唐輝蓉崔進張家驊代佑果李為明廖陳

（1. 昆明醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院，昆明 650101；2. 昆明醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院，昆明 650101 ）

PDSW聯(lián)合熱療對胃癌細胞和組織中COX-2、Bcl-2表達的影響

唐輝蓉1崔進1張家驊1代佑果2李為明1廖陳1

（1. 昆明醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院，昆明 650101；2. 昆明醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院，昆明 650101 ）

旨在探討生理性深層海水（PDSW）聯(lián)合熱療對人胃癌SGC-7901細胞和組織中COX-2和Bcl-2表達的影響，明確其在人胃癌SGC-7901體外和體內 的抗癌作用。通過在體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細胞株，隨機分為實驗組、對照組和空白組，實驗組加PDSW，對照組加生理鹽水，空白組不做其他處理，分別在37℃、40℃和43℃熱療 溫度下 培養(yǎng)。同時，將SGC-7901細胞注射至裸鼠皮下，建立移植瘤模型，隨機分為5組，至腫瘤長至直徑為1 cm時 ，分別進行 H2O+RT、H2O +40℃、H2O +43℃、PDSW+40℃、PDSW +43℃處理，用實時熒光定量PCR檢測細胞和組織中COX-2和Bcl-2 基因表達情況，Western blot檢測COX-2和Bcl-2蛋 白的表達情況。結果顯示，在SGC-7901細胞中和裸鼠皮下移植瘤的組織中，熱療均能降低COX-2、Bcl-2基因及蛋白的表達，同時，與生理鹽水組相比，PDSW聯(lián)合熱療處理下，細胞和組織中COX-2、Bcl-2表 達量顯著下降。P DSW聯(lián)合熱療能抑制胃癌SGC-7901細胞中COX-2、Bcl-2基因和蛋白的表達，從而有效抑制胃癌細胞的增殖。

PDSW；熱療；SGC-7901；COX-2；Bcl-2；qRT-PCR；Western blot

胃癌（Gastric cancer）是比較常見的一種惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率較高，在我國每年死于胃癌的人數(shù)高達十幾萬［1］，目前熱療在腫瘤治療上應用較廣，但它在臨床應用中存在一些缺點，如體溫明顯升高會使心臟的負荷增加，引起神經(jīng)上、生理上的不良反應，而溫和的全身熱療由于溫度上升范圍小而延長治療時間，且在溫和熱療的治療條件下，腫瘤細胞的活性可能仍維持較高水平。所以，溫度過高或治療時間過長，都會增加治療 的危險性，甚至引起一系列副作用［2，3］。因此，尋找有效的治療手段是醫(yī)學界急待解決的問題。目前已有相關文獻報道，生理性深層海水（PDSW）是“平衡微量元素”不可替代的最佳資源［4］，它具有低溫、水質潔凈穩(wěn)定、富含營養(yǎng)成分和礦物成分、細菌和病原菌較少等特點，將熱療與PDSW相結合，能提高全身熱療的療效，減輕副作用。

胃癌的發(fā)生通常是因為癌基因的激活和抑癌基因的抑制或失活而引起的。環(huán)氧合酶-2（COX-2）是合成前列腺素E2（PG E2）的一個關鍵酶［5，6］。大量研究表明COX-2表達高低與胃癌的 發(fā)生密切相關［7］。COX-2在正常組織中表現(xiàn)出低表達或不表達，但在腫瘤細胞中的表達量較高，因而使腫瘤細胞中的PGE2大量合成，PGE2除了能夠使腫瘤細胞快速生長增殖，還會激活Bcl-2的表達，Bcl-2為凋亡抑制基因，Bcl-2的表達則會抑制癌細胞的凋亡［8］。

近年來，已有很多基于COX-2和Bcl-2基因在癌組織中的表達及其臨床意義的研究［9］，但關于PDSW聯(lián)合熱療對胃癌細胞COX-2和Bcl-2基因表達的影響還未見報道，因此，本實驗通過PDSW聯(lián)合熱療，對人胃癌SGC-7901細胞進行體外培養(yǎng)，并將SGC-7901細胞注入裸鼠皮下，應用實時熒光定量PCR和Western blot來檢測胃癌細胞及裸鼠組織中COX- 2、Bcl-2 mRNA和蛋白的表達情況，旨在探討PDSW聯(lián)合熱療對COX-2和Bcl-2 mRNA及蛋白表達的影響，為PDSW聯(lián)合熱療治療胃癌提供分子依據(jù)，以期為胃癌的輔助治療提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料

人胃癌SGC-7901細胞，由昆明醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院腫瘤研究所提供。PDSW來源：取我國南海海域的“深層海水”（海平面200 m以下），閉光運送至昆明，室溫閉光儲存，在超微過濾后，用銅鋅合金去除海水中的重金屬，用反復凍融的方法濃縮海水，并去除多余的鹽份，制備成PDSW，其主要元素含量測定由農業(yè)部產(chǎn)品質量監(jiān)督檢驗測試中心（昆明）檢測，具體方法見本實驗室前期的研究［10］。4-5周齡BALB/c-nu/nu雄性裸鼠。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng)與處理 用含有10% FBS的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)SGC-7901細胞，置于5% CO2、37℃的恒溫培養(yǎng)箱中，隔天換液1次。當細胞匯合并鋪滿培養(yǎng)瓶底約80%-90%時進行傳代。待穩(wěn)定增長后，取對數(shù)生長期、細胞活力達到95%的細胞，制成單細胞懸液，接種于6孔板中，培養(yǎng)24 h后，進行分組處理。對照組（NC）：培養(yǎng)基+ SGC-7901+生理鹽水；實驗組（PDSW）：培養(yǎng)基+ SGC-7901+PDSW（1∶38稀釋，50 mL培養(yǎng)液加1.3 mL PDSW）；空白組（CON）：培養(yǎng)基+ SGC-7901。分別置于37℃（常規(guī)細胞培養(yǎng)）、40℃（持續(xù)培養(yǎng)6 h）、43℃（持續(xù)培養(yǎng)1 h）熱療溫度下培養(yǎng)，復溫37℃后繼續(xù)培養(yǎng)48 h，收集樣品。

1.2.2 SGC-7901人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型建立 購買4-5周齡BALB/c-nu/nu雄性裸鼠，明暗交替適應性飼養(yǎng)1周后開始實驗。在左腋背部皮下注射SGC-7901細胞，至腫瘤長至直徑為3 mm大小時，按溫度、給藥不同隨機分為5組，入組飼養(yǎng)至腫瘤長至直徑1 cm大小時開始熱療，隔日熱療一次，至第45 d處死全部小鼠。具體分組處理如下：荷瘤鼠+H2O+RT；荷瘤鼠+H2O+40℃；荷瘤鼠+H2O+43℃（H2O為生理鹽水）；荷瘤鼠+PDSW+40℃；荷瘤鼠+PDSW+43℃。

1.2.3 基因表達分析 采用TaKaRa公司的Trizol Reagent提取SGC-7901細胞和裸鼠皮下移植瘤組織中的總RNA，提取得到的RNA用由超微量分光光度計（Biomate3）和瓊脂糖凝膠電泳檢測其質量。檢測合格的RNA用ABI High capacity cDNA reverse transcription試劑盒進行反轉錄。將反轉錄后得到的cDNA作為模板，按照ABI公司的熒光定量分析試劑盒（SYBR Select Master Mix）進行RT-PCR，熒光定量反應體系為：SYBR Premix Ex TaqTMII（2×）10 μL，上下游引物各1 μL，cDNA模板2 μL，RNase-free water 6 μL，總體積20 μL。根據(jù)引物設計原則，從NCBI上獲得的目的基因mRNA全長序列，并使用軟件設計人的內參基因GAPDH和目的基因COX-2、Bcl-2，引物見表1。反應在ABI-7500熒光定量PCR儀器中進行，以GAPDH為內參，運用2-△△t法進行分析，△△CT=（CT目的基因-CT管家基因）實驗組-（CT目的基因-CT管家基因）。每個實驗數(shù)據(jù)3次重復。

表1 COX-2 Bcl-2基因實時熒光定量PCR所用引物

1.2.4 總蛋白的提取 使用RIPA裂解液（購自北京索萊寶生物科技有限公司）提取細胞和組織中的總蛋白，用BCA蛋白濃度測定試劑盒（購自碧云天生物科技有限公司）檢測所得蛋白的濃度，采用Western blot檢測蛋白條帶，最后用圖像分析軟件ImageJ對目的蛋白及內參蛋白（GAPDH）條帶進行灰度值測試，以目的/內參灰度值比值表示蛋白表達情況。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)用統(tǒng)計軟件SPSS11.5分析和Duncan多重比較，統(tǒng)計結果用軟件Sigmaplot10.0作圖。

2 結果

2.1 SGC-7901細胞中COX-2和Bcl-2基因表達情況

分別提取SGC-7901細胞CON、NC和PDSW組在3個溫度條件處理下的總 RNA，瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA結果（圖1）顯示，電泳后均出現(xiàn)了3條清晰的rRNA條帶，表明提取的RNA質量較好。

總RNA經(jīng)逆轉錄合成cDNA后，進行qRT-PCR檢測。對獲得的CT值進行相對定量分析，結果表明，熱療后3個處理下的COX-2基因表達量均隨溫度的升高而不斷下降，PDSW+43℃聯(lián)合熱療組COX-2基因mRNA水平有較大幅度的下調，比37℃處理下的表達量低24.3%，表現(xiàn)出顯著差異（P=0.015），但相同溫度條件下空白組和生理鹽水組下降差異不顯著，分別比37℃處理下的表達量低16.1%和19.5%（圖2-A）；熱療后3個處理下的Bcl-2基因表達量均下調，PDSW+43℃聯(lián)合熱療組Bcl-2 mRNA 水平下調量較大，比37℃處理下的表達量低23.0%（圖2-B），表現(xiàn)出顯著差異（P=0.018）。說明熱療能有效抑制COX-2和Bcl-2基因的表達，PDSW聯(lián)合熱療組COX-2和Bcl-2表達量更低。

圖1 RNA瓊脂糖凝膠電泳檢測

圖2 SGC-7901細胞中COX-2（A）和Bcl-2（B）熒光定量檢測結果

2.2 裸鼠組織中COX-2和Bcl-2基因表達情況

分別提取不同溫度處理下裸鼠腫瘤組織中的總RNA，用紫外分光光度儀測定RNA的純度和濃度，OD260/280比值均在1.8-2.0之間，表明提取的RNA純度較高，1% 瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA結果（圖3）表明，電泳后均出現(xiàn)了28S、18S和5S三條清晰的rRNA條帶，表明提取RNA較好。

圖3 RNA瓊脂糖凝膠電泳圖譜

總RNA經(jīng)逆轉錄合成cDNA后，進行qRT-PCR檢測，對獲得的 CT 值進行相對定量分析，結果（圖4）表明，與常溫處理條件相比，在H2O+40℃、H2O+43℃、PDSW+40℃和 PDSW+43℃的處理條件下，COX-2和Bcl-2的表達水平均下降，且在相同溫度下，PDSW組的表達量低于H2O組的表達量。對于COX-2，PDSW+40℃處理下表達量比正常組低22.4%，表現(xiàn)出顯著差異（P=0.015），同時比H2O+40℃處理下的表達量低14.7%，PDSW+43℃處理下表達量比正常組低57.1%，表現(xiàn)出極顯著差異（P=0.00），同時比H2O+43℃處理下的表達量低31.9%；對于Bcl-2，PDSW+40℃處理下表達量比正常組低15.3%，差異不顯著（P=0.061），同時比H2O+40℃處理下的表達量低9.0%，PDSW+43℃處理下表達量比正常組低35.0%，表現(xiàn)出極顯著差異（P=0.002），同時比H2O+43℃處理下的表達量低20.4%。表明PDSW聯(lián)合熱療后胃癌組織中COX-2和Bcl-2基因的表達水平下降，并且隨著溫度的升高，表達下降差異更明顯。

2.3 SGC-7901細胞中COX-2和Bcl-2蛋白表達情況分別提取不同處理細胞的總蛋白，經(jīng)BCA 法定量后，每個膠孔中加入等量的蛋白，以GAPDH為內參，運用Western blotting檢測細胞中COX-2和Bcl-2蛋白表達，結果（圖5）表明，在相對分子量74 kD（COX-2）和26 kD（Bcl-2）的位置出現(xiàn)了清晰的目的條帶。

圖 4 qRT-PCR檢測COX-2和Bcl-2基因在mRNA水平的表達

圖5 Western Blot檢測細胞中COX-2和Bcl-2的蛋白條帶

用Image J圖像分析軟件分別對目的蛋白COX-2、Bcl-2和內參GAPDH蛋白條帶分別進行分析，計算其表達量。運用t檢驗進行顯著性差異分析，結果顯示如圖6。在PDSW聯(lián)合熱療下，COX-2/GAPDH灰度比值明顯下調，且差異性顯著，在43℃下CON、NC和PDSW組分別比在37℃下低30.5%（P=0.004）、44.5%（P=0.00）和54.7%（P=0.00）。Bcl-2/GAPDH在PDSW聯(lián)合熱療下的灰度比值也下降，在43℃下CON、NC和PDSW組分別比在37℃下低28.3%（P=0.001）、9.6%（P=0.16）和10.1%（P=0.00）。表明不同溫度不同條件處理后，COX-2和Bcl-2蛋白表達量均降低，在PDSW聯(lián)合熱 療處理下蛋白表達 較低，與基因表達情況一致。

圖6 不同處理下細胞中COX-2（A）和Bcl-2（B）蛋白表達情況

2.4 裸鼠組織中COX-2和Bcl-2蛋白表達情況

分別提取不同處理裸鼠組織中的總蛋白，以GAPDH為內參，運用Western blotting檢測細胞中COX-2和Bcl-2蛋白表達，得到的目的蛋白條帶如圖7。

圖7 Western Blot檢測組織中COX-2和Bcl-2的蛋白條帶

用ImageJ圖像分析軟件分別對目的蛋白COX-2、Bcl-2和內參GAPDH蛋白條帶分別進行半定量分析，計算其表達量。運用t檢驗進行顯著性差異分析，結果（圖8）顯示，在H2O+RT、H2O+40℃、PDSW+40℃和H2O+43℃處理組中，胃癌組織中COX-2和Bcl-2蛋白表達變化不明顯，在PDSW+ 43℃處理下表達急劇下降，與正常組相比，COX-2和Bcl-2蛋白表達量分別比正常組低43.5%（P=0.004）和16.9%（P=0.016）。說明PDSW聯(lián)合熱療能有效降低COX-2和Bcl-2蛋白的表達量。

圖8 不同處理下組織中COX-2和Bcl-2蛋白表達情況

3 討論

在腫瘤治療中，熱療既能誘導細胞凋亡，又能使細胞直接死亡，很多體外研究發(fā)現(xiàn)，熱療一般存在一個閾溫度，主要機制為在閾值以下溫度誘導細胞的凋亡，而閾值以上溫度則會引起細胞壞死。Tang等［11］研究表明，對于多數(shù)胃癌細胞而言，43℃只有短暫的抑制細胞增殖的作用，并不存在細胞凋亡。PDSW能為細胞生長提供平衡的微量元素，本實驗室前期的研究表明，由于腫瘤細胞在功能和結構上存在缺陷，因此在PDSW條件下，正常細胞表達增強，提高了熱的閾溫度值，增強了耐熱能力；而腫瘤細胞代謝能力旺盛，在PDSW條件下，細胞內富集了某些元素，可導致這些元素在瘤細胞中不斷積累并超載，從而使腫瘤細胞的閾溫度降低，耐熱力降低［12］。本研究通過PDSW聯(lián)合熱療對胃癌SGC-7901細胞進行體外和體內處理，檢測COX-2和Bcl-2基因及蛋白的表達，試圖從分子及蛋白層面上來解釋PDSW聯(lián)合熱療對胃癌細胞的抑制作用機制。

COX-2蛋白是一種可誘導型限速酶，一般在正常的組織中含量很低，當發(fā)生炎癥反應時能被迅速誘導，從而導致發(fā)熱、紅腫或疼痛等癥狀的發(fā)生。有關研究表明，COX-2蛋白在結腸癌［13］、乳腺癌［14］等癌組織中表達量較高，COX-2可能有以下幾方面的作用機制［15-17］：（1）加快合成前列腺素，抑制機體免疫反應；（2）促進腫瘤血管形成并抑制腫瘤細胞的凋亡；（3）使腫瘤細胞基質中金屬蛋白表達上調；（4）誘導活化致癌前體物質。由于COX-2高表達發(fā)生在癌前病變，且顯著高于正常組織，所以一般認為COX-2的高表達出現(xiàn)在腫瘤發(fā)生早期，因此很多研究把COX-2作為治療胃癌的靶點。李士坤等［7］檢測了不同類型的胃息肉組織，發(fā)現(xiàn)其中都有COX-2蛋白的表達，且不同類型間的表達率存在顯著差異，尤其是瘤樣組織中的COX-2蛋白表達極為顯著。有研究發(fā)現(xiàn)［18］，COX-2蛋白在胃癌組織、不典型增生組織、萎縮化生性病變組織、淺表性胃炎組織和正常胃黏膜組織中的表達情況完全不同，在胃癌組織中表達率最高，正常胃黏膜組織中表達最低，其中，不典型增生組織中COX-2蛋白的表達率隨著病變程度的加重而增高，認為COX-2與胃癌發(fā)生前期有密切聯(lián)系。由于COX-2的高表達會使腫瘤細胞中的PGE2大量合成，PGE2除了能夠使腫瘤細胞快速生長增殖，還會激活凋亡抑制基因Bcl-2的表達，最終會抑制癌細胞的凋亡，加快癌變的發(fā)展。本研究通過PDSW聯(lián)合熱療對胃癌細胞及組織進行處理，結果表明，無論在SGC-7901細胞中還是裸鼠皮下移植瘤的組織中，熱療均能降低COX-2基因及蛋白的表達，通過抑制COX-2的表達來抑制癌細胞的增長，同時，與生理鹽水組相比，PDSW聯(lián)合熱療處理下，細胞和組織中COX-2表達量顯著下降，這說明PDSW與熱療相聯(lián)合，能有效抑制COX-2的表達，從而抑制胃癌腫瘤細胞的增長。

癌基因Bcl-2是一個凋亡抑制基因，近年來已發(fā)現(xiàn)Bcl-2基因在結腸癌、淋巴瘤和乳腺癌等很多腫瘤組織中均過表達［9］。Bcl-2的表達與胃癌關系密切，F(xiàn)orones等［20］研究了胃癌中Bcl-2蛋白的表達情況，發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中，Bcl-2蛋白的表達率為68%，顯著高于其在腸化組織中的表達率，而且早期胃癌組織中的表達率要比進展期胃癌組織的表達率高。因此，Bcl-2同樣在正常的胃黏膜組織中表達量較低。Bcl-2蛋白的表達量在胃癌從良性向惡性過渡的過程中逐漸升高，在胃癌組織和正常組織中表達存在顯著性差異。田明等［21］研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織和正常胃組織中的Bcl-2蛋白表達率分別為62.5%和14.3%，表明Bcl-2基因在胃癌發(fā)生過程中起重要作用，其高表達同樣是胃癌發(fā)生的早期事件。彭鵬等［22］研究推測，Bcl-2與腫瘤的進展無顯著相關，而與癌變前期的過程有關。因此可將Bcl-2的表達情況作為監(jiān)測胃黏膜早期癌變與否的指標。本研究結果表明，沒經(jīng)過處理的SGC-7901細胞和裸鼠皮下移植瘤的組織中，Bcl-2基因和蛋白的表達較高，可反映出胃癌細胞較高的增殖活性，經(jīng)熱療處理后，Bcl-2表達量降低，且PDSW聯(lián)合熱療處理后Bcl-2表達量更是顯著降低，間接反映出PDSW聯(lián)合熱療能有效抑制胃癌細胞的增殖，從而起到治療腫瘤的效果。

本實驗前期應用PDSW聯(lián)合熱療對肝癌細胞進行了研究發(fā)現(xiàn)，單用PDSW處理肝癌細胞時，沒有促進肝癌細胞的生長，但PDSW聯(lián)合熱療后，能使帶肝癌腫瘤的實驗動物生存時間延長，且能增強熱療的抗癌作用［12］。本研究結果也表明，PDSW聯(lián)合熱療可以通過控制癌基因和抑癌基因的表達，進而抑制人胃癌SGC-7901細胞的增殖和移植瘤實驗動物癌組織的增長，提高抗癌作用。綜上所述，PDSW聯(lián)合熱療能有效抑制SGC-7901細胞和裸鼠皮下移植瘤組織中COX-2、Bcl-2基因和蛋白的表達，從而抑制胃癌細胞的增殖。其中更多的作用機制和抑制途徑，還需進行深入的研究，關于PDSW聯(lián)合熱療能抑制SGC-7901細胞的增殖，其在臨床上的應用，以及可能產(chǎn)生的不良反應、并發(fā)癥等還需大量的研究。

4 結論

PDSW聯(lián)合熱療能有效抑制SGC-7901細胞和裸鼠皮下移植瘤組織中COX-2、Bcl-2基因和蛋白的表達，從而抑制胃癌細胞的增殖，最終達到治療腫瘤的療效。

［1］季蒙蒙, 楊金偉, 杜斌, 等. 天麻素對胃癌細胞活力和凋亡的影響［J］. 現(xiàn)代生物醫(yī)學進展, 2015（13）：2421-2424.

［2］ 張佳慧, 秦麗娟. 腫瘤熱療的研究進展［J］. 前沿進展, 2012, 9：1424-1426.

［3］閆向勇, 劉文超. 熱療在腫瘤治療中的研究進展［J］. 世界中西醫(yī)結合雜志, 2014, 9（2）：213-216.

［4］崔進. “深層海水”在醫(yī)學領域中的研究［J］. 昆明醫(yī)學院學報, 2011, 32（8）：l-2.

［5］Kozak KR, Rowlinson SW, Marnett LJ. Oxygenation of the endocannabinoid, 2-arachidonylglycerol, to glyceryl prostaglandins by cyclooxygenase-2［J］. J Biol Chem, 2000, 275：33744-33749.

［6］Radmark O, Shimizu T, Jornvall H, et al. Leukotriene A4 hydrolase in human leukocytes. Purification and properties［J］. J Biol Chem, 1984, 259：12339-12345.

［7］李士坤, 任慶梅, 陳克河. 不同類型胃息肉組織中COX-2基因蛋白的表達及其意義［J］. 中國實用醫(yī)藥, 2012, 7（29）：51-52.

［8］田慧軍, 鄧濤, 沈志祥, 等. 大腸癌和大腸腺瘤COX-2和Bcl-2的基因表達及其意義［J］. 胃腸病學和肝病學雜志, 2003, 12（6）：544-546.

［9］肖煒明, 施瑞華, 丁巖冰, 等. 胃癌組EGFR和COX-2表達的意義及其相關性［J］. 世界華人消化雜志, 2007, 15（2）：123.

［10］李為明, 崔進, 徐鵬遠, 代佑果, 深層海水對小鼠創(chuàng)面愈合的促進作用［J］. 重慶醫(yī)學, 2014, 2（43）：462-464.

［11］Tang R, Zhu ZG, Qu Y, et al. The impact of hyperthermic chemotherapy on human gastric cancer cell lines：preliminary results［J］. Oncol Rep 2006, 16（3）：549-559.

［12］代佑果. “深層海水”與熱療聯(lián)合治療肝細胞癌的實驗性研究［M］. 昆明醫(yī)科大學, 2014, 5.

［13］Miladi-Abdennadher I, Abdelmaksoud-Dammak R, Ayed-Guerfali DB, et al. Expression of COX-2 and E-cadherin in Tunisian patients with colorectal adenocarcinoma［J］. Acta Histochemica, 2012, 114（6）：577-581.

［14］Serra KP, Sarian LO, Rodrigues-Peres RM, et al. Expression of cyclooxygenase-2（COX-2）and p53 in neighboring invasive and in situ components of breast tumors［J］. Acta Histochemica, 2012, 114（3）：226-231.

［15］Leung WK, To RF, Ng YP, et al. Association between cyclooxygenase-2 overexpression and missense P53 mutations, in gastric cancer［J］. Br J Cancer, 2001, 84（3）：335-339.

［16］李百文, 沈強. 胃癌不同臨床病理分期中環(huán)氧合酶與E基質金屬蛋白酶的表達及其相關性［J］. 復旦學報：醫(yī)學版, 2007, 34（1）：223.

［17］李杰, 楊紅, 郝洪嶺, 等. 環(huán)氧合酶2與腫瘤研究進展［J］.臨床誤診誤治, 2012, 25（4）：73-75.

［18］陳美霓, 郭浩, 郭巍, 等. COX-2蛋白和VEGF-C蛋白在胃癌和非胃癌黏膜病變組織中的表達及臨床意義［J］. 海南醫(yī)學, 2015, 26（18）：2671-2674.

［19］Forones NM, Carvalho AP, Giannotti-Filho O, et al. Cell proliferation and apoptosis in gastric cancer and intestinal metaplasia［J］. ArqGastroenterol, 2005, 42（1）：30-34.

［20］Anagnostopoulos GK, Stefanou D, Arkoumani E, et al. Bax and Bcl-2 protein expression in gastric precancerous lesions：immunohisto chemical study［J］. J Gastroenterol Hepatol, 2005, 20（11）：1674-1678.

［21］田明, 張云鋒, 杜寧, 等. PTEN和bcl-2在胃癌組織中的表達及臨床意義［J］. 陜西醫(yī)學雜志, 2011, 40（2）：148-151.

［22］彭鵬, 鄒文蓉. p53, VEGF, Bcl-2在進展期胃癌組織中的表達［J］. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生, 2011, 27（2）：184-186.

（責任編輯 李楠）

Effects of PDSW Combined with Hyperthermia on COX-2 and Bcl-2 Expressions in Gastric Cancer Cells and Tissues

TANG Hui-rong1CUI Jin1ZHANG Jia-hua1DAI You-guo2LI Wei-ming1LIAO Chen1
（1. Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University，Kunming 650101；2. Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University，Kunming 650101）

This work aims to explore the effect of PDSW combined with hyperthermia on COX-2 and Bcl-2 expressions in gastric cancer cells SGC-7901 and t issues，and to clar ify its anti-can cer effects on gastric cancer cells SGC-7901 in vitro a n d in vivo. The SGC-79 01 cells were cultured in vitro and then were randomly divided into experimental，control and blank groups；the experimental group was added with PDSW，control group was given with normal saline，blank group was in no other treatment，and each group were cultured under 37℃，40℃ and 43℃respectively. Concurrently，the SGC-7901 cells were injected into the nude mice subcutaneous to establish the transplantation tumor model. The injected mice were randomly divided into 5 groups，and then given the treatment with H2O+RT，H2O +40℃，H2O +43℃，PDSW+40℃，and PDSW+43℃ respectively when the tumor cells grew to 1 cm diameter. qRT-PCR and Western blot were used to detect the mRNA of gene COX-2 and Bcl-2 and the protein expression of COX-2 and Bcl-2 in the cells and tissues. As r esults，in SGC-7901 cells and nu d e mice s ubcutaneous transplantation tumor tissue s，the expressions of gene COX-2 and Bcl-2 mRNA and their protein expressions decreased under the treatment of hyperthermia. Compared with the treatment of normal saline group，the expressions of gene COX-2 and Bcl-2 and their protein expression decreased remarkably under the treatment of PDSW combined wit h hyperthermia. Conclusively，PDSW combined with hyperthermia may inhibit the expressions of gene COX-2 and Bcl-2 and their protein expressions in gastric cancer SGC-7901 cells and tissues，so as to effectively inhibit the proliferation of gastric cancer cells.

PDSW；hyperthermia treats；SGC-7901；COX-2；Bcl-2；qRT-PCR；Western blot

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016-0691

2016-07-21

云南省科學技術廳聯(lián)合專項（2010CD166）

唐輝蓉，女，博士，研究方向：消化外科；E-mail：tgyxjob@163.com

崔進，男，博士，教授，博士生導師，研究方向：干療外科；E-mail：yncuijin@126.com