駱澤禮，王敬銘，李 威，蔣尚蓉，彭思毅，李明朔，趙光偉，楊曉偉

（西南大學榮昌校區(qū)動物醫(yī)學系，重慶 402460）

川渝地區(qū)部分豬場豬瘟、豬偽狂犬病和口蹄疫的抗體監(jiān)測

駱澤禮，王敬銘，李 威，蔣尚蓉，彭思毅，李明朔，趙光偉，楊曉偉

（西南大學榮昌校區(qū)動物醫(yī)學系，重慶 402460）

為評價豬場的疫苗免疫效果，制定合理的免疫程序。利用酶聯免疫吸附（ELISA）的方法，對四川省、重慶市6個規(guī)?；B(yǎng)豬場的409份血清，分別進行豬瘟、豬偽狂犬病和口蹄疫的抗體檢測。結果顯示，A、B、C、D、E和F等6個豬場的豬瘟抗體陽性率分別為91%、85.71%、92.5%、79.8%、75%和97.33%，豬偽狂犬病gB抗體陽性率分別為100%、80.2%、100%、93%、75%和96%，豬口蹄疫抗體陽性率分別為72%、76.7%、79.59%、80.8%、0和82.67%，場間差異顯著。統(tǒng)計學分析顯示，母豬中的這3種疫病抗體陽性率均顯著高于仔豬。其中，母豬、仔豬的豬瘟抗體陽性率分別為98.21%、27.27%，豬偽狂犬病gB抗體陽性率分別為98.21%、42.5%，豬口蹄疫抗體陽性率分別為83.41%、42.5%。本研究結果可為川渝地區(qū)規(guī)模化豬場疫苗免疫程序的制定提供參考。

豬瘟；偽狂犬?。豢谔阋?；抗體檢測

豬瘟（Classical swine fever，CSF）、偽狂犬?。≒seudorabies，PR）和口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）均是豬場的常見傳染病，會給豬場造成重大經濟損失[1]。近年來，隨著我國養(yǎng)豬業(yè)的集約化、規(guī)模化發(fā)展，豬飼養(yǎng)密度越來越大，種豬交流越來越頻繁，這為豬病的發(fā)生、傳播創(chuàng)造了條件。目前，這幾種豬病在全國各地不斷暴發(fā)和流行，并呈現持續(xù)蔓延趨勢，對集約化養(yǎng)豬業(yè)危害更為嚴重，極大影響和制約了我國畜牧業(yè)的健康發(fā)展[2]。到目前為止，對這些疫病還沒有特效的治療手段，只能以預防為主[3]。

隨著越來越多豬病疫苗的陸續(xù)上市，準確評價疫苗的免疫效果極為重要，而檢測免疫后的抗體水平是評價疫苗的有效方法。疫苗的免疫效果受很多因素影響，諸如疫苗的質量、疫苗的儲存和運輸條件、免疫程序、接種途徑、接種對象的個體差異等[4]。了解豬場的免疫水平，實時監(jiān)測豬群的免疫狀況，及時微調免疫程序，對于保證豬群的健康十分重要。同時，一定階段的抗體監(jiān)測數據，可為豬場制定更為科學合理的免疫程序提供依據[5]。及時開展免疫效果監(jiān)測、評估免疫保護效果是重大動物疫病強制免疫工作的重要手段。本監(jiān)測獲得的這3種疫病的抗體數據，為該地區(qū)的豬場制定科學合理的免疫程序提供了依據。

1 材料和方法

1.1 血清樣本

A、B、C、D、E場均為重慶市養(yǎng)豬場，F場是四川省萬源縣某養(yǎng)豬場。2016年6月在四川省、重慶市6個規(guī)?；B(yǎng)殖場抽檢409份血清（均為有效血清），進行CSF、PR和FMD抗體檢測。其中，母豬按20%～35%的比例隨機抽樣；仔豬按照10%左右的比例抽檢，日齡為（63±7）天；種公豬100%檢測（表1）。6家豬場均使用上海某生物制品有限公司商品疫苗進行免疫。對母豬和種公豬血清樣本，在2次免疫后21～42天采集；仔豬的免疫程序為1日齡接種PR疫苗，45日齡接種CSF疫苗，52日齡接種FMD疫苗，對FMD血清樣本，在疫苗免疫后10～14天采集。

表1 各豬場采集的血清樣品數量 （單位：份）

1.2 檢測試劑盒

FINDE CSF抗體快速檢測試劑盒（生產批號20160602）、FINDE PR gB抗體快速檢測試劑盒（生產批號20160602）和FINDE豬FMD抗體快速檢測試劑盒（生產批號20160602），均購自深圳芬德生物科技有限公司。

1.3 檢測方法

對CSF、PR gB和FMD抗體的檢測，采用酶聯免疫（ELISA）方法，分別應用FINDE CSF、PR gB和FMD抗體快速檢測試劑盒，按照各自的試劑盒說明書操作。

1.3.1 樣品準備。①取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品在1周內可于2～8 ℃保存，長期保存需置-20 ℃以下。②用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（將5 μL血清加入195 μL樣品稀釋液中，混勻），對陰、陽性對照，不用稀釋。③濃縮洗滌液使用前，應恢復至室溫，使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

1.3.2 檢測步驟。①使用前將試劑盒置室溫30 min，使其恢復至室溫。②取所需用量酶標板，設空白對照1孔，陰、陽性對照各2孔，將未用的板條盡快密封，2～8 ℃保存。③在空白對照孔，加樣品稀釋液100 μL；在陰、陽性對照孔，分別加入陰、陽性對照100 μL；在每個樣品孔，加入稀釋后的樣品100 μL（97.5 μL樣品稀釋液+2.5 μL血清）。④混勻，置37 ℃反應30 min。⑤抽去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，重復洗滌5次，拍干。⑥每孔加酶標記物100 μL（空白孔除外），置37 ℃反應30 min。⑦洗滌，同步驟⑤。⑧每孔依次加底物液A、B各50 μL，混勻，37 ℃避光反應10 min。⑨每孔加終止液50 μL，混勻，用空白孔調零，于450 nm（可用630 nm做參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

1.3.3 結果判定。樣品A值≥0.38為陽性；樣品A值在0.2～0.38之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性。本實驗結果為陰性或可疑時，表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。

1.4 統(tǒng)計分析

應用Microsoft Excel軟件進行數據分析，利用其中的CHITEST統(tǒng)計函數，求出兩兩比較的概率（P）值，與常用概率P=0.05比較，得出兩兩比較間的顯著水平。判定標準：P＞0.05，差異不顯著；P≤0.05，差異顯著。

2 檢測結果

2.1 CSF抗體檢測結果

A、B、C、D、E和F場的CSF抗體總陽性率分別為91%、85.71%、92.5%、79.8%、75%和97.33%。統(tǒng)計學分析顯示：F場與B、D、E場之間，C、A場與D、E場之間差異顯著；F、C、A場之間，C、A、B場之間，B與D場之間，B、D、E場之間差異不顯著（表2）。

表2 CSF抗體陽性率統(tǒng)計對比結果 （單位：%）

2.2 PR gB抗體檢測結果

A、B、C、D、E和F場的PR gB抗體總陽性率分別為100%、80.2%、100%、93%、75%和96%。統(tǒng)計學分析顯示：A、C場與F、D、B、E場之間，F場與B、E場之間，D場與B、E場之間差異顯著；A與C、F與D、B與E場之間差異不顯著（表3）。

2.3 FMD抗體檢測結果

A、B、C、D、E和F場的FMD抗體總陽性率分別為72%、76.7%、79.59%、80.8%、0和82.67%。統(tǒng)計學分析顯示：F與E、D與E、C與E、B與E、A與E場之間差異顯著，F、D、C、B、A場之間差異不顯著（表4）。

表3 PR gB抗體陽性率統(tǒng)計對比結果 （單位：%）

表4 FMD抗體陽性率統(tǒng)計對比結果 （單位：%）

2.4 6個豬場母豬與仔豬總陽性率比較

母豬、仔豬的CSF抗體總陽性率分別為98.21%、27.27%，PR gB分別為98.21%、42.5%，FMD分別為83.41%、42.5%。統(tǒng)計學分析顯示，母豬與仔豬的CSF、PR（gB）、FMD抗體陽性率均為差異顯著（表5）。

表5 6個豬場3種疫病的母豬與仔豬總陽性率比較（單位：%）

3 分析與討論

抗體檢測的作用主要是評估疫苗免疫效果和調整免疫程序，指導和完善豬場的疾病防控方案[6]。國家強制免疫計劃規(guī)定CSF、PR和FMD抗體的合格率必須達到70%以上。從上述檢測結果可知，這6個規(guī)?；B(yǎng)殖場的血清抗體陽性率均處于可接受的水平。但是要想控制上述3種疫病，最為理想的豬群抗體陽性率應在90%以上[1]。

從這6個豬場409份血清的CSF、PR gB和FMD抗體檢測結果來看，不同豬場的不同疫病抗體陽性率存在不同程度的差異：在CSF抗體檢測中，A、B、C和D場的種公豬陽性率均達了100%，D場和E場的待售種豬陽性率分別為95%和75%；在PR gB抗體檢測中，A、B、C和D場的種公豬陽性率均為100%，A、D和E場的待售種豬陽性率分別為100%、100%和75%；在FMD抗體檢測中，A、B、C、D場的種公豬陽性率分別為95%、96.15%、63.63%、89.47%，D場和E場的待售種豬陽性率分別為60%和0。

造成這些差異的原因可能與疫苗的接種次數、免疫程序、免疫對象、人為誤差等因素有關。這6個養(yǎng)殖場的CSF和PR gB抗體陽性率均較高，免疫效果較好；在FMD抗體檢測中，A、B、C、D、F場的免疫效果達到了國家要求，但E場的陽性率卻為0，因此應及時對E場的豬群進行補免。

6個豬場母豬的CSF、PR gB和FMD抗體總陽性率遠遠大于仔豬，這主要與免疫接種的次數有關。母豬年齡較大，接種次數多，產生的抗體水平較高，而仔豬年齡小，接種次數少，產生抗體水平自然就低。所以，應加強對仔豬的免疫，以減少疾病的發(fā)生。

目前，對于規(guī)?；i場來說，科學的做法是做好整體豬群重要傳染病的預防工作。首先根據豬群抗體的動態(tài)水平，制定個性化的免疫程序，并對疫苗的免疫效果進行跟蹤監(jiān)測，對免疫不合格的豬及時補免；其次對豬群要定期進行重要傳染?。ㄈ鏑SF、PR、FMD、PRRS等）的檢測，及時淘汰帶毒豬，控制傳染源，逐步凈化豬群[7]；最后要加強養(yǎng)殖管理，堅持豬群全進全出制度，盡量減少從外界引種而帶入病原的機會，認真做好隔離、檢疫、消毒工作，實施封閉式管理[8]。只有采取以上綜合防控措施，才能有效控制豬傳染病的發(fā)生及傳播。

[1]陳溥言. 獸醫(yī)傳染病學 [M]. 5版 北京：中國農業(yè)出版社，2006.

[2]殷震，劉景華. 動物病毒學[M]. 2版 北京：科學技術出版社，2007：1180-1181.

[3]熊丁杰. 豬瘟抗體阻斷檢測方法的建立和對豬瘟活疫苗免疫效果的評價[D]. 成都：四川農業(yè)大學，2010.

[4]郭小玲. 河南省豬瘟、高致病性禽流感疫苗臨床應用效果調查評估[D]. 鄭州：河南農業(yè)大學，2012.

[5] 黃增燕，張任娜，朱建國. 某規(guī)?；B(yǎng)豬場豬瘟、藍耳病及偽狂犬抗體檢測與分析[J].中國豬業(yè)，2012（10）：43-45.

[6]劉兆文，郭林，肖煥星. 江蘇某規(guī)?；i場豬瘟、藍耳病、偽狂犬gE抗體檢測與分析[J].今日養(yǎng)豬業(yè)，2015（8）：73-75.

[7]韓崇江，張大丙. 部分豬場豬瘟抗體有效保護水平的探討[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2009，36 （10）：191-192.

[8] 王大林，索緒峰，王建新，等. 海南省規(guī)?；i場豬瘟免疫抗體的檢測與免疫效果分析[J]. 養(yǎng)豬，2005（5）：32.

（責任編輯：朱迪國）

Antibody Surveillance on Classical Swine Fever，Pseudorabies and Foot-and-mouth Disease in Some Swine Farms of Sichuan-Chongqing Region

Luo Zeli，Wang Jingming，Li Wei，Jiang Shangrong，Peng Siyi，Li Mingshuo，Zhao Guangwei，Yang Xiaowei

（Department of Veterinary Medicine，Rongchang Campus of Southwest University，Chongqing 402460）

In order to recognize the immune status and to establish proper immune program，levels of specific antibodies against Classical swine fever virus（CSFV），Pseudorabies virus（PRV）and Foot-and-mouth disease virus（FMDV）in some farms of Sichuan-Chongqing region were investigated. By the method of ELISA，409 serum samples from 6 large scale farms were conducted detection. Results showed that the antibody positive rates of CSFV in these six farms were 91%，85.71%，92.5%，79.8%，75% and 97.33%，that of PRV gB were 100%，80.2%，100%，93%，75% and 96%，and that of FMDV were 72%，76.7%，79.59%，80.8%，0 and 82.67%，respectively，showing significant difference. Furthermore，through statistical analysis，antibody levels against the 3 viruses existing in sows were all higher than those in piglets. The antibody positive rates of CSF in sows and piglets were 98.21% and 27.27%. And the corresponding numerical values were 98.21% and 42.5% in PRV，83.41% and 42.5% in FMD. These findings would offer references for determining the immunization procedure for large-scale swine farms in Sichuan-Chongqing region.

Classical swine fever；Pseudorabies；Foot-and-mouth disease；antibody detection

S851.3

B

1005-944X（2017）04-0016-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.04.005

西南大學教育教學改革研究項目（2016JY097、2016JY100）；西南大學基本科研項目（XDJK2013C057）

楊曉偉