李福琴, 石麗紅, 王 飛, 孫財(cái)遠(yuǎn), 康 頔, 張鈺萍, 陳泠竹, 胡德禹

(貴州大學(xué)精細(xì)化工研究開發(fā)中心, 教育部綠色農(nóng)藥與農(nóng)業(yè)生物工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 貴州 貴陽(yáng) 550025)

研究論文

QuEChERS-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)土壤和柑橘中吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈的殘留

李福琴, 石麗紅, 王 飛, 孫財(cái)遠(yuǎn), 康 頔, 張鈺萍, 陳泠竹, 胡德禹*

(貴州大學(xué)精細(xì)化工研究開發(fā)中心, 教育部綠色農(nóng)藥與農(nóng)業(yè)生物工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 貴州 貴陽(yáng) 550025)

建立了QuEChERS-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)檢測(cè)土壤和柑橘中吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈的分析方法。樣品經(jīng)甲醇或乙腈提取,N-丙基乙二胺(PSA)凈化后,用液相色譜分離，電噴霧正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式進(jìn)行質(zhì)譜測(cè)定,以基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行外標(biāo)法定量。吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的定量限(LOQ,S/N=10)分別為5.8～7.0 μg/kg、9.3～14.1 μg/kg和2.1～2.6 μg/kg。樣品的加標(biāo)回收率為75.48%～109.18%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.60%～5.11%(n=5)。該法快速簡(jiǎn)便,定量準(zhǔn)確,用基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液能夠有效、準(zhǔn)確地校正LC-MS/MS測(cè)定吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈殘留的基質(zhì)效應(yīng),滿足土壤、橘皮、橘肉和柑橘全果實(shí)際樣品的檢測(cè)需求。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;QuEChERS;吡唑醚菌酯;甲基硫菌靈;多菌靈;土壤;柑橘

吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)是甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑[1]。其抑菌機(jī)理[2]是阻止細(xì)胞色素間的電子傳遞而抑制線粒體的呼吸作用,使線粒體不能產(chǎn)生和提供細(xì)胞正常代謝所需能量,最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

甲基硫菌靈(thiophanate-methyl),化學(xué)名稱為1,2-二(3-甲氧羰基-2-硫脲基)苯,屬于苯并咪唑類殺菌劑,經(jīng)羥化、水解、代謝為多菌靈(carbendazim)[3]。其抑菌機(jī)理[4]是通過(guò)干擾細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中紡錘體的形成,從而干擾細(xì)胞的分裂。GB 2763-2016規(guī)定甲基硫菌靈的殘留定義為甲基硫菌靈和多菌靈的殘留總和,以多菌靈計(jì)。

吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈作為高效、低毒的廣譜性殺菌劑,對(duì)于果蔬生長(zhǎng)期間的炭疽病、輪紋病、黑腐病以及貯藏期間的青霉病、綠霉病等有良好的防治作用[5,6],被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。然而,盲目或過(guò)量地使用這些農(nóng)藥而造成的環(huán)境污染、農(nóng)藥超標(biāo)等問(wèn)題引起了人們的廣泛關(guān)注。歐盟規(guī)定吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈在柑橘中的殘留限量分別為2、6和0.2 mg/kg;日本規(guī)定吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的殘留限量分別為2、3和3 mg/kg;國(guó)際食品法典委員會(huì)(CAC)規(guī)定吡唑醚菌酯和多菌靈的殘留限量分別為2 mg/kg和1 mg/kg; GB 2763-2016中規(guī)定了柑橘中多菌靈的殘留限量為5 mg/kg,但尚未規(guī)定吡唑醚菌酯和甲基硫菌靈在柑橘中的殘留限量。因此,建立快速、靈敏的方法監(jiān)測(cè)柑橘中吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈的殘留具有重要意義。

目前,吡唑醚菌酯的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法(GC)[7,8]、液相色譜法(LC)[9,10]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)[11,12]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[13,14]。氣相色譜法、液相色譜法的靈敏度較低,主要用于單一殺菌劑在簡(jiǎn)單作物上的殘留分析;氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法選擇性和靈敏度較高,主要應(yīng)用于果蔬、谷物、茶葉、中藥材、飲料、肉類等復(fù)雜基質(zhì)的多殘留分析。

甲基硫菌靈及代謝物多菌靈的檢測(cè)方法主要有紫外分光光度法(UV)[15]、氣相色譜法[16]、液相色譜法[17-20]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[21-25]等。紫外分光光度法易受干擾,準(zhǔn)確度較低;氣相色譜法不宜直接分析苯并咪唑類等熱不穩(wěn)定化合物,往往需要衍生化。

已報(bào)道的吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的前處理方法主要有固相微萃取法(SPME)[8]、凝膠滲透法(GPC)[10,11]、固相萃取法[12,14,19-21]、微孔膜液液萃取法[17]、QuEChERS技術(shù)[23-25]等。Munitz等[8]采用固相微萃取法、吳迪等[10]采用凝膠滲透法提高了樣品的凈化效率,但復(fù)雜繁瑣的前處理步驟不能滿足大批量快速檢測(cè)的需求;固相萃取法溶劑消耗量大、費(fèi)時(shí)費(fèi)力且易對(duì)環(huán)境造成污染;Sandahl等[17]采用微孔膜液液萃取技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì)目標(biāo)化合物的選擇性富集,但有機(jī)溶劑消耗量大;李鵬等[23]用QuEChERS方法對(duì)樣品進(jìn)行凈化,過(guò)程繁瑣(二次提取)、耗時(shí)長(zhǎng)(60 min);王連珠等[24]采用QuEChERS方法提取51種農(nóng)藥,其中甲基硫菌靈的回收率低于50%;張志勇等[25]采用改進(jìn)的QuEChERS技術(shù)作為黃瓜樣品的前處理方法,過(guò)程復(fù)雜且溶劑使用量大(40 mL)。

本研究采用改進(jìn)的QuEChERS技術(shù)與LC-MS/MS結(jié)合,建立了一種快速、靈敏地檢測(cè)土壤、橘皮、橘肉和柑橘全果中吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈殘留的分析方法。該方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏,可滿足農(nóng)藥殘留的分析要求。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

LC-20 ADXR液相色譜儀(日本Shimadzu公司); 4000 Q-TRAP三重四極桿質(zhì)譜儀(美國(guó)Applied Biosystems公司); QL-901渦旋混合器(江蘇海門市麒麟醫(yī)用儀器廠); TGL-20B高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠); RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠); ALC-210.4電子天平(德國(guó)艾科勒公司)。

甲醇、乙腈為質(zhì)譜純(美國(guó)Tedia公司);N-丙基乙二胺(PSA, 40～60 μm, 博納艾杰爾公司);吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品(純度99.0%)、甲基硫菌靈標(biāo)準(zhǔn)品(純度97.0%)(德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司);多菌靈標(biāo)準(zhǔn)品(純度99.2%)(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息中心); 40%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))吡唑醚菌酯-甲基硫菌靈懸浮劑(有效成分為5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))吡唑醚菌酯和35%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))甲基硫菌靈, 推薦的施藥劑量為有效成分333.3～500 mg/kg，江蘇龍燈化工有限公司);屈臣氏蒸餾水(香港Watson有限公司);無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉為分析純(成都金山化學(xué)試劑有限公司)。

1.2 殘留試驗(yàn)

田間試驗(yàn)于2015、2016年在貴州省都勻市惠水縣、廣西壯族自治區(qū)崇左市扶綏縣和湖南省長(zhǎng)沙市芙蓉鎮(zhèn)3地實(shí)施。試驗(yàn)區(qū)按《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》的要求設(shè)置，每個(gè)試驗(yàn)區(qū)隨機(jī)抽取2棵果樹,重復(fù)3次。以40%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))吡唑醚菌酯-甲基硫菌靈懸浮劑的高劑量(500 mg/kg)和1.5倍高劑量(750 mg/kg)各噴霧施藥2次和3次,施藥間隔期為10 d。在相同條件下另設(shè)空白對(duì)照區(qū)，空白對(duì)照區(qū)不施藥。距最后1次施藥的第14、21、28 d采集土壤和柑橘樣品,測(cè)定土壤和柑橘中吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈的殘留。

1.3 樣品的制備

土壤樣品按SOP FT-04-01規(guī)定制備,柑橘全果、果皮、果肉樣品按SOP FT-03-22規(guī)定制備。

將土壤樣品碾碎后過(guò)1 mm(16目)篩,收集于搪瓷盤中混勻,用四分法取200～300 g樣品兩份；將橘皮切成2 cm的小塊,勻漿后混勻；用勻漿機(jī)將橘肉、柑橘全果勻漿、混勻。取150 g處理好的樣品兩份。

將上述樣品分別裝入封口樣品容器中,貼好標(biāo)簽,于-20 ℃冷凍保存。

表 1 MRM模式下吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的保留時(shí)間、監(jiān)測(cè)離子、去簇電壓和碰撞能量

* Quantitative ion.

1.4 樣品前處理

土壤:稱取5.0 g(精確至0.01 g)樣品于50 mL聚四氟乙烯離心管中,加入20 mL甲醇,渦旋提取3 min,超聲10 min,加入5 g無(wú)水硫酸鎂,渦旋1 min,以6 000 r/min離心5 min。取1 mL上清液轉(zhuǎn)移至裝有50 mg PSA的離心管中,渦旋1 min,過(guò)0.22 μm濾膜,待LC-MS/MS檢測(cè)。

橘皮、橘肉、柑橘全果:稱取5.0 g(精確至0.01 g)樣品于50 mL聚四氟乙烯離心管中,加入20 mL乙腈,渦旋提取5 min,超聲15 min,加入5 g氯化鈉,渦旋1 min,以6 000 r/min離心5 min。取1 mL上清液轉(zhuǎn)移至裝有50 mg PSA的離心管中,渦旋1 min,過(guò)0.22 μm濾膜,待LC-MS/MS檢測(cè)。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱取10 mg吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶解并定容至100 mL,分別配制質(zhì)量濃度為100 mg/L的單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,密封后于4 ℃避光保存,備用。

分別取適量吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用甲醇逐級(jí)稀釋,配制吡唑醚菌酯質(zhì)量濃度為5～1 000 μg/L、甲基硫菌靈質(zhì)量濃度為12.5～2 500 μg/L、多菌靈質(zhì)量濃度為1.25～250 μg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,密封后于4 ℃避光保存,備用。

取空白樣品,按1.4節(jié)方法前處理后,取1 mL上清液濃縮至干,用系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液復(fù)溶并定容至1 mL,分別配制土壤、橘皮、橘肉和柑橘全果中質(zhì)量濃度對(duì)應(yīng)的系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.6 分析條件

色譜柱:Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm);柱溫40 ℃;流動(dòng)相:(A)甲醇和(B)水;梯度洗脫程序:0～1.0 min,50%B;1.0～1.1 min, 50%B～30%B;1.1～6.0 min,30%B;6.0～6.1 min,30%B～15%B;6.1～12.0 min,15%B;12.0～12.1 min,15%B～50%B;12.1～15.0 min,50%B;流速:0.5 mL/min;進(jìn)樣量:2.0 μL。

離子源:電噴霧離子(ESI)源;掃描方式:正離子掃描;離子源溫度:550 ℃;離子噴霧電壓:5 500 V;輔助氣壓力1(N2): 344.8 kPa;輔助氣壓力2(N2): 344.8 kPa;氣簾氣壓力:206.9 kPa。采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式采集數(shù)據(jù),以保留時(shí)間和離子對(duì)信息進(jìn)行定性分析,以母離子和響應(yīng)值最高的子離子進(jìn)行定量分析。吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的保留時(shí)間、監(jiān)測(cè)離子、去簇電壓和碰撞能量見表1。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜和質(zhì)譜條件的優(yōu)化

分別考察了以不同比例的甲醇-水、乙腈-水和甲醇-0.1%(v/v)甲酸水溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫時(shí)目標(biāo)物的分離效果。以乙腈-水作為流動(dòng)相體系時(shí),多菌靈有拖尾現(xiàn)象且峰寬過(guò)大;以甲醇-0.1%(v/v)甲酸水溶液作為流動(dòng)相體系時(shí),吡唑醚菌酯峰形變形、分叉;以甲醇-水作為流動(dòng)相體系時(shí),吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈均有較好的峰形且分離效果較好,故選為實(shí)驗(yàn)所用。

采用流動(dòng)注射單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的形式分別對(duì)吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。選擇ESI+電離模式,對(duì)離子噴霧電壓、離子源溫度、氣簾氣壓力及碰撞能量等條件進(jìn)行優(yōu)化。通過(guò)選擇Full scan掃描得到分子離子峰,并優(yōu)化得到去簇電壓,再在Product Ion模式下優(yōu)化碰撞能量,并得到定量和定性離子,然后用優(yōu)化得到的質(zhì)譜條件進(jìn)行MRM測(cè)定。

2.2 提取溶劑的選擇

根據(jù)現(xiàn)有的文獻(xiàn)方法,結(jié)合吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的性質(zhì),考察了甲醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷5種提取溶劑對(duì)吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈在土壤、橘皮、橘肉、柑橘全果中回收率的影響(見圖1)。結(jié)果表明,對(duì)于土壤樣品,采用丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷提取時(shí),吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的回收率均不能同時(shí)達(dá)到70%以上;采用乙腈提取時(shí),目標(biāo)物的回收率為70%～85%;采用甲醇提取時(shí),目標(biāo)物的回收率為90%～100%,故選擇甲醇作為提取溶劑。對(duì)于柑橘果皮、果肉、全果樣品,采用甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷提取時(shí),目標(biāo)物的回收率均不能同時(shí)達(dá)到70%以上;采用乙腈提取時(shí),目標(biāo)物的回收率為80%～100%,故選擇乙腈作為提取溶劑。

圖 1 不同提取劑對(duì)吡唑醚菌酯(0.2 mg/kg)、甲基硫菌靈(0.5 mg/kg)和多菌靈(0.05 mg/kg)回收率的影響(n=3)Fig. 1 Effects of the different extraction solvents on the recoveries of pyraclostrobin (0.2 mg/kg), thiophanate-methyl (0.5 mg/kg), carbendazim (0.05 mg/kg) (n=3) Matrix: a. soil; b. citrus peel; c. citrus pulp; d. citrus.

2.3 吸附劑的選擇

在提取柑橘樣品時(shí)，會(huì)有較多的有機(jī)酸、色素和糖類化合物與目標(biāo)化合物共流出,如果不進(jìn)一步凈化,會(huì)干擾目標(biāo)化合物的準(zhǔn)確定量。目前,采用QuEChERS技術(shù)時(shí)常用的吸附劑主要有C18、石墨化炭黑(GCB)和PSA。C18主要用于去除脂類等疏水性雜質(zhì);GCB主要用于去除色素類物質(zhì);PSA是一種弱陰離子交換劑,主要用于去除脂肪酸等物質(zhì)。本研究分別考察了10、30和50 mg的C18、GCB和PSA對(duì)目標(biāo)物質(zhì)回收率的影響。結(jié)果表明,經(jīng)不同質(zhì)量的C18或GCB凈化后,目標(biāo)物質(zhì)的回收率均較低,無(wú)法滿足分析要求;而經(jīng)10、30和50 mg的PSA凈化后,目標(biāo)物質(zhì)的回收率分別為82.29%～95.24%、82.14%～96.71%和81.53%～95.85%,且PSA的用量越多,樣品凈化后的顏色越淺,故本研究選用50 mg的PSA作為吸附劑。

2.4 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.4.1 線性范圍、檢出限和定量限

本試驗(yàn)對(duì)不同濃度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,以目標(biāo)物質(zhì)的峰面積為縱坐標(biāo)(y)、對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x, μg/L)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明,吡唑醚菌酯在5～1 000 μg/L、甲基硫菌靈在12.5～2 500 μg/L、多菌靈在1.25～250 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.99(見表2)。

以3倍和10倍信噪比(S/N)確定方法的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)。吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的檢出限分別為1.7～2.1 μg/kg、2.8～4.2 μg/kg和0.6～0.8 μg/kg,定量限分別為5.8～7.0 μg/kg、9.3～14.1 μg/kg和2.1～2.6 μg/kg。方法的檢出限和定量限遠(yuǎn)低于當(dāng)前各國(guó)現(xiàn)行的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。

表 2 不同基質(zhì)中吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、基質(zhì)效應(yīng)(ME)、檢出限和定量限

y: peak area;x: mass concentration, μg/L; /: not exist.

2.4.2 基質(zhì)效應(yīng)的考察

基質(zhì)效應(yīng)是指樣品中一種或幾種非待測(cè)組分對(duì)待測(cè)物含量測(cè)定準(zhǔn)確度的影響。為提高方法的準(zhǔn)確度,需要對(duì)不同基質(zhì)產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)做出評(píng)價(jià)[26]。對(duì)1.5節(jié)配制的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，,以二者的斜率比來(lái)判定基質(zhì)效應(yīng)的強(qiáng)弱[27-29]:比值大于1時(shí),表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng);比值小于1時(shí),表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)。結(jié)果表明,吡唑醚菌酯在不同基質(zhì)中的斜率比大于1,說(shuō)明存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng);甲基硫菌靈在不同基質(zhì)中的斜率比均小于1,說(shuō)明存在明顯的基質(zhì)抑制效應(yīng);多菌靈在不同基質(zhì)中的斜率比大于1,說(shuō)明存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)(見表2)。不同基質(zhì)中吡唑醚菌酯(0.2 mg/kg)、甲基硫菌靈(0.5 mg/kg)和多菌靈(0.05 mg/kg)的MRM色譜圖見圖2。

圖 2 不同基質(zhì)中吡唑醚菌酯(0.2 mg/kg)、甲基硫菌靈(0.5 mg/kg)和多菌靈(0.05 mg/kg)的色譜圖 Fig. 2 Chromatograms of pyraclostrobin (0.2 mg/kg),thiophanate-methyl (0.5 mg/kg) and carbendazim (0.05 mg/kg) in different matrices

2.4.3 回收率與精密度

稱取不同基質(zhì)的空白樣品，加入不同濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻后靜置2 h,制得吡唑醚菌酯含量為0.02、0.2、4 mg/kg、甲基硫菌靈含量為0.05、0.5、10 mg/kg、多菌靈含量為0.005、0.05、1 mg/kg的加標(biāo)樣品。按1.4節(jié)的描述進(jìn)行前處理，進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn),每個(gè)加標(biāo)水平重復(fù)5次，結(jié)果見表3。土壤、橘皮、橘肉和柑橘全果中吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的加標(biāo)回收率分別為75.48%～101.73%、77.92%～109.18%和83.31%～102.44%, RSD分別為0.60%～4.97%、0.66%～3.20%和1.09%～5.11%(n=5)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，建立的方法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度,滿足在土壤、橘皮、橘肉和柑橘全果基質(zhì)中吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈的殘留檢測(cè)要求。

表 3 吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈在不同基質(zhì)中的加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)

2.5 實(shí)際樣品檢測(cè)

將建立的方法應(yīng)用于田間試驗(yàn)樣品。檢測(cè)出吡唑醚菌酯在所有土壤、橘皮、橘肉、柑橘全果樣品中的最終殘留分別小于1.78、0.98、0.09和0.26 mg/kg;甲基硫菌靈的殘留分別小于0.32、0.98、0.41和0.87 mg/kg;多菌靈的殘留分別小于1.23、0.61、0.18和0.52 mg/kg。橘肉中吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈最終殘留量均低于各國(guó)規(guī)定的殘留限量值。

3 結(jié)論

本研究建立了QuEChERS-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)檢測(cè)土壤和柑橘中吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和多菌靈殘留的分析方法。該方法操作簡(jiǎn)單,提取時(shí)間短,溶劑用量少,線性范圍寬,靈敏度高,為柑橘中農(nóng)藥殘留檢測(cè)提供了技術(shù)支持。

[1] Zhang Y B. World Pasticides, 2007, 29(3): 47

張亦冰. 世界農(nóng)藥, 2007, 29(3): 47

[2] Yao Y, Chen J X, Li T, et al. Fine Chemical Intermediates, 2013, 43(3): 65

姚瑛, 陳九星, 李濤, 等. 精細(xì)化工中間體, 2013, 43(3): 65

[3] Ding Y, Wu R H, Guo X Y, et al. Agrochemicals, 2013, 52(12): 896

丁悅, 吳若函, 郭曉瑜, 等. 農(nóng)藥, 2013, 52(12): 896

[4] Yin X H, Li R Y, Wang M, et al. Agrochemicals, 2014, 53(3): 191

尹顯慧, 李榮玉, 王梅, 等. 農(nóng)藥, 2014, 53(3): 191

[5] Pu Z X, Huang Z D, Hu X R, et al. Acta Agricultural Zhejiangensis, 2014, 26(1): 122

蒲占湑, 黃振東, 胡秀榮, 等. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2014, 26(1): 122

[6] Ma H J, Cao Q L, Ma Y F, et al. Agrochemicals, 2013, 52(6): 408

馬海軍, 曹慶亮, 馬亞芳, 等. 農(nóng)藥, 2013, 52(6): 408

[7] Wu J S, Feng J W, Ren Y X, et al. Agrochemicals, 2011, 50(10): 754

吳潔珊, 馮家望, 任永霞, 等. 農(nóng)藥, 2011, 50(10): 754

[8] Munitz M S, Resnik S L, Montti M I T, et al. Agr Sci, 2014, 5(11): 964

[9] Li R J, Yu J L, Song G C. Pesticide Science and Administration, 2010, 31(6): 33

李瑞娟, 于建壘, 宋國(guó)春. 農(nóng)藥科學(xué)與管理, 2010, 31(6): 33

[10] Wu D, Xin J, Pan H J, et al. Chinese Journal of Pesticide Science, 2012, 14(6): 681

吳迪, 莘婧, 潘洪吉, 等. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 14(6): 681

[11] Bo H B, Wang J H, Guo C H, et al. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2008, 36(11): 1471

薄海波, 王金花, 郭春海, 等. 分析化學(xué), 2008, 36(11): 1471

[12] Lagunas-Allué L, Sanz-Asensio J, Martínez-Soria M T. J Chromatogr A, 2012, 1270(24): 62

[13] Zhang F Z, Wang L, Zhou L, et al. Ecotox Environ Safe, 2012, 78(4): 116

[14] Liu J, Zhang X, Shen J, et al. Hubei Agricultural Sciences, 2014, 53(19): 4698

劉軍, 張仙, 沈菁, 等. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 53(19): 4698

[15] GB/T 5009. 188-2003

[16] SN 0162-92

[17] Sandahl M, Mathiasson L, Jonsson J A. J Chromatogr A, 2000, 893(1): 123

[18] Gu X Y, Qiu M Z, Liu Y Z. Physical Testing and Chemical Analysis Part B: Chemical Analysis, 2010, 46(7): 797

辜雪英, 仇滿珍, 劉云珠. 理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè), 2010, 46(7): 797

[19] Shi J L, Song C M, Kong G H, et al. Chinese Journal of Analysis Laboratory, 2012, 31(12): 82

師君麗, 宋春滿, 孔光輝, 等. 分析試驗(yàn)室, 2012, 31(12): 82

[20] Zhang N J, Wu X Z, Jiang X. Modern Food Science and Technology, 2013, 29(4): 907

張念潔, 吳信子, 姜旭. 現(xiàn)代食品科技, 2013, 29(4): 907[21] Liu X S, Zheng L, Huang W W, et al. Journal of Instrumental Analysis, 2013, 32(1): 84

劉曉松, 鄭玲, 黃文雯, 等. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2013, 32(1): 84

[22] Liu N, Dong F S, Liu X G, et al. Food Control, 2014, 43(43): 115

[23] Li P, Liu K L, Yang X, et al. Journal of Food Safety and Quality, 2013, 4(1): 89

李鵬, 劉凱麗, 楊欣, 等. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào), 2013, 4(1): 89

[24] Wang L Z, Zhou Y, Huang X Y, et al. Chinese Journal of Chromatography, 2013, 31(12): 1167

王連珠, 周昱, 黃小燕, 等. 色譜, 2013, 31(12): 1167

[25] Zhang Z Y, Gong Y, Shan W L, et al. Chinese Journal of Chromatography, 2012, 30(1): 91

張志勇, 龔勇, 單煒力, 等. 色譜, 2012, 30(1): 91

[26] Chen J J, Zhang J, Wu S Z, et al. Chinese Journal of Chromatography, 2016, 34(10): 1005

陳姣姣, 張靜, 吳思卓, 等. 色譜, 2016, 34(10): 1005

[27] Zheng X P, Ding L P, Chen Z T, et al. Chinese Journal of Chromatography, 2015, 33(6): 652

鄭香平, 丁立平, 陳志濤, 等. 色譜, 2015, 33(6): 652

[28] Chen X X, Xu J, Liu X G, et al. J Sep Sci, 2014, 37(13): 1640

[29] Ding L P, Cai C P, Wang D H. Chinese Journal of Chromatography, 2014, 32(8): 849

丁立平, 蔡春平, 王丹紅. 色譜, 2014, 32(8): 849

Guizhou University Graduate Student Innovation Fund (No. 2016077).

Simultaneous determination of pyraclostrobin and thiophanate-methyl and its metabolite carbendazim residues in soil and citrus by QuEChERS-liquid chromatography-tandem mass spectrometry

LI Fuqin, SHI Lihong, WANG Fei, SUN Caiyuan, KANG Di,ZHANG Yuping, CHEN Lingzhu, HU Deyu*

(ResearchandDevelopmentCenterforFineChemicals,StateKeyLaboratoryofGreenPesticideandAgriculturalBioengineering,MinistryofEducation,GuizhouUniversity,Guiyang550025,China)

A QuEChERS-liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was developed for the determination of pyraclostrobin, thiophanate-methyl and its metabolite carbendazim in soil and citrus. The samples were extracted with methanol or acetonitrile, purified by primary secondary amine (PSA), then separated by LC, detected in multiple reaction monitoring (MRM) mass spectrometry mode via positive electrospray ionization. The analytes were quantified by matrix-matched standard solutions with external standard method. The limits of quantification (LOQs) of pyraclostrobin, thiophanate-methyl and carbendazim in different matrices were 5.8-7.0 μg/kg, 9.3-14.1 μg/kg and 2.1-2.6 μg/kg, respectively. For all the samples, the spiked recoveries ranged from 75.48% to 109.18%, and the relative standard deviations (RSDs) were 0.60%-5.11% (n=5). The method is quick, easy, effective, sensitive and accurate. The matrix-matched calibration solutions can efficiently compensate matrix effects of the pyraclostrobin, thiophanate-methyl and carbendazim in LC-MS/MS analysis. The established method can be applied to the residue analysis of the real samples of soil, citrus peel, citrus pulp and citrus fruits.

liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS); QuEChERS; pyraclostrobin; thiophanate-methyl; carbendazim; soil; citrus

10.3724/SP.J.1123.2017.01031

2017-01-22

貴州大學(xué)研究生創(chuàng)新基金項(xiàng)目(2016077).

O658

A

1000-8713(2017)06-0620-07

* 通訊聯(lián)系人.Tel:(0851)88292170,E-mail:dyhu@gzu.edu.cn.