張成喜 孫友德 劉錫武 孫國強(qiáng)*(.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，青島6609；.青島市畜牧獸醫(yī)研究所，青島6600)

過瘤胃蛋氨酸對奶牛瘤胃微生物蛋白產(chǎn)量、產(chǎn)奶性能和氮排泄的影響

張成喜1孫友德2劉錫武2孫國強(qiáng)1*
(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，青島266109；2.青島市畜牧獸醫(yī)研究所，青島266100)

本試驗(yàn)旨在研究過瘤胃蛋氨酸(RPMet)對奶牛瘤胃微生物蛋白(MCP)產(chǎn)量、產(chǎn)奶性能及氮排泄的影響。選取年齡、體重、胎次、產(chǎn)奶量、乳成分及泌乳期[(90±15) d]相近的荷斯坦奶牛40頭，隨機(jī)分為4組，每組10頭，對照組和試驗(yàn)1組、2組、3組分別添加0、15、25和35 g/(d·頭) RPMet。預(yù)試期15 d，正試期60 d。結(jié)果表明：1)各試驗(yàn)組瘤胃MCP的產(chǎn)量均極顯著高于對照組(P<0.01)，試驗(yàn)1組、2組、3組分別比對照組提高了13.10%、20.45%、16.23%。2)試驗(yàn)組產(chǎn)奶量顯著或極顯著高于對照組(P<0.05或P<0.01)，試驗(yàn)1組、2組、3組分別比對照組提高了8.12%、13.32%、10.32%；RPMet能顯著或極顯著提高乳脂率和乳蛋白率(P<0.05或P<0.01)，顯著或極顯著降低了乳體細(xì)胞數(shù)(P<0.05或P<0.01)，以試驗(yàn)2組最低。3)在氮總排出量方面，各試驗(yàn)組均極顯著低于對照組(P<0.01)，試驗(yàn)1組、2組、3組分別比對照組降低了8.55%、17.49%、13.25%。由此可知，在本試驗(yàn)條件下，飼糧中添加RPMet可以顯著提高奶牛瘤胃MCP產(chǎn)量，減少氮排泄，提高奶牛生產(chǎn)性能。綜合各項(xiàng)試驗(yàn)指標(biāo)，RPMet的最適添加量為25 g/(d·頭)。

過瘤胃蛋氨酸；瘤胃微生物蛋白；產(chǎn)奶性能；氮排泄

近年來，隨著我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)集約化、規(guī)?；潭鹊奶岣?，飼養(yǎng)成本和環(huán)境污染等問題成為制約我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)發(fā)展的重要因素。在反芻動(dòng)物養(yǎng)殖過程中，蛋白質(zhì)類飼料原料的缺乏以及利用率偏低成為影響反芻動(dòng)物生產(chǎn)的主要因素[1]。如何在實(shí)際生產(chǎn)中，提高奶牛對蛋白質(zhì)飼料的利用率、降低飼養(yǎng)成本、減少氮排泄對整個(gè)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有十分重要的意義。氨基酸營養(yǎng)作為反芻動(dòng)物蛋白質(zhì)營養(yǎng)的實(shí)質(zhì)和核心[2]，可以通過補(bǔ)飼氨基酸的方式，來提高奶牛氮素利用率，降低氮排泄。蛋氨酸作為反芻動(dòng)物的第一或第二限制性氨基酸，對于高產(chǎn)奶牛顯得尤其重要[3]，可采用補(bǔ)飼方法緩解其蛋氨酸營養(yǎng)不足的問題。為防止蛋氨酸在瘤胃中降解，可在添加前進(jìn)行物理或化學(xué)方法修飾等保護(hù)性處理，使其過瘤胃消化吸收[4]。鄒阿玲等[5]研究發(fā)現(xiàn)，在奶牛飼糧中添加過瘤胃蛋氨酸(rumen-protected methionine，RPMet)不僅可以顯著提高泌乳早期奶牛的產(chǎn)奶量、乳蛋白率和牛奶比重，還能夠提高乳脂率和乳中非脂固形物的含量。燕磊[6]在小尾寒羊氨基酸代謝的研究中指出，飼糧中添加RPMet可以降低尿中尿素氮排出量、尿素氮/進(jìn)食氮以及尿氮排出量，提高飼料中氮的沉積量以及氮的生物學(xué)價(jià)值。Salsbury等[7]通過體外試驗(yàn)研究表明，蛋氨酸和蛋氨酸羥基類似物(MHA)可以加速微生物的生長。韓占強(qiáng)等[8]研究不同RPMet對奶牛pH和氨態(tài)氮(NH3-N)的影響時(shí)指出，在奶牛飼糧中添加30 g/(d·頭)棕櫚油包被的蛋氨酸，可以滿足瘤胃微生物對蛋氨酸的需要，提高了對NH3-N的利用率，促使瘤胃中MCP的合成。目前，RPMet在奶牛方面的研究主要集中在產(chǎn)奶量上，對飼糧中添加RPMet能否增加瘤胃中微生物蛋白(MCP)產(chǎn)量、降低氮排泄的研究報(bào)道較少，且結(jié)果不一致。本試驗(yàn)在奶牛飼糧中添加不同水平的RPMet，探討RPMet對奶牛瘤胃MCP產(chǎn)量、產(chǎn)奶性能以及氮排泄的影響，以期提高奶牛對蛋白質(zhì)飼料的利用率和產(chǎn)奶性能，降低奶牛飼養(yǎng)成本和氮排泄，為我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 RPMet

RPMet購自青島潤博特生物科技有限公司，為白色顆粒狀物質(zhì)，原料組成為DL-蛋氨酸、棕櫚油、二氧化硅，其中DL-蛋氨酸≥60%，水分≤12%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)采用單因素隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，挑選青島奧特奶牛良種場年齡、體重、胎次、產(chǎn)奶量、乳成分以及泌乳期[(90±15) d]相近的荷斯坦奶牛40頭，隨機(jī)分為4組，每組10頭。對照組和試驗(yàn)1組、2組、3組分別補(bǔ)飼0、15、25和35 g/(d·頭) RPMet。每頭奶牛每天預(yù)留0.5 kg精料將其作為載體與RPMet混合，剩余的精料與粗飼料混勻后制成全混合日糧(TMR)，RPMet與精料混勻后隨TMR飼喂，TMR組成及其營養(yǎng)水平見表1。

簡析：第(1)小題是考查氧化還原反應(yīng)原理。將重要信息“SiO與NaOH溶液反應(yīng)生成最高價(jià)硅的化合物”轉(zhuǎn)化為證據(jù),可判斷反應(yīng)產(chǎn)物必定還有一種還原產(chǎn)物H2。第(2)問是考查化學(xué)平衡。對于第(3)問,研究對象是電解池,要從電極反應(yīng)角度分析。有考生會憑記憶,被所謂的“規(guī)律”誤導(dǎo),作出“熔融鹽中有Cl-,陽極上是Cl-被氧化生成Cl2”的錯(cuò)誤判斷。先全面收集題給信息:生產(chǎn)目的是制取SiH4;熔融鹽有H-和Cl-兩種陰離子、Li+和K+兩種陽離子;粗硅轉(zhuǎn)化為SiH4。再根據(jù)電解時(shí)陽極發(fā)生氧化反應(yīng)這一要素就可以寫出所要求的電極反應(yīng)式了。與其他電解池相比,這里陽極上是非金屬硅被氧化,這一點(diǎn)比較特殊。

試驗(yàn)期為75 d，其中預(yù)試期為15 d，正試期為60 d。采用舍飼，試驗(yàn)牛每天使用利拉伐擠奶器擠奶2次(04:00、16:00)，每天飼喂TMR 2次(04:30、16:30)，并且確保奶牛每天有20 h以上時(shí)間能夠接觸到TMR。試驗(yàn)牛飼喂后能夠在運(yùn)動(dòng)場自由飲水和運(yùn)動(dòng)，按照常規(guī)對其進(jìn)行驅(qū)蟲、光照和管理。

高校圖書館和社會之間的聯(lián)系，更多的應(yīng)該是從高校畢業(yè)出去的校友中挖掘。每一個(gè)校友的職業(yè)發(fā)展和人生發(fā)展都應(yīng)該是高校關(guān)心的內(nèi)容，因?yàn)樗麄儠蔀樵谛W(xué)生最好的職業(yè)方向?qū)?。高校圖書館如果能協(xié)助高校將校友服務(wù)銜接到圖書館會員制服務(wù)中，將會對所有校友和在校師生提供一個(gè)良好的互利環(huán)境，有益于提升彼此的社會競爭力。

1.3 試樣采集及處理

1.3.1 飼料樣

使用四分法收集TMR樣，并在65 ℃烘箱中烘干制成風(fēng)干樣，粉碎后備用。

1.3.2 糞樣

預(yù)試期第1～3天、正試期第28～30天、正試期第58～60天時(shí)使用全收糞法采集3次糞樣，連續(xù)3 d進(jìn)行24 h全收糞，每組收集10頭試驗(yàn)牛的全部糞樣。收糞前應(yīng)先將牛床沖洗干凈，并及時(shí)將糞便收集起來，每天將收集的糞便混勻并稱重，稱重前先使用四分法收集當(dāng)天的糞便，按每100 g糞便添加25 mL 10%的硫酸，對其進(jìn)行固氮處理，然后放入-20 ℃冰箱中冷凍保存，采樣期最后1 d將3 d內(nèi)所留的糞樣按照樣重比例均勻混合，然后將其放入65 ℃烘箱中烘至恒重保存，用于測定糞中氮含量。

表1 TMR組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1)每千克預(yù)混料含One kg of premix contained the following:VA 800 000 IU,VD3400 000 IU,VE 3 000 IU,Fe 2 000 mg,Cu 1 500 mg,Zn 1 200 mg,Mn 3 500 mg,I 100 mg,Se 50 mg,Co 50 mg。

2)產(chǎn)奶凈能通過計(jì)算得出，為各原料的產(chǎn)奶凈能[9]與其所占的百分比相乘，然后相加；其余營養(yǎng)水平為實(shí)測值[10]。NELwas a calculated value, which was the sum of NELof different ingredients[9]multiplied by their percentages; while the other nutrient levels were measured values[10].

1.3.3 尿樣

建筑安全管理標(biāo)準(zhǔn)體系要做到科學(xué)有效運(yùn)行需要從上至下，對現(xiàn)場施工的每一個(gè)環(huán)節(jié)都加強(qiáng)關(guān)注，從而促進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)的有效實(shí)施，但是現(xiàn)階段大多數(shù)項(xiàng)目因節(jié)約人工成本，施工現(xiàn)場的組織機(jī)構(gòu)仍不夠健全或沒有完善，無法做到全面監(jiān)控，因此要按照安全管理標(biāo)準(zhǔn)化體系來指導(dǎo)和監(jiān)督每一個(gè)環(huán)節(jié)的施工，建立健全組織機(jī)構(gòu)非常重要。

預(yù)試期第1～3天、正試期第28～30天、正試期第58～60天時(shí)收集3次尿樣，參考朱雯[11]點(diǎn)收尿法采樣，每次采樣時(shí)使用人工接尿結(jié)合膀胱取尿的方式進(jìn)行采樣，先使用頸夾將牛固定，再采取膀胱取尿的方式將導(dǎo)管插到膀胱中依次采集每頭牛的尿樣，如果在采集過程中有牛出現(xiàn)自主排尿，則由其他人員負(fù)責(zé)接尿，每天收集2次尿樣，每隔12 h采集1次，連續(xù)采集3 d。每天采集尿樣的時(shí)間在前1天的基礎(chǔ)上延后4 h，收集的尿液按一定比例添加98%的濃硫酸，調(diào)節(jié)pH(pH<3)，最后放入-20 ℃冰箱冷凍保存。

1.3.4 乳樣

分別在預(yù)試期第1天和正試期每隔15 d收集乳樣，按照早、晚產(chǎn)奶量的比例進(jìn)行收集，共收集65 mL，其中50 mL乳樣需添加重鉻酸鉀防腐劑(0.6 mg/mL)，混合均勻后放入4 ℃冰箱中冷藏用于測定乳成分，剩余15 mL乳樣經(jīng)過1 500×g離心10 min處理后，取4 mL離心樣(下層清液)，并向其中加入等體積(4 mL)的三氯乙酸(TCA)(25%)，靜置5 min后于3 500×g下離心20 min去除乳蛋白，取1.5 mL處理后的乳樣將其置于-20 ℃冰箱中冷凍，用于測定乳尿素氮的排出量。

1.4 測定指標(biāo)與方法

遠(yuǎn)程傳輸系統(tǒng)主要由電源、發(fā)射模塊、發(fā)射天線和GPRS-232-701無線數(shù)據(jù)傳輸終端組成，每套傳輸系統(tǒng)都安裝了移動(dòng)SIM卡。在機(jī)電井運(yùn)行期，管理人員通過監(jiān)控平臺可準(zhǔn)確掌握運(yùn)行情況和各類參數(shù)（移動(dòng)SIM卡每8個(gè)小時(shí)向機(jī)井監(jiān)控平臺傳輸更新一次使用水量、當(dāng)前剩余水量、最近一次的購水量、購水次數(shù)、水泵功率等數(shù)據(jù)）。

正試期MCP的產(chǎn)量為正試期第30天和正試期第60天 MCP產(chǎn)量的平均值。

預(yù)試期內(nèi)每隔2 d稱1次TMR剩料，記錄投料量(TMR車停穩(wěn)時(shí)所顯示的投料量)，每次在飼喂之前應(yīng)先收集上次的剩料并稱重，根據(jù)每次的投料量和剩料量計(jì)算每頭牛的平均采食量，共記錄6次。預(yù)試期結(jié)束后，按照6次采食量記錄，計(jì)算出預(yù)試期內(nèi)每頭試驗(yàn)牛的平均采食量。按照同樣的方法，正試期內(nèi)每隔10 d記錄1次試驗(yàn)牛采食量，共記錄6次。正試期結(jié)束后，按照6次采食量記錄，計(jì)算出正試期內(nèi)每頭試驗(yàn)牛的平均采食量。按照每次的采食量記錄調(diào)整下階段的TMR投料量。根據(jù)正試期試驗(yàn)牛的平均采食量和TMR中的養(yǎng)分含量，計(jì)算試驗(yàn)牛的主要養(yǎng)分采食量。

1.4.2 MCP產(chǎn)量

尿中嘌呤衍生物(PD)主要來源于瘤胃微生物嘌呤，可以通過測定尿中PD的含量估測出MCP的產(chǎn)量。利用比色法測定尿中尿酸和尿囊素的含量，尿中尿酸和尿囊素的含量之和即為PD的含量[12]。

1.池塘準(zhǔn)備 3月初，池塘施用75kg/畝生石灰進(jìn)行干法清塘，3天后排干池水曬塘。放苗前10天左右，池塘水位加至10cm，以4～5m的行距、2～3m的株距種植輪葉黑藻。種植一周后提高水位至50cm左右，根據(jù)池塘肥力，放苗前7天左右使用一次生物肥，培育生物餌料。池塘進(jìn)水用100目長筒狀篩絹網(wǎng)過濾，防止敵害進(jìn)入。前期保持較低水位，有利于輪葉黑藻生長和水體升溫。

小腸吸收外源性嘌呤數(shù)量(X)的計(jì)算公式為：

Y=0.85X+0.385BW0.75。

式中:Y為尿中嘌呤衍生物的排出量(mmol/d)；0.85為牛腸道吸收的嘌呤轉(zhuǎn)化為尿中PD的回收率；0.385為當(dāng)牛腸道吸收嘌呤的數(shù)量為0時(shí)，尿中排出內(nèi)源嘌呤衍生物的數(shù)量；BW0.75為動(dòng)物的代謝體重。

根據(jù)以下公式計(jì)算MCP的產(chǎn)量：

MCP(g/d)=(6.25×70X)/(0.83×0.116×1 000)=6.25×0.727X。

式中：X為小腸吸收外源性嘌呤的數(shù)量(mmol/d)；70為每摩爾嘌呤的含氮量(mg/mol)；0.83為微生物核酸嘌呤的消化率；0.116為瘤胃微生物總氮中嘌呤氮的比例；6.25為氮換算為蛋白質(zhì)的平均系數(shù)。

1.4.1 采食量

1.4.3 產(chǎn)奶量及乳成分含量

使用利拉伐魚骨式擠奶機(jī)擠奶，自動(dòng)顯示產(chǎn)奶量。預(yù)試期、正試期每隔5 d記錄1次試驗(yàn)牛產(chǎn)奶量，每次連續(xù)記錄3 d，取平均值。

使用山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院奶牛研究中心生產(chǎn)性能測定實(shí)驗(yàn)室的乳成分和體細(xì)胞自動(dòng)分析儀(CombiFoss FT+，丹麥Foss公司)測定乳脂率、乳蛋白率、乳糖率及乳體細(xì)胞數(shù)，使用加權(quán)平均法計(jì)算正試期各乳成分的含量。

1.4.4 氮代謝指標(biāo)

采用凱氏定氮法分析尿氮含量[10]，采用脲酶法測定尿中尿素氮含量[13]，采用苦味酸比色法測定尿肌酐含量[14]，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。參考Valadares等[14]的試驗(yàn)方法，用尿肌酐(每頭牛每天1 kg體重約排出29 mg尿肌酐)標(biāo)記來測定試驗(yàn)牛的排尿量。參照張麗英[10]主編的《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》中的檢測方法，測定飼糧和糞中的粗蛋白質(zhì)(CP)含量。

2.4 RPMet添加水平對奶牛氮素表觀消化率及氮排泄的影響

氮代謝指標(biāo)計(jì)算公式如下：

糞氮(g/d)=日排氮量×糞中CP的含量×0.16；
乳氮(g/d)=產(chǎn)奶量×乳蛋白率×0.16；
可消化氮(g/d)=飼糧食入氮-糞氮；
氮總排出量(g/d)=糞氮+尿氮；
氮表觀消化率(%)=[(飼糧食入氮-
糞氮)/飼糧食入氮]×100。

由表2可知，飼糧中添加RPMet后對干物質(zhì)及其他養(yǎng)分的采食量影響比較小。

光譜衍射效率可以根據(jù)圖的縱坐標(biāo)的光強(qiáng)衍射強(qiáng)度與基準(zhǔn)光強(qiáng)度的相對比值,可得到在特定波長下的光譜衍射效率,其計(jì)算公式為其中I0為原始光譜的總強(qiáng)度,I(為經(jīng)衍射后的光譜強(qiáng)度,Imin為噪聲強(qiáng)度[8]。運(yùn)用MATLAB對衍射強(qiáng)度信息編程計(jì)算,最終得到光譜衍射效率,其部分光譜衍射效率如圖9所示。

使用Excel 2016軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步處理。使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan氏法多重比較檢驗(yàn)組間差異顯著性，以P<0.05和P<0.01分別表示差異顯著和極顯著，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2.東營工業(yè)化的發(fā)展階段。其一，基于人均GDP指標(biāo)衡量，我市已處于現(xiàn)代化社會階段（工業(yè)化的第6階段）。人均GDP直接反映生產(chǎn)率水平的高低，也是實(shí)現(xiàn)工業(yè)化的前提條件。2012年，東營人均GDP為145395元，折算成1970年美元（折算數(shù)據(jù)見表2）為3847美元，已經(jīng)處于現(xiàn)代化社會階段。

2 結(jié)果與分析

2.1 RPMet添加水平對奶牛主要養(yǎng)分采食量的影響

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

內(nèi)部控制環(huán)境是企業(yè)內(nèi)部控制要素中的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，是保證內(nèi)部控制順利實(shí)施的基本前提。企業(yè)要想營造完善的內(nèi)部控制環(huán)境必須從內(nèi)部控制制度框架的構(gòu)建著手，以此為基礎(chǔ)，充分發(fā)揮內(nèi)部控制環(huán)境的作用。例如：企業(yè)應(yīng)將內(nèi)部控制的理念灌輸?shù)矫恳幻麊T工的心中，將內(nèi)部控制融入到企業(yè)的所有日常經(jīng)營管理環(huán)節(jié)中，從而為內(nèi)部控制的順利實(shí)施營造良好的環(huán)境，為內(nèi)部控制的順利實(shí)施提供制度保障。再例如：作為企業(yè)的高層管理者必須結(jié)合自身的實(shí)際情況，高度關(guān)注并重新認(rèn)識內(nèi)部控制制度的重要性，并在企業(yè)內(nèi)部成立合規(guī)的監(jiān)察部門，實(shí)現(xiàn)對企業(yè)各個(gè)業(yè)務(wù)處理流程的動(dòng)態(tài)化合規(guī)監(jiān)察。另外，企業(yè)還必須站在全局發(fā)展的角度對內(nèi)部控制的實(shí)施做一個(gè)整體規(guī)劃。

表2 RPMet添加水平對奶牛主要養(yǎng)分采食量的影響

由表4可知，預(yù)試期產(chǎn)奶量及各乳成分指標(biāo)組間無顯著差異(P>0.05)。正試期，試驗(yàn)2組和3組的產(chǎn)奶量極顯著高于對照組(P<0.01)，試驗(yàn)1組產(chǎn)奶量顯著高于對照組(P<0.05)，各試驗(yàn)組之間均無顯著差異(P>0.05)，試驗(yàn)1組、2組、3組與對照組相比分別提高了8.12%、13.32%、10.32%。在乳脂率方面，試驗(yàn)2組和3組極顯著高于對照組(P<0.01)，試驗(yàn)1組顯著高于對照組(P<0.05)，其中試驗(yàn)2組極顯著高于試驗(yàn)1組(P<0.01)，而試驗(yàn)3組與試驗(yàn)1組和2組之間均差異不顯著(P>0.05)；在乳蛋白率方面，各試驗(yàn)組均極顯著高于對照組(P<0.01)，其中試驗(yàn)2組極顯著高于試驗(yàn)1組(P<0.01)，這2組與試驗(yàn)3組之間無顯著差異(P>0.05)；在乳糖率方面，各試驗(yàn)組與對照組之間均無顯著差異(P>0.05)；在乳體細(xì)胞數(shù)方面，試驗(yàn)2組和3組極顯著低于對照組(P<0.01)，其中試驗(yàn)2組顯著低于試驗(yàn)1組(P<0.05)，與試驗(yàn)3組之間差異不顯著(P>0.05)，試驗(yàn)1組顯著低于對照組(P<0.05)，與試驗(yàn)3組之間無顯著差異(P>0.05)。

與學(xué)校體育、軍隊(duì)體育的強(qiáng)制性不同，社會體育是民眾自愿參與的。吳邦偉在考察歐美各國后感慨，“體育發(fā)達(dá)之國家其民眾結(jié)合體之體育社團(tuán)，多出于公立者數(shù)十百倍”。只依靠政府開辦公共體育場來普及社會體育，難度很大；如何最大限度調(diào)動(dòng)社會力量參與到普及社會體育事業(yè)中，他提出，獎(jiǎng)勵(lì)社會體育工作中表現(xiàn)突出的個(gè)人和團(tuán)體是最經(jīng)濟(jì)的路徑。當(dāng)時(shí)，江蘇的常熟、吳縣、鎮(zhèn)江等地已經(jīng)有以報(bào)社或個(gè)人的名義舉辦比賽，或者捐助財(cái)物來幫助普及體育事業(yè)[9]。吳邦偉認(rèn)為，這是好現(xiàn)象；政府對于這種社會力量，要做到“能力單薄者，予以協(xié)助，其辦有成績者，加以獎(jiǎng)勵(lì)，則風(fēng)氣所播，因而興起者，必大有人在，社會體育之生機(jī)，在乎斯矣。[10]”

由表3可知，各試驗(yàn)組尿酸和尿囊素的排出量均極顯著高于對照組(P<0.01)，其中試驗(yàn)2組顯著高于試驗(yàn)1組(P<0.05)，這2組與試驗(yàn)3組差異不顯著(P>0.05)；各試驗(yàn)組嘌呤衍生物排出量均極顯著高于對照組(P<0.01)，其中試驗(yàn)2組顯著高于試驗(yàn)1組(P<0.05)，這2組與試驗(yàn)3組之間無顯著差異(P>0.05)；在MCP產(chǎn)量方面，各試驗(yàn)組均極顯著高于對照組(P<0.01)，其中試驗(yàn)2組顯著高于試驗(yàn)1組(P<0.05)，這2組與試驗(yàn)3組之間差異不顯著(P>0.05)，試驗(yàn)1組、2組、3組的瘤胃MCP產(chǎn)量與對照組相比分別提高了13.10%、20.45%、16.23%。

表3 RPMet添加水平對奶牛瘤胃微生物蛋白產(chǎn)量的影響

同行數(shù)據(jù)，若肩標(biāo)為不同的小寫字母則表示差異顯著(P<0.05)，不同的大寫字母則表示差異極顯著(P<0.01)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean extremely significant difference (P<0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.3 RPMet添加水平對奶牛產(chǎn)奶量及乳成分的影響

2.2 RPMet添加水平對奶牛瘤胃MCP產(chǎn)量的影響

表4 RPMet添加水平對奶牛產(chǎn)奶量及乳成分的影響

老人在這里已經(jīng)是三代同堂了，十九歲入疆參加工作，輾轉(zhuǎn)烏魯木齊、焉耆，隨后按照組織安排，挺進(jìn)塔里木，在昔日“風(fēng)頭水尾”的十四團(tuán)扎下了根，從此再也沒有離開。

由表5可知，各試驗(yàn)組食入氮與對照組之間無顯著差異(P>0.05)；從糞氮排出量方面來看，試驗(yàn)2組和3組極顯著低于對照組(P<0.01)，顯著低于試驗(yàn)1組(P<0.05)，而試驗(yàn)2組和3組間差異不顯著(P>0.05)，試驗(yàn)1組顯著低于對照組(P<0.05)；在尿氮排出量方面，各試驗(yàn)組均極顯著低于對照組(P<0.01)，其中試驗(yàn)2組極顯著低于試驗(yàn)1組(P<0.01)，與試驗(yàn)3組之間無顯著差異(P>0.05)；在乳氮排出量方面，各試驗(yàn)組均極顯著高于對照組(P<0.01)，其中試驗(yàn)2組極顯著高于試驗(yàn)1組(P<0.01)，與試驗(yàn)3組之間差異不顯著(P>0.05)；在乳尿素氮排出量方面，試驗(yàn)2組極顯著低于對照組(P<0.01)，顯著低于試驗(yàn)1組(P<0.05)，與試驗(yàn)3組之間無顯著差異(P>0.05)，試驗(yàn)3組顯著低于對照組(P<0.05)，與試驗(yàn)1組差異不顯著(P>0.05)，試驗(yàn)1組與對照組之間無顯著差異(P>0.05)；試驗(yàn)1組、2組、3組的氮總排出量與對照組分別降低了8.55%、17.49%、13.25%，各試驗(yàn)組均極顯著低于對照組(P<0.01)，其中試驗(yàn)2組極顯著低于試驗(yàn)1組(P<0.01)，與試驗(yàn)3組之間差異不顯著(P>0.05)，試驗(yàn)3組顯著低于試驗(yàn)1組(P<0.05)；從可消化氮方面來看，試驗(yàn)2組和3組極顯著高于對照組(P<0.01)，其中試驗(yàn)2組顯著高于試驗(yàn)1組(P<0.05)，與試驗(yàn)3組之間差異不顯著(P>0.05)，試驗(yàn)1組顯著高于對照組(P<0.05)，與試驗(yàn)3組之間無顯著差異(P>0.05)；在氮表觀消化率方面，試驗(yàn)2組和3組均極顯著高于對照組(P<0.01)，顯著高于試驗(yàn)1組(P<0.05)，而試驗(yàn)2組和3組之間無顯著差異(P>0.05)，試驗(yàn)1組顯著高于對照組(P<0.05)。

手術(shù)并發(fā)癥情況:中毒性休克:觀察組無中毒性休克病例,對照組2例,切口感染:觀察組2例,對照組2例;觀察組中無腹腔感染患者,對照組4例,觀察組與對照組中均無腸梗阻患者,觀察組中無多器官功能衰竭患者。對照組中有1例多器官功能衰竭患者。對照組并發(fā)癥發(fā)生率為30%,觀察組并發(fā)癥發(fā)生率為6.67%。所有患者均經(jīng)過6~12個(gè)月的隨訪,觀察組無復(fù)發(fā)病例。對照組中2例復(fù)發(fā)胃潰瘍,復(fù)發(fā)率為6.67%,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表5 RPMet添加水平對奶牛氮排泄的影響

3 討 論

3.1 RPMet添加水平對奶牛主要營養(yǎng)物質(zhì)采食量的影響

武安泉等[15]研究表明，瘤胃投注RPMet(N-乙酰-DL-蛋氨酸)對綿羊干物質(zhì)采食量影響差異不顯著。鄒彩霞等[16]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加RPMet對泌乳水牛的干物質(zhì)采食量沒有顯著影響。楊維仁[17]在瘤胃投飼不同形式的蛋氨酸試驗(yàn)結(jié)果表明，投飼動(dòng)物油包被蛋氨酸可以顯著提高試驗(yàn)肉牛的氮沉積以及氮表觀消化率。飼糧中添加RPMet后增加了十二指腸中蛋氨酸的含量，有效降低了尿中尿素氮的含量以及尿氮的損失，進(jìn)而提高了飼糧中氮的沉積率和利用率。這些前人研究與本試驗(yàn)的飼糧中添加RPMet對奶牛的采食量沒有顯著影響，可以顯著提高奶牛氮表觀消化率，降低奶牛氮排泄的結(jié)果相似。

3.2 RPMet添加水平對奶牛瘤胃MCP產(chǎn)量的影響

抗生素濫用在臨床上普遍存在，耐藥菌株明顯增加，對抗感染效果明顯下降，因此，必須確保合理應(yīng)用抗生素。應(yīng)用前對患者進(jìn)行皮試，若出現(xiàn)陽性反應(yīng)或者患者存在抗生素過敏史則不可使用抗生素進(jìn)行治療。在應(yīng)用各類抗感染藥物時(shí)必須嚴(yán)格遵醫(yī)囑，不可擅自更改應(yīng)用劑量和時(shí)間[3] 。

MCP提供了反芻動(dòng)物60%～70%的蛋白質(zhì)需要量，是反芻動(dòng)物最主要的氮源，其產(chǎn)量不僅反映了微生物對氮的利用效率，還間接反映了瘤胃微生物菌群的數(shù)量。Berthiaume等[18]使用硬脂酸包被的蛋氨酸飼喂非泌乳荷斯坦奶牛結(jié)果表明，試驗(yàn)組十二指腸氨氮與對照組相比降低了6%，MCP的流量增加了38%，十二指腸食糜中蛋氨酸的含量增加了50%。高紅建[19]研究發(fā)現(xiàn)，在綿羊飼糧中添加RPMet可以促使瘤胃微生物活動(dòng)增強(qiáng)，對NH3-N的利用率增加，進(jìn)而提高了瘤胃MCP的產(chǎn)量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼糧中添加RPMet，可以顯著提高奶牛瘤胃MCP產(chǎn)量，與上述研究結(jié)果相符。RPMet在瘤胃中能合理兼顧促瘤胃性和過瘤胃性2特征。促瘤胃性是指少量游離出來的蛋氨酸可以改善瘤胃內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)瘤胃微生物的生長與繁殖；而絕大部分蛋氨酸能夠安全通過瘤胃，在瘤胃后消化道中又能迅速有效釋放，并能以生物學(xué)可利用的方式被吸收，少量游離出來的蛋氨酸則用以改善瘤胃內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)瘤胃微生物的生長與繁殖[20]。熊春梅[21]研究表明，在反芻動(dòng)物飼糧中添加或者瘤胃投飼N-羥甲基蛋氨酸鈣(N-HMM-Ca)，可以滿足瘤胃微生物對蛋氨酸的需要，提高了NH3-N的利用率，促使瘤胃MCP合成增加。韓占強(qiáng)等[8]也發(fā)現(xiàn)飼糧中添加RPMet可以顯著降低NH3-N的濃度。瘤胃液中NH3-N濃度的顯著降低，說明RPMet提高了瘤胃微生物對NH3-N的利用率，瘤胃MCP合成增加。

3.3 RPMet添加水平對奶牛產(chǎn)奶量及乳成分的影響

韓兆玉等[22]研究表明，夏季在奶牛飼糧中添加12 g/d RPMet，可以提高奶牛的產(chǎn)奶量、乳脂率、乳蛋白率和乳糖率，降低奶牛的乳體細(xì)胞數(shù)。鄒阿玲等[5]研究發(fā)現(xiàn)，在奶牛飼糧中添加RPMet可以顯著提高泌乳早期奶牛的產(chǎn)奶量和乳蛋白率，可以提高乳脂率。奶牛處在泌乳高峰期時(shí)乳蛋白率普遍較低，主要是由于奶牛在泌乳初期干物質(zhì)采食量的增加低于產(chǎn)奶量的上升，導(dǎo)致奶牛處于營養(yǎng)負(fù)平衡[23]。如果直接在飼糧中添加蛋氨酸，則會被瘤胃微生物所降解，能夠到達(dá)小腸被吸收利用的蛋氨酸數(shù)量很少，最終失去了添加的意義。因此，可以在泌乳早期奶牛飼糧中添加RPMet，增加小腸可吸收蛋氨酸的數(shù)量，提高蛋氨酸的利用率。蛋氨酸不僅可以作為合成蛋白質(zhì)的原料，還可以提供甲基基團(tuán)促進(jìn)脂蛋白的合成，而脂蛋白能夠加速肝中合成的血漿三酰甘油(TG)向乳腺轉(zhuǎn)運(yùn)。此外，RPMet中還含有一部分過瘤胃脂肪，可以為乳脂的合成提供原料。兩者的共同作用下，提高了乳脂率[24]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在奶牛飼糧中添加RPMet，能顯著提高奶牛產(chǎn)奶量、乳脂率和乳蛋白率，顯著降低了乳體細(xì)胞數(shù)。乳體細(xì)胞數(shù)是反映乳房健康狀況的重要指標(biāo)，乳體細(xì)胞數(shù)越高，說明奶?；既榉垦椎目赡苄栽酱?，乳體細(xì)胞數(shù)降低，說明奶牛乳房的健康狀況得到改善。

經(jīng)過10多年的發(fā)展，INSPIRE相關(guān)法令（包括規(guī)定）、數(shù)據(jù)規(guī)范、元數(shù)據(jù)及網(wǎng)絡(luò)服務(wù)、數(shù)據(jù)與服務(wù)共享、空間數(shù)據(jù)服務(wù)和報(bào)告監(jiān)測機(jī)制等已在歐洲國家，包括部分亞洲國家普遍采用，19個(gè)專家組開發(fā)的70多個(gè)核心模式已在基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)涉及的各領(lǐng)域得到普遍應(yīng)用，INSPIRE標(biāo)準(zhǔn)系列的頂層設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)亦推廣到相關(guān)國家和區(qū)域。

3.4 RPMet添加水平對奶牛氮素表觀消化率及氮排泄的影響

楊維仁[17]研究表明，在肉牛瘤胃投飼動(dòng)物油包被蛋氨酸能夠降低糞氮和尿氮的排出量，顯著提高了可消化氮和沉積氮水平，提高了氮的利用效率。飼糧中蛋白質(zhì)的利用效率主要取決于到達(dá)小腸的可吸收氨基酸的平衡，而影響小腸氨基平衡的關(guān)鍵因素為限制性氨基酸。蛋氨酸作為泌乳奶牛的限制性氨基酸之一，在飼糧中添加RPMet是平衡奶牛小腸可吸收氨基酸最有效的途徑。蛋氨酸缺乏時(shí)會限制其他氨基酸的利用，不能被利用的氨基酸則以氨的形式在肝臟中經(jīng)鳥氨酸循環(huán)轉(zhuǎn)化為尿素，然后再經(jīng)過腎臟的過濾作用隨尿液排出體外。當(dāng)飼糧中蛋白質(zhì)水平一定時(shí)，添加適量的RPMet使小腸的氨基酸組成趨向平衡，有利于各種氨基酸的利用，從而降低了尿氮的排出量[6]。謝實(shí)勇等[25]研究了包被蛋氨酸對內(nèi)蒙古白絨山羊氮代謝的影響，結(jié)果表明飼糧中添加包被蛋氨酸有降低糞氮和尿氮排出量的趨勢，并且能夠顯著提高可消化氮、沉積氮和氮表觀消化率。本試驗(yàn)中，飼喂RPMet后能夠顯著降低糞氮和尿氮的排出量，顯著提高可消化氮以及氮表觀消化率。燕磊[6]研究了RPMet對小尾寒羊氨基酸代謝的影響，結(jié)果表明添加RPMet可以顯著降低尿氮的排出量，有降低糞氮排出量的趨勢，極顯著增加了氮的沉積量。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，飼糧中添加RPMet可以顯著提高奶牛瘤胃MCP產(chǎn)量，減少氮排泄，提高奶牛生產(chǎn)性能，綜合各項(xiàng)試驗(yàn)指標(biāo)，RPMet的最適添加量為25 g/(d·頭)。

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*Corresponding author, professor, E-mail: qdnydxsgq@126.com

(責(zé)任編輯 王智航)

Effects of Rumen-Protected Methionine on Ruminal Microbial Protein Production, Milk Performance and Nitrogen Excretion of Dairy Cows

ZHANG Chengxi1SUN Youde2LIU Xiwu2SUN Guoqiang1*
(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,QingdaoAgriculturalUniversity,Qingdao266109,China; 2.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicineofQingdao,Qingdao266100,China)

This experiment was conducted to determine the effects of rumen-protected methionine (RPMet) on ruminal microbial protein (MCP) production, milk performance and nitrogen excretion of dairy cows. Forty Holstein lactating cows with similar age, body weight, parity, milk yield, milk composition and lactation period [(90±15) d] were randomly divided into 4 groups with 10 cows per group. The supplement level of RPMet in control and test groups 1, 2 and 3 was 0, 15, 25 and 35 g/(d·head), respectively. The pretest lasted for 15 d, and the test lasted for 60 d. The results showed as follows: 1) ruminal MCP production in test groups 1, 2 and 3 was extremely significantly increased by 13.10%, 20.45% and 16.23% compared with control group (P<0.01), respectively. 2) Milk yield in test groups 1, 2 and 3 was significantly increased by 8.12%, 13.32% and 10.32% compared with control group (P<0.05 orP<0.01), respectively; RPMet could significantly increase milk fat percentage and milk protein percentage (P<0.05 orP<0.01), and could significantly reduce milk somatic cell count (P<0.05 orP<0.01), especially test group 2 was the lowest. 3) Compared with control group, total nitrogen excretion in test groups was extremely significantly reduced (P<0.01), and was reduced by 8.55%, 17.49% and 13.25% in test groups 1, 2 and 3, respectively. It can be seen that the addition of RPMet to diets can significantly increase ruminal MCP production, decrease nitrogen excretion, and improve the performance of dairy cows under the present experimental conditions. The optimal dosage of RPMet was 25 g/(d·head).[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(5)：1759-1766]

rumen-protected methionine; ruminal microbial protein; milk performance; nitrogen excretion

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.05.036

2016-11-01

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系牛產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(SDAIT-09-08)

張成喜(1988—)，男，山東臨沂人，碩士研究生，研究方向?yàn)榉雌c動(dòng)物營養(yǎng)。E-mail: zcares@126.com

*通信作者:孫國強(qiáng)，教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail: qdnydxsgq@126.com

S816.7

A

1006-267X(2017)05-1759-08