周志陽,曹有龍,王藝涵,陳帝君,米 佳,李曉鶯,閆亞美,,*,曾曉雄,,*

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,江蘇南京 210095; 2.國家枸杞工程技術(shù)研究中心,寧夏銀川 750002)

?

枸杞芽茶與葉茶的化學(xué)成分和抗氧化活性分析

周志陽1,曹有龍2,王藝涵1,陳帝君1,米 佳2,李曉鶯2,閆亞美1,2,*,曾曉雄1,2,*

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,江蘇南京 210095; 2.國家枸杞工程技術(shù)研究中心,寧夏銀川 750002)

以寧夏枸杞芽茶、枸杞葉茶為原料,利用熱水浸提(料液比1∶40、溫度96 ℃、時(shí)間30 min)制備枸杞芽茶與葉茶提取物并對(duì)其所含的化學(xué)成分含量進(jìn)行測(cè)定,采用HPLC對(duì)枸杞芽茶與葉茶提取物中游離氨基酸的組成進(jìn)行了分析,利用DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基清除率、總還原力為指標(biāo)對(duì)枸杞芽茶、葉茶茶湯提取物的抗氧化活性進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。結(jié)果表明,枸杞芽茶、枸杞葉茶提取物中多酚含量分別為6.32%、2.96%。枸杞芽茶與葉茶提取物中天冬氨酸(3230.41、2440.96 μg/g)、天冬酰胺(3754.77、3495.57 μg/g)、組氨酸(5585.26、2825.17 μg/g)以及亮氨酸(4376.09、1051.00 μg/g)含量較為豐富。枸杞芽茶與葉茶提取物相比抗氧化活性較強(qiáng),二者對(duì)DPPH自由基(IC50:147.63、241.23 μg/mL)、ABTS自由基(IC50:109.87、145.32 μg/mL)以及超氧陰離子自由基(IC50:46.58、54.32 μg/mL)均具有良好的清除能力,與葉茶相比,枸杞芽茶具有更好的抗氧化活性。

枸杞芽茶,枸杞葉茶,化學(xué)成分,游離氨基酸,抗氧化活性

寧夏枸杞(LyciumbarbarumL.)屬茄科落葉灌木,是我國重要的藥用植物資源,同時(shí)也是寧夏最具特色的藥食同源性農(nóng)產(chǎn)品[1]。枸杞的芽葉部分與枸杞子同樣具有重要的藥用價(jià)值,據(jù)《本彩綱目》記載“春采枸杞葉,名天精草”,這里“天精草”所指的就是枸杞新鮮芽葉[2]。制作枸杞芽茶、葉茶所選用的枸杞樹品種為無果枸杞樹,花蕾少,結(jié)果率低,色澤碧綠且無病蟲害[3]。大量研究報(bào)道,多酚類物質(zhì)是茶葉中最具代表性的活性成分,傳統(tǒng)綠茶由于茶多酚類物質(zhì)的存在發(fā)揮了廣泛的生物活性,如抗氧化[4]、降血糖[4]、降血脂[4]、抗腫瘤及誘變劑[5]、保護(hù)心血管[6]、抗炎癥[7]、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡[8]、抗輻射[9]等,但目前關(guān)于枸杞芽茶、葉茶這一新型茶品,對(duì)其所含的多酚等具有重要生物活性的化學(xué)成分的相關(guān)研究不多。邱虹等[10]在對(duì)無果枸杞芽茶醇提取物的抗氧化作用研究中發(fā)現(xiàn)無果枸杞芽茶醇提取物可改善小鼠的學(xué)習(xí)與記憶能力,且作用機(jī)制可能與枸杞芽茶醇提取物的抗氧化活性有關(guān);分析無果枸杞芽茶對(duì)高血脂患者血脂水平及抗氧化能力的影響,結(jié)果顯示患者人群在飲用枸杞芽茶4個(gè)月后,血清總膽固醇(TC)水平、甘油三酯(TG)水平、MDA水平、低密度脂蛋白(LDL-C)水平下降,SOD活力增高(p<0.05),高密度脂蛋白(HDL-C)水平無明顯變化(p>0.05),表明寧夏無果枸杞具有調(diào)節(jié)血脂、增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力的作用。魏智清等[11]在探討寧夏枸杞芽茶、葉茶水煎劑對(duì)糖尿病小鼠的降血糖作用研究中發(fā)現(xiàn)一定劑量的寧夏枸杞芽茶、葉茶水煎劑對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠有較明顯的降血糖作用。

本研究以寧夏枸杞芽茶、葉茶為原料制備芽茶與葉茶提取物,對(duì)包括多酚、兒茶素、黃酮、多糖、蛋白質(zhì)及氨基酸在內(nèi)的化學(xué)成分含量進(jìn)行測(cè)定,利用高效液相色譜(HPLC)法分析游離氨基酸組成與含量,并通過DPPH自由基、ABTS自由基、超氧陰離子自由基清除率及總還原力等指標(biāo)對(duì)枸杞芽茶、葉茶提取物的抗氧化活性進(jìn)行評(píng)價(jià),以期為枸杞葉茶、芽茶的進(jìn)一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)理論數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

枸杞芽茶、葉茶 購于銀川泰豐生物技術(shù)有限公司,新鮮枸杞芽、葉經(jīng)殺青、揉捻、干燥等工序后密封包裝保存于-20 ℃?zhèn)溆?碧螺春綠茶 杭州西湖名茶有限公司;沒食子酸、谷氨酸 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;蘆丁 上海瑞永生物技術(shù)有限公司;牛血清白蛋白 北京索萊寶科技有限公司;葡萄糖、VC(Vitamin C)、DPPH(2,2′-diphenyl-1-picrylhydrazyl)、ABTS[2,2′-azino-bis-(3-ethylbenothiazolin-6-sμLfonate)diammonium salt]、NBT(nitroblue tetrazolium)、PMS(Phenazine methosulfate)、TPTZ[2,4,6-tris(2-pyridyl)-s-trizaine] 美國Sigma公司;鄰苯二甲醛(OPA) 上海麥克林生化科技有限公司;其余試劑 均為國產(chǎn)分析純。

HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋 江蘇國華電器有限公司;EYELA N-1100真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 日本東京理化公司;Telstar LyoQuest 2G6冷凍干燥機(jī) 西班牙Telstar公司;BL-220H分析天平 日本島津公司;MAPADAV-1200可見分光光度計(jì) 上海美譜達(dá)儀器有限公司;Agilent 1100高效液相色譜儀(G1311A四元泵、G1379A真空脫氣機(jī)、G1316A柱溫箱、G1315BDAD工作站)、Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×15 cm,5 μm) 美國安捷倫公司;Synergy-2酶標(biāo)儀 美國Biotek公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 枸杞芽茶、葉茶提取物的制備 取適量枸杞芽茶、葉茶以去離子水(96 ℃預(yù)熱、料液比 1∶40)于96 ℃水浴鍋中充分浸提30 min,浸提液經(jīng)紗布過濾、4000 r/min離心20 min后得澄清茶湯,茶渣重復(fù)以上操作二次后合并上清液,上清液經(jīng)濃縮、冷凍干燥后制得枸杞芽茶、葉茶提取物,提取物置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 多酚、兒茶素、黃酮、可溶性總糖、蛋白質(zhì)、氨基酸含量測(cè)定 多酚含量的測(cè)定參照劉麗香[12]等的方法;兒茶素含量的測(cè)定參照劉坤等[13]的方法;黃酮含量的測(cè)定參照韋秀芝等[14]的方法;可溶性總糖含量的測(cè)定參照王黎明[15]、傅博強(qiáng)等[16]的方法蛋白質(zhì)含量的測(cè)定參照鄧?yán)螓惖萚17]的方法;游離氨基酸含量的測(cè)定參照劉美[18]、邵金良等[19]的方法。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.2.3 枸杞芽茶與葉茶提取物中游離氨基酸的HPLC分析 參照Wang等[20]的方法并做適當(dāng)修改。準(zhǔn)確稱取0.25 g枸杞芽茶或葉茶,加入10 mL去離子水于95 ℃浸提20 min,過濾、離心,上清液定容10.0 mL,以0.45 μm水相微孔濾膜過濾。取1.0 mL過膜后的茶湯于活化后的SPE固相萃取柱上,收集洗脫液,隨后以10 mL 10%乙醇洗脫萃取柱,合并兩次洗脫液、濃縮,用1.0 mL去離子水復(fù)溶,過0.22 μm有機(jī)相濾膜。準(zhǔn)確稱取50.0 mg OPA試劑于10 mL離心管中,依次加入0.5 mL甲醇、4.5 mL硼酸(0.4 mol/L,pH9.5)、0.25 mLβ-巰基乙醇,即為OPA衍生化試劑。準(zhǔn)確移取復(fù)溶后的枸杞芽茶、葉茶茶湯洗脫液或標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液(每種氨基酸含5個(gè)濃度)140 μL與20 μL OPA衍生化試劑于離心管中,混勻于25 ℃反應(yīng)2 min,立即取樣進(jìn)行HPLC分析,繪制各氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算枸杞芽茶、葉茶氨基酸含量。

高效液相色譜條件:Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱;流動(dòng)相A:乙腈∶甲醇∶水=45∶45∶10,流動(dòng)相B:40 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.5),采用梯度洗脫方法;流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長:338 nm。洗脫程序?yàn)?0 min,10% A;10 min,18% A;15 min,24% A;21～21.5 min,41% A;22 min,42.2% A;23 min,42.5% A;25 min,58% A;27 min,59% A;30～35 min,60% A。

1.2.4 枸杞芽茶與葉茶抗氧化活性測(cè)定

1.2.4.1 DPPH自由基清除率測(cè)定 參照Liu等[21]、Hu等[22]的方法并做適當(dāng)改動(dòng),依次準(zhǔn)確移取不同濃度(0.025、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25 mg/mL)枸杞芽茶、葉茶提取物水溶液50 μL、DPPH溶液(0.4 mmol/L)25 μL及去離子水100 μL于96孔板中,混勻于30 ℃避光反應(yīng)30 min,反應(yīng)結(jié)束后用酶標(biāo)儀測(cè)定517 nm處吸光值,計(jì)算清除率及半抑制濃度(清除率達(dá)到50%對(duì)應(yīng)的樣品濃度,IC50值),VC做陽性對(duì)照。

表1 枸杞芽茶、葉茶各項(xiàng)化學(xué)成分含量Table 1 Chemical contents of Lycium barbarum bud and leaf teas

注:ND:未檢測(cè)到,*顯著水平0.05,**顯著水平0.01,每組實(shí)驗(yàn)結(jié)果為三次平行實(shí)驗(yàn)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

其中,A0為去離子水代替樣品組,A1為正常實(shí)驗(yàn)組,A2為無水乙醇代替DPPH試劑空白組。

1.2.4.2ABTS自由基清除率測(cè)定 參照Xie等[23]的方法,將ABTS溶液(7mmol/L)與K2S2O8溶液(4.95mmol/L)等體積混合,于暗處放置12h后以PBS溶液(磷酸鹽緩沖溶液0.2mol/L,pH7.4)調(diào)整混合液734nm處吸光值在0.7±0.02范圍制備ABTS工作液。準(zhǔn)確移取不同濃度(0.025、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25mg/mL)枸杞芽茶、葉茶提取物水溶液20μL及ABTS工作液200μL于96孔板中,搖勻于室溫下反應(yīng)10min,測(cè)定反應(yīng)液在734nm處吸光值,VC做陽性對(duì)照。

其中,A0為去離子水代替樣品組,A1為正常實(shí)驗(yàn)組,A2為PBS溶液代替ABTS工作液試劑空白組。

1.2.4.3 超氧陰離子自由基清除率測(cè)定 參照Bi等[24]的方法,依次準(zhǔn)確移取不同濃度(0.025、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25mg/mL)枸杞芽茶與葉茶提取物水溶液、以PBS(磷酸鹽緩沖溶液0.1mol/L,pH7.4)配制的NBT溶液(156μmol/L)、NADH溶液(468μmol/L)及PMS溶液(60μmol/L)各50μL到96孔板中,混勻后于室溫下反應(yīng)5min,測(cè)定560nm處吸光值,VC做陽性對(duì)照。

其中,A0為去離子水代替樣品組,A1為正常實(shí)驗(yàn)組,A2為PBS溶液代替NBT試劑空白組。

1.2.4.4 總還原力測(cè)定 參照Wu等[25]的方法,取50μL不同濃度(0.025、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25mg/mL)提取物水溶液于96孔板中,然后依次加入50μL0.2mol/LpH6.6磷酸鹽緩沖溶液、50μLK3Fe(CN)6溶液(1%,W/V)、50μL三氯乙酸(10%,W/V)及25μL氯化鐵溶液(0.1%,W/V),室溫放置10min后測(cè)定700nm處吸光值,以去離子水代替氯化鐵溶液做空白,以VC做陽性對(duì)照。

總還原力=A1-A2

其中,A1為正常實(shí)驗(yàn)組吸光值,A2為去離子水代替氯化鐵實(shí)驗(yàn)組吸光值。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Origin 8.0、IBM SPSS Statistic 20軟件進(jìn)行分析,利用單因素ANOVA法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 枸杞芽茶、葉茶提取物的化學(xué)成分含量

枸杞芽茶、葉茶中各項(xiàng)化學(xué)成分含量見表1?？梢钥闯?枸杞芽茶與葉茶提取物的多酚、黃酮、多糖、蛋白質(zhì)及氨基酸含量中,除枸杞芽茶黃酮含量(1.88%)稍低于枸杞葉茶(2.00%)外,其他各項(xiàng)成分含量均高于枸杞葉茶,其中多酚、蛋白質(zhì)及游離氨基酸三項(xiàng)指標(biāo)差異顯著(p<0.01)。對(duì)于茶類中起良好抗氧化活性作用的多酚類物質(zhì),枸杞芽茶多酚含量(6.32%)顯著高于枸杞葉茶(2.96%,p<0.01),分析原因可能是在枸杞芽發(fā)育到葉的過程中由于生長需要,枸杞芽中儲(chǔ)備的營養(yǎng)物質(zhì)被消耗,造成枸杞葉茶中蛋白質(zhì)、氨基酸以及多酚類等物質(zhì)含量出現(xiàn)一定程度的降低。測(cè)定兒茶素含量時(shí),枸杞芽茶、葉茶提取物香莢蘭素顯色反應(yīng)并沒有和碧螺春茶一樣呈現(xiàn)明顯紅色(圖1),吸光度幾乎為0(與空白對(duì)照一致)。Mocan等[26]對(duì)枸杞葉的多酚類物質(zhì)進(jìn)行HPLC-MS分析時(shí)也發(fā)現(xiàn)枸杞葉中的多酚類物質(zhì)主要為綠原酸、蘆丁等,并未發(fā)現(xiàn)兒茶素類物質(zhì)的存在?；诒狙芯拷Y(jié)果及文獻(xiàn)報(bào)道可以認(rèn)為枸杞芽茶、葉茶這一新型保健茶品不同于中國傳統(tǒng)茶葉,枸杞芽茶與葉茶中的多酚類物質(zhì)主要以綠原酸類物質(zhì)形式存在,而并非傳統(tǒng)綠茶中廣泛存在的兒茶素類物質(zhì),這一不同點(diǎn)可以為寧夏枸杞芽茶與葉茶的綜合利用及產(chǎn)品開發(fā)提供新的思路。

圖1 枸杞芽茶與葉茶、綠茶茶湯香莢蘭素鹽酸顯色反應(yīng)結(jié)果對(duì)比圖Fig.1 Results of vanillin reactions of liquor of green tea,Lycium barbarum bud and leaf teas注:0:蒸餾水(空白對(duì)照),#1枸杞芽茶,#2枸杞葉茶,#4碧螺春綠茶。

表2 15種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程及相關(guān)系數(shù)Table 2 Retention time,regression equation and R2 of 15 amino acid standards

氨基酸類物質(zhì)是茶制品中重要的呈味物質(zhì),其含量多少會(huì)對(duì)各種茶制品的滋味品質(zhì)產(chǎn)生直接影響,枸杞芽茶、葉茶是近年來的新興茶制品,而目前關(guān)于枸杞芽茶、葉茶中氨基酸的種類及含量分析鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以固相萃取、柱前衍生結(jié)合HPLC法對(duì)枸杞芽茶與葉茶中的主要游離氨基酸的組成及含量進(jìn)行了分析。從圖2A中可以看出15種氨基酸除精氨酸(Arg)、蘇氨酸(Thr)的色譜峰未完全分開外,其余各氨基酸色譜峰峰形良好,各氨基酸的保留時(shí)間及回歸方程見表2。圖2B與圖2C分別為枸杞芽茶與葉茶的游離氨基酸液相色譜圖,枸杞芽茶與葉茶中主要游離氨基酸含量見表3?？梢钥闯鯝sp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Asn(天冬酰胺)、Ser(絲氨酸)、His(組氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Leu(亮氨酸)色譜峰相對(duì)而言較為明顯,為枸杞芽茶與葉茶中的主要游離氨基酸,其中Asn、Asp、His、Leu含量更為豐富;同時(shí)可以看出,與枸杞葉茶相比枸杞芽茶中各主要游離氨基酸的含量較高。Wang等[20]對(duì)綠茶、紅茶以及烏龍茶中游離氨基酸的定性、定量分析中發(fā)現(xiàn),茶氨酸是綠茶、紅茶以及烏龍茶中含量最高的游離氨基酸,在綠茶、紅茶與烏龍茶中茶氨酸含量分別達(dá)到2158.54、1369.12、1287.21 μg/g,組氨酸的含量分別為316.56、217.56、30.20 μg/g。因此該分析結(jié)果表明枸杞芽茶與葉茶在游離氨基酸的組成及含量上與傳統(tǒng)茶葉存在較大的差異。

圖2 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品(A)、枸杞芽茶(B)與枸杞葉茶(C)高效液相色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of amino acid standards(A),Lycium barbarum bud tea(B)and Lycium barbarum leaf tea(C)

表3 枸杞芽茶與葉茶中的7種主要游離氨基酸含量Table 3 The content of 7 main free amino acids from Lycium barbarum buds and leaf teas

2.2 枸杞芽茶與葉茶的抗氧化活性

2.2.1 DPPH自由基清除能力 枸杞芽茶、葉茶對(duì)DPPH自由基的清除能力見圖3。從圖3中可以看出,在整個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi),枸杞芽茶提取物對(duì)DPPH自由基的清除率與陽性對(duì)照相比明顯較弱,但始終高于枸杞葉茶,在濃度達(dá)到0.25 mg/mL時(shí),枸杞芽茶、葉茶提取物對(duì)DPPH自由基的清除率分別為59.2%、53.2%,IC50值分別為147.63、241.23 μg/mL。張自萍等[27]在對(duì)枸杞子不同提取液抗氧化活性的研究中發(fā)現(xiàn),在相同提取條件下,枸杞子水提取液的DPPH自由基清除活性強(qiáng)于乙醇提取液,且枸杞子乙醇提取液隨著乙醇濃度的上升,DPPH自由基清除力逐步下降,IC50(半抑制濃度)具體表現(xiàn)為水(0.902 mg/mL)>50%乙醇(0.953 mg/mL)>80%乙醇(0.971 mg/mL)>95%乙醇(1.828 mg/mL),表明枸杞子中的水溶性提取物具有更好的抗氧化活性,即水提法相對(duì)于醇提法更有利于發(fā)揮枸杞子的抗氧化活性作用。對(duì)比本研究中枸杞芽茶、葉茶對(duì)于DPPH自由基的清除活性可以發(fā)現(xiàn),枸杞芽茶與葉茶與枸杞子相比具有更強(qiáng)的DPPH自由基清除力,造成這一現(xiàn)象的原因可能是枸杞子中主要活性物質(zhì)為多糖類等物質(zhì),而枸杞芽、葉中含量較為豐富的多酚類物質(zhì)結(jié)構(gòu)中含大量酚羥基,研究表明酚羥基極易與自由基反應(yīng),提供質(zhì)子和電子而使自由基失去反應(yīng)活性[28],因而對(duì)眾多自由基有著更為顯著的清除活性。枸杞芽茶與枸杞葉茶多酚含量(6.32%、2.96%)的不同可能也是造成枸杞芽茶DPPH自由基清除力強(qiáng)于枸杞葉茶的重要原因。

圖3 枸杞芽茶、葉茶提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力Fig.3 Scavenging activities on DPPH radicals of crude extracts from Lycium barbarum bud tea and Lycium barbarum leaf tea

2.2.2 ABTS自由基清除能力 枸杞芽茶、葉茶對(duì)ABTS自由基的清除率見圖4,陽性對(duì)照VC在濃度0.10 mg/mL時(shí)清除率已經(jīng)接近100%;與VC相比,枸杞芽茶、葉茶清除率較低,但枸杞芽茶對(duì)ABTS自由基的清除效果明顯強(qiáng)于枸杞葉茶,枸杞芽茶、葉茶對(duì)ABTS自由基的IC50值分別為109.87、145.32 μg/mL,這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果與DPPH自由基清除率的結(jié)果保持一致,表明枸杞芽茶中含量相對(duì)較高的多酚等物質(zhì)作為重要的生物活性成分對(duì)于清除ABTS自由基發(fā)揮了重要作用。Mocan等[26]通過液質(zhì)聯(lián)用分析發(fā)現(xiàn)枸杞葉中的多酚類主要為綠原酸、蘆丁、對(duì)香豆酸、異槲皮素等物質(zhì),其中綠原酸含量為5899.29 μg/mL,相對(duì)含量最高,枸杞葉乙醇提取物對(duì)ABTS自由基的清除力相當(dāng)于35.72 μg VE/mL。

圖4 枸杞芽茶、葉茶提取物對(duì)ABTS自由基的清除能力Fig.4 Scavenging activities on ABTS radicals of crude extracts from Lycium barbarum bud tea and Lycium barbarum leaf tea

2.2.3 超氧陰離子自由基清除能力 枸杞芽茶、葉茶對(duì)超氧陰離子自由基的清除情況見圖5。隨著濃度的上升,枸杞芽茶、葉茶對(duì)超氧陰離子自由基的清除率呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系,當(dāng)濃度達(dá)到0.2 mg/mL并進(jìn)一步增大時(shí),枸杞芽茶、葉茶的清除率增強(qiáng)趨勢(shì)逐漸放緩,且二者差距逐漸減少,在濃度0.25 mg/mL時(shí),二者對(duì)超氧陰離子自由基的清除率分別達(dá)到79.5%、78.4%,IC50值分別為46.58、54.32 μg/mL。關(guān)炳峰等[29]在對(duì)金銀花提取物的抗氧化活性與其綠原酸含量的相關(guān)性研究中以VC、綠原酸純品作為陽性對(duì)照,分析金銀花提取物和與其所含的等量的綠原酸的抗氧化能力的差異,發(fā)現(xiàn)金銀花提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除力與其所含綠原酸含量密切相關(guān),當(dāng)金銀花提取物濃度達(dá)到0.2 mg/mL時(shí),對(duì)超氧陰離子自由基的清除率高于90%,清除能力顯著,略低于VC。枸杞芽、葉中的多酚類生物活性成分主要為綠原酸類物質(zhì)[26],枸杞芽茶、葉茶中雖然沒有檢測(cè)出兒茶素類物質(zhì)的存在,但枸杞芽茶、葉茶中的綠原酸等多酚類物質(zhì)可能發(fā)揮了良好的對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用。

圖5 枸杞芽茶、葉茶提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力Fig.5 Scavenging activities on superoxide radicals of crude extracts from Lycium barbarum bud tea and Lycium barbarum leaf tea

2.2.4 總還原力 枸杞芽茶、葉茶的總還原力結(jié)果見圖6,可以看出與陽性對(duì)照VC相比,枸杞芽茶、葉茶的總還原能力明顯較弱,在濃度0.25 mg/mL時(shí),VC、枸杞芽茶、葉茶的總還原力分別為1.84、0.38、0.26,表明枸杞芽茶總還原力稍強(qiáng)于枸杞葉茶。關(guān)炳峰等[29]在探討金銀花提取物的超氧陰離子自由基清除率與其綠原酸含量相關(guān)性的同時(shí),以K3[Fe(CN)6]反應(yīng)體系測(cè)定了金銀花提取物的還原能力,結(jié)果表明在較低濃度下綠原酸純品與金銀花提取物還原力較弱,呈平行上升趨勢(shì),低于VC的還原能力;在濃度到達(dá)0.05 mg/mL并進(jìn)一步加大至最大濃度0.2 mg/mL的過程中,二者還原能力呈較快增長趨勢(shì)并逐步接近VC。綠原酸類物質(zhì)的存在可以為富含綠原酸類物質(zhì)的植物材料提供良好的還原力,因此含有較豐富綠原酸類物質(zhì)的枸杞芽茶、葉茶為新型保健茶品的開發(fā)利用提供了一定的依據(jù)。

圖6 枸杞芽茶、葉茶提取物總還原能力Fig.6 Total reducing power of crude extracts from Lycium barbarum bud tea and Lycium barbarum leaf tea

3 結(jié)論

枸杞芽茶提取物中多酚、蛋白質(zhì)、游離氨基酸含量顯著高于枸杞葉茶(p<0.01),黃酮、可溶性總糖含量均沒有顯著差異,而且在枸杞芽茶、葉茶中沒有檢測(cè)出綠茶中常見的兒茶素類多酚物質(zhì)。HPLC法測(cè)定枸杞芽茶與葉茶中游離氨基酸含量的結(jié)果表明,天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、絲氨酸、組氨酸、酪氨酸、亮氨酸為枸杞芽茶與葉茶中的主要游離氨基酸,其中天冬酰胺、天冬氨酸、組氨酸、亮氨酸含量更為豐富。枸杞芽茶、葉茶對(duì)DPPH自由基、ABTS自由基及超氧陰離子自由基均有良好的清除能力,且枸杞芽茶具有更好的抗氧化活性,但與陽性對(duì)照VC的抗氧化活性相比,枸杞芽茶、葉茶仍存在一定差距。

[1]李憲明,高治軍. 寧夏枸杞葉茶的開發(fā)現(xiàn)狀和制茶品種比較[J]. 寧夏農(nóng)林科技,2012,53(12):20-21.

[2]陳玲,余昆,徐桂花,等. 枸杞葉茶保健酒的研究[J]. 釀酒科技,2013(4):77-79.

[3]李建國,馬金平,王孝,等. 枸杞芽茶栽培技術(shù)[J]. 北方園藝,2015(2):139-140.

[4]毛清黎,施兆鵬,李玲,等. 茶葉兒茶素保健及藥理功能研究新進(jìn)展[J]. 食品科學(xué),2007,28(8):584-589.

[5]Kuroda Y,Hara Y. Antimutagenic and anticarcinogenic activity of tea polyphenols[J]. Mutation Research/fundamental & Molecular Mechanisms of Mutagenesis,1999,436(1):69-97.

[6]Krisetherton P M,Keen C L. Evidence that the antioxidant flavonoids in tea and cocoa are beneficial for cardiovascular health[J]. Current Opinion in Lipidology,2002,13(13):41-49.

[7]Relja B,T?ttel E,Breig L,et al. Effects of green tea catechins on the pro-inflammatory response after haemorrhage/resuscitation in rats[J]. British Journal of Nutrition,2011,105(12):1791-1797.

[8]Oz H S,Ebersole J L. Green tea polyphenols mediated apoptosis in intestinal epithelial cells by a fadd-dependent pathway[J]. Journal of Cancer Therapy,2010,1(3):105-113.

[9]Peng Z,Xu Z W. Tea polyphenols protect against irradiation-induced injury in submandibular glands’ cells:a preliminary study[J]. Archives of Oral Biology,2011,56(8):738-743.

[10]邱虹,羅燕楓,孫向平,等. 寧夏無果枸杞芽茶對(duì)高血脂患者血脂水平及抗氧化功能的影響[J]. 寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2015,37(11):1249-1252.

[11]魏智清,王吉軍,談?dòng)榔? 枸杞葉(芽)茶降血糖作用小鼠實(shí)驗(yàn)研究[J]. 農(nóng)業(yè)科學(xué)研究,2012,33(3):1-3.

[12]劉麗香,Tanguy Laura,梁興飛,等. Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定苦丁茶中多酚含量[J]. 茶葉科學(xué),2008,28(2):101-106.

[13]劉坤,伏圣青,高華,等. 茶葉中兒茶素含量的快速測(cè)定方法研究[J]. 青島大學(xué)學(xué)報(bào):工程技術(shù)版,2010,25(4):87-90.

[14]韋秀芝,張可鋒,段小群. 不同品種金花茶葉中總黃酮含量測(cè)定[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(10):5869-5869.

[15]王黎明,夏文水. 蒽酮-硫酸法測(cè)定茶多糖含量的研究[J]. 食品科學(xué),2005,26(7):185-188.

[16]傅博強(qiáng),謝明勇,聶少平,等. 茶葉中多糖含量的測(cè)定[J].食品科學(xué),2001,22(11):69-73.

[17]鄧麗莉,潘曉倩,生吉萍,等. 考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蘋果組織微量可溶性蛋白含量的條件優(yōu)化[J]. 食品科學(xué),2012(24):185-189.

[18]劉美,馬葉萍,柳陽陽,等. 茶葉中游離氨基酸含量的測(cè)定[J]. 微量元素與健康研究,2016,33(1):51-52.

[19]邵金良,黎其萬,董寶生,等. 茚三酮比色法測(cè)定茶葉中游離氨基酸總量[J]. 中國食品添加劑,2008(2):162-165.

[20]W ang L,Xu R,Hu B,et al. Analysis of free amino acids in Chinese teas and flower of tea plant by high performance liquid chromatography combined with solid-phase extraction[J]. Food Chemistry,2010,123(4):1259-1266.

[21]Ying L,Ma S S,Ibrahim S A,et al. Identification and antioxidant properties of polyphenols in lotus seed epicarp at different ripening stages[J]. Food Chemistry,2015,185:159-164.

[22]Hu B,Wang Y,Xie M,et al. Polymer nanoparticles composed with gallic acid grafted chitosan and bioactive peptides combined antioxidant,anticancer activities and improved delivery property for labile polyphenols[J]. Journal of Functional Foods,2015,15:593-603.

[23]Xie M,Hu B,Wang Y,et al. Grafting of gallic acid onto chitosan enhances antioxidant activities and alters rheological properties of the copolymer[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry,2014,62(37):9128-9136.

[24]Bi H,Gao T,Li Z,et al. Structural elucidation and antioxidant activity of a water-soluble polysaccharide from the fruit bodies of Bulgaria inquinans(Fries)[J]. Food Chemistry,2013,138(2-3):1470-1475.

[25]Wu Q,Qu H,Jia J,et al. Characterization,antioxidant and antitumor activities of polysaccharides from purple sweet potato[J]. Carbohydrate Polymers,2015,132:31-40.

[26]Mocan A,Vlase L,Vodnar D C,et al. Polyphenolic content,antioxidant and antimicrobial activities of Lycium barbarum L. andLyciumchinenseMill. leaves[J]. Molecules,2014,19(7):10056-10073.

[27]張自萍,黃文波,廖國玲,等. 枸杞子提取液抗氧化活性的研究[J]. 西北植物學(xué)報(bào),2007,27(5):943-946.

[28]胡宗福,于文利,趙亞平. 綠原酸清除活性氧和抗脂質(zhì)過氧化的研究[J]. 食品科學(xué),2006,27(2):128-130.

[29]關(guān)炳峰,譚軍,周志娣. 金銀花提取物的抗氧化作用與其綠原酸含量的相關(guān)性研究[J]. 食品工業(yè)科技,2007,28(10):127-129.

Analysis of chemical compositions and antioxidant activities ofLyciumbarbarumbud and leaf teas

ZHOU Zhi-yang1,CAO You-long2,WANG Yi-han1,CHENG Di-jun1,MI Jia2,LI Xiao-ying2,YAN Ya-mei1,2,*,ZENG Xiao-xiong1,2,*

(1.College of Food Science and Technology,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China; 2.National Wolfberry Engineering Research Center,Yinchuan 750002,China)

The extracts ofLyciumbarbarumbud and leaf teas were prepared by hot water extraction(ratio of solid to liquid 1∶40,temperature 96 ℃,extraction time 30 min)and their chemical contents were determined,and compositions of free amino acids inLyciumbarbarumbud and leaf teas were analyzed by HPLC. Furthermore,the antioxidant activities ofLyciumbarbarumbud and leaf tea were evaluated by determining of scavenging activities on DPPH radical,ABTS radical and superoxide radical and total reducing power. The results showed that the total polyphenols contents forLyciumbarbarumbud and leaf teas were 6.32% and 2.96%,respectively. Asp(3230.41 and 2440.96 μg/g),Asn(3754.77 and 3495.57 μg/g),His(5585.26 and 2825.17 μg/g)and Leu(4376.09 and 1051.00 μg/g)were relatively abundant inLyciumbarbarumbud and leaf teas. Moreover,bothLyciumbarbarumbud tea and leaf tea exhibited favorable scavenging activities on DPPH(IC50:147.63 and 241.23 μg/mL),ABTS(IC50:109.87 and 145.32 μg/mL)and superoxide radicals(IC50:46.58 and 54.32 μg/mL). Compared withLyciumbarbarumleaf tea,Lyciumbarbarumbud tea showed relatively higher antioxidant activity.

Lyciumbarbarumbud tea;Lyciumbarbarumleaf tea;chemical composition;free amino acid;antioxidant activity

2016-10-11

周志陽(1992-)，男，碩士研究生，研究方向：食品生物資源化學(xué)，E-mail：2014108068@njau.edu.cn。

*通訊作者:閆亞美(1982-)，女，博士，副研究員，研究方向：枸杞加工與貯藏，E-mail：yanyamei@163.com。 曾曉雄(1964-),男，博士，教授，研究方向：食品生物技術(shù)，E-mail:zengxx@njau.edu.cn。

寧夏農(nóng)林科學(xué)院對(duì)外合作項(xiàng)目(JLC201601)；寧夏農(nóng)林科學(xué)院先導(dǎo)項(xiàng)目(NKYG-13-08,NKYJ-14-26,NKYZ-16-0505)；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目。

TS201.2

A

1002-0306(2017)10-0129-07

10.13386/j.issn1002-0306.2017.10.017