倪加影+薛蕾

摘 要：本文對(duì)參芪生血顆粒的制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。最佳的提取工藝為提取二次，提取液倍數(shù)為12倍，10倍，提取時(shí)間為120分鐘，60分鐘。本方法可靠、簡(jiǎn)單，可用于生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：參芪生血顆粒；制備；工藝

地黃為參芪生血顆粒主要成分。地黃（拉丁學(xué)名：Rehmannia glutinosa （Gaetn.） Libosch. ex Fisch. et Mey.），玄參科地黃屬多年生草本植物，其根部為傳統(tǒng)中藥之一，最早出典于《神農(nóng)本草經(jīng)》。《綱目》記載：“填骨髓，長(zhǎng)肌肉，生精血，補(bǔ)五臟、內(nèi)傷不足，通血脈，利耳目，黑須發(fā)，男子五勞七傷，女子傷中胞漏，經(jīng)候不調(diào)，胎產(chǎn)百病?！钡攸S具有有強(qiáng)心、利尿、抗心腦血管疾病、神經(jīng)保護(hù)、抗糖尿病、抗骨質(zhì)疏松、增強(qiáng)免疫等多種藥理作用[1-3]。本實(shí)驗(yàn)以地黃中梓醇為指標(biāo)對(duì)參芪生血顆粒制備工藝進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

R-1050大型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；GM-0.33II隔膜真空泵（上海笛柏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；UV1600紫外可見分光光度計(jì)（西安華辰樂(lè)天實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）；美國(guó)必能信DHA1000超聲波清洗機(jī)（北京星越天成科技有限公司）；LC600A液相色譜儀（南京科捷分析儀器有限公司）；FA1204CFAC型全自動(dòng)內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；SG-4050C雙列四孔恒溫水浴鍋（上海碩光電子科技有限公司）；1810-B石英自動(dòng)雙重蒸餾水器（上?？德穬x器設(shè)備有限公司）。乙腈（北京亞太龍興化工有限公司）、甲醇（北京亞太龍興化工有限公司）、乙醇（北京亞太龍興化工有限公司）。

2 提取方法

2.1 提取方法的選擇

2.1.1 粉碎目數(shù)的選擇

分別將參芪生血顆粒原料粉碎過(guò)20目、30目、40目、50目。稱取參芪生血顆粒原料細(xì)粉，提取工藝為提取二次，提取液倍數(shù)為12倍，10倍，提取時(shí)間為120分鐘，60分鐘，過(guò)濾，合并濾液，靜止48小時(shí)，取上清液濃縮適量。采用高效液相測(cè)定濃縮膏梓醇的含量，計(jì)算提取率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明將參芪生血顆粒原料粉碎過(guò)20目、30目、40目、50目無(wú)明顯差異，所以選擇粉碎20目。

2.1.2 加水倍數(shù)的選擇

將參芪生血顆粒原料粉碎過(guò)20目。分別稱取參芪生血顆粒原料細(xì)粉，提取二次，分別采用加水倍數(shù)為14倍，12倍；12倍，10倍；10倍，8倍；8倍，6倍；提取時(shí)間為120分鐘，60分鐘，過(guò)濾，合并濾液，靜止48小時(shí)，取上清液濃縮適量。采用高效液相測(cè)定濃縮膏梓醇的含量，計(jì)算提取率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明加水倍數(shù)為14倍，12倍和12倍，10倍收率無(wú)明顯差別，加水倍數(shù)為12倍，10倍收率高于加水倍數(shù)為10倍，8倍和8倍，6倍，所以選擇加水倍數(shù)為12倍，10倍。

2.2 顆粒制備

取濃縮膏，噴霧干燥。取干膏粉，加適量糊精和乙醇，采用槽型混合機(jī)混合，采用搖擺制粒機(jī)制粒，60攝氏度干燥，采用振動(dòng)篩整粒。

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[4-5]。色譜柱為依利特hypersil BDS C18色譜柱（4.6*250*5u）；乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；流速1.0mLomin-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按梓醇峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

3.2 供試品溶液的制備

取參芪生血顆粒適量，研細(xì)，精密稱取，置50mL量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理提取10分鐘，放置至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，即得。

3.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取梓醇對(duì)照品約10mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，量取5毫升，至50毫升容量瓶?jī)?nèi)，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含梓醇20μg）。

3.4 陰性干擾試驗(yàn)

取除地黃的原料，按方中比例和制備工藝方法制成陰性制劑，用以上選定的測(cè)定條件進(jìn)行吸收曲線繪制，觀察在與梓醇相同的保留時(shí)間處是否存在吸收峰，結(jié)果表明：在選定條件下測(cè)得的陰性液吸收曲線在與梓醇相同保留時(shí)間處不存在吸收峰，因此說(shuō)明選定的條件測(cè)定梓醇無(wú)干擾，具有較強(qiáng)的專屬性。

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μgomL-1的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，梓醇對(duì)照品在5～50μgomL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.6 精密度試驗(yàn)

依照2.4項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液，精密吸取梓醇對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.86%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

3.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批參芪生血顆粒樣品6份，分別依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值為0.76%，結(jié)果表明，此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時(shí)精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品梓醇峰面積積分值的RSD為0.63%。結(jié)果表明梓醇至少在4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

3.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的梓醇對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.3%，RSD為0.76%。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)參芪生血顆粒提取工藝的加水倍數(shù)和藥材粉碎目數(shù)進(jìn)行研究。確定最佳的提取工藝為提取二次，提取液倍數(shù)為12倍，10倍，提取時(shí)間為120分鐘，60分鐘。

參考文獻(xiàn)

[1]杜紅陽(yáng)，李東寧，付海燕，包翠芬，秦書儉.地黃多糖誘導(dǎo)大鼠BMSCs向神經(jīng)樣細(xì)胞分化中對(duì)Notch信號(hào)通路的影響[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2013（12）

[2]孟祥龍，肖洋，薛非非，潘飛，李坤，王明芳，馬俊楠，張朔生.地黃研究前沿、熱點(diǎn)及發(fā)展趨勢(shì)——基于知識(shí)圖譜的“地黃”可視化研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2016（06）.

[3]蔡春沉，王洪璽，王肅.地黃多糖對(duì)肥胖糖尿病大鼠模型的治療作用及對(duì)血清中GLP-1、GIP水平的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2013（18）.

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