韋雪華，汪 洋，李玉杰，孫圣福，肉先姑·庫爾班，劉麗平，姜秀云，陳 靜，王貴升，田夫林

（1. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東泰安 271018；2. 山東省動物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250022；3. 新疆喀什麥蓋提縣畜牧獸醫(yī)局，新疆麥蓋提 844600）

2016年山東省豬病毒性疫病的病原學(xué)檢測

韋雪華1，汪 洋2，李玉杰2，孫圣福2，肉先姑·庫爾班3，劉麗平2，姜秀云2，陳 靜2，王貴升2，田夫林2

（1. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東泰安 271018；2. 山東省動物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250022；3. 新疆喀什麥蓋提縣畜牧獸醫(yī)局，新疆麥蓋提 844600）

為了解2016年山東省幾種主要豬病毒性疫病的流行情況，采用熒光定量RT-PCR或PCR方法，對山東省部分豬場送檢的730份病料進(jìn)行了病原學(xué)檢測。結(jié)果檢出248份陽性病料，樣品個體陽性檢出率由高到低的病原依次為豬圓環(huán)病毒2型（13.02%）、豬藍(lán)耳病病毒（10.41%）、古典豬瘟病毒（8.08%）、豬流行性腹瀉病毒（7.26%）、豬偽狂犬病毒（3.84%）、豬輪狀病毒（1.65%）、豬傳染性胃腸炎病毒（0.14%）；樣品混合感染陽性率為8.08%，以豬藍(lán)耳病病毒和豬圓環(huán)病毒2型混合感染最為常見（3.02%）。本次病原學(xué)檢測為山東省豬場病毒性疾病的綜合防控提供了數(shù)據(jù)參考。

豬圓環(huán)病毒2型；豬藍(lán)耳病病毒；古典豬瘟病毒；豬流行性腹瀉病毒；豬偽狂犬病毒；豬輪狀病毒；豬傳染性胃腸炎病毒；病原學(xué)檢測；混合感染

近年來，山東省養(yǎng)豬業(yè)平穩(wěn)發(fā)展，但部分豬場病毒性疫病的流行和發(fā)生仍較為嚴(yán)重，威脅著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[1]。豬病毒性疫病危害嚴(yán)重，其引起的病理變化和臨床癥狀也較為復(fù)雜，主要表現(xiàn)為典型癥狀明顯減輕，病原混合感染和繼發(fā)感染較嚴(yán)重，因此必須依靠實驗室檢測來確診[2]。山東省動物疫病預(yù)防與控制中心采用熒光定量RT-PCR和PCR方法，對2016年山東省部分地市豬場送檢的730份豬病料進(jìn)行了豬瘟病毒（CSFV）、豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病毒（PRV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）和豬輪狀病毒（PRoV）的病原學(xué)檢測。為探究2016年山東省豬場病毒性疫病的流行情況，對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行了統(tǒng)計分析，以期為山東省豬病毒性疫病的防控提供一定的數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

2016年，濟(jì)南、德州、煙臺、濟(jì)寧、臨沂、淄博等17個地市共送檢了730份豬病料。山東省動物疫病預(yù)防與控制中心接樣室專業(yè)人員采集了病料中的肺臟、脾臟、腎臟、淋巴結(jié)、扁桃體等組織樣品，并做好標(biāo)號及背景記錄。

1.2 主要試劑

豬瘟病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒、豬藍(lán)耳病病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒、豬偽狂犬病毒熒光PCR檢測試劑盒、豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR檢測試劑盒，均購自北京生科尚儀科技有限公司；豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉和豬輪狀病毒三重實時熒光RT-PCR檢測試劑盒，購自世紀(jì)元亨。

1.3 樣品處理

將組織樣品反復(fù)凍融3次，取5～10 g至于1.5 mL離心管中，剪碎，充分研磨，加入pH7.2的PBS制成糊狀，8 000 r/min離心2 min，取上清，提取總核酸，置于-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4 檢測方法

分別按照各病原熒光定量RT-PCR或PCR試劑盒的說明書進(jìn)行配液，在實時熒光PCR儀上設(shè)定具體反應(yīng)條件，主要包括擴(kuò)增試劑的準(zhǔn)備、加樣和RT-PCR（PCR）反應(yīng)。

2 結(jié)果

結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)為：Ct值是none的樣品為陰性，Ct值小于或等于30.0的樣品為陽性，Ct值大于30.0的樣品為陰性；對未出現(xiàn)S型曲線，但本底較高的樣本，判為陰性。病料樣品的結(jié)果判定是在陰陽性對照樣品成立的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。

730份豬病料中共檢出248份陽性。其中，檢出PRRSV變異株樣品24份，占PRRSV總陽性數(shù)的31.58%；同時檢出2種及以上病毒的樣品59份，占總陽性樣品數(shù)的23.79%，以PRRSV和PCV-2混合感染為主（表1）。

表1 樣品病毒性疾病病原學(xué)檢測結(jié)果

3 討論

雖然目前已有圓環(huán)病毒弱毒苗和滅活苗[3]用于該病防控，但本次檢測數(shù)據(jù)表明，病毒性疫病中的PCV-2（13.02%）陽性率仍最高，提示在加強(qiáng)PCV-2免疫同時，應(yīng)對發(fā)病豬進(jìn)行及時隔離。研究認(rèn)為PCV-2可通過消化道、呼吸道傳播，也可經(jīng)胎盤傳播，其最主要的傳播方式為口鼻接觸感染豬的排泄物，如糞、尿等，或是與感染豬直接接觸[4]。因此，建議不要混養(yǎng)或采用柵欄分隔飼養(yǎng)，控制好飼養(yǎng)環(huán)境，切斷病毒傳播途徑，加強(qiáng)對健康豬的保護(hù)。同時，該病毒可感染其他養(yǎng)殖動物，如水貂等[5]，具有一定的公共衛(wèi)生威脅。

豬藍(lán)耳病是一種主要的豬繁殖障礙性疫病，種豬群常帶毒，呈亞臨床感染，導(dǎo)致病毒在豬場中循環(huán)傳播，成為生長豬群的傳染源[6]。本次檢測數(shù)據(jù)顯示PRRSV陽性率為10.41%，其中存在24份變異株，占比為31.57%，進(jìn)一步驗證了PRRSV具有廣泛的變異性。這種變異不僅存在于歐洲型和美洲型兩大基因型內(nèi)，即使是同一基因型的不同毒株之間，也存在較大的變異性[7]。此外，由于PRRSV在機(jī)體內(nèi)的持續(xù)感染，使機(jī)體免疫水平降低，導(dǎo)致CSF、PCV-2等免疫失敗、繼發(fā)或混合感染，使得豬病的預(yù)防、診斷和控制更加困難。

近年來，豬瘟流行總體較為平穩(wěn)，但部分豬場仍有病例發(fā)生，且臨床癥狀和病理變化不典型。因此，應(yīng)該加強(qiáng)環(huán)境控制，防止CSFV入侵；建立健康豬群，實行良好的飼養(yǎng)管理策略；建立良好的生態(tài)環(huán)境，同時應(yīng)重視疫苗質(zhì)量和免疫程序的合理有效。

本次檢測數(shù)據(jù)顯示，PRV、PEDV、TGEV和PRoV的檢出陽性率均低于5%，表明這4種病毒性疫病在山東省的流行繼續(xù)保持穩(wěn)定，疫情控制較好，尤其是TGEV，只檢出1份陽性樣品，表明山東省對該病的防控效果較好。雖然這幾種病疫情平穩(wěn)，但仍不排除零星散發(fā)的可能，所以不能放松警惕，應(yīng)繼續(xù)堅持“養(yǎng)重于防、防重于治、綜合防控”的理念[8]。

本次檢測數(shù)據(jù)顯示，含2種或2種以上病原的病料共計59份，陽性率為8.08%，且以PRRSV和PCV-2混合感染為主，共24份，進(jìn)一步證明了病毒性疫病多以混合感染形式發(fā)生的研究結(jié)論。PRRSV和PCV-2均可造成細(xì)胞免疫和體液免疫抑制，破壞機(jī)體的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致豬群免疫力嚴(yán)重下降，從而造成繼發(fā)感染和混合感染，不但容易造成誤診，給防治帶來困難，而且會導(dǎo)致高發(fā)病率和死亡率，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重威脅。建議豬場在做好衛(wèi)生消毒工作的同時，加強(qiáng)對豬免疫效果的監(jiān)測，重視豬群的混合感染和繼發(fā)感染。

綜上所述，2016年山東省豬病毒性疫病的檢測數(shù)據(jù)表明：危害山東省養(yǎng)豬業(yè)的主要病原是PCV-2，其次是PRRSV和CSFV；豬群混合感染嚴(yán)重，尤其是PCV-2和PRRSV的混合感染。以上實驗室檢測數(shù)據(jù)的分析結(jié)果為山東省了解豬病毒性疫病的流行狀況提供了參考，為豬病毒性疫病防控措施的制定提供了依據(jù)。

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（責(zé)任編輯：朱迪國）

Analysis on Etiology Detection of Swine Viral Diseases in Shandong Province in 2016

Wei Xuehua1，Wang Yang2，Li Yujie2，Sun Shengfu2，Rouxiangu Kuerban3，Liu Liping2，Jiang Xiuyun2，Chen Jing2，Wang Guisheng2，Tian Fulin2

（1. College of Veterinary Medicine，Shandong Agricultural University，Tai′an，Shandong 271018；2. Shandong Animal Disease Prevention and Control Center，Jinan，Shandong 250022；3. Maketi Animal Husbandry and Veterinary Bureau，Maketi，Xinjiang 844600）

In order to analyze the epidemic situation of several swine viral diseases in Shandong Province in 2016，a total of 730 samples were detected by fluorescent quantitative RT-PCR or PCR method. The results showed that there were 248 positive samples，and disease types were listed according to individual positive rates from high to low：Porcine circovirus type 2（PCV-2，13.02%），Porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV，10.41%），Classical swine fever virus（CSFV，8.08%），Porcine epidemic diarrhea virus（PEDV，7.26%），Pseudorabies virus（PRV，3.84%），Porcine rotavirus（PRoV，1.65%），Transmissible gastroenteri tis virus（TGEV，0.14%）. Meanwhile，mixed infection rate was identified 8.08%，and the coinfection of PRRSV and PCV-2 was the most common（ratio of 3.02%）. The results of statistical analysis would provide certain theoretical reference for comprehensive prevention and control of viral diseases in swine farms in Shandong Province.

PCV-2；PRRSV；CSFV；PEDV；PRV；PRoV；TGEV；etiology detection；mixed infection

S851.3

B

1005-944X（2017）04-0013-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.04.004

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系毛皮動物創(chuàng)新團(tuán)隊（SDAIT-21-05）；山東省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程（CXGC2016B14）

并列第一作者：韋雪華、汪 洋

王貴升、田夫林