系抗病力比較分析

李玉鋒1戴習(xí)林1袁新程1周迅1胡彥杰1丁福江2

（1. 水產(chǎn)科學(xué)國家級實驗教學(xué)示范中心（上海海洋大學(xué)） 農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點實驗室（上海海洋大學(xué)） 水產(chǎn)動物遺傳育種中心上海市協(xié)同創(chuàng)新中心（上海海洋大學(xué)）；2. 上海申漕特種水產(chǎn)開發(fā)公司，上海 201516）

采用熒光定量PCR方法，對4個羅氏沼蝦抗病選擇系的4個抗病力基因（熱休克蛋白70（HSP70）Se-GPx、CAT、SOD）表達量分析。通過感染溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus），對比4個選擇系之間HSP70、Se-GPx、CAT及SOD表達量的差異，結(jié)合4個選擇系成活率，來對比4個抗病選擇系抗病力強弱。結(jié)果表明，A、B兩個抗病選擇系的肝胰腺HSP70 mRNA的相對表達量明顯高于C、D兩個抗病選擇系（P<0.05）。感染96 h內(nèi)Se-GPx、CAT、SOD表達量變化顯著，在4個選擇系不同時間表達量也不相同，但是總體變化趨勢是A、B選擇系高于C、D選擇系。結(jié)合4個選擇系感染溶藻弧菌一周的成活率分別為65.0%、65.8%、51.7%及53.3%，可得出結(jié)論A、B兩個抗病選擇系抗病力高于C、D兩個選擇系。

羅氏沼蝦；HSP70；非特異性免疫；溶藻弧菌

羅氏沼蝦（Macrobrachium rosenbergii）原產(chǎn)于東南亞一帶，是我國目前主要的淡水經(jīng)濟養(yǎng)殖品種，在水產(chǎn)養(yǎng)殖經(jīng)濟增長和農(nóng)業(yè)發(fā)展中占有重要地位。但近幾年來由于環(huán)境、養(yǎng)殖模式等多方面因素的影響，羅氏沼蝦出現(xiàn)嚴重的種質(zhì)衰退現(xiàn)象；另一方面，羅氏沼蝦病害日益嚴重，給我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重的災(zāi)難［1］。要解決這個問題必須研究羅氏沼蝦抗病機制以及培育抗病新品種。

熱休克蛋白 70（Heat stress proteins 70，HSP-70），是機體在受到應(yīng)激時細胞內(nèi)迅速合成的一種蛋白質(zhì)，它具有高度保守性，能增加機體的自身保護反應(yīng)，可以增強細胞對損害的耐受程度，維持細胞的正常代謝，提高細胞的生存率［2，3］，因此熱休克蛋白70是衡量羅氏沼蝦抗病力的一個重要因素。甲殼動物的免疫系統(tǒng)與脊椎動物有很大不同，無特異性免疫，主要是非特異性免疫，這種免疫重要是依靠一些酶來完成的，所以研究免疫過程中的免疫相關(guān)酶以提高羅氏沼蝦自身的免疫能力是很有必要的［4］。有研究指出谷胱甘肽過氧化物酶在生物體的抗氧化方面，以及體內(nèi)遭受到病原體感以后產(chǎn)生的免疫活動中發(fā)揮著重要的作用，從而保護生物機體免受體內(nèi)產(chǎn)生的過量活性氧分子的損害［5，6］。根據(jù)谷胱甘肽過氧化物酶的活性中心是否含硒可以分為含硒的谷胱甘肽過氧化物酶（Se-GPx）和不含硒的谷胱甘肽過氧化物酶（non-Se-GPx）兩種類型［7，8］，目前甲殼動物中發(fā)現(xiàn)的GPx均為Se-GPx［9，10］。過氧化氫酶（CAT）可以清除生物體產(chǎn)生的H2O2，在生物體內(nèi)發(fā)揮著抗氧化的作用［11，12］。超氧岐化酶（SOD）也是生物體內(nèi)存在的一種抗氧化酶，它對生物體內(nèi)自由基的清除起著重要作用，有清除O2的作用［13］。同時超氧岐化酶也是甲殼類動物體液免疫的一部分，是衡量甲殼類動物非特異性免疫性狀的重要指標。溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）是引起壺菌病發(fā)生的一種重要的致病菌，目前有關(guān)溶藻弧菌致病性的研究報道有很多，本實驗室在羅氏沼蝦育苗池中水體中分離得到溶藻弧菌。

基于以上理論支撐，本實驗選育四代的4個抗病選擇系（A、B、C、D）的羅氏沼蝦，在人工感染溶藻弧菌后，通過RT-PCR方法檢測4個選擇系肝胰腺中4個抗病力基因（HSP70、Se-GPx、CAT、SOD）表達量的差異，并結(jié)合4個選擇系死亡率比較其抗病力，初步探討溶藻弧菌對羅氏沼蝦肝胰腺中4個抗病力基因表達量的影響，以及以上幾個基因和羅氏沼蝦抗病力之間的關(guān)系，對本實驗室4個羅氏沼蝦選擇系的抗病力進行比較分析，選擇出抗病力較強的選擇系，為本實驗室下一代的抗病選育工作提供理論支持，同時希望能為羅氏沼蝦病害防治工作和免疫機理的深入研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 實驗用羅氏沼蝦為本實驗室人工選擇配對和育苗，自然交尾建立的4個羅氏沼蝦抗病專門化選擇系子四代選擇系（A、B、C、D），選擇體長（7.25±0.74）cm，體重（13.46±4.31）cm的蝦作為實驗用蝦。每個選擇系實驗動物均放在水泥池中暫養(yǎng)一周，水溫25-28℃，每天投喂兩次，每隔一天換一次水（換水量約為1/3），持續(xù)充氣。

1.1.2 主要儀器及試劑 熒光定量PCR儀、凝膠成像儀（德國Biostep）、梯度PCR（Eppendorf）、臺式冷凍離心機（Eppendorf）、RNAiso plus（TaKaRa）、反轉(zhuǎn)錄試劑（TaKaRa）、DNAmarker（天根生物）、氯仿、無水乙醇、PCR引物由生工生物上海部合成。

1.2 方法

1.2.1 感染實驗 溶藻弧菌的培養(yǎng)：實驗菌種來自上海海洋大學(xué)病原庫，保種的菌種先經(jīng)過異養(yǎng)菌培養(yǎng)基（PGY）培養(yǎng)12 h后，接種到弧菌選擇培養(yǎng)基（TCBS）進行特異性培養(yǎng)，最終制備成1×106CFU/mL（用平板計數(shù)法計數(shù)）的溶藻弧菌菌懸液于4℃保存。

感染：4個選擇系中每個選擇系隨機挑選180只羅氏沼蝦，設(shè)置3個平行，在羅氏沼蝦第二腹節(jié)基部注射0.2 mL濃度為1×106CFU/mL的溶藻弧菌菌懸液。

1.2.2 總RNA的抽提 4個選擇系分別在感染溶藻弧菌0、6、12、24、48和96 h后取肝胰腺，然后在液氮中充分研磨加入1 mL RNAiso plus，靜止5 min后加入0.2 mL氯仿在4℃離心機中12 000 r/min離心15 min，小心吸取上清液0.4 mL至新的離心管中，再加入0.5 mL異丙醇靜止10 mim后于4℃離心機中12 000 r/min離心10 min，倒掉上清液加1 mL 75%乙醇在4℃離心機中7 500 r/min離心5 min，倒掉液體得到總RNA，最后用1%瓊脂糖電泳檢測RNA的完整性。

1.2.3 cDNA的合成 將完整無降解并且測得OD260nm/OD280nm值1.8-2.0的RNA用TaKaRa公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書上的方法反轉(zhuǎn)錄成cDNA，將反轉(zhuǎn)錄好的cDNA放-20℃冰箱保存。

1.2.4 熒光定量PCR反應(yīng)分析基因的表達 劉波等［2］根據(jù)GenBank發(fā)布的羅氏沼蝦HSP70序列（AY466445.1），設(shè)計HSP70的引物。在GenBank中查得羅氏沼蝦過氧化氫酶（HQ668089.1）、超氧歧化酶（DQ121374.1）、含硒谷胱甘肽過氧化物酶（FJ670566.1）及18S（GQ131934.1）序列，設(shè)計引物序列見表1，引物均由上海生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

表1 熒光定量PCR試驗中用到的引物及序列

熒光定量PCR反應(yīng)體系（20 μL體系）：7.5 μL SYBR Premix Ex Taq，0.3 μL引物F，0.3 μL引物R，0.6 μL cDNA模板，6.3 μL ddH2O。熒光定量PCR反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性30 s；95℃變性5 s，60℃退火30 s，55℃延伸15 s，40個循環(huán)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

羅氏沼蝦各基因mRNA的相對表達量用Livak和Schmittgen建立的2-ΔΔCt計算法計算。然后用目的基因與內(nèi)參基因18S得比值來表示目的基因的相對表達量。數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析，P<0.05認為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 四個選擇系成活率比較

2.1.1 養(yǎng)殖比較分析 經(jīng)歷了100 d的養(yǎng)殖，4個羅氏沼蝦選擇系的養(yǎng)殖成活率表現(xiàn)出一定的差異，4組羅氏沼蝦選擇系養(yǎng)殖成活率比較如圖1所示，A、B兩個選擇系成活率顯著高于C、D兩個選擇系P<0.05，選擇系B成活率最高，達到83.39%。其余3個選擇系A(chǔ)、C、D成活率分別為82.78%、71.11%和70%。

2.1.2 感染存活比較分析 人工注射感染溶藻弧菌后，4個選育選擇系A(chǔ)、B、C、D之間的抗病感染能力表現(xiàn)出一定的差異（表2）。注射感染12 h時，A選擇系成活率極顯著高于B選擇系（P<0.01），且顯著高于D選擇系（P<0.05），B選擇系成活率顯著高于C選擇系（P<0.05）。注射感染24 h時，A、B選擇系成活率極顯著高于C選擇系（P<0.01），并且A、B抗病選擇系成活率顯著高于D選擇系（P<0.05），B、D選擇系成活率顯著高于C選擇系（P<0.05）。注射感染48 h以及2周后，A、B選擇系成活率極顯著高于C、D兩個選擇系（P<0.01）。綜上所述，4個抗病選擇系在感染溶 藻弧菌后成活率存在一定差異，A、B選擇系抗病力明顯強于C、D選擇系，這對以后育種工作具有重要的指導(dǎo)意義。

2.2 感染溶藻弧菌后羅氏沼蝦肝胰腺中HSP70 mRNA表達量變化

4個抗病選擇系感染溶藻弧菌后肝胰腺HSP70 mRNA的相對含量如圖2所示，總體變化趨勢是：0-24 h HSP70基因表達量劇烈增加，之后相對表達量降低，48 h與96 h之間表達量無差異。12、24 h時HSP70 mRNA的相對表達量明顯高于其他時間段（P<0.01）。4個抗病選擇系之間肝胰腺HSP70 mRNA的相對含量為：感染6 h時B選擇系相對表達量高于C、D選擇系相對表達量（P<0.05），12、24 h時A、B兩個抗病選擇系的肝胰腺HSP70 mRNA的相對表達量明顯高于C、D兩個抗病選擇系（P<0.05），48h時A選擇系的肝胰腺HSP70 mRNA的相對表達量明顯高于C、D兩個抗病選擇系（P<0.05），其他時間段各個選擇系之間肝胰腺HSP70 mRNA相對表達量差異不顯著。

圖1 四組羅氏沼蝦選擇系養(yǎng)殖成活率比較

2.3 感染溶藻弧菌羅氏沼蝦肝胰腺中非特異性免疫因子Se-GPx、CAT、SOD基因相對含量

4個抗病選擇系在感染溶藻弧菌后肝胰腺中Se-GPx mRNA各個時間段的相對表達量如圖3所示，總體變化趨勢是：感染到0-24 h，4個選擇系Se-GPx mRNA表達量逐漸升高，到24 h達到峰值。24-96 h，4個選擇系Se-GPx mRNA表達量逐漸降低。4個選擇系之間肝胰腺中Se-GPx mRNA各個時間段相對表達量：0 h時，B抗病選擇系的肝胰腺Se-GPx mRNA的相對表達量明顯高于A、C、D三個抗病選擇系（P<0.05），A抗病選擇系的肝胰腺Se-GPx mRNA的相對表達量明顯高于D 抗病選擇系（P<0.05）；6 h時，B抗病選擇系的肝胰腺SeGPx mRNA的相對表達量極顯著高于C、D兩個抗病選擇系（P<0.01），A抗病選擇系的肝胰腺Se-GPx mRNA的相對表達量顯著高于C、D三個抗病選擇系（P<0.05）；24 h和48 h時，A、B兩個抗病選擇系的肝胰腺Se-GPx mRNA的相對表達量顯著高于C、D兩個抗病選擇系（P<0.05）。

表2 4個羅氏沼蝦選擇系抗溶藻弧菌能力比較

圖 2 四個羅氏沼蝦選擇系感染溶藻弧菌后肝胰腺中HSP70 mRNA相對表達量

圖3 四個羅氏沼蝦選擇系感染溶藻弧菌后肝胰腺中Se-GPx mRNA相對表達量

4個抗病選擇系在感染溶藻弧菌后肝胰腺中CAT mRNA各個時間段的相對表達量如圖4所示，總體變化趨勢是：感染到0-12 h，4個選擇系CAT mRNA表達量逐漸升高，到12 h達到峰值。12-96 h，4個選擇系CAT mRNA表達量逐漸降低。4個選擇系之間肝胰腺中CAT mRNA各個時間段相對表達量：6 h時，A、B兩個抗病選擇系的肝胰腺CAT mRNA的相對表達量顯著高于C、D 抗病選擇系（P<0.05）；12 h時，A抗病選擇系的肝胰腺CAT mRNA的相對表達量顯著高于D 抗病選擇系（P<0.05）；96 h時，A、B抗病選擇系的肝胰腺CAT mRNA的相對表達量顯著高于D 抗病選擇系（P<0.05）其他時間段4個抗病選擇系間CAT mRNA相對表達量差異。

4個抗病選擇系在感染溶藻弧菌后肝胰腺中SOD mRNA各個時間段的相對表達量如圖5所示，總體變化趨勢是：感染至0-24 h，4個選擇系SOD mRNA表達量逐漸升高，到24 h達到峰值。24-96 h，4個選擇系SOD mRNA表達量逐漸降低。4個選擇系之間肝胰腺中SOD mRNA各個時間段相對表達量：0 h時，B抗病選擇系的肝胰腺SOD mRNA的相對表達量顯著高于A、D 抗病選擇系（P<0.05）且極顯著高于A抗病選擇系（P<0.01）；24、48 h時，B抗病選擇系肝胰腺SOD mRNA的相對表達量顯著高于C、D 抗病選擇系（P<0.05），其他時間段內(nèi)4個抗病選擇系間SOD相對表達量差異不顯著。

圖4 四個羅氏沼蝦選擇系感染溶藻弧菌后肝胰腺中CAT mRNA相對表達量

圖 5 四個羅氏沼蝦選擇系感染溶藻弧菌后肝胰腺中SOD mRNA相對表達量

3 討論

3.1 溶藻弧菌感染96 h內(nèi)4個選擇系羅氏沼蝦肝胰腺HSP70 mRNA相對表達量差異

水生動物一般終生生活在水環(huán)境中，所以它們與環(huán)境之間的關(guān)系是最為緊密的，兩者之間的關(guān)系大部分是通過HSP70實現(xiàn)的。生物體在熱和其他因素刺激（重金屬離子、缺氧、病毒及細菌感染等）時，會發(fā)生熱休克反應(yīng)用來抑制蛋白的合成，而熱休克蛋白能通過修復(fù)、重新折疊變性蛋白及解離聚集的蛋白，達到對肌體和細胞的保護作用。其中HSP70是最為重要的一類［14-16］。有研究報道HSP70的較高表達能保護人單核細胞免受過氧化氫引起的毒害、人的A-431細胞免受氰化鈉的傷害［17］。水產(chǎn)動物也有相關(guān)報道指出HSP70表達水平的高低對水產(chǎn)動物的抗逆性和環(huán)境的適應(yīng)能力都具有直接關(guān)系。NAKANO等對兩種潮間杜父魚（Oligocottusmaculosus和O. suyderi）的研究表明，當魚體內(nèi)的HSP70儲存較多時，機體會具有更大的耐受能力，機體能夠適應(yīng)更大的溫差變化［18］。Cruz-Rodriguez等用多環(huán)芳香烴等化學(xué)藥品和污染水體的沉積物來刺激美洲牡蠣發(fā)現(xiàn)，牡蠣體內(nèi)HSP70表達量明顯增加，表明HSP70參與了機體對不良環(huán)境的抵御作用，從而參與了維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。本實驗也發(fā)現(xiàn)羅氏沼蝦在感染溶藻弧菌后，肝胰腺中HSP70 mRNA表達量在0、6、12和24 h內(nèi)呈上升趨勢，48-96 h表達量降低，這也表明羅氏沼蝦在感染溶藻弧菌后，自身的保護反應(yīng)觸發(fā)，體內(nèi)迅速促使合成HSP70。結(jié)合4個羅氏沼蝦感染存活率比較可以得出結(jié)論：HSP70 mRNA表達量較高的選擇系具有較高的成活率，因此HSP70 mRNA的高表達量與生物體的抗逆性能力呈正相關(guān)。

3.2 溶藻弧菌感染96 h內(nèi)4個選擇系羅氏沼蝦肝胰腺中非特異性免疫免疫Se-GPx、CAT、SOD基因相對含量的差異

當生物體受到細菌、病毒等侵染時，甲殼動物會發(fā)生呼吸爆發(fā)的現(xiàn)象，這種呼吸爆發(fā)以及其他免疫活動中產(chǎn)生的活性氧分子會在細胞內(nèi)產(chǎn)生積累，對機體細胞產(chǎn)生嚴重的損害［19-21］。鑒于這種損害，甲殼動物的體內(nèi)會產(chǎn)生了很多的具有抗氧化作用的酶，一旦有過氧化物在體內(nèi)生成，便會立刻發(fā)揮作用，利用本身的氧化還原作用將過氧化物轉(zhuǎn)化為無害或毒害較低的物質(zhì)［22］。有研究指出對凡納濱對蝦注射溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus），用RT-PCR對Se-GPx基因mRNA在血淋巴細胞中的表達量分析后，發(fā)現(xiàn)隨著呼吸爆發(fā)現(xiàn)象的發(fā)生，Se-GPx基因的相對表達量在0-6 h時顯著升高，這也說明Se-GPx與凡納濱對蝦免疫過程有著緊密相關(guān)，因此在甲殼動物中Se-GPx基因的表達水平可以作為其適應(yīng)外界變化和抵御外界病原體入侵的重要指標［23，24］。CAT是抗氧化酶的其中一個，它在清除過氧化物和超氧自由基、減少或阻止羥基自由基的形成等方面發(fā)揮著重要作用。SOD也是體內(nèi)清除氧自由基主要的酶，它能有效地清除并終止O2引發(fā)的一系列反應(yīng)，對生物體的抗氧化和氧化平衡起關(guān)鍵作用［25-28］。有很多研究者也發(fā)現(xiàn)，給南美白對蝦投喂免疫增強劑之后，蝦體內(nèi)SOD的抗氧化活性會有上升，蝦的抗病能力也會增強、在感染細菌和病毒后的存活率有升高。Cheng等［29］克隆了羅氏沼蝦cMnSOD的基因，并且對對蝦進行注射細菌（Lactococcus garvieae），研究了該基因在血細胞和肝胰腺中的表達情況。孫燕等［30］研究在飼料中添加益生菌，凡納濱對蝦的成活率和肝胰腺中SOD基因的相對表達量都有所上升。張慶利［31］對對蝦感染W(wǎng)SSV后發(fā)現(xiàn)血細胞中的CAT基因的轉(zhuǎn)錄趨勢與CAT活性的變化趨勢基本一致，說明蝦感染W(wǎng)SSV后，通過大幅度提高CAT基因的轉(zhuǎn)錄，合成大量的CAT，調(diào)控細胞內(nèi)氧化還原反應(yīng)的動態(tài)平衡，在殺滅抵御感染的免疫反應(yīng)過程中起作用。在感染細菌或病毒后，通過熒光定量檢測，基因較高的表達量和生物的高成活率存在正相關(guān)的關(guān)系，因此本實驗通過對4個羅氏沼蝦抗病選擇系感染溶藻弧菌，通過熒光定量技術(shù)對4個選擇系羅氏沼蝦的非特異性基因表達量進行檢測分析，4個抗病選擇系在感染溶藻弧菌后肝胰腺中的Se-GPx、CAT、SOD表達量都有所增加，這也說明這3種酶參與了羅氏沼蝦的體液免疫。這表明Se-GPx、CAT、SOD對溶藻弧菌的侵入反應(yīng)比較敏感，在免疫過程中發(fā)揮著積極作用，可能為羅氏沼蝦的抗病能力以及病害防治工作提供理論依據(jù)。比較4個羅氏沼蝦選擇系在感染96 h內(nèi)Se-GPx、CAT、SOD相對表達量水平，可得出結(jié)論：在4個選擇系不同時間Se-GPx、CAT、SOD表達量也不相同，但是總體變化趨勢是A、B選擇系高于C、D選擇系。

4 結(jié)論

通過分析羅氏沼蝦4個抗病選擇系感染溶藻弧菌后肝胰腺中4個抗病力基因相對表達量的不同，再結(jié)合4個選擇系感染溶藻弧菌后成活率B>A>D>C，可以得出結(jié)論：甲殼動物體內(nèi)HSP70、Se-GPx、CAT、SOD均參與了清除弧菌、保護生物體的免疫反應(yīng)，且?guī)讉€基因表達量水平和機體的抗病力有直接的關(guān)系，表達量相對較高的生物體具有較強的抗病能力。本實驗室選育的4個抗病選擇系的抗病力強弱也有不同，B選擇系高于其他3個選擇系，A選擇系抗病力高于C、D選擇系，C和D選擇系抗病力差異不大。

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（責(zé)任編輯 李楠）

Comparing and Analyzing the Disease Resistances of Four Diseaseresistant Selected Lines of Macrobrachium rosenbergii

LI Yu-feng1DAI Xi-lin1YUAN Xin-cheng1ZHOU Xun1HU Yan-jie1DING Fu-jiang2
（1. National Demonstration Center for Experimental Fisheries Science Education（Shanghai Ocean University）；Key Laboratory of Freshwater Aquatic Genetic Resources（Shanghai Ocean University），Ministry of Agriculture；Shanghai Collaborative Innovation for Aquatic Animal Genetics and Breeding；2. Shanghai Shencao Special Fisheries Development Corps，Shanghai 201516）

Expressions of 4 disease-resistant genes（heat shock protein70（HSP70），Se-GPx，CAT，and SOD）from 4 selected lines（A，B，C，and D）of Macrobrachium rosenbergii were analyzed with real-time PCR. Infected with Vibrio alginolyticus，the disease-resistant abilities of the 4 selected lines were compared based on the survival rates of 4 selected lines and the expression differences ofHSP70，Se-GPx，CAT，and SOD among the 4 selected lines. The results showed that relative expression of HSP70 mRNA of A and B was obviously higher than that of C and D in the hepatopancreas（P<0.05）. The expressions of Se-GPx，CAT，and SOD changed significantly within 96 h，and were different among the 4 selected lines at different time；however，the general trend was that expressions in A and B were higher than those in C and D. The rate of A，B，C，and D was 65.0%，65.8%，51.7%，and 53.3% after infecting with V.alginolyticus for a week，it is inferred that disease-resistant ability of A and B is higher than that of C and D.

Macrobrachium rosenbergii；HSP70；non-specific immune；Vibrio alginolyticus

10.13560/J.cnki.biotech.bull.1985.2017-0096

2017-02-17

上海市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（蝦類）[滬農(nóng)科產(chǎn)字（2015）第5號]

李玉鋒，男，碩士研究生，研究方向：水產(chǎn)動物種質(zhì)資源于種苗工程；E-mail：959914518@qq.com

戴習(xí)林，男，博士，教授，研究方向：水產(chǎn)養(yǎng)殖與海洋生物學(xué)；E-mail：xldai@shou.edu.cn