吳振永

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微小核糖核酸(miRNA)聯(lián)合C反應(yīng)蛋白檢測(cè)對(duì)肺癌早期的診斷價(jià)值

吳振永

目的 探討微小核糖核酸(miRNA)聯(lián)合C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測(cè)對(duì)肺癌早期的診斷價(jià)值。方法 選取經(jīng)病理學(xué)確診為肺癌患者42例作為觀察組，另取同期健康體檢者30例作為對(duì)照組，采用RT-PCR檢測(cè)法檢測(cè)并比較兩組受試者血清中的miRNA 21，miRNA 141，miRNA 145表達(dá)水平，采用速率散射比濁法測(cè)定及比較兩組受試者血清中CRP，同時(shí)采用ROC曲線分析聯(lián)合檢測(cè)miRNA 和CRP對(duì)早期肺癌的診斷價(jià)值。結(jié)果 觀察組患者miRNA 21、miRNA 141和CRP表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，mi RNA 145水平則明顯低于對(duì)照組，差異比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。曲線分析結(jié)果顯示，miRNA 和CRP水平聯(lián)合診斷肺癌早期的ROC曲線下面積、靈敏度、特異度，均較miRNA 、CRP水平單獨(dú)預(yù)測(cè)肺癌早期的ROC曲線下面積、靈敏度、特異度高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 miRNA聯(lián)合CRP檢測(cè)診斷肺癌早期的靈敏度和特異度均較高，診斷價(jià)值良好，可以作為肺癌診斷的參考指標(biāo)。

微小核糖核酸；C反應(yīng)蛋白；肺癌；診斷

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1062～1064)

肺癌是世界上發(fā)病率最高的腫瘤之一，占男性腫瘤發(fā)病率和死亡率首位，全世界肺癌的死亡率高達(dá)85%，嚴(yán)重威脅著患者的生命安全[1-2]。肺癌早期癥狀通常較輕微，甚至可無(wú)任何不適，而一旦發(fā)覺往往是晚期，已錯(cuò)過了最佳的治療時(shí)機(jī)，預(yù)后多因此不良。因而尋求有效參考指標(biāo)為肺癌早期診斷提供輔助極其必要[3-4]。本文通過研究探討微小核糖核酸(miRNA)聯(lián)合C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測(cè)對(duì)肺癌早期的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2016年1月我院病理學(xué)確診為肺癌患者42例作為觀察組，所有病例均于體檢時(shí)行胸部X檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)，進(jìn)一步診斷證實(shí)為肺癌早期，其中包含小細(xì)胞肺癌患者11例，非小細(xì)胞肺癌患者31例，非小細(xì)胞癌患者包括鱗癌患者11例，腺癌患者7例，大細(xì)胞癌患者13例。所有患者均已被告知本研究，患者均同意本研究且已簽署知情同意書?；颊吲懦龂?yán)重的心腦血管疾病，且均為首次診斷為肺癌，術(shù)前均未接受放療化療及免疫治療，其中包括男性20例，女性22例，年齡30～77歲，平均年齡(53.27±4.86)歲。另取同期健康體檢者30例作為對(duì)照組受試者，受試者均無(wú)心腦血管疾病、腎病及近期感染。其中男性13例，女性17例，年齡31～79歲，平均年齡(53.44±4.75)歲。兩組患者在年齡，性別等基本資料差異比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，一般資料具有可比性。

1.2 治療方法

所有患者均在病理診斷的基礎(chǔ)上，根據(jù)各自的病情由同一主治醫(yī)生采取相應(yīng)的手術(shù)及放化療治療及予以相應(yīng)的手術(shù)禁忌、飲食康復(fù)指導(dǎo)。囑患者定期復(fù)查，密切觀察。

1.3 樣本收集方法

所有受試者于入院時(shí)抽取其空腹靜脈血5 ml，置于離心機(jī)上以3 500 r/min離心10 min，取上層血清分裝儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱中,備用以測(cè)定PCR水平。取1 ml血樣，加1 ml T10E10充分混勻后,以8 000 rpm離心6 min后棄上清，下層沉淀加入667 μl STE，24 μl的20%的SDS，37 ℃水浴1 h，再棄上清液，加300 μl USSTE裂解懸浮，用力震蕩破碎細(xì)胞。加入等體積的飽和酚，充分混合后以10 000 rpm離心10 min，重復(fù)3次。用吸頭尖端剪頭一段將上清液吸出，用等體積的氯仿異戊醇(24∶1)充分混勻至看不到白色界面后以10 000 rpm離心10 min，然后取上清，加入2倍體積冷無(wú)水乙醇混勻再次以12 000 rpm轉(zhuǎn)速離心10 min，取沉淀加500 μl的70%的乙醇浸洗2次以洗出DNA的雜質(zhì)，再次離心10 min，取DNA自然放置30 min。待乙醇晾干后加50 μlT10E1緩沖液回溶將其儲(chǔ)存于-20 ℃環(huán)境中待用。

1.4 檢測(cè)方法

采用速率散射比濁法,測(cè)定及比較兩組受試者血清中C反應(yīng)蛋白，試劑購(gòu)自瑞士Bachem公司，檢測(cè)操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。miRNA濃度檢測(cè)方法參照參考文獻(xiàn)[5]，即取總RNA3 μl參照TaKaRa公司的RNA PCRKitVer 3.0試劑盒說明書對(duì)標(biāo)本進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，以 RNase-free H2O調(diào)零，RNase-free H2O作為空白對(duì)照，通過ND-1000微量紫外可見分光光度計(jì)測(cè)樣品miRNA 21、miRNA 141、miRNA 145的濃度值。mRNA相對(duì)含量=目的基因條帶積分吸光度值/內(nèi)參照GAPDH基因條帶積分吸光度值。實(shí)驗(yàn)均至少重復(fù)3次。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者mi RNA和CRP表達(dá)水平比較

觀察組患者mi RNA 21、mi RNA 141和CRP表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，mi RNA 145水平則明顯低于對(duì)照組，差異比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組受試者mi RNA和CRP表達(dá)水平比較情況

2.2 ROC曲線分析聯(lián)合檢測(cè)miRNA 和CRP對(duì)早期肺癌的診斷價(jià)值

ROC曲線分析結(jié)果顯示，miRNA 和CRP水平聯(lián)合診斷肺癌早期的ROC曲線下面積、靈敏度、特異度均較miRNA 、CRP水平單獨(dú)預(yù)測(cè)肺癌早期的ROC曲線下面積、靈敏度、特異度高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2和圖1。

表2 ROC曲線分析聯(lián)合檢測(cè)miRNA 和CRP對(duì)早期肺癌的診斷價(jià)值

圖1 受試者操作特性曲線圖

3 討論

據(jù)2012年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全世界有180萬(wàn)人被診斷為肺癌，其中死亡人數(shù)達(dá)到160萬(wàn)[6]。發(fā)病率占所有腫瘤的13%，死亡率占所有腫瘤死亡人數(shù)的19.4%，5年生存率僅為5.8 %，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其它腫瘤，預(yù)后非常不良[7]。雖然隨著近年來(lái)臨床診斷技術(shù)與治療技術(shù)不斷改進(jìn)與提高，肺癌診斷和治療現(xiàn)狀有所改善，但因缺乏有效的診斷方法，早期肺癌的診斷率依然僅有 25%左右。探求有效的參考指標(biāo)，提高早期肺癌的診斷率迫在眉睫[8]。

微小核糖核酸miRNA是1類非編碼小RNA分子，它在細(xì)胞增殖、分化、凋亡、上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)型、組織器官形成和生長(zhǎng)發(fā)育等生理過程中發(fā)揮著重要作用[9]。近年來(lái)有研究表明，miRNA不僅參與了人體正常的生理過程，而且在各種疾病的發(fā)生和進(jìn)展過程中也扮演著重要角色，各類惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等病理過程與miRNA關(guān)系密切[10-11]。CRP是由人體肝細(xì)胞合成的1種正常球蛋白，它是1種與炎癥反應(yīng)相關(guān)的分子，健康者的血清中的CRP含量非常低，當(dāng)機(jī)體發(fā)生炎癥反應(yīng)時(shí)，其濃度可達(dá)到正常值的幾百倍甚至上千倍[12]。研究證實(shí)CRP參與多種疾病的病理過程。本文通過研究探討肺癌患者體內(nèi)的miRNA和PCR相對(duì)含量，旨在為肺癌早期的診斷提供參考指標(biāo)。結(jié)果顯示，患者miRNA 21，miRNA 141和CRP表達(dá)水平明顯高于健康者水平，miRNA 145則明顯低于健康者水平。提示RNA作為促癌基因和抑癌基因參與肺癌的病理過程，在肺癌早期尚未顯現(xiàn)明顯癥狀時(shí)已在血清中異常表達(dá)。miRNA 21，miRNA 141均具有促癌基因的特性，其高表達(dá)促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生發(fā)展，miRNA 145則具有抑癌基因的特性，抑制其表達(dá)會(huì)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。而CRP作為炎癥反應(yīng)因子，在肺癌早期，機(jī)體出現(xiàn)癌變時(shí)已在血清中異常表達(dá)。以上結(jié)果提示二者結(jié)合診斷或可作為肺癌早期的參考指標(biāo)。通過進(jìn)一步ROC曲線分析證實(shí)了這一猜測(cè)。分析結(jié)果顯示，miRNA和CRP水平聯(lián)合診斷肺癌早期的ROC曲線下面積、靈敏度、特異度均較miRNA、CRP水平單獨(dú)預(yù)測(cè)肺癌早期的ROC曲線下面積、靈敏度、特異度高。

綜上所述，miRNA聯(lián)合CRP檢測(cè)診斷肺癌早期的靈敏度和特異度均較高，診斷價(jià)值良好，可能作為肺癌早期診斷的參考指標(biāo)。

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(編輯：吳小紅)

Value of MiRNA Combined with C-reactive Protein in the Diagnosis of Early Lung Cancer

WUZhenyong.BaodingSecondCentralHospital,Baoding,072750

Objective To study the value of miRNA combined with C-reactive protein in the diagnosis of early lung cancer.Methods 42 cases of patients with pathology diagnosed lung cancer were selected as the observation group,30 cases of healthy examinees were selected as the control group,the serum miRNA 21,miRNA 141 and miRNA 145 level of the 2 groups were detected and measured by RT-PCR assay.Serum CRP of the 2 groups were determinated by rate scatter nephelometry.At the same time,ROC curve analysis was used to detect the diagnostic value of miRNA and CRP for early lung cancer.Results The miRNA21,mi RNA141 and CRP level of the observation group were significantly higher than that of the control group,however the miRNA 145 levels were significantly lower than that of the control group,the difference was statistically significant(P<0.05).ROC curve analysis results showed that the area under the ROC curve was bigger,sensitivity and specificity were better in the diagnosis of early lung cancer by the miRNA combined with CRP level than by any single of them(P<0.05).Conclusion miRNA combined with CRP in the diagnosis of early lung cancer have higher sensitivity and specificity,miRNA combined with PCR may become reference index for early lung cancer diagnosis.

miRNA;C-reactive protein;Lung cancer;Diagnosis

072750 河北省保定市第二中心醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.07.006

R734.2

A

1001-5930(2017)07-1062-03

2016-07-22

2017-04-16)