路明亮

摘要：目的 通過HPLC方法測(cè)定尼莫地平片劑的含量。方法 在色譜條件：選擇Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，流動(dòng)相：甲醇∶水（68∶32），檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm，進(jìn)樣量10 μl，1.0 ml/min流速，柱溫為室溫（25℃）條件下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 尼莫地平在11.07～55.35 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為：Y=6921.2X-4311.6（r=0.9994），平均回收率為100.97%，RSD=1.5%。結(jié)論 采用高效液相色譜方法，可有效評(píng)估尼莫地平片劑中尼莫地平的含量，本法簡(jiǎn)單、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：HPLC法；尼莫地平；含量

尼莫地平（Nimodipine，NMD）為1，4雙氫吡啶類鈣通道拮抗劑，主要用于擴(kuò)張腦血管及改善腦功能[1]，該藥難溶于水，屬脂溶性藥物[2]。尼莫地平片劑測(cè)定多以紫外分光光度法為主，但因該法存在有關(guān)物質(zhì)方面干擾，專屬性較差[3]，本文由此出發(fā)考察高效液相法在其含量測(cè)定方面的應(yīng)用效果。

1 資料與方法

1.1儀器與試藥 島津 LC-2010CHT 型高效液相色譜儀；超聲波清洗器；甲醇由霍尼韋爾貿(mào)易（上海）有限公司提供，為色譜醇；尼莫地平對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：160112-160223）；尼莫地平片（牡丹江靈泰藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H23022380，規(guī)格：20 mg，批號(hào)：160123、160321、160628）。

1.2方法

1.2.1高效液相色譜法

1.2.1.1色譜條件 ①波長(zhǎng)：選擇以流動(dòng)相做空白對(duì)照，于200～400 nm波長(zhǎng)下對(duì)尼莫地平對(duì)照品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果顯示在238 nm處尼莫地平有最大吸收；以空氣為對(duì)照，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行全波段掃描顯示，其在238 nm內(nèi)基線平行，無(wú)干擾，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm。②色譜柱：選擇Agilent C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇∶水（68∶32），檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm，進(jìn)樣量10 μl，1.0 ml/min流速，柱溫為室溫（25℃）。

1.2.1.2溶液的制備 ①供試品溶液的制備：精密稱取10片尼莫地平片，粉碎后混合均勻，精密稱取上述供試品適量置于25 ml容量瓶中，加入流動(dòng)相適量稀釋，搖勻至澄清后，稀釋至對(duì)應(yīng)刻度，取適量溶液經(jīng)微孔濾膜（0.25 μm）過濾后，待用。②對(duì)照品溶液的制備：采用十萬(wàn)分之一天平稱取尼莫地平對(duì)照品11.07 mg于100 ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻即得。

1.2.1.3方法學(xué)驗(yàn)證 ①精密度試驗(yàn)：在相同色譜條件下，取對(duì)照品重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μl，分別測(cè)定峰面積，并計(jì)算6組數(shù)據(jù)所得的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果為1.2%<2.0%，符合藥典規(guī)定[4]，提示本組方法精密度良好。②重復(fù)性試驗(yàn)：選擇同批號(hào)尼莫地平片6份，精密稱定后，根據(jù)供試品“1.2.1.2①”項(xiàng)操作制備溶液，采用“1.2.1.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣10 μl，采集6份樣品的色譜圖，計(jì)算溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.3%（<2.0%），符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，提示本組方法具有較好的重復(fù)性。③穩(wěn)定性試驗(yàn)：于2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取尼莫地平供試品溶液，采用相同色譜條件，進(jìn)樣10 μl，根據(jù)測(cè)得的色譜峰面積，供試品組RSD為1.6%<2.0%，提示供試品溶液在24 h內(nèi)較為穩(wěn)定。④回收率考察：取“1.2.1.2①”項(xiàng)供試液，保存至3個(gè)錐形瓶?jī)?nèi)，依次加尼莫地平對(duì)照品0.409 mg、1.231 mg和2.141 mg，根據(jù)“1.2.1.1”項(xiàng)色譜條件，進(jìn)樣10 μl，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定，得到回收率分別為101.11%、100.84%和100.97%，平均100.97%，RSD 1.5%，與藥典標(biāo)準(zhǔn)相符[4]。

1.2.1.4線性關(guān)系考察 采用移液管精密移取“1.2.1.2②”的尼莫地平對(duì)照品溶液1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml于10 ml容量瓶中，使用流動(dòng)相稀釋至刻度，澄清后，采用微孔濾膜過濾，得到系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。結(jié)合對(duì)應(yīng)色譜條件，進(jìn)樣10 μl，測(cè)定樣品色譜峰面積，以峰面積和濃度為坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程為：Y=6921.2X-4311.6（r=0.9994），提示尼莫地平濃度在11.07～55.35 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積存在良好的線性關(guān)系。

1.2.2樣品中尼莫地平含量測(cè)定 結(jié)合“1.2.1.1”項(xiàng)下色譜條件，分別測(cè)定尼莫地平對(duì)照品溶液與3批尼莫地平片供試品溶液，供試品制備同“1.2.1.2①”項(xiàng)操作，采用自身對(duì)照法對(duì)供試品內(nèi)含有的尼莫地平含量進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示，高效液相法測(cè)定尼莫地平片中，尼莫地平平均含量（與標(biāo)識(shí)量比較）為（100.67±0.83）%，見表1。

3 討論

尼莫地平（C21H26N2O7）屬二氫吡啶類鈣拮抗劑，其在238 nm和234 nm的波長(zhǎng)處均有吸收，但研究顯示前者的靈敏度比后者高，故本文選擇238 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。流動(dòng)相選擇方面，由于尼莫地平幾乎不溶于水而溶于甲醇，美國(guó)藥典33版[5]中顯示其流動(dòng)相為甲醇-四氫呋喃-水（20∶20∶60），考慮上述方法對(duì)四氫呋喃純度及色譜柱要求較高，故本文嘗試采用甲醇-水系統(tǒng)作為流動(dòng)相備選，最終選擇甲醇-水（68∶32）作為流動(dòng)相，此時(shí)尼莫地平與雜質(zhì)分離度較高為4.1，且峰形較好，保留時(shí)間在7.5 min左右。需注意的是尼莫地平對(duì)光敏感，故在測(cè)定過程中注意避光操作及保存。

通過本文結(jié)果我們可知，高效液相色譜法測(cè)定尼莫地平準(zhǔn)確性高、精密度好、重現(xiàn)性好和相關(guān)性均符合相關(guān)要求，可通過色譜柱作用將尼莫地平及其有關(guān)物質(zhì)有效分離，提高測(cè)定的專屬性，值得推廣使用。

參考文獻(xiàn)：

[1]潘文，李豫，雷宇，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定血清中尼莫地平和尼群地平濃度[J].中國(guó)藥業(yè)，2012，21（2）：25-26.

[2]李帥，李文莉，廖彬，等.高效液相色譜法測(cè)定尼莫地平固體制劑的溶出度[J].中南藥學(xué)，2012，10（7）：494-497.

[3]郝桂明，華蓮，唐素芳.HPLC法測(cè)定尼莫地平軟膠囊的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].藥物分析雜志，2012，32（3）：464-467.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

[5]Rajani B，Mukkanti K.Optimized and validated RP-HPLC method for estimation of nimodipine in tablet dosage form[J].International Journal of Research in Pharmacy and Chemistry，2014，4（1）：105-109.