范鵬琳，林明明，劉 峰，王苗苗，劉玉璽，賀 皓，孫業(yè)全

介入治療是肝細(xì)胞肝癌的主要非外科治療手段，具有創(chuàng)傷小、栓塞腫瘤供血動脈效果明顯、局部藥物濃度高等優(yōu)點［1］。由于常規(guī)的化療藥物介入治療后可引起肝功能損害、免疫功能降低等不良反應(yīng)，使得經(jīng)皮肝動脈化療栓塞（transcatheter hepatic arterial chemoembolization，TACE）技術(shù)受到一定的限制。因此，研制低毒、靶向的介入制劑成為提高肝癌化療栓塞療效的發(fā)展方向。20世紀(jì)80年代，馮敢生等［2］在國內(nèi)首次應(yīng)用中藥白芨經(jīng)肝動脈介入治療肝癌，取得了良好的效果，從此，中藥聯(lián)合TACE成為中晚期肝癌及肝轉(zhuǎn)移瘤頗為有效的姑息治療方法［3］。壁虎活性單體是從新鮮的無蹼壁虎中提取而來，對腫瘤特別是肝癌等實體瘤具有獨特的療效［4］。該研究通過局部灌注壁虎活性單體治療兔肝臟VX2移植瘤，并應(yīng)用磁共振彌散加權(quán)成像技術(shù)監(jiān)測評估其近期介入治療療效。

1 材料與方法

1.1 動物模型建立 隨機(jī)取普通級純種健康成年新西蘭大白兔 （購于山東省農(nóng)科院，許可證號SCXK20090013）25 只，雌雄不限，體重 2.5～3.0 kg，將傳代荷瘤兔腫瘤制成1 mm3大小的瘤塊備用，將麻醉（2%戊巴比妥鈉，5±1 ml/只）好的實驗兔固定于兔臺，碘附消毒，鋪無菌洞巾后行腹部正中切口，自劍突下切開長約1.5 cm的切口，鈍性分離后暴露出肝臟，輕柔地將肝左葉拉出體外，用眼科鑷在肝左葉膈面插入約0.5 mm深的竇道，將準(zhǔn)備好的瘤粒植入，然后用明膠海綿填塞竇口，用蘸有生理鹽水的紗布按壓數(shù)分鐘，確認(rèn)無出血后回納肝臟，逐層縫合?？p合后碘附消毒，術(shù)后連續(xù)四天后肢外側(cè)肌肉注射頭孢氨芐青霉素（60萬U/只·d）。

1.2 實驗分組和藥物干預(yù) 2 w后，超聲 （美國Siemens Medical公司的乳腺容積成像系統(tǒng)，型號ACUSON S2000，探頭為 9L4，頻率范圍為 5～8 MHz）篩選20只建模成功的大白兔，隨機(jī)平均分為2組。實驗組：選擇右側(cè)腹般溝區(qū)備皮、消毒，暴露出約2 cm的股動脈。用眼科剪剪一“V”字形小口，引入3F微導(dǎo)管及微導(dǎo)絲，透視下間斷注入造影劑尋找腹腔干開口，當(dāng)導(dǎo)管頂端在胸12和腰1椎體間出現(xiàn)“嵌入”現(xiàn)象時造影，直至找到腹腔動脈開口，進(jìn)入腹腔動脈并超選至肝左動脈，造影可見腫瘤組織輕度染色（圖1A），然后灌注混有壁虎活性單體的碘化油栓塞目標(biāo)血管（圖1B），完成后近端股動脈結(jié)扎。對照組操作同實驗組，栓塞劑僅有碘化油。

圖1 藥物灌注前后腫瘤組織圖像

1.3 MRI檢查 術(shù)前1 d及術(shù)后3周采用GE Signa3.0TMR掃描儀行MR掃描，掃描參數(shù)：T1WI TR 2240 ms，TE22.0 ms，NEX 為 2 次；T2WI TR5620 ms，TE119.6 ms，NEX為1次，所有軸位成像采用快速自旋回波 （Fast Spinecho，SE），F(xiàn)OV24.0 cm， 矩陣256×256，層厚 5.0 mm，層間距 5.5 mm。DWI參數(shù)：TR5000 ms，TE75.9 ms，NEX 為 2 次，F(xiàn)OV24.0 cm，矩陣 160×160，層厚 5.0 mm，層間距 5.5 mm，b值分別取0、1000 s/mm2。觀察腫瘤的形態(tài)、境界、信號以及有無局部浸潤等情況。在腫瘤的最大層面上測量感興趣區(qū)（ROI）的 DWI信號值（b=1000），ADC 參數(shù)圖上自動顯示ADC值，連續(xù)層面測定并計算平均值（去除頭尾兩層避免部分容積效應(yīng)）。ROI應(yīng)選擇相應(yīng)層面同一位置進(jìn)行測量。比較兩組腫瘤DWI信號強(qiáng)度及ADC值治療前后變化［5］。

1.4 病理學(xué)檢查 實驗結(jié)束后，將腫瘤組織完整切除，觀察瘤組織大小、色澤質(zhì)地、表面結(jié)節(jié)等。4%甲醛固定、石蠟包埋、切片，常規(guī)HE染色。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 17.0進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)檢驗，連續(xù)正態(tài)分布變量資料數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用 t檢驗；P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MRI表現(xiàn) 肝左葉可見圓形或類圓形的實性瘤灶，T1WI呈低信號，T2WI示腫瘤呈高信號，境界清楚，腫瘤信號均勻；術(shù)前腫瘤DWI信號呈高信號，信號均勻（圖 2A、3A），強(qiáng)度（1626.20±370.10），ADC 值為（0.9±0.1）×10－3mm2/s；術(shù)后實驗組及對照組T2WI及DWI信號較術(shù)前減低，以實驗組較明顯（圖2B、3B），術(shù)后實驗組、對照組腫瘤DWI信號強(qiáng)度分別為 653.69±67.82，785.34±98.13，ADC 值分別為（1.67±0.54）×10－3mm2/s 和（1.47±0.36）×10－3mm2/s，治療前、后實驗組DWI信號強(qiáng)度及ADC值差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.01）；治療前、后對照組DWI信號強(qiáng)度及ADC值差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；術(shù)后兩組DWI信號強(qiáng)度及ADC值差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

圖2 對照組術(shù)前和術(shù)后DWI掃描像

圖3 實驗組術(shù)前和術(shù)后DWI掃描像

圖4 對照組和實驗組的病理切片圖像（10×）

2.2 病理學(xué)結(jié)果 腫瘤表面欠光滑，質(zhì)地較韌，切面呈灰白色、魚肉狀，部分腫瘤組織內(nèi)部凝固性壞死；對照組鏡下觀可見散在的細(xì)胞核固縮、碎裂，壞死程度相對較輕；實驗組切片可見小片狀無結(jié)構(gòu)的紅染區(qū)，壞死程度較重。

3 討論

肝癌嚴(yán)重影響著人類健康，在傳統(tǒng)抗腫瘤藥物存在一定不良反應(yīng)的情況下，從天然動植物中提取低毒、高效、多靶點的抗腫瘤藥物成了藥物研發(fā)的熱點［6］。國醫(yī)藥典中記載，壁虎對腫瘤特別是肝細(xì)胞癌等實體瘤具有獨特的療效［4］，其主要作用機(jī)制為：（1）免疫調(diào)節(jié)作用；（2）抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；（3）抑制血管生成；（4）調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境。雖然壁虎活性單體的藥效學(xué)研究很多，但其治療劑量的研究卻少有報道，該實驗采用的濃度（20 mg/kg）是在趙榮榮等［5］研究的基礎(chǔ)上確定，其認(rèn)為壁虎活性單體對兔VX2移植瘤具有雙重作用，低濃度時促進(jìn)腫瘤的生長，高濃度（20 mg/kg）時抑制腫瘤的生長。

MR彌散加權(quán)成像（DWI）因其評價抗腫瘤藥物的療效具有早期、可重復(fù)、無創(chuàng)傷等優(yōu)點［7］，而成為近年來研究的熱點［8－10］。 DWI能夠反映在體組織內(nèi)水分子的微觀擴(kuò)散情況，ADC值的變化反映組織結(jié)構(gòu)的變化。ADC值的大小主要由細(xì)胞外間隙的彌散阻力決定，其次為細(xì)胞的含水量等［11］。DWI評價介入短期療效的原理：TACE能直接或間接閉塞腫瘤的供血動脈，使得腫瘤細(xì)胞因缺少營養(yǎng)物質(zhì)而出現(xiàn)凋亡、壞死，從而增加細(xì)胞外間隙游離水的含量，DWI圖像上表現(xiàn)為低信號，ADC值升高。而正常肝組織中70%左右的血供由門靜脈供血，且組織內(nèi)枯否細(xì)胞能代謝碘油，因此介入治療前后對正常肝臟組織的 ADC值變化無明顯影響［12］。研究發(fā)現(xiàn)：實驗組和對照組的ADC值均升高，而且實驗組升高的較為明顯，說明實驗組的腫瘤組織壞死較多，病理結(jié)果也證實實驗組瘤組織出現(xiàn)壞死較對照組范圍廣且徹底，與理論相符合。該實驗說明了壁虎活性單體聯(lián)合碘油栓塞較單純栓塞對癌細(xì)胞的殺傷能力更強(qiáng)，其效果優(yōu)于單純碘油栓塞，說明壁虎活性單體對腫瘤細(xì)胞具有顯著的抑制作用。

綜上所述，適量壁虎活性單體聯(lián)合介入能夠有效抑制腫瘤的生長；MR彌散加權(quán)成像可以準(zhǔn)確、客觀、無創(chuàng)的評價壁虎活性單體聯(lián)合對兔肝VX2移植瘤的作用。

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