鄭良棟 何雪梅 張 婷 劉 潔 霍本念 劉夢(mèng)楠 王 薛 馮 濤

(重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心，重慶400016)

·生物治療·

人胚胎干細(xì)胞對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞體外抑制作用的研究①

鄭良棟②何雪梅 張 婷②劉 潔②霍本念②劉夢(mèng)楠②王 薛 馮 濤②

(重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心，重慶400016)

目的：研究體外共培養(yǎng)情況下人胚胎干細(xì)胞H9對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的抑制作用。方法：建立人胚胎干細(xì)胞 (H9) 與肝癌HepG2細(xì)胞共培養(yǎng)體系,顯微鏡下觀察胚胎干細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，流式細(xì)胞儀檢測(cè)H9細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡與周期的影響，Transwell小室法檢測(cè)H9細(xì)胞對(duì)HepG2細(xì)胞侵襲和遷移的影響，基因芯片分析共培養(yǎng)后HepG2細(xì)胞全基因組的表達(dá)譜變化。結(jié)果：結(jié)果發(fā)現(xiàn)共培養(yǎng)過(guò)程中，肝癌HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，隨共培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，出現(xiàn)老化或凋亡跡象；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HepG2細(xì)胞凋亡率顯著增加，細(xì)胞周期被阻滯于G0/G1期；Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HepG2細(xì)胞侵襲、遷移力均降低；基因芯片結(jié)果發(fā)現(xiàn)HepG2細(xì)胞全基因組表達(dá)譜發(fā)生了顯著變化，差異基因涉及多條信號(hào)通路。結(jié)論：人胚胎干細(xì)胞H9體外對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2有一定程度的抑制作用。

胚胎干細(xì)胞;肝癌；共培養(yǎng);抑制;凋亡

人胚胎干細(xì)胞是從人早期胚胎的囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中分離出來(lái)的多潛能干細(xì)胞，具有無(wú)限增殖性、自我更新性和維持未分化狀態(tài)等特性，在基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用方面具有廣闊的前景。

在腫瘤機(jī)制研究中，研究者發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞尤其是腫瘤干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞在許多生物學(xué)行為上具有高度相似性，比如都具有無(wú)限增殖性、高表達(dá)端粒酶、侵襲、遷移性等，并且可從機(jī)體的免疫監(jiān)視中逃逸，具有一些相同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[1-3]。但是，二者在對(duì)腫瘤作用方面卻截然不同：腫瘤基質(zhì)具有很強(qiáng)的致癌性，能夠體外誘導(dǎo)正常細(xì)胞癌變，然而胚胎干細(xì)胞微環(huán)境卻能夠使得癌細(xì)胞的惡性表型顯著改善，促進(jìn)其向良性轉(zhuǎn)化[4]。

共培養(yǎng)是將兩種或多種細(xì)胞混合培養(yǎng)，使得一種細(xì)胞的形態(tài)功能能夠穩(wěn)定表達(dá)并且維持相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間[5]。細(xì)胞共培養(yǎng)技術(shù)在腫瘤的實(shí)驗(yàn)性治療、干細(xì)胞分化誘導(dǎo)等多方面均具有廣泛應(yīng)用。

為了進(jìn)一步驗(yàn)證人胚胎干細(xì)胞是否具有體外抗腫瘤效應(yīng)。本研究選擇人胚胎干細(xì)胞系H9與肝癌HepG2細(xì)胞建立共培養(yǎng)模型，并觀察共培養(yǎng)過(guò)程中胚胎干細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、凋亡、細(xì)胞周期、侵襲、遷移等的影響，并嘗試?yán)没蛐酒夹g(shù)初步探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1主要試劑 人胚胎干細(xì)胞系H9細(xì)胞購(gòu)自北京賽貝生物技術(shù)有限公司；人肝癌HepG2細(xì)胞株由重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心保存；PSCeasy人多潛能干細(xì)胞培養(yǎng)基(北京賽貝生物技術(shù)有限公司)；胎牛血清，DMEM培養(yǎng)基(HyClone，USA)；hoechst33258(碧云天生物技術(shù)研究所)；Transwell小室(Coster)；Matrigel基質(zhì)膠(Sigma公司)。

1.1.2主要儀器 CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(Thermo公司)；-80℃超低溫冰箱(Thermo公司)；-20℃普通冰箱(Thermo公司)；倒置熒光顯微鏡(Olympus公司)；YJ-1450型醫(yī)用超凈工作臺(tái)(華新器械公司)；臺(tái)式離心機(jī)(湘儀離心機(jī)儀器公司)；普通倒置顯微鏡(重慶光學(xué)儀器公司)。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) HepG2細(xì)胞用含10%胎牛血清、青霉素100 U/ml、鏈霉素100 μg/ml的DMEM完全培養(yǎng)基在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3～4 d傳代一次，取對(duì)數(shù)期細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。

人胚胎干細(xì)胞系H9，培養(yǎng)于Basement Membrane Matrix上，培養(yǎng)液為胚胎干細(xì)胞完全培養(yǎng)基。保持每天換液1次，當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到80%時(shí)，用EDTA 在37℃下溫和消化5 min，然后離心細(xì)胞棄去上清，用新鮮的PSCeasy完全培養(yǎng)液重懸，以1∶5～1∶10的比例傳代。

1.2.2共培養(yǎng)過(guò)程中HepG2細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 根據(jù)上述胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)詳細(xì)方法，將H9細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)，待細(xì)胞匯合度達(dá)到50%(即細(xì)胞團(tuán)塊約長(zhǎng)滿6孔板底面積的一半)時(shí)，吸棄原干細(xì)胞專用培養(yǎng)基，用PBS溶液清洗細(xì)胞2遍。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌HepG2細(xì)胞，以每孔5×105個(gè)接種于上述已經(jīng)鋪有50%胚胎干細(xì)胞H9的6孔板中，每孔加入DMEM完全培養(yǎng)基3 ml于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)共培養(yǎng)。在共培養(yǎng)開(kāi)始時(shí)，另外于6孔板設(shè)置相同細(xì)胞量的單獨(dú)培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞和肝癌細(xì)胞作為陰性對(duì)照。每隔24 h換液一次，以保證細(xì)胞生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)充足。共培養(yǎng)細(xì)胞分別于24、48、72 h后于顯微鏡下觀察各組細(xì)胞的變化并拍照。

1.2.3肝癌細(xì)胞周期、凋亡檢測(cè) 共培養(yǎng)：將H9細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)，待細(xì)胞匯合度達(dá)到70%時(shí)，備用。將對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)狀態(tài)良好的HepG2細(xì)胞5×105個(gè)接種到6孔板適用的Transwell小室(0.4 μm)底部，用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)到細(xì)胞貼壁。實(shí)驗(yàn)分組：肝癌HepG2與干細(xì)胞H9共培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組(H9+HepG2)，單獨(dú)培養(yǎng)的肝癌HepG2為空白對(duì)照組(HepG2)。Transwell小室用 PBS洗2遍，然后插入預(yù)先種有H9細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)板里，將各組細(xì)胞同時(shí)放入孵箱中培養(yǎng)到48 h。

共培養(yǎng)結(jié)束后，收集實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的肝癌HepG2細(xì)胞，用PBS洗2次，然后用預(yù)冷的70%乙醇固定細(xì)胞，PI染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。

共培養(yǎng)結(jié)束后，收集實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的HepG2細(xì)胞，PBS洗2遍后，PBS重懸，上流式細(xì)胞儀，用AnnexinV-PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。

1.2.4肝癌細(xì)胞侵襲和遷移實(shí)驗(yàn) Matrigel包被：將Matrigel 基質(zhì)膠從-20℃拿出，于4℃冰箱放置過(guò)夜解凍，然后用4℃預(yù)冷的無(wú)血清1640培養(yǎng)基稀釋至1 mg/ml 的濃度，取稀釋過(guò)的Matrigel 膠800 μl 加入到Transwell的上室，將Transwell小室放在37℃細(xì)胞孵箱溫育4～5 h，使上室膜上形成一層凝膠。將對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)狀態(tài)良好的HepG2細(xì)胞5×105個(gè)接種到6孔板適用的8.0 μm孔徑Transwell小室底部(侵襲實(shí)驗(yàn)使用的Transwell小室預(yù)先經(jīng)Matrigel包被，遷移實(shí)驗(yàn)則不需Matrigel包被)，用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)到細(xì)胞貼壁，血清饑餓處理12 h。實(shí)驗(yàn)組的Transwell小室用 PBS洗2遍，然后插入預(yù)先種有70%匯合度H9細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)板孔里；對(duì)照組的Transwell小室用 PBS洗2遍后則插入未接種H9的空白培養(yǎng)板孔里將各組細(xì)胞同時(shí)放入孵箱中培養(yǎng)24 h。

培養(yǎng)結(jié)束后，用醫(yī)用棉簽輕柔擦去上室表面細(xì)胞，然后用甲醇固定15 min。PBS潤(rùn)洗2遍后，0.1%濃度的結(jié)晶紫溶液室溫下染色30 min，然后用PBS洗凈染液，將Transwell晾干，在倒置顯微鏡下觀察穿過(guò)小室膜的細(xì)胞數(shù)目并拍照記錄。每個(gè)小室可隨機(jī)選取5個(gè)不同的視野，數(shù)出視野里的細(xì)胞數(shù)目，求出平均值。

1.2.5基因芯片檢測(cè)肝癌細(xì)胞基因變化 細(xì)胞前期共培養(yǎng)處理同1.2.3的“共培養(yǎng)”項(xiàng)。

共培養(yǎng)48 h后，胰酶消化收集細(xì)胞，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌1次后收集細(xì)胞，并用PBS液重懸細(xì)胞，并送往上海伯豪生物技術(shù)有限公司[生物芯片(上海)國(guó)家工程研究中心]進(jìn)行基因芯片分析，用Affymetrix表達(dá)譜芯片測(cè)定樣品的全基因組表達(dá)情況。

2 結(jié)果

2.1共培養(yǎng)的生物學(xué)行為觀察 人胚胎干細(xì)胞H9與肝癌HepG2細(xì)胞共培養(yǎng)一段時(shí)間后，肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制。如圖1所示，共培養(yǎng)0 h時(shí)，干細(xì)胞與肝癌細(xì)胞狀態(tài)均很好，24 h后，肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)開(kāi)始受到抑制，細(xì)胞開(kāi)始變稀疏，尤其是靠近干細(xì)胞團(tuán)塊的肝癌細(xì)胞受到抑制而生長(zhǎng)稀疏。隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，癌細(xì)胞凋亡加劇，到72 h時(shí)，已經(jīng)可見(jiàn)細(xì)胞數(shù)量明顯減少。且在共培養(yǎng)過(guò)程中胚胎干細(xì)胞因?yàn)槭芘囵B(yǎng)基、環(huán)境等因素影響，細(xì)胞極易脫落，即原來(lái)致密的細(xì)胞團(tuán)塊開(kāi)始疏松并且脫落漂浮，脫落后其原來(lái)生長(zhǎng)過(guò)的空間短時(shí)間腫瘤細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)。且發(fā)現(xiàn)，共培養(yǎng)初始時(shí)覆蓋在胚胎干細(xì)胞表面的腫瘤細(xì)胞，最終繼續(xù)貼附著在干細(xì)胞表面而漂浮死亡。而單獨(dú)培養(yǎng)的H9和HepG2細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖均正常。

2.2共培養(yǎng)對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響 共培養(yǎng)48 h后，AnnexinV-PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果見(jiàn)圖2。與單獨(dú)培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞相比，共培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞，其凋亡率有所增加，具有顯著性差異(P<0.05)。從單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)的5.21%增加到共培養(yǎng)時(shí)的30.14%。

2.3共培養(yǎng)對(duì)腫瘤細(xì)胞周期的影響 與單獨(dú)培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞相比，共培養(yǎng)組的HepG2細(xì)胞在作用48 h后，G0/G1期細(xì)胞比率增加顯著，從49.80%增加到72.91%；G2/M期有所下降，從16.21%降到7.25%；S期從33.99%降到19.85%?？梢?jiàn)，細(xì)胞停留在G0/G1期比率增加，表現(xiàn)出明顯的G0/G1期阻滯，其差異具有顯著性差異(P<0.05)。見(jiàn)圖3。

圖1 HepG2的細(xì)胞形態(tài)變化(×100)Fig.1 Morphological changes of HepG2 cells(×100)

2.4共培養(yǎng)對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移的影響 如圖4和表1所示，在侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)中，共培養(yǎng)組肝癌HepG2細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)均明顯少于對(duì)照組HepG2細(xì)胞(P<0.05),即共培養(yǎng)組肝癌HepG2細(xì)胞穿透Matrigel基底膜的侵襲力明顯低于對(duì)照組細(xì)胞，共培養(yǎng)組肝癌HepG2細(xì)胞穿透小室底膜的遷移能力也較對(duì)照組低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖2 H9細(xì)胞對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響Fig.2 Effect of H9 on apoptosis of HepG2 cells

圖3 H9對(duì)HepG2細(xì)胞周期的影響Fig.3 Effect of H9 on cell cycle of HepG2 cellsNote: A.HepG2 cell line was cultured alone;B.HepG2 cell line was co-cultured with H9.

圖4 H9細(xì)胞對(duì)HepG2細(xì)胞侵襲和遷移的影響(×200)Fig.4 Effect of H9 on invasion and migration of HepG2 cells(×200)

2.5共培養(yǎng)對(duì)腫瘤細(xì)胞全基因組表達(dá)譜的影響 采用信號(hào)比值方法對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行分析。針對(duì)掃描到的探針信號(hào)值實(shí)驗(yàn)組/對(duì)照組。篩選2倍以上變化基因?yàn)椴町惢?。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，差異的基因共15 588個(gè)。其中上調(diào)的基因6 640個(gè)，下調(diào)的基因8 948個(gè)。差異基因散點(diǎn)圖見(jiàn)圖5。

這些差異基因涉及多個(gè)方面，包括細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖、遷移、免疫應(yīng)答等。其中凋亡相關(guān)基因有BCL-2、caspase3、caspase7、caspase8、caspase9、caspase10、AKT1、TRAF1等數(shù)百條，涉及多條凋亡調(diào)控通路。免疫相關(guān)基因也有IL-1、IL-2、IL-4、IL-8、CCL1、CCL16、CCL20、HLA-A、HLA-B、HLA-C等數(shù)百條基因，涉及B細(xì)胞、T細(xì)胞和NK細(xì)胞、免疫因子如干擾素、腫瘤壞死因子等參與的信號(hào)通路。由于涉及的差異基因數(shù)目和通路較多，只列舉出差異基因GO富集分析中部分我們感興趣的結(jié)果，見(jiàn)表2。

表1 HepG2細(xì)胞侵襲和遷移的數(shù)量

圖5 散點(diǎn)圖Fig.5 Plot scatter plotNote:s3.Co-culture group;s5.Control group.

3 討論

細(xì)胞共培養(yǎng)技術(shù)在腫瘤的實(shí)驗(yàn)性治療、腫瘤的侵襲性[6-10]、體內(nèi)基因表達(dá)的模擬等方面均具有重要意義[9-11]。本研究中我們采用共培養(yǎng)體系，研究體外環(huán)境中胚胎干細(xì)胞及其微環(huán)境對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的抑制作用，并探索其機(jī)制。首先，我們發(fā)現(xiàn)經(jīng)與胚胎干細(xì)胞共培養(yǎng)的肝癌HepG2細(xì)胞發(fā)生了形態(tài)學(xué)變化，具體表現(xiàn)為癌細(xì)胞狀態(tài)不佳，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，部分細(xì)胞出現(xiàn)老化或凋亡跡象。為了進(jìn)一步驗(yàn)證胚胎干細(xì)胞的這種體外抑癌效應(yīng)，我們使用了流式細(xì)胞儀檢測(cè)共培養(yǎng)后肝癌HepG2細(xì)胞的凋亡率和細(xì)胞周期變化，流式檢測(cè)結(jié)果與觀察到的現(xiàn)象一致。與單獨(dú)培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞相比，共培養(yǎng)組的HepG2細(xì)胞處于G0/G1期細(xì)胞數(shù)目顯著增多，而G2/M、S期細(xì)胞數(shù)目減少，表現(xiàn)出明顯的G0/G1期阻滯，并且細(xì)胞凋亡率也有明顯的升高?？赡艿脑蚴桥咛ジ杉?xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中或其微環(huán)境中，存在一些細(xì)胞因子，可調(diào)控細(xì)胞周期和誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞進(jìn)入凋亡程序，并在某種程度上對(duì)腫瘤細(xì)胞基因重編程，使一些惡性表型轉(zhuǎn)化為良性[12,13]。

惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移現(xiàn)象是腫瘤細(xì)胞有別于正常細(xì)胞的重要特性，也是臨床治療過(guò)程中腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的主要原因之一[14]。因此，我們檢測(cè)了共培養(yǎng)條件下HepG2細(xì)胞的侵襲力和遷移力的變化。結(jié)果顯示，共培養(yǎng)組HepG2細(xì)胞的侵襲力和遷移力均明顯降低，表明胚胎干細(xì)胞及其微環(huán)境對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的侵襲和遷移能力也有抑制作用。

表2 GO分析結(jié)果

基因芯片技術(shù)的發(fā)展為大規(guī)模分析基因表達(dá)提供了工具[15,16]。我們通過(guò)基因芯片技術(shù)分析共培養(yǎng)后肝癌肝癌細(xì)胞HepG2全基因組的表達(dá)譜變化，共檢測(cè)出數(shù)萬(wàn)個(gè)差異基因。進(jìn)一步的差異基因結(jié)果富集分析也篩選出數(shù)百條GO-terms,其中涉及細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖、遷移、免疫應(yīng)答等,從基因?qū)用孀糇C了前述實(shí)驗(yàn)中胚胎干細(xì)胞對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、周期、侵襲、遷移等的影響。Yaddanapudi等[17]研究證實(shí)，由胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫并不是一種機(jī)體的“異物反應(yīng)”，而有可能是由多種效應(yīng)細(xì)胞和細(xì)胞因子參與構(gòu)成的針對(duì)胚胎干細(xì)胞表面抗原的特異性免疫應(yīng)答。而我們GO分析富集得出的GO 條目immune response下的115個(gè)免疫應(yīng)答相關(guān)基因發(fā)生了顯著變化，涉及B細(xì)胞、T細(xì)胞和NK細(xì)胞、免疫因子如干擾素、腫瘤壞死因子等參與的信號(hào)通路。從基因?qū)用孀C實(shí)了胚胎干細(xì)胞可能通過(guò)影響肝癌HepG2細(xì)胞的免疫應(yīng)答等產(chǎn)生對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制作用。我們猜測(cè)可能是共培養(yǎng)過(guò)程中，由肝癌細(xì)胞作為抗原刺激胚胎干細(xì)胞分化產(chǎn)生一些免疫細(xì)胞或免疫因子等，對(duì)肝癌細(xì)胞產(chǎn)生了免疫重編程作用。基因芯片雖然有大規(guī)模、高通量、可快速篩選基因等優(yōu)點(diǎn)，但仍然有誤差存在。對(duì)篩選出的差異基因及富集分析得到的GO term仍需PCR和Western等進(jìn)一步篩選驗(yàn)證。

綜上所述，本研究初步證實(shí)了人胚胎干細(xì)胞H9體外對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2有一定程度的抑制作用，具體表現(xiàn)為對(duì)肝癌細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、侵襲、遷移等的抑制和細(xì)胞周期的影響。然而，其具體的機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

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[收稿2016-09-23 修回2016-10-19]

(編輯 張曉舟)

InhibitoryeffectofhumanembryonicstemcellsonHepG2cellsinvitro

ZHENGLiang-Dong,HEXue-Mei,ZHANGTing,LIUJie,HUOBen-Nian,LIUMeng-Nan,WANGXue，F(xiàn)ENGTao.ResearchCenterofMolecularMedicineandCancer,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China

Objective:To study the inhibitory effect of human embryonic stem cells on the HepG2 cells in vitro.Methods:The co-culture system of Human embryonic stem cells (H9) and liver cancer HepG2 cells was established.The effect of H9 on the biological behavior of HepG2 cells was observed by microscope,the flow cytometry was used to detect the apoptosis of tumor cells and the cell cycle alteration.Transwell assay was used to detect the migration and invasion of tumor cells.Gene microarray technique was used to examine the change of gene expression profile of HepG2 cells.Results:In the process of co-culture,the growth of hepatoma cells was inhibited.With the extension of the culture time,cells decreased gradually,and occurred signs of aging or apoptosis.Flow cytometry test results showed that the apoptosis rate of hepatoma cells was significantly increased,and the cell cycle was blocked in the G0/G1 phase.Transwell test results showed that the invasion and migration of HepG2 cells were decreased.The gene chip results showed that the whole genome expression profile of HepG2 cells had a significant change.Conclusion:The human embryonic stem cells had an inhibitory effect on HepG2 cells in vitro.

Embryonic stem cells;Hepatoma;Co-culture;Inhibition;Apoptosis

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.06.012

①本文為國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81071770，81201679)。

②同時(shí)供職于重慶市生物化學(xué)與分子藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶400016。

鄭良棟(1989年-)，男，碩士，主要從事分子藥理學(xué)與腫瘤藥理學(xué)研究，E-mail:zishangjun@126.com。

及指導(dǎo)教師：馮 濤(1963年-)，男，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事腫瘤機(jī)理和治療方面的研究，E-mail:478240069@qq.com。

R392

A

1000-484X(2017)06-0864-05