李莉紅,皇甫冰,高繼萍,常 凱,陳朝陽,龐文彪,宋國華

(山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，實驗動物與人類疾病動物模型山西省重點實驗室，太原 030001)

研究報告

EGFR，PDCD4，TGF-β1，Smad3，Smad7在中國地鼠口腔頰囊黏膜癌變過程中的表達(dá)研究

李莉紅,皇甫冰,高繼萍,常 凱,陳朝陽,龐文彪,宋國華*

(山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，實驗動物與人類疾病動物模型山西省重點實驗室，太原 030001)

目的 探討EGFR，PDCD4，TGF-β1，Smad3，Smad7在口腔正常黏膜、上皮單純增生、上皮異常增生和鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義。方法 采用ELISA對中國地鼠口腔黏膜癌變過程中血清EGFR，PDCD4水平進(jìn)行檢測；采用免疫組織化學(xué)法檢測正?？谇火つど掀?，單純增生上皮、異常增生上皮和鱗癌組織中TGF-β1，Smad3，Smad7的表達(dá)。結(jié)果 在口腔黏膜癌變過程中血清EGFR蛋白呈升高趨勢，血清PDCD4的表達(dá)呈降低趨勢，呈負(fù)相關(guān)。鱗癌組織中TGF-β1、Smad7表達(dá)明顯高于口腔正常黏膜、上皮單純增生、上皮異常增生(P< 0.05)，而Smad3作用減弱。相關(guān)性分析顯示，口腔異常增生上皮、口腔鱗癌組織中TGF-β1表達(dá)與Smad7呈正相關(guān)(P< 0.05)。結(jié)論 EGFR，PDCD4，TGF-β1，Smad3，Smad7表達(dá)與口腔鱗癌的生物學(xué)行為關(guān)系密切，本實驗為研究口腔鱗癌機(jī)理研究提供了理論依據(jù)，對口腔鱗癌的發(fā)展與預(yù)后有重要意義。

口腔鱗狀細(xì)胞癌;免疫組織化學(xué)；癌前病變

口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC) 是一種常發(fā)生于舌、牙齦、頰部等部位的上皮源性惡性腫瘤，與其它腫瘤相似是一種多因素調(diào)節(jié)、多階段發(fā)生和多基因參與的復(fù)雜性疾病。近年來，口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，同時，癌癥患者的發(fā)病年齡也逐漸年輕化[1]。在我國，口腔鱗狀細(xì)胞癌能夠占到口腔癌的 80%以上[2]。腫塊、結(jié)節(jié)、白色斑塊、潰瘍等是OSCC 患者中主要出現(xiàn)的癥狀[3]，給患者日常生活帶來了許多不便，同時對患者的心理健康造成了一定的傷害。近些年以來，在口腔鱗狀細(xì)胞癌的治療方面雖然取得了很大的突破，但是，口腔鱗狀細(xì)胞癌的生存率仍然低于 50%[4]，因此對其機(jī)制以及治療的研究非常重要。

研究表明，腫瘤的形成是腫瘤細(xì)胞凋亡和增殖失去平衡的結(jié)果[5]，也是原癌基因與抑癌基因表達(dá)異常的疾病。表皮生長因子受體(EGFR)的高表達(dá)和程序性細(xì)胞凋亡因子4(PDCD4)的低表達(dá)對腫瘤的增殖、預(yù)后、轉(zhuǎn)移具有重要意義，并與細(xì)胞凋亡行為密切相關(guān)[6]。TGF -β信號通路的異常與腫瘤發(fā)生、發(fā)展緊密相關(guān)，在許多腫瘤中已得到證實[7-9]。Smads蛋白能使TGF -β信號從細(xì)胞外傳遞到細(xì)胞核，Smads缺失使TGF -β信號傳導(dǎo)通路中斷引起腫瘤發(fā)生[10]。本文將采用ELISA、免疫組化檢測EGRF、PDCD4、TGF-β1、Smad3、Smad7在中國地鼠正常口腔黏膜組織、單純增生組織、異常增生組織及口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況，探討其在口腔鱗狀細(xì)胞癌早期診斷和治療中所起的重要作用，為口腔癌的發(fā)展及靶向治療的可能性、尋找新的更好的腫瘤標(biāo)志物提供實驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

清潔級雄性中國地鼠60只，8～10周齡，體重 24～26 g，由山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供[SCXK(晉)2015-0001]。動物實驗期間，動物飼養(yǎng)于屏障環(huán)境[SYXK(晉)2015-0001]，溫度控制在25℃左右，相對濕度40%～70%，12 h/12 h光暗循環(huán)條件下飼養(yǎng)，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后進(jìn)行正式實驗，嚴(yán)格按照山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物管理委員會制定的操作規(guī)程來進(jìn)行動物實驗，并遵守國際慣例。

1.2 主要試劑

兔抗人、大鼠、小鼠、兔TGF-β1多克隆抗體，兔抗大鼠、小鼠Smad3、Smad7多克隆抗體，SABC免疫組化染色試劑盒，DAB顯色試劑盒和3%H2O2，均購自武漢博士德生物公司；EGFR、PDCD4 ELISA檢測試劑盒均購自武漢貝茵萊生物科技有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 口腔癌前病變和鱗癌動物模型制備

將60只雄性中國地鼠隨機(jī)分為三個組：模型組(24只)、溶劑對照組(12只)、空白對照組(24只)。每周一、三、五上午9∶00將0.5%DMBA丙酮液用小頭棉簽涂擦在模型組中國地鼠雙側(cè)頰囊，洗耳球吹干禁食禁水2 h；溶劑對照組只涂丙酮液，涂抹方式同模型組；空白對照組不做任何處理。持續(xù)15周，最終建模成功，建模過程將頰囊病理改變按WHO標(biāo)準(zhǔn)的12項分級記錄進(jìn)行判定[11]。試驗過程中按實驗動物使用的“3R”原則給以人道主義關(guān)懷，實驗處理結(jié)束后，采用符合實驗動物福利的處死方法進(jìn)行處理，盡量縮短處死的時間減少對實驗動物的傷害。

1.3.2 酶聯(lián)免疫吸附法測定所有標(biāo)本血清中EGFR、PDCD4的含量

空腹地鼠眼眶靜脈叢采血，血清分離后-20℃低溫冰箱凍存待檢，試劑盒購自武漢貝茵萊生物科技有限公司提供，均嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。酶標(biāo)儀讀取 450 nm 處OD 值。

1.3.3 免疫組織化學(xué)法檢測頰囊組織中TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白的表達(dá)

根據(jù)病理鑒定結(jié)果挑選口腔正常黏膜組織、上皮單純增生組織、上皮異常增生組織及鱗癌組織用于免疫組化檢測。按SABC試劑盒說明書進(jìn)行操作，切片脫蠟至水，3%H2O2滅活內(nèi)源性酶，微波修復(fù)抗原，5%BSA 封閉，一抗、二抗處理后，DAB 顯色，蘇木素輕度復(fù)染、脫水、透明、封片。顯微鏡觀察免疫組化切片TGF-β1、Smad3、Smad7的蛋白表達(dá)情況，陽性細(xì)胞以細(xì)胞漿和/或細(xì)胞膜和/或細(xì)胞核呈棕黃色、棕褐色或彌漫性著色為準(zhǔn)。每組3個重復(fù)，采用Image Pro Plus(IPP)圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析，每張切片隨機(jī)選取5個完整而不重疊的高倍鏡視野(×200)，測定每個視野下陽性反應(yīng)的平均光密度，以每例5個視野的平均光密度的平均值作為該例的測量值。平均光密度值越高說明表達(dá)越強(qiáng)，反映組織內(nèi)含量越多。

1.4 統(tǒng)計分析

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，實驗數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。多組均數(shù)之間比較采用單因素方差分析，方差分析中均數(shù)的兩兩比較選用 LSD 法，兩組均數(shù)之間比較采用獨立樣本的t檢驗，相關(guān)性分析運用Pearson積差相關(guān)分析。以P< 0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 病理鑒定結(jié)果

空白對照組、溶劑對照組與模型組標(biāo)本病理鑒定結(jié)果如表1所示。

2.2 ELISA檢測中國地鼠口腔頰囊黏膜癌變過程中蛋白表達(dá)及統(tǒng)計分析

2.2.1 EGFR、PDCD4蛋白表達(dá)

中國地鼠血清EGFR在正常黏膜組織、單純增生組織、異常增生組織及鱗癌組織的組間比較差異有顯著性(F=27.54，P< 0.001)(見表2，圖1)。鱗癌組織表達(dá)明顯升高，與正常黏膜組織、單純增生組織、異常增生組織比較差異有顯著性(P< 0.001)。異常增生表達(dá)高于正常黏膜(P< 0.01)、單純增生(P< 0.05)，差異有顯著性。單純增生表達(dá)略高于正常黏膜，差異無顯著性(P> 0.05)。實驗結(jié)果表明，在口腔頰囊黏膜癌變過程中血清EGFR蛋白呈升高趨勢。

經(jīng)單因素方差分析，在正常口腔黏膜、單純增生、異常增生及鱗癌中血清PDCD4的表達(dá)/濃度差異有顯著性(F=87.75，P< 0.001)(如表2，圖1所示)。正常黏膜組PDCD4水平顯著高于單純增生、異常增生及鱗癌組，正常黏膜與單純增生之間差異有顯著性(P< 0.05)，其余各組兩兩比較差異有顯著性(P< 0.001)。實驗結(jié)果顯示，在口腔頰囊黏膜癌變過程中血清PDCD4的表達(dá)呈降低趨勢。

表1 各組標(biāo)本病理鑒定結(jié)果

表2 口腔黏膜癌變各階段血清EGFR、PDCD4濃度比較(±s)

Tab.2 Comparison of serum EGFR、PDCD4 in different stages of the oral mucosa carcinoma

表2 口腔黏膜癌變各階段血清EGFR、PDCD4濃度比較(±s)

組織類型Histologictype例數(shù)NumberEGFR/ng/mLPDCD4/pg/mL正?？谇火つormaloralmucosa60.57±0.08219.72±12.76上皮單純增生Epithelialhyperplasiaofpure60.65±0.12205.37±7.45*上皮異常增生Epithelialdysplasia60.77±0.04**△182.70±6.67***☆原位癌及鱗癌Insitucarcinomaandsquamouscellcarcinomas60.98±0.07***☆★138.97±8.81***☆★

注：與對照組比較*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001; 與單純增生組比較△P<0.05，○P<0.01，☆P<0.001;與異常增生組比較▲P<0.05，●P<0.01，★P<0.001。

Note.Compared with the control group，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001; Compared with the simple hyperplasia group，△P<0.05，○P<0.01，☆P<0.001;Compared with the epithelial dysplasia group，▲P<0.05，●P<0.01，★P<0.001.

注：與對照組比較*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001; 與單純增生組比較△P<0.05，○P<0.01，☆P<0.001;與異常增生組比較▲P<0.05，●P<0.01，★P<0.001。圖1 口腔黏膜癌變各階段血清EGFR、PDCD4的變化Note. Compared with the control group，*P<0.05， **P<0.01， ***P<0.001; Compared with the simple hyperplasia group，△P<0.05，○P<0.01，☆P<0.001;Compared with the epithelial dysplasia group，▲P<0.05，●P<0.01，★P<0.001.Fig.1 Changes of serum EGFR and PDCD4 of in different stages of the oral mucosa carcinoma

組織類型Histologictype例數(shù)NumberTGF-β1Smad7Smad3正?？谇火つormaloralmucosa60.11±0.020.23±0.010.23±0.01上皮單純增生Epithelialhyperplasiaofpure60.16±0.02***0.24±0.01*0.29±0.02***上皮異常增生Epithelialdysplasia60.23±0.02***☆0.29±0.01***☆0.26±0.02*○原位癌及鱗癌Insitucarcinomaandsquamouscellcarcinomas60.28±0.01***☆★0.33±0.02***☆★0.20±0.02**☆★

注：與對照組比較*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001; 與單純增生組比較△P<0.05，○P<0.01，☆P<0.001;與異常增生組比較▲P<0.05，●P<0.01，★P<0.001.

Note.Compared with the control group，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001; Compared with the simple hyperplasia group，△P<0.05，○P<0.01，☆P<0.001; Compared with the epithelial dysplasia group，▲P<0.05，●P<0.01，★P<0.001.

2.2.2 EGFR和PDCD4蛋白在口腔黏膜癌變過程中表達(dá)相關(guān)性分析

為了了解EGFR和PDCD4在口腔黏膜癌變過程中的相關(guān)關(guān)系，進(jìn)一步對EGFR和PDCD4進(jìn)行Pearson積差相關(guān)分析。研究表明，EGFR和PDCD4在口腔異常增生組織(r=-0.72，P< 0.05)、頰囊黏膜鱗癌組織(r=-0.92，P< 0.05)中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，在單純增生組織中無明顯相關(guān)(r=-0.22，P> 0.05)。

2.3 免疫組織化學(xué)檢測腫瘤相關(guān)基因在中國地鼠口腔頰囊黏膜癌變各階段的蛋白表達(dá)

2.3.1 TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表達(dá)

免疫組化結(jié)果顯示，TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白陽性染色表現(xiàn)為不同程度的棕色或棕黃色顆粒狀著色，TGF-β1陽性產(chǎn)物定位于上皮細(xì)胞的細(xì)胞漿中，Smad3、Smad7陽性產(chǎn)物彌漫表達(dá)于細(xì)胞核與細(xì)胞漿中。TGF-β1在中國地鼠正?？谇火つ?、單純增生組織、異常增生組織和鱗癌組織中均可見陽性表達(dá)，呈逐漸上升趨勢，組間比較差異有顯著性(F=135.08，P< 0.001)。在中國地鼠鱗癌組織中，TGF-β1主要定位于上皮基底層、癌巢中央，著色不均勻(如圖2所示)，相對于少量均勻染色于上皮全層的正?？谇火つげ町愑酗@著性(P< 0.001)。Smad7在口腔鱗癌組織中呈強(qiáng)陽性表達(dá)，OD值為0.33±0.02，與Smad3正好相反。Smad3陽性細(xì)胞在正常口腔黏膜中表達(dá)最強(qiáng)，后緩慢下降，鱗癌組織中呈弱陽性表達(dá)，二者相比差異顯著，差異有顯著性(P< 0.01)(如表3，圖3所示)。

2.3.2 三種蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析

實驗結(jié)果顯示口腔黏膜癌變過程中TGF-β1、Smad3、Smad7均存在顯著的變動趨勢，我們猜想基因之間可能存在著一定的關(guān)系，共同參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。進(jìn)一步的相關(guān)性分析揭示在鱗癌組織中，TGF-β1表達(dá)與Smad7呈正相關(guān)(r=0.96，P< 0.05)，與Smad3表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.65，P< 0.05)。三個基因在鱗癌組織中存在相關(guān)關(guān)系(P< 0.05)。

注：Normal：對照組；SH：單純增生組；ED：異常增生組；SCC：鱗癌組。圖2 TGF-β1、Smad3、Smad7的免疫組化結(jié)果(IHC×200)Note. Normal：the control group; SH：the simple hyperplasia group；ED：the epithelial dysplasia group；SCC：the squamous cell carcinoma group.Fig.2 Results of TGF-β1、Smad3、Smad7 in different stages of the carcinogenesis immunohistochemical

注：與對照組比較*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001; 與單純增生組比較△P<0.05，○P<0.01，☆P<0.001;與異常增生組比較▲P<0.05，●P<0.01，★P<0.001。圖3 口腔黏膜癌變各階段TGF-β1、Smad3、Smad7的蛋白表達(dá)Note. Compared with the control group，*P<0.05， **P<0.01， ***P<0.001;Compared with the simple hyperplasia group，△P<0.05， ○P<0.01，☆P<0.001; Compared with the epithelial dysplasia group，▲P<0.05，●P<0.01，★P<0.001.Fig.3 Expression of TGF-β1、Smad3、Smad7 in different stages of the oral mucosa carcinoma

3 討論

口腔癌是頭頸部較常見的腫瘤之一，綜合治療效果和預(yù)后較差，五年生存率低，是目前困擾臨床工作者的難題之一，早期診斷和早期治療是提高患者生存率和生存質(zhì)量的關(guān)鍵[12]。

在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中，癌基因和抑癌基因的變化一直是研究的重點，因為各種腫瘤中都基本上能發(fā)現(xiàn)癌基因和抑癌基因的改變。腫瘤啟動基因EGFR是一種重要的跨膜受體，是細(xì)胞傳遞過程中的重要物質(zhì)，與腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移和預(yù)后等具有相關(guān)性[13]。EGFR表達(dá)激活會導(dǎo)致正常細(xì)胞增殖失控，有研究證實在多種實體腫瘤如肺癌、乳腺癌、前列腺癌、腎癌、腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤等中存在高表達(dá)或異常表達(dá)[14]。Chan KK1等研究發(fā)現(xiàn)在口腔癌中有EGFR過表達(dá)，認(rèn)為其參與了口腔癌的發(fā)生發(fā)展[15]。馮曉宇等通過酶聯(lián)免疫吸附法測定了口腔頜面部惡性腫瘤患者血清中EGFR的含量，與本研究結(jié)果一致，均發(fā)現(xiàn)鱗癌組血清EGFR含量明顯高于正常組，提示EGFR與腫瘤增殖密切相關(guān)，對其有促進(jìn)作用[16]。但研究發(fā)現(xiàn)，EGFR在參與腫瘤的形成過程中并不是獨立完成的，是與多種細(xì)胞因子共同作用導(dǎo)致的。本研究聯(lián)合檢測了血清EGFR和PDCD4的表達(dá)水平，結(jié)果表明，二者呈負(fù)相關(guān)(r=-0.92，P<0.05)。PDCD4基因是近年發(fā)現(xiàn)的一種新的與細(xì)胞凋亡相關(guān)的抑癌基因，不僅調(diào)節(jié)細(xì)胞的程序性死亡，而且通過抑制蛋白轉(zhuǎn)錄和翻譯過程抑制腫瘤細(xì)胞的生長，目前研究表明，多種腫瘤中均存在 PDCD4 表達(dá)的缺失或低表達(dá)[17]。我們猜想EGFR一方面促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，另一方面通過抑制PDCD4的表達(dá)來抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)了腫瘤的形成。聯(lián)合檢測EGFR與PDCD4可提高對口腔癌早期診斷的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性，具有一定輔助診斷價值。

維持口腔黏膜上皮的正常結(jié)構(gòu)依賴于口腔黏膜細(xì)胞的喪失與更新的動態(tài)平衡，口腔癌產(chǎn)生過程中，癌細(xì)胞過度增殖或細(xì)胞凋亡受阻，癌細(xì)胞不斷積累而產(chǎn)生癌癥。轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1是一種多功能細(xì)胞因子，參與細(xì)胞分化增殖、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)效應(yīng)[18]。許多研究表明:癌細(xì)胞可抵抗TGF -β1的生長抑制，同時出現(xiàn)TGF-β1表達(dá)水平的增高，并與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)[19]。Smads 蛋白作為 TGF-β 超家族信號從膜受體到胞核的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，一旦發(fā)生異常時，阻止信號傳導(dǎo)，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[20]。正常生理情況下，TGF -β1信號傳導(dǎo)中，TGF -β1與受體結(jié)合，形成二聚體，激活TGF -β1，激活的TGF -β1磷酸化Smad2和Smad3,與Smad4結(jié)合轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi)，Smad3基因?qū)υ┗?c-myc 的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)進(jìn)行抑制，上調(diào) P15 和 P21 的表達(dá)，通過P15阻止 CDK4 和 CDK6 與 cyclin D 的結(jié)合，抑制周期素 E2 以及周期素依賴激酶 2 復(fù)合物的活性，從而抑制細(xì)胞周期[21,22]。而Smad7以負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子形式競爭性的與TGF -β1結(jié)合，阻斷Smad2和Smad3磷酸化，未磷酸化的Smad2、Smad3不能與Smad4結(jié)合形成異源復(fù)合物，不能轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄， TGF-β 超家族信號通路被阻斷，失去生長抑制的作用，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，可見Smad7表達(dá)的紊亂，影響細(xì)胞對TGF-β1的應(yīng)答，促進(jìn)細(xì)胞的惡性化進(jìn)展[23]。所以Smad7具有維護(hù)TGF -β1信號通路平衡的作用。本實驗顯示，口腔鱗癌組織中TGF -β1表達(dá)明顯高于口腔正常黏膜、單純增生組織、異常增生組織，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異，提示TGF -β1的表達(dá)與口腔癌進(jìn)展密切相關(guān)；在鱗癌組織中Smad3蛋白的表達(dá)水平低于口腔黏膜、單純增生組織、異常增生組織，而Smad7在鱗癌組織中表達(dá)升高，二者呈負(fù)相關(guān)。Huang GW及其他學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)Smad7在皮膚癌、子宮內(nèi)膜癌及甲狀腺癌、胃癌中呈現(xiàn)出高表達(dá)，Smad3表達(dá)下調(diào)[24-26]。以上結(jié)論與本研究結(jié)果相似。Smad3基因、Smad7基因作為Smad 家族的重要成員，在口腔癌組織中的異常表達(dá)都能促使TGF-β1失去抑制腫瘤細(xì)胞增殖的生物學(xué)效應(yīng)，促進(jìn)了腫瘤的進(jìn)程。

腫瘤分子遺傳學(xué)研究表明，腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多種基因同時或先后協(xié)同作用的結(jié)果。我們進(jìn)一步的分析顯示，鱗癌組織中TGF-β1、Smad3、Smad7基因之間均具有一定的相關(guān)性，提示共同參與了OSCC的發(fā)生發(fā)展，為口腔癌的發(fā)病機(jī)制研究提供科學(xué)依據(jù)。

[1] Kim, E.S, W.K,etal. Chemopreben of aero digestive tract cancers [J]. Annu Rev Med, 2002, 53(9):223-243.

[2] 邱蔚六.口腔頜面外科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社. 2010: 274.

[3] 廖汶曉, 閆怡軒, 黃艷青，等.塞來昔布增強(qiáng)口腔癌化療敏感性與阻滯周期進(jìn)程的相關(guān)性[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2013, 33(6): 885-888.

[4] Siegel R, Naishadham D, Jemal A. Cancer statistics, 2013 [J]. CA Cancer J Clin, 2013, 63(1):11-30.

[5] Nayyar AS. Novel biochemical markers: early detection and prevention of malignant transformation a pilot study [J]. Acta Med Iran, 2012, 50(9): 597-602.

[6] 姚華，吳葆萱，吳求亮. EGFR在口腔粘膜鱗癌和癌前病變中的表達(dá)及意義[J]. 口腔醫(yī)學(xué), 1999, 19(1): 1-3.

[7] Katz LH, Likhter M, Jogunoori W,etal. TGF-β signaling in liver and gastrointestinal cancers[J]. Cancer Lett, 2016, 379(2):166-172.

[8] Yokokura S,Kanaji N,Tadokoro A,etal. Confluence-dependent resistance to cisplatin in lung cancer cells is regulated by transforming growth factor-beta[J]. Exp Lung Res, 2016, 26(4): 175-181.

[9] Zhu H, Luo H, Shen Z,etal. Transforming growth factor-β1 in carcinogenesis, progression, and therapy in cervical cancer[J]. Tumour Biol, 2016, 37(6): 7075-7083.

[10] 王海霞, 朱大海. Smad及其結(jié)合蛋白在TGFβ信號傳導(dǎo)中的功能[J]. 遺傳, 2003, 25(4): 479-483.

[11] WHO Collaborating Centre for Oral Precancerous Lesions. Definition of leukoplakia and related lesions; an aid to studies on oral precancer[J]. Oral Surg, 1978， 46(4): 518-539.

[12] 鐘來平, 鄭家偉, 張陳平，等. 口腔癌早期診斷的研究現(xiàn)狀[J]. 中國口腔頜面外科雜志, 2007, 5 (4): 243-247.

[13] 劉士霞. p53、RAR-β2、Ki-67和EGFR在口腔鱗癌化療前后的變化及臨床意義[J]. 中國臨床研究, 2015, 28 (7): 929-931.

[14] 劉祥偉,陳德滇, 周紹強(qiáng). IGF-1、EGFR、Caspase-3在青年女性乳腺癌患者的表達(dá)及相關(guān)性研究[D]. 昆明醫(yī)科大學(xué), 2012.

[15] Chan KK, Glenny AM, Weldon JC,etal. Interventions for the treatment of oral and oropharyngeal cancers: targeted therapy and immunotherapy[J]. Cochrane Database Syst Rev, 2015, (12):CD010341.

[16] 馮曉宇, 邢汝東,魯大鵬，等. 口腔頜面部惡性腫瘤患者血清中SCCA、Cyfra21-1、EGFR、CyclinD1含量的檢測[J]. 北京口腔醫(yī)學(xué), 2009, 17 (6): 309-313.

[17] 孔海麗, 劉傳芳. PDCD4、TGF-β1在急性髓系白血病患者骨髓中的表達(dá)及意義[D]. 山東大學(xué), 2011.

[18] 孫維克, 戚向敏. TGF-β1在口腔扁平苔蘚及鱗癌中的表達(dá)[J]. 濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，34(6):410-413.

[19] 蔡傳寶, 陶學(xué)金, 朱聲榮，等. TGF-β1、Smad4和CyclinD1在口腔鱗癌中的表達(dá)和意義[J]. 口腔醫(yī)學(xué)研究, 2007, 23(1): 14-16.

[20] 王秀梅, 劉成敏, 張成仁，等. 信號傳導(dǎo)通路與腫瘤關(guān)系的研究[J]. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2009, 17(8): 1568-1570.

[21] Derynck R, Zhang YE. Smad-dependent and Smad-independent pathways in TGF-beta family signalling[J]. Nature, 2003, 425(6958): 577-584.

[22] Baughn LB,Di Liberto M,Niesvizky R,etal. CDK2 phosphorylation of Smad2 disrupts TGF-beta transcriptional regulation in resistant pri-mary bone marrow myeloma cells [J]. J Immunol, 2009, 182(4): 1810-1817.

[23] Kleeff J, Ishiwata T, Maruyama H,etal. The TGF-β signaling inhibitor Smad7 enhances tumorigencity in pancreatic cancer[J]. Oncogene, 1999, 18(39): 5363-5372.

[24] Huang GW, Mo WN, Kuang GQ,etal. Expression of p16, nm23-HI, E-cadherin and CD44 gene products and their significance in nasopharyngeal carcinoma[J]. Laryngoscope, 2001, 111(8): 1465-1471.

[25] 范曉軍, 趙瑞力, 胡俊蘭. 喉鱗癌組織中TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ和Smad7表達(dá)及相關(guān)研究[D]. 河北醫(yī)科大學(xué), 2010.

[26] 馬速佳, 周志強(qiáng), 吳成穩(wěn)等. 人體胃癌組織中Smad3基因與Smad7基因的相關(guān)性表達(dá)及其臨床意義[J]. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2014, 39 (3): 378-382.

The expression of EGFR，PDCD4，TGF-β1，Smad3 and Smad7 during oral buccal mucosa carcinogenesis in chinese hamster

LI Li-hong, HUANG Fu-bing, Gao Ji-ping, CHANG-kai, CHEN Zhao-yang, PANG Wen-biao, SONG Guo-hua*

(Shanxi Medical University, Laboratory Animal Center, Shanxi Key Laboratory of Experimental Animal Science and Human Disease Animal Model, Taiyuan 030001,China)

Objective To study the expression and significance of EGFR, PDCD4, TGF-β1, Smad3, Smad7 in oral normal mucosa, oral simple hyperplasia, oral epithelial dysplasia and oral squamous cell carcinomas(OSCC). Methods Serum levels of EGFR, PDCD4 were measeured with ELISA in Chinese hamster during the oral mucosa carcinogenesis; The expressions of TGF-β1, Smad3, Smad7 in oral normal mucosa, oral simple hyperplasia, oral epithelial dysplasia and OSCC tissues were examined by immunohistochemistry. Results In the process of oral carcinogenesis，the expression level of EGFR increased significantly，while the expression of PDCD4 was decreased, the negatively correlation was evident between expression of these two proteins in ED and SCC. The expression of TGF-β1, Smad7 was higher in OSCC than in oral normal mucosa, oral simple hyperplasia, oral epithelial dysplasia(P< 0.05), while the expression of Smad3 was decreased. Further analysis showed the expression of TGF-β1 was correlated with the expression of Smad7. Conclusions The expressions of EGFR, PDCD4, TGF-β1, Smad3, Smad7 are closely related with the biological behaviors of oral squamous cell cancinoma.This experiment provides a theoretical basis for the study of oral squamous cell carcinomas mechanism research. So it has important significance for the development and prognosis of oral squamous carcinomaare.

Oral squamous cell carcinomas(OSCC); Immunohistochemistry; Drecancerous lesion

山西省實驗動物專項(2014k08、2015k03)。

李莉紅(1988-)，女，碩士研究生，研究方向:人類疾病動物模型。E-mail: 1179407927@qq.com； 皇甫冰(1990-)，女，碩士研究生，研究方向:人類疾病動物模型。E-mail: bhuangfu@hotmail.com

宋國華(1973-)，女，博士，研究方向：人類疾病動物模型。E-mail: ghsongg@hotmail.com

R-33

A

1671-7856(2017) 05-0064-07

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.05.015

2016-09-27