黃紅英，顏曉靜，陳英華，陳越峰，唐智超，馮紀(jì)南，唐巧燕，鄧斌

（湘南學(xué)院化學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，湖南郴州423000）

白芨組培苗的播種技術(shù)研究

黃紅英，顏曉靜，陳英華，陳越峰，唐智超，馮紀(jì)南，唐巧燕，*鄧斌

（湘南學(xué)院化學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，湖南郴州423000）

采用活性炭粉、面粉、瓊脂粉等材料對白芨種子進(jìn)行混勻稀釋的方法，選用不同的混合比例設(shè)置多種對照進(jìn)行播種并觀察白芨種子萌發(fā)情況。結(jié)果表明，白芨種子和瓊脂粉比例1∶3是最佳的混合配方。

白芨；稀釋；萌發(fā)

白芨是一種藥用價(jià)值極高的蘭科植物[1]，塊莖為我國傳統(tǒng)中藥，具有補(bǔ)肺、止血、消腫、生肌、斂瘡[2]等作用。由于其種子小、無胚乳、自然萌發(fā)率低的特點(diǎn)，現(xiàn)今的培育主要依靠原球莖的液體培養(yǎng)、種子無菌播種[3]、利用假鱗莖[4]和愈傷組織[5]等植物組織培養(yǎng)的瓶苗栽培方式。其中，操作最簡便、產(chǎn)出量最大的方法為直接利用種子的無菌播種方法，但是因?yàn)榘总阜N子小而聚集，使得撒種操作時(shí)不易分散，所以長出來的瓶苗太過緊湊，長勢不好，只能通過移瓶分株再栽培來彌補(bǔ)，這無疑增加了產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的負(fù)擔(dān)。因此，白芨組培苗的播種技術(shù)研究很有實(shí)際意義。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

白芨蒴果，采自宜章縣御仙農(nóng)業(yè)生態(tài)有限公司；MS培養(yǎng)基[6]，由實(shí)驗(yàn)室自行配制；活性炭粉、面粉、瓊脂粉，市售。

1.2 儀器

YXQ-LS-50G型立式壓力蒸汽滅菌鍋；SW-CJ-2F型超凈工作臺；AUY200型電子天平。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 MS培養(yǎng)基的配制

配方：1/2MS+1.0mg/LNAA+30 g/L白砂糖+6.0 g/L瓊脂粉，pH值5.8。

1.3.2 種子滅菌

選用未開裂的白芨蒴果，首先用流水沖洗白芨蒴果約30 min，用洗衣粉水刷洗白芨蒴果表面，用蒸餾水沖洗2～3遍。在超凈臺中用75%乙醇消毒30 s，無菌水沖洗1次，再用0.1%的HgCl2水溶液浸泡5 min，期間不停地?fù)u動，使其消毒徹底，用無菌水沖洗5～6次，然后置于干燥的滅菌濾紙上吸盡水分，用解剖刀切開白芨蒴果，取出種子（為避免由于種子選擇不同造成結(jié)果誤差，試驗(yàn)采取將使用的10顆白芨蒴果一起切開后在滅菌培養(yǎng)皿中全部混勻）。

1.3.3 選用不同的材料和比例進(jìn)行種子稀釋

將取出的白芨種子在無菌操作臺分為大致相等的10份，放入已滅菌的培養(yǎng)皿中。在無菌操作室內(nèi)根據(jù)種子的質(zhì)量，按照種子∶分散材料=1∶1，1∶2，1∶3的比例逐個(gè)稱取活性炭粉、面粉、瓊脂粉，在培養(yǎng)皿中與相對應(yīng)的種子充分混勻。

近年來，隨著社會轉(zhuǎn)型的不斷推進(jìn)，改革進(jìn)入深水期，與此同時(shí)社會矛盾糾紛也呈現(xiàn)多發(fā)高發(fā)態(tài)勢。社會矛盾糾紛的多元化解機(jī)制建設(shè)呼之欲出，在實(shí)踐過程中，調(diào)解、仲裁、行政裁決、行政復(fù)議、訴訟等多項(xiàng)糾紛解決制度發(fā)揮著各自的作用，為多元矛盾糾紛化解機(jī)制建構(gòu)打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

1.3.4 撒種

將種子分別按1∶1，1∶2，1∶3不同比例與活性炭粉、面粉、瓊脂粉混合均勻，定量接種，使每管混合物中種子數(shù)量大致相當(dāng)，每個(gè)培養(yǎng)瓶撒1管種子（為避免撒種環(huán)節(jié)因操作者不同引起的誤差，本環(huán)節(jié)由1人操作。）

1.3.5 培養(yǎng)條件

種子播種后移至組培室中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24± 2℃，光照12 h/d，光照強(qiáng)度2 000～3 000 LX[7]。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 對照組的種子萌發(fā)

種子播種于培養(yǎng)基15 d后觀察到有萌發(fā)的跡象，種子吸脹，由黃褐色變成綠色；20 d時(shí)便可觀察到種子變?yōu)榫G色小球體狀，即原球莖；26 d后原球發(fā)出綠色的芽尖；60 d后有種子繼續(xù)萌發(fā)，有些原球莖再培養(yǎng)，長出了幼葉，同時(shí)少數(shù)原球莖則會繼續(xù)長大但并不分化出幼葉。

2.2 與活性炭粉混勻稀釋的種子萌發(fā)

2.3 與面粉混勻稀釋的種子萌發(fā)

經(jīng)過10 d的培養(yǎng)種子開始萌發(fā)，但伴隨著大部分的種子造成感染，未感染的23 d后長成原球莖。

2.4 與瓊脂粉混勻稀釋的種子萌發(fā)

種子在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，13 d后種子開始萌發(fā)，20 d后原球莖形成，27 d后原球莖逐漸發(fā)育2片子葉，60 d后長成株高7～8 cm的幼苗。

不同比例混勻稀釋對種子萌發(fā)時(shí)間的影響見圖1，不同比例混勻稀釋對植物幼苗生長的影響見圖2。

圖1 不同比例混勻稀釋對種子萌發(fā)時(shí)間的影響

3 分析討論

由上述結(jié)果可以看出，混合不同的物質(zhì)對種子進(jìn)行稀釋播種，對種子的萌發(fā)率和萌發(fā)時(shí)間都有一定影響?；旌喜牧蠟槊娣刍颦傊鄣模N子萌發(fā)時(shí)間較短；混合材料為活性炭粉的，種子萌發(fā)時(shí)間最長。但面粉為混合材料比例1∶2和1∶3的組大部分造成了感染，而瓊脂粉播種的幾乎無感染現(xiàn)象。原因可能是面粉與瓊脂粉本身含有一定營養(yǎng)，促進(jìn)了白芨種子的萌發(fā)；而活性炭粉可能是吸附了培養(yǎng)基中種子萌發(fā)的誘導(dǎo)劑和有機(jī)質(zhì)，從而對種子萌發(fā)具有一定的抑制作用。面粉混合物的感染率高，因?yàn)樗母郀I養(yǎng)不僅帶給種子，也給細(xì)菌和真菌帶去了營養(yǎng)，造成感染，這種種子較難萌發(fā)，而且對失誤率也是考驗(yàn)。60 d后種子萌發(fā)成幼苗，對照組的幼苗緊挨在一起不好分離；混合材料為面粉的長時(shí)間后長成坨狀，幼苗也不好分離。而瓊脂粉的小苗分散的最好，比例為1∶3分散效果最好，這樣再進(jìn)行根的誘導(dǎo)時(shí)更容易。通過固體稀釋法把白芨種子按1∶1，1∶2，1∶3的比例混合面粉、活性炭粉和瓊脂粉再進(jìn)行播種和無菌培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)1∶3的白芨種子和瓊脂粉比例白芨瓶苗的生產(chǎn)效果最好，可以減少白芨種子培育時(shí)的轉(zhuǎn)接次數(shù)，甚至可以達(dá)到一次成苗的效果。

總之，通過對傳統(tǒng)的白芨種子無菌播種育苗技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn)和簡化，減少了移瓶次數(shù)，最大限度降低了生產(chǎn)過程中的污染率，減少了種子的萌發(fā)時(shí)間，提高了萌發(fā)率。使用改進(jìn)后的技術(shù)，白芨種子到煉苗只需要120 d左右，節(jié)約了生產(chǎn)成本，對促進(jìn)白芨人工栽培產(chǎn)業(yè)發(fā)展以及保護(hù)野生資源都具有重要的意義。

圖2 不同比例混勻稀釋對植物幼苗生長的影響

[1]葉靜，鄭曉君，管常東.白芨的無菌萌發(fā)與組織培養(yǎng)[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，32（S1）：422-425.

[2]林福林，楊昌云.中藥白芨的現(xiàn)代研究概況[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2013，33（7）：571-573.

[3]袁寧.白芨組織培養(yǎng)技術(shù)體系研究[D].成都：西南交通大學(xué)，2008.

[4]李慧敏，楊冠海，李明靜.白芨瓶內(nèi)假鱗莖誘導(dǎo)研究[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，44（10）：1 607-1 612.

[5]石云平，趙志國，唐鳳鸞.白芨愈傷組織誘導(dǎo)、增殖與分化研究[J].中草藥，2013，44（3）：349-353.

[6]張燕，黎斌，李思鋒.不同培養(yǎng)基上白芨的種子萌發(fā)與幼苗形態(tài)發(fā)生[J].西北植物學(xué)報(bào)，2009，29（8）：1 584-1 589.

[7]張建霞，付志惠，李洪林.白芨胚發(fā)育與種子萌發(fā)的關(guān)系[J].亞熱帶植物科學(xué)，2005，34（4）：32-35.◇

Study on Sowing Technology to Tissue Culture of Bletilla Striata

HUANG Hongying，YAN Xiaojing，CHEN Yinghua，
CHEN Yuefeng，TANG Zhichao，F(xiàn)ENG Ji'nan，TANG Qiaoyan，*DENG Bin（Institute of Chemical Biology and Environmental Engineering，Xiangnan University，Chenzhou，Hu'nan 423000，China）

The materials such as activated carbon powder，flour，agar powder are used to blend with Bletilla seed to dilution. Different mix proportion is chosen to set a variety of controlled plant and observe of Bletilla seed germination.The conclusion is that 1∶3 proportion of agar powder and Bletilla seeds is a blend of the best formula.

Bletilla striata；dilution；germination

S630.5

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.05.022

1671-9646（2017）05a-0073-02

2017-04-01

中南林業(yè)科技大學(xué)橫向課題（2012XN09）；郴州市科技局項(xiàng)目（CZ2013090）。

黃紅英（1966—），女，碩士，教授，研究方向?yàn)橹参飳W(xué)。

*通訊作者：鄧斌（1972—），男，博士（后），教授，研究方向?yàn)榛瘜W(xué)、環(huán)境及生物教學(xué)與研究。