趙斌

摘 要：本實驗建立反相高效液相色譜法測定舒筋外洗顆粒中虎杖苷的含量并對其質(zhì)量穩(wěn)定性進(jìn)行考察。方法：固定相為奧泰公司C18色譜柱（220 mm×4.6mm，5μm），甲醇-乙腈-水（5：25：70）為流動相，檢測波長為303nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。本文對舒筋外洗顆粒中的虎杖苷進(jìn)行含量測定，結(jié)果表明該法不受其它成分的干擾，分離度好，精密度、重現(xiàn)性佳，可用于舒筋外洗顆粒中虎杖苷的含量測定；舒筋外洗顆粒質(zhì)量穩(wěn)定，可存放36月。

關(guān)鍵詞：舒筋外洗顆粒；質(zhì)量；穩(wěn)定

舒筋外洗顆粒具有溫經(jīng)通絡(luò)，消腫止痛的功效。虎杖為舒筋外洗顆粒主要成分之一。虎杖別名為花斑竹、酸筒桿、川筋龍、斑莊、斑杖根等，具有清熱解毒、散瘀定痛、利膽退黃、祛風(fēng)利濕、止咳化痰等功效。虎杖常用于關(guān)節(jié)痹痛、濕熱黃疸、咳嗽痰多、跌撲損傷、癓瘕、癰腫瘡毒等?！兜崮媳静荨酚涊d：“攻諸腫毒，止咽喉疼痛，利小便，走經(jīng)絡(luò)。治五淋白濁，痔漏，瘡癰，婦人赤白帶下。”虎杖具有抗心肌缺血/再灌注損傷、保護(hù)心肌、抗腫瘤、抗腦出血、改善學(xué)習(xí)記憶力等作用[1-5]。本實驗建立反相高效液相色譜法測定舒筋外洗顆粒中虎杖苷的含量并對其質(zhì)量穩(wěn)定性進(jìn)行考察。

1 儀器與試藥

Aurora-F1實驗室自動洗瓶機(jī)（杭州喜瓶者生物技術(shù)有限公司）、TH-W50GC多功能全自動純水機(jī)（武漢市天虹儀表有限責(zé)任公司）、P230高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司）、超聲波清洗器US-3M（中科儀（北京）儀器有限公司）、HH.S11-1電熱恒溫水浴鍋（上海昨非實驗室設(shè)備有限公司）、FA1204CFAC型全自動內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）、YOKO-2005雙波長薄層色譜掃儀（武漢藥科新技術(shù)開發(fā)有限公司）?；⒄溶諏φ掌酚芍袊幤飞镏破窓z定所提供。乙腈（上海金錦樂實業(yè)有限公司）、冰醋酸（上海拜力生物科技有限公司）、磷酸二氫鉀（上海拜力生物科技有限公司）、三乙胺（湖北巨龍?zhí)冕t(yī)藥化工有限公司）、甲醇（上海金錦樂實業(yè)有限公司）、磷酸（湖北巨龍?zhí)冕t(yī)藥化工有限公司）、醋酸鈉（湖北巨龍?zhí)冕t(yī)藥化工有限公司）、磷酸二氫銨（湖北巨龍?zhí)冕t(yī)藥化工有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[6-9]。色譜柱為奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）；甲醇-乙腈-水（5：25：70）為流動相；檢測波長為303nm。理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取舒筋外洗顆粒，精密稱定，置10毫升容量瓶內(nèi)中，加入適量流動相，超聲處理10分鐘，放冷至室溫，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過。取續(xù)濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取虎杖苷對照品適量，用甲醇溶解并稀釋成每1ml中含10μg的溶液，作為對照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

取除虎杖以外的原輔料，按照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結(jié)果在虎杖苷出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取虎杖苷對照品10.0mg，置25ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，虎杖苷在8～80μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗

精密吸取虎杖苷對照品溶液20μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.79%。結(jié)果表明，本實驗精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗

分別稱取同批舒筋外洗顆粒樣品6份，測定含量，并計算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.69%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

依照2.3項下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測定，供試品虎杖苷峰面積積分值的RSD為0.71%。結(jié)果表明虎杖苷至少在4小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 準(zhǔn)確度試驗

取對照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入虎杖苷對照品，按項下方法制備成120%、140%、160%。取模擬樣品照“含量測定”項下方法試驗，計算回收率為99.2%，RSD為0.95%。

3 穩(wěn)定性考察方法

將本品置于30℃的恒溫箱內(nèi)，分別于第1、2、3、12、24、36個月末取樣并測定，考察外觀、重量差異、微生物限度、含量的測定結(jié)果做比較。放置36個月后，舒筋外洗顆粒未發(fā)生明顯變化。經(jīng)測定發(fā)現(xiàn)，外觀、重量差異、微生物限度、含量均穩(wěn)定，表明舒筋外洗顆?？梢源娣?6個月。

4 討論

分別考察含1%醋酸0.025mol.L-1醋酸銨溶液-乙腈（75∶25），乙腈-水-三乙胺（30：70：0.1），甲醇-水（35：65），甲醇-水（40：60），甲醇：2%冰醋酸水溶液（20∶80），甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.3），甲醇-乙腈-水（5：25：70），水-乙腈-三乙胺（80∶20：0.01）不同比例的流動相，結(jié)果以甲醇-乙腈-水（5：25：70）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-水（5：25：70）為流動相。此方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于舒筋外洗顆粒中虎杖苷的含量測定。舒筋外洗顆粒質(zhì)量穩(wěn)定，可存放36月。

參考文獻(xiàn)

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