劉立英

（遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧營(yíng)口 115009）

遼南地區(qū)雞源性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

劉立英

（遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧營(yíng)口 115009）

為了解遼南地區(qū)雞源大腸桿菌的耐藥情況，對(duì)遼南地區(qū)5個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）送檢的40例疑似大腸桿菌病、死雞中分離出36株細(xì)菌，經(jīng)生化試驗(yàn)鑒定出32株屬于大腸桿菌。對(duì)已鑒定32株大腸桿菌對(duì)19種藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示除頭孢他啶、硫酸粘菌素外，大腸桿菌對(duì)其他17種藥物均產(chǎn)生不同程度耐藥。對(duì)阿莫西林的耐藥率最高，達(dá)68.75%；其次是紅霉素，達(dá)62.50%；再次是慶大霉素、恩諾沙星、諾氟沙星、鹽酸環(huán)丙沙星、鹽酸林可霉素，分別是53.13%、40.63%、40.63%、37.50%、31.25%。對(duì)頭孢噻呋、硫酸阿米卡星、替米考星、左氧氟沙星、多西環(huán)素、硫酸新霉素相對(duì)較為敏感。

遼南地區(qū)；雞大腸桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

雞大腸桿菌病是由大腸埃希氏桿菌（Escherichiacoli，E.coli）引起的，一年四季均可發(fā)病，發(fā)病率約為10%～69%，死亡率約為31.8%～72%。臨床主要表現(xiàn)為敗血癥、氣囊炎、腹膜炎、輸卵管炎、滑膜炎和眼炎等。隨著養(yǎng)禽業(yè)集約化，飼養(yǎng)規(guī)模不斷擴(kuò)大以及臨床有些從業(yè)人員對(duì)抗菌藥物的濫用，導(dǎo)致大腸桿菌病成為養(yǎng)雞業(yè)比較難控制的細(xì)菌性疾病之一，大量耐藥菌株的出現(xiàn)，不僅對(duì)養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)也危及人類健康[1]。

本試驗(yàn)對(duì)遼南地區(qū)5個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）送檢的40例疑似病、死雞中分離出36株細(xì)菌，經(jīng)過(guò)生化試驗(yàn)鑒定出32株屬于大腸桿菌，通過(guò)藥敏試驗(yàn)，以期了解遼南地區(qū)雞源大腸桿菌耐藥情況，從而為該地區(qū)大腸桿菌病的防治提供科學(xué)依據(jù)，并且為今后研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料2016年大連瓦房店地區(qū)、普蘭店地區(qū)及營(yíng)口地區(qū)5個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）送檢到遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物健康養(yǎng)殖與評(píng)價(jià)中心的病、死雞。

1.1.2 主要試劑及培養(yǎng)基牛肉膏、蛋白胨、麥康凱瓊脂購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；糖發(fā)酵管等均購(gòu)于廣東省環(huán)凱微生物科技公司；革蘭氏染色液按有關(guān)資料自行配制。阿莫西林、慶大霉素、硫酸阿米卡星、多西環(huán)素、鹽酸環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、諾氟沙星、頭孢曲松鈉、頭孢他啶、頭孢噻呋、替米考星、硫酸新霉素、鹽酸林可霉素、氟苯尼考、恩諾沙星、硫酸粘菌素、克林霉素、紅霉素、克拉霉素等原粉均有沈陽(yáng)華飛藥業(yè)有限公司提供。

1.1.3 藥敏紙片試驗(yàn)所用的19種藥物藥敏紙片為自制，參照陳玉萍的方法[3]。

1.2 方法

1.2.1 大腸桿菌的分離培養(yǎng)無(wú)菌采取典型病、死雞的心血、肝臟、氣囊、關(guān)節(jié)的滲出物、臍炎的卵黃物質(zhì)、輸卵管炎和腹膜炎的干酪樣物等作為病料，劃線接種于麥康凱培養(yǎng)基平板上，37℃培養(yǎng)24 h。然后挑取平板上粉紅色單個(gè)典型菌落，經(jīng)革蘭氏染色、鏡檢，觀察到革蘭氏陰性短桿菌后，在麥康凱平板上再次劃線分離培養(yǎng)，以獲得大腸桿菌典型菌落，2～8℃保存?zhèn)溆?，如長(zhǎng)期保存時(shí)，可純培養(yǎng)后，貯存于-60℃[3]。

1.2.2 生化試驗(yàn)取上述大腸桿菌典型菌落接種于普通肉湯中，于37℃培養(yǎng)24 h，對(duì)所分離株進(jìn)行糖發(fā)酵、VP、MR、硫化氫、吲哚等試驗(yàn)，并觀察結(jié)果[3]。

1.2.3 藥敏試驗(yàn)（紙片法）參照K-B法，無(wú)菌操作將已經(jīng)鑒定為雞大腸桿菌的培養(yǎng)物，均勻涂布在普通瓊脂培養(yǎng)基表面，將阿莫西林、慶大霉素、硫酸阿米卡星、多西環(huán)素、鹽酸環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、諾氟沙星、頭孢曲松鈉、頭孢他啶、頭孢噻呋、替米考星、硫酸新霉素、鹽酸林可霉素、氟苯尼考、恩諾沙星、硫酸粘菌素、克林霉素、紅霉素、克拉霉素藥敏紙片貼到瓊脂培養(yǎng)基表面，37℃培養(yǎng)24 h后，測(cè)量抑菌圈直徑[4]。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌分離鑒定

此次對(duì)遼南地區(qū)5個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）送檢的40例疑似病、死雞中分離出36株細(xì)菌，經(jīng)過(guò)生化試驗(yàn)鑒定出32株屬于大腸桿菌。在麥康凱培養(yǎng)基上長(zhǎng)出邊緣整齊隆起、表面光滑濕潤(rùn)的紅色圓形菌落，革蘭氏染色為陰性，鏡檢為紅色、兩端鈍圓的短桿菌，多單個(gè)散在，無(wú)芽孢，符合大腸桿菌的形態(tài)特征。

2.2 生化試驗(yàn)結(jié)果

將分離的32株大腸桿菌進(jìn)行生化試驗(yàn)鑒定，分解葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、產(chǎn)酸產(chǎn)氣，部分菌株分解蔗糖。VP試驗(yàn)為陰性、MR試驗(yàn)為陽(yáng)性、硫化氫試驗(yàn)陰性、吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 32株分離大腸桿菌生化試驗(yàn)結(jié)果

表1 32株分離大腸桿菌生化試驗(yàn)結(jié)果（續(xù)表）

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

參照NCCLS標(biāo)準(zhǔn)判定，抑菌圈直徑15.1～20mm者為高度敏感，直徑10.1～15 mm者為中度敏感，直徑在10 mm以下者為低度敏感，直徑為0者判定為耐藥[6]。32株已鑒定大腸桿菌對(duì)19種抗菌藥物進(jìn)行敏感性檢測(cè)，結(jié)果顯示除頭孢他啶、硫酸粘菌素所分離大腸桿菌對(duì)所檢測(cè)的抗菌藥均產(chǎn)生不同程度耐藥性。對(duì)阿莫西林、慶大霉素、恩諾沙星、諾氟沙星、紅霉素的耐藥率較高，對(duì)硫酸阿米卡星、頭孢噻呋、替米考星、多西環(huán)素的耐藥率較低（見(jiàn)表2、表3）。

3 討論

本試驗(yàn)共計(jì)分離出36株細(xì)菌，經(jīng)過(guò)生化試驗(yàn)鑒定出32株屬于大腸桿菌，32株已鑒定大腸桿菌對(duì)19種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示除頭孢他啶、硫酸粘菌素外，大腸桿菌對(duì)其他17種藥物均產(chǎn)生不同程度耐藥。本地區(qū)大腸腸菌對(duì)阿莫西林的耐藥率最高，達(dá)68.75%；其次是紅霉素，達(dá)62.50%；再次是慶大霉素、恩諾沙星、諾氟沙星、鹽酸環(huán)丙沙星、鹽酸林可霉素，分別是53.13%、40.63%、40.63%、37.50%、31.25%。該地區(qū)大腸桿菌對(duì)頭孢他啶、硫酸粘菌素尚無(wú)耐藥性產(chǎn)生，對(duì)頭孢噻呋、硫酸阿米卡星、替米考星、左氧氟沙星、多西環(huán)素、硫酸新霉素相對(duì)較為敏感，在治療禽大腸桿菌病時(shí)可以選擇上述敏感藥物。

本試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)有部分菌株對(duì)多種藥物均具有耐藥性，與前幾年相比較，耐藥譜不斷擴(kuò)大，呈多重耐藥趨勢(shì)。根據(jù)筆者調(diào)查了解分析，導(dǎo)致耐藥現(xiàn)象日趨嚴(yán)重及多重耐藥趨勢(shì)加重主要原因如下：臨床不合理用藥，用藥種類繁多，用藥情況復(fù)雜，從業(yè)人員專業(yè)素質(zhì)參差不齊等[5-6]。控制大腸桿菌耐藥性的產(chǎn)生首先要注重改善飼養(yǎng)管理環(huán)境，減少大腸桿菌發(fā)病率。養(yǎng)殖過(guò)程中一旦發(fā)病，正確診斷，合理選擇抗菌藥物，制定科學(xué)合理的給藥方案，有針對(duì)性的選擇高度敏感藥物，明確給藥劑量、給藥途徑及合理的給藥療程，才能達(dá)到理想治療效果，從而減少抗藥性的產(chǎn)生。此外，加強(qiáng)獸用抗菌藥物監(jiān)督管理、加強(qiáng)完善抗菌藥物應(yīng)用和細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)體系、加強(qiáng)養(yǎng)殖業(yè)與獸醫(yī)從業(yè)人員教育也是控制細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生的主要措施，同時(shí)也是2016年中央14部門聯(lián)合發(fā)布《遏制細(xì)菌耐藥國(guó)家行動(dòng)計(jì)劃》的主要舉措。

表2 32株分離大腸桿菌對(duì)19種藥物藥敏試驗(yàn)

表2 32株分離大腸桿菌對(duì)19種藥物藥敏試驗(yàn)（續(xù)表）

表3 分離雞源大腸桿菌的藥敏試驗(yàn)分析

[1]王海濤，李全宏.雞大腸桿菌病的防治[J].山東畜牧獸醫(yī)，2013，195（4）:35-36.

[2]陳玉萍.抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)方法[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2007（4）:88-89.

[3]陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)[M].北京中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2006：111-113.

[4]徐叔云等.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.

[5]劉玉濤.福建省雞源大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2014，30（2）:65-68.

[6]王影，李欣南.大腸桿菌耐藥性產(chǎn)生與傳播機(jī)制研究現(xiàn)狀[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2016，（1）:32-36.

Isolation,Identification and Antimicrobial Susceptibility Test of Chicken Colibacillosis in Southern Liaoning Province

LIU LiYing
（LiaoningAgricultural Technical College,Yingkou 115009,China）

In order to understand the resistance of Escherichia coli isolated from Laying hens in southern Liaoning,40 cases of suspected E.coli disease were collected from five farms in southern Liaoning,and 36 strains of bacteria were isolated from dead Laying hens.32 Escherichia coli were isolated and identified by biochemical test.By the means of antimicrobial susceptibility test on 32 Escherichia coli those were identified,the results showed that Escherichia coli produced resistance to 17 drugs in varying degrees apart from Ceftazidime and Colistin sulfate.Resistance to amoxicillin was the highest,reaching to 68.75%;followed by erythromycin,up to 62.50%;resistance to Again Gentam icin,Enrofloxacin,Norfloxacin,Ciprofloxacin Hy drochloride,lincomycin hydrochloride,were respectively 53.13%,40.63%,40.63%,37.50%and31.25%.Escherichia coli was relatively sensitive to Cefotaxime,Amikacin sulfate, Tilmicosin,Levofloxacin,Doxycycline and Neomycin sulfate.

Escherichia coli;separation and identification;antimicrobial susceptibilitytest

S855.3

A

1671－0517（2017）02－0001－04

2017－01－10

劉立英（1982-），女，講師，碩士。吉林省九臺(tái)人，從事動(dòng)物藥理與毒理學(xué)教學(xué)與研究。