陳燕，劉靜，李滔，潘琴，王玲

(荊州市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北荊州434020)

卵巢癌組織中Yes-相關(guān)蛋白和p73的表達(dá)及其臨床意義

陳燕，劉靜，李滔，潘琴，王玲

(荊州市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北荊州434020)

目的探討卵巢癌組織中Yes-相關(guān)蛋白(YAP)和p73的表達(dá)及其意義。方法選取2013年1月至2016年6月在我院治療的卵巢癌患者81例(病例組)，同時選取卵巢良性腫瘤患者70例作為對照組，檢測兩組患者的YAP和p73蛋白表達(dá)。結(jié)果病例組患者的YAP和p73蛋白陽性表達(dá)率分別為60.49%和67.90%，明顯高于對照組的11.43%和30.00%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；病例組Ⅲ～Ⅳ期患者的YAP蛋白和p73蛋白陽性率為79.49%和82.05%，明顯高于Ⅰ～Ⅱ期的42.86%和54.76%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；病例組病理分級G3患者YAP蛋白和p73蛋白陽性率為71.67%和80.00%，明顯高于G1和G2級的28.57%和33.33%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的p73蛋白陽性率為86.96%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的60.34%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論卵巢癌組織YAP和p73蛋白表達(dá)增強(qiáng)，可能參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，其中p73與卵巢癌淋巴轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系。

卵巢癌；Yes-相關(guān)蛋白；p73蛋白；病理特征

卵巢癌是臨床上較為常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，相關(guān)研究顯示卵巢癌的發(fā)病率可達(dá)134/10萬人以上，且近年來呈現(xiàn)出了明顯的上升趨勢[1]。臨床上卵巢癌的長期發(fā)生發(fā)展可以導(dǎo)致不良臨床結(jié)局的發(fā)生，增加患者的病死率。對于卵巢癌發(fā)病過程中相關(guān)生物學(xué)信號機(jī)制的研究，可以為揭示卵巢的發(fā)病過程或者為后續(xù)的臨床上卵巢癌的生物學(xué)靶向治療提供理論依據(jù)。Yes相關(guān)蛋白(Yes-associatedprotein，YAP)是HIPPO信號通路的重要效應(yīng)蛋白，可以通過影響到卵巢腫瘤的細(xì)胞周期及凋亡等病理過程，進(jìn)而參與到卵巢癌的發(fā)病過程中[2-3]；p73作為p53家族成員，可以在影響到細(xì)胞內(nèi)第二信使等物質(zhì)合成的基礎(chǔ)上，參與到卵巢惡性腫瘤的發(fā)生過程中[4]。本研究旨在探討YAP及p73等相關(guān)蛋白在卵巢癌中的異常表達(dá)，并分析其與卵巢癌臨床病理特征間的關(guān)系，報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2013年1月至2016年6月在我院治療的卵巢癌患者81例(病例組)，年齡23～67歲，平均(51.21±10.82)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均經(jīng)病理學(xué)確診；(2)均為初次治療；(3)患者及家屬知情同意并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前經(jīng)放、化療及免疫治療。同時選取卵巢良性腫瘤患者70例作為對照組，年齡20～69歲，平均(50.81±9.10)歲。兩組患者的年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 檢測方法冰上分離出組織，置于預(yù)冷的研缽中液氮研磨至粉末狀。冰上靜置60 min，室溫下20 000 r/min離心60 min，取出下層沉淀。按總蛋白80 g計(jì)算上樣容積，按照比例為3:1或者4:1上TBS緩沖液，加入20μL緩沖液后于45 V電壓下進(jìn)行電泳操作，脫脂蛋白封閉2 h，加入YAP和p73抗體(鼠來源抗體，購自南京碧云天生物科技有限公司)各10μL后室溫下孵育2 h，2 h后加入二抗(兔來源抗體，購自南京凱基生物科技有限公司)。采用日本Panasoic公司生存的HSO-900系統(tǒng)影像分析儀器進(jìn)行圖像分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的YAP和p73蛋白表達(dá)比較YAP和p73蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞胞質(zhì)和/或胞核，呈棕黃色。病例組YAP和p73蛋白陽性表達(dá)率分別為60.49%(49/81)和67.90%(55/81)，明顯高于對照組的11.43%(8/70)和30.00%(21/70)，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=38.469、21.572，P<0.05)，見圖1。

圖1 卵巢癌組織YAP和p73蛋白表達(dá)(×400)

2.2 YAP蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Ⅲ～Ⅳ期患者YAP蛋白陽性率為79.49%，明顯高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)；病理分級G3患者YAP蛋白陽性率為71.67%，明顯高于G1和G2級(P<0.05)；不同年齡、腫瘤直徑、病理類型及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者YAP蛋白表達(dá)差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.3 p73蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Ⅲ～Ⅳ期患者p73蛋白陽性率為82.05%，明顯高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)；病理分級G3患者p73蛋白陽性率為80.00%，明顯高于G1和G2級(P<0.05)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者者p73蛋白陽性率為86.96%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)；不同年齡、腫瘤直徑及病理類型患者p73蛋白表達(dá)差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表1 YAP蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

表2 p73蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

3 討論

遺傳易感基因、射線及化學(xué)毒物等均可以促進(jìn)卵巢上皮來源惡性腫瘤的異常增殖和病變，促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生。近年來相關(guān)流行病學(xué)研究表明，卵巢癌在年齡介于35～50歲的人群中發(fā)病率可達(dá)0.09%以上[5]。有效的靜脈化療方案可以提高5%左右的五年生存率，并延長3～4個月的術(shù)后生存時間[3]。但一項(xiàng)匯集118例卵巢癌患者的術(shù)后化療的隨訪研究表明，35%的卵巢癌患者對于靜脈化療不敏感，同時化療的總體治療有效率不足55%，停藥后6個月內(nèi)的復(fù)發(fā)率可接近25%，臨床預(yù)后較差[6]。而對于卵巢癌發(fā)病過程中相關(guān)生物學(xué)機(jī)制的研究，可以為卵巢癌的綜合性放化療提供新的作用靶點(diǎn)，并為卵巢癌的治療預(yù)后評估提供參考。

p73是構(gòu)成卵巢癌細(xì)胞骨架成分的重要分子結(jié)構(gòu)，廣泛分布于惡性腫瘤的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，在卵巢癌細(xì)胞的異常擴(kuò)增及增殖的過程中，通過外分泌的方式釋放入血，同時p73作為p53超家族成員，分子結(jié)構(gòu)中含有的磷酸化的氨基酸序列，在腫瘤細(xì)胞的異常分化等病理過程中，p73的合成增多，并隨著卵巢癌細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞膜的破碎而釋放入血[7]；YAP廣泛存在于內(nèi)胚葉起源的消化系統(tǒng)癌，正常人血清中也可有微量存在，YAP是一個廣譜性腫瘤標(biāo)志物，可以通過激活下游HIPPO信號通路，進(jìn)而促進(jìn)大腸癌、肺癌和卵巢癌等惡性腫瘤的病情發(fā)展[8-10]，雖然有研究探討了YAP蛋白等在卵巢癌中的異常表達(dá)，但相關(guān)研究的樣本量較少，臨床資料的收集偏倚較為嚴(yán)重，可信性不高。

本研究發(fā)現(xiàn)，YAP和p73蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞胞質(zhì)和/或胞核，呈棕黃色，提示兩者可能主要通過影響細(xì)胞內(nèi)相關(guān)生物學(xué)因子的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控卵巢癌細(xì)胞的生物學(xué)特性的改變，同時YAP和p73蛋白兩者在細(xì)胞間質(zhì)成分中同樣存在一定程度的異常表達(dá)，但數(shù)量較少。而陽性率的對比分析可見，卵巢癌組患者病灶組織中的YAP和p73蛋白陽性表達(dá)率均明顯高于正常對照人群，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示YAP和p73蛋白可能參與到了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中。YAP和p73蛋白可以通過誘導(dǎo)下游信號通路的激活，促進(jìn)癌基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白的翻譯，進(jìn)而加劇卵巢癌病情的進(jìn)展。馮君桃等[11]和周青峰等[12]研究者通過回顧性收集分析了92例樣本量的臨床資料，發(fā)現(xiàn)在卵巢漿液腺細(xì)胞癌患者病灶組織中的YAP和p73蛋白陽性率均明顯高于對照組，且患者的臨床分期越晚，YAP和p73蛋白陽性率越高，這與本研究的結(jié)論較為一致。對于不同臨床病理特征的研究發(fā)現(xiàn)，在臨床分期較晚的卵巢癌患者中，YAP和p73蛋白陽性表達(dá)率均高于早期患者，表明YAP和p73蛋白陽性表達(dá)可以顯著促進(jìn)卵巢癌臨床分期的進(jìn)展，其機(jī)制考慮可能與YAP和p73蛋白提供卵巢上皮惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲或者轉(zhuǎn)移能力有關(guān)；病理分級較差的卵巢癌組織中，YAP和p73蛋白陽性表達(dá)率均較高，提示YAP和p73蛋白在影響卵巢癌細(xì)胞異常分化的過程中同樣可能發(fā)揮了重要的調(diào)控作用，YAP和p73蛋白在影響癌細(xì)胞的分化抗原簇的表達(dá)或者分化調(diào)控因子-9的過程中具有重要的意義，可以顯著影響到癌細(xì)胞的異常分化調(diào)節(jié)。但需要注意的是，本研究中并未發(fā)現(xiàn)YAP蛋白的表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的異常表達(dá)，這與Kawamura等[13]和Zhang等[14]的結(jié)論并不完全一致，考慮到檢測方法的不統(tǒng)一、臨床資料的納入排除標(biāo)準(zhǔn)的不統(tǒng)一等，均可能導(dǎo)致了最終結(jié)論的差別。

綜上所述，在卵巢癌組織中，YAP和p73蛋白陽性表達(dá)率異常上升，且上升的YAP或者p73蛋白在影響卵巢癌臨床分期、病理分級等過程中可能發(fā)揮了重要的調(diào)控作用。但本研究對于YAP和p73蛋白的表達(dá)與卵巢癌遠(yuǎn)期生存指標(biāo)如病死率或者中位生存時間的分析不足，存在一定的局限性。

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Expression and clinical significance of Yes-related protein and p73 in ovarian cancer tissue.

CHEN Yan,LIU Jing,LI Tao,PAN Qin,WANG Ling.Department of Obstetrics and Gynecology,Jingzhou Central Hospital,Jingzhou 434020, Hubei,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and significance of Yes-associated protein(YAP)and p73 in ovarian cancer tissue.MethodsFrom January 2013 to June 2016,a total of 81 patients with ovarian cancer(case group)in our hospital from January 2013 to June 2016 were selected.At the same time,70 cases of ovarian benign tumor patients were enrolled as the control group.The expression of YAP and p73 protein were detected between the two groups.ResultsThe positive expression rates of YAP and p73 protein in case group were respectively 60.49%and 67.90%,which were significantly higher than 11.43%and 30.00%in the control group(P<0.05).The positive rates of YAP protein and p73 protein in stageⅢandⅣwere 79.49%and 82.05%,which were significantly higher than 42.86% and 54.76%in the stageⅠ～Ⅱ,with statistically significant difference(P<0.05).The positive rates of YAP protein and p73 protein were 71.67%and 80.00%in pathological grading G3patients,which were significantly higher than 28.57% and 33.33%in pathological grading G1and G2pateints(P<0.05).The positive rate of p73 protein in patients with lymph node metastasis was 86.96%,which was significantly higher than 60.34%in patients without lymph node metastasis, with statistically significant difference(P<0.05).ConclusionYAP and p73 protein expression in ovarian cancer tissue are enhanced,which may be involved in the occurrence and development of ovarian cancer.p73 is related to lymph node metastasis of ovarian cancer.

Ovarian cancer;Yes-associated protein(YAP);p73 protein;Pathological characteristics

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.10.004

R737.31

A

1003—6350（2017）10—1560—03

2016-11-26)

湖北省自然科學(xué)基金(編號：2014FFB04510)

陳燕。E-mail：psmei66@126.com