韓仁嬌,王彩云,羅述博,程 英,云戰(zhàn)友

(1.內蒙古乳業(yè)技術研究院有限責任公司,內蒙古呼和浩特 010110; 2.內蒙古伊利實業(yè)集團股份有限公司,內蒙古呼和浩特 010110)

復合中性蛋白酶水解乳清蛋白中β-乳球蛋白的工藝條件優(yōu)化

韓仁嬌1,2,王彩云1,2,羅述博1,2,程 英1,2,云戰(zhàn)友1,2

(1.內蒙古乳業(yè)技術研究院有限責任公司,內蒙古呼和浩特 010110; 2.內蒙古伊利實業(yè)集團股份有限公司,內蒙古呼和浩特 010110)

為優(yōu)化雙酶水解技術生產水解乳清蛋白工藝,探尋適度水解條件下最優(yōu)的β-乳球蛋白水解工藝,本研究以Neutral protease F(以下簡稱F酶)添加量、Neutral protease G酶(以下簡稱G酶)添加量、酶解溫度為主要影響因素,結合實際生產中的其他水解條件,在單因素實驗基礎上,運用Box-Behnken實驗設計原理,探討F酶與G酶添加量、酶解溫度的最佳組合。結果表明:F酶與G酶同時添加,F酶添加量0.44%(相當于2672.32 U/g)、G酶添加量0.08%(相當于362.24 U/g)、酶解溫度55.2 ℃時生產乳清水解蛋白的β-乳球蛋白水解率高達58.99%±0.02%,與市售品牌水解乳清蛋白相比,過敏原β-乳球蛋白水解率最高,分子量分布在1000～180 u之間的肽段占51.76%,游離氨基酸含量為2.34%,明顯優(yōu)于市售同類產品。

乳清蛋白,復合中性蛋白酶,β-乳球蛋白水解率,分子質量分布,響應面法

乳清蛋白作為一種重要的乳源食品蛋白,經過生物酶解可制備易于人體消化吸收的肽段[1-2],還能產生一些具有特殊生理功能的生物活性肽,如具有降血壓功能的降血壓肽、具有促進鈣鐵吸收的酪蛋白磷酸肽,具有抗菌功能的抑菌肽等[3-5]。但是牛乳乳清蛋白中所含有的β-乳球蛋白(β-Lg),是導致嬰幼兒過敏的主要過敏原,人乳中并不含有這一蛋白組分,但它在牛乳乳清蛋白中所占的比例高達56%～60%[6-8],所以,要生產母乳化、舒適或是低致敏性的嬰幼兒配方奶粉,降低或去除乳清蛋白中的β-乳球蛋白是十分必要的。

生物酶解法是一種降低β-乳球蛋白含量的新手段,該方法工藝簡單、生產成本低,在水解β-乳球蛋白的同時可獲得大量的生物活性肽,提高乳清蛋白的生物效價,拓寬乳清蛋白的應用領域。研究表明,在相同濃度以及相同氨基酸組成的條件下,人體對肽的吸收速度要比游離氨基酸快,尤其是小肽(二肽、三肽)[9-10]。但是,在水解乳清蛋白的過程中勢必會產生不同比例的游離氨基酸組分,而游離氨基酸含量過高食用后會導致嬰兒體內滲透壓的升高,進而產生不適感。因此,提高水解產物中小肽質量分數(shù)、降低或控制游離氨基酸比例,對制備優(yōu)質的水解乳清蛋白是十分必要的。

本研究采用生物酶解技術,使用前期篩選后獲得的兩種中性蛋白酶(Neutral protease F,F酶和Neutral protease G,G酶)復合酶解乳清蛋白,以β-乳球蛋白水解率為主要考察指標,對兩種蛋白酶的最適添加量和最適酶解溫度進行了響應面優(yōu)化實驗分析,進而獲得乳清蛋白達到適度水解(水解度在10%左右)狀態(tài)下的最佳水解工藝,對水解產物的分子質量分布和β-乳球蛋白水解率進行了檢測,同時與市售同類產品進行了β-乳球蛋白水解率和分子質量分布情況的對比。

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

Neutral protease F 酶活607345.5 U/g,市售商業(yè)蛋白酶;Neutral protease G 酶活452800 U/g,市售商業(yè)蛋白酶;濃縮乳清蛋白 WPC80蛋白質含量80.2%,新西蘭恒天然公司;水解乳清蛋白1、2、3 為3種市售水解乳清蛋白粉;β-Lg(色譜純)、低分子量標準蛋白(Marker)、Tris-Base、細胞色素C(MW12384)、桿菌酶(MW1450)、乙氨酸-乙氨酸-酪氨酸-精氨酸(MW451)、乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸(MW189)等 均為分析純,Sigma公司。

T6紫外-可見分光光度儀 北京普析通用儀器有限責任公司;ML1602型電子天平 梅特勒公司;LSHZ-300型冷凍水浴恒溫振蕩器 太倉培英;BUCHI B-370型凱氏定氮儀 瑞士BUCHI公司;1200高效液相色譜儀 安捷倫;iMark酶標儀、Mini-PROTEAN垂直電泳儀 美國伯樂。

1.2 實驗方法

1.2.1 乳清蛋白水解工藝 將WPC80與水按照1∶9的比例配制成蛋白溶液,按比例加入蛋白酶,在攪拌轉速為450 r/min的條件下進行水解,該過程保持溫度恒定,水解2 h后加入1 mol/L的NaOH溶液調節(jié)pH為6.8～7.0,取出溶液置于85 ℃水浴中保溫10 min,冷卻至50 ℃后進行噴霧干燥。

1.2.2 單因素實驗設計方法

1.2.2.1 F酶添加量對β-乳球蛋白水解率及分子質量分布的影響 將WPC80與水按照1∶9的比例配制成蛋白溶液,在G酶添加量為底物蛋白添加量的0.08%的條件下,分別按[E]/[S]比例為0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%加入蛋白酶F,該過程始終保持溫度為55 ℃,其他條件及操作按1.2.1,考察不同F(xiàn)酶添加比例對β-乳球蛋白水解率及分子質量分布的影響,確定最佳的F酶添加量。

1.2.2.2 G酶添加量對β-乳球蛋白水解率及分子質量分布的影響 將WPC80與水按照1∶9的比例配制成蛋白溶液,在F酶添加量為底物蛋白添加量的0.4%的條件下,分別按[E]/[S]比例為0.03%、0.05%、0.07%、0.09%、0.11%加入蛋白酶G,該過程始終保持溫度為55 ℃,其他條件及操作按1.2.1,考察不同G酶添加比例對β-乳球蛋白水解率及分子質量分布的影響,確定最佳的G酶添加量。

1.2.2.3 酶解溫度對β-乳球蛋白水解率及分子質量分布的影響 將WPC80與水按照1∶9的比例配制成蛋白溶液,按以上確定的最適F酶和G酶添加量分別為底物蛋白添加量的0.4%和0.07%的比例添加兩種蛋白酶,在攪拌轉速為450 r/min、水解溫度分別為40、45、50、55、60 ℃的條件下進行水解,其他條件及操作按1.2.1,考察不同酶解溫度對β-乳球蛋白水解率及分子質量分布的影響,確定最佳的酶解溫度。

1.2.3 F酶單獨酶解樣品的制備 將WPC80與水按照1∶9的比例配制成蛋白溶液,按[E]/[S]為0.4%的比例加入蛋白酶F,在攪拌轉速為450 r/min的條件下進行水解,該過程保持溫度恒定55 ℃,水解2 h后加入1 mol/L的NaOH溶液調節(jié)pH為6.8～7.0,取出溶液置于85 ℃水浴中保溫10 min,冷卻至50 ℃后進行噴霧干燥。

1.2.4 水解度測定 采用三硝基苯磺酸鈉(TNBS)法[11-12]。

1.2.5β-乳球蛋白水解率的測定 采用SDS-PAGE法測定[13],β-乳球蛋白水解率的計算公式如下:

β-乳球蛋白水解率(%)=(水解前β-乳球蛋白含量-水解后β-乳球蛋白含量)/水解前β-乳球蛋白含量×100。

1.2.6 分子質量分布測定 采用高效液相色譜法測定,具體檢測條件如下。

色譜條件:色譜柱:TSKgel 2000 SWXL 300 mm×7.8 mm,流動相:乙腈∶水∶三氟乙酸為45∶55∶0.1(V/V),在UV220 nm下檢測,流速為0.5 mL/min,柱溫為30 ℃。

樣品制備:將樣品配制成1 mg/mL的溶液,吸取2 mL于10 mL容量瓶中,用流動相稀釋至刻度,用微孔過濾膜過濾后供進樣。

相對分子質量校正曲線:以相對分子質量的對數(shù)(lg Mr)對保留時間作圖得到相對分子質量校正曲線方程。

1.2.7 Box-Behnken實驗設計 根據(jù)單因素實驗結果,采用響應面設計,運用Box-Behnken實驗設計原理,以β-乳球蛋白水解率為響應值,選定F酶添加量、G酶添加量和酶解溫度,設計三因素三水平響應面分析實驗,其中蛋白酶添加量以占蛋白干基質量分數(shù)計,實驗因素水平見表1。

表1 響應面實驗因素和水平設計Table 1 Coded values and corresponding real values of the optimization parameters tested in response surface analysis

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Design-Expert7.0軟件(Static Made Easy,Minneapolis,MN,USA)進行數(shù)據(jù)處理。

2 結果與分析

2.1 單因素實驗

2.1.1 F酶添加量對β-乳球蛋白水解率及分子質量分布的影響 F酶與G酶同時添加,確定G酶添加量不變,改變F酶的添加量,考察其對β-乳球蛋白水解率的影響,實驗結果見圖1。

圖1 F酶添加量對β-乳球蛋白水解率及分子質量分布的影響Fig.1 Effect of F-protease concentration on β-Lg hydrolysis rate

由圖1可知,β-乳球蛋白水解率隨著F酶添加量的增加不斷上升,當添加量超過底物蛋白的0.4%時,β-乳球蛋白水解率上升趨緩；另外,當F酶添加量低于底物蛋白的0.4%時,隨著蛋白酶添加量的增加水解產物中分子量處于1000～180 u之間的肽段的質量分數(shù)明顯增加；當添加量超過底物蛋白的0.4%時,水解產物游離氨基酸(分子量<180 u的組分)含量明顯增加；考慮到添加過多的蛋白酶對β-乳球蛋白水解率影響不大,反而使水解產物中產生較多的游離氨基酸組分,又增加生產成本,破壞水解產物的風味,所以選擇F酶添加量為底物蛋白的0.4%左右較為合適。

2.1.2 G酶添加量對β-乳球蛋白水解率及分子質量分布的影響 F酶與G酶同時添加,確定F酶添加量不變,考察在此基礎上G酶添加量對β-乳球蛋白水解率及分子量分布的影響,具體實驗結果見圖2。

由圖2可知,β-乳球蛋白水解率隨著G酶添加量的增加呈增加趨勢,但變化幅度不明顯,但分子質量分布受G酶添加量影響較明顯。隨著添加量的增加水解產物中處于1000～180 u之間的肽段比例逐漸增加,游離氨基酸組分逐漸減少,當添加量超過0.07%時,分子質量變化趨勢趨緩,考慮到添加過多的G酶對β-乳球蛋白水解率和分子量分布影響不大,還會引起生產成本的提高,所以選擇G酶添加量為0.07%左右較為合適。

2.1.3 酶解溫度對β-乳球蛋白水解率及分子質量分布的影響 由圖3可知,在兩種蛋白酶同時水解且添加量不變的情況下,β-乳球蛋白水解率隨著酶解溫度的升高先升高后降低,當酶解溫度為55 ℃時,β-乳球蛋白水解率達到最高值,當酶解溫度達到60 ℃時,有部分蛋白酶已經失活,所以其β-乳球蛋白水解率明顯下降,綜合考慮β-乳球蛋白水解率和水解產物分子質量分布,選擇酶解溫度為55 ℃左右較為合適。

圖3 酶解溫度對β-乳球蛋白水解率及分子質量分布的影響Fig.3 Effect of hydrolysis temperature on β-Lg hydrolysis rate

2.2 響應面法優(yōu)化水解乳清蛋白生產工藝

2.2.1 模型建立及顯著性分析 根據(jù)表1方案進行響應面實驗,在17個實驗中,1～12是析因實驗,13～17是中心實驗,用來估算實驗誤差。響應面分析實驗結果見表2,方差分析見表3。

表2 響應面分析實驗設計及結果Table 2 Box-Behnken experimental design and results for response surface analysis

經回歸擬合后,實驗因素對響應值的影響可用回歸方程表示。

Y=58.75+1.39A+0.17B+0.33C+0.12AB-0.21AC+0.07BC-1.89A2-0.04B2-4.02C2

由表3可以看出,A、A2、C2為極顯著性影響因素,C和B2影響顯著。在各影響因素中,F酶添加量對β-乳球蛋白水解率影響最大,其次是酶解溫度和G酶添加量。

2.2.2 響應面優(yōu)化與分析 根據(jù)模型方程繪制β-乳球蛋白水解率響應面圖,結果如圖4～圖6所示。從圖中可以直觀地看出各因素對β-乳球蛋白水解率的影響。

由圖4、圖5可以看出,當G酶添加量和酶解溫度不變時,β-乳球蛋白水解率隨F酶添加量的增加而升高,當達到一定值以后略有降低;當F酶添加量和酶解溫度不變時,β-乳球蛋白含量隨G酶添加量的增加變化趨勢不大,說明G酶的加入對于β-乳球蛋白的水解效果影響不大。F酶添加量對β-乳球蛋白含量影響較G酶添加量顯著,表現(xiàn)為曲線變化趨勢較大。

表3 響應面實驗方差分析Table 3 Analysis of variance for the fitted regression model

圖4 F酶添加量和G酶添加量對β-乳球蛋白水解率影響的響應面圖Fig.4 Response surface plot for the effect of cross-interaction between F-protease concentration and G-protease concentration on β-Lg hydrolysis rate

注:*表示差異顯著(p<0.05);**表示差異極顯著(p<0.01)。

圖5 F酶添加量和酶解溫度對β-乳球蛋白水解率影響的響應面圖Fig.5 Response surface plot for the effect of cross-interaction between F-protease concentration and hydrolysis temperature on β-Lg hydrolysis rate

圖6 G酶添加量和酶解溫度對β-乳球蛋白水解率影響的響應面圖Fig.6 Response surface plot for the effect of cross-interaction between G-protease concentration and hydrolysis temperature on β-Lg hydrolysis rate

由圖5、圖6可以看出,當F酶和G酶添加量不變時,β-乳球蛋白水解率隨著溫度的升高呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢,說明當酶解溫度超過蛋白酶的最適溫度以后,隨著酶活力的逐漸降低其水解底物蛋白中β-乳球蛋白的能力也逐漸下降。

通過對模型方程求導計算,得到β-乳球蛋白水解率最高的酶解工藝參數(shù)為F酶添加量0.44%(相當于2672.32 U/g)、G酶添加量0.08%(相當于362.24 U/g)、酶解溫度55.17 ℃,由模型方程預測得到此時的β-乳球蛋白水解率是59.04%。根據(jù)響應面優(yōu)化結果,以F酶添加量0.44%、G酶添加量0.08%、酶解溫度55.2 ℃酶解生產水解乳清蛋白,通過驗證實驗,所得水解乳清蛋白的β-乳球蛋白水解率為58.99%±0.02%,與模型方程預測值基本一致。

2.3 酶解產物分子質量分布情況

采用高效液相色譜法對以上工藝制備的水解乳清蛋白的分子質量分布情況進行了檢測,測定結果見圖7。

圖7 酶解產物高效液相檢測圖譜Fig.7 HPLC diagram of whey protein hydrolyzate 注:1為水解前樣品的HPLC譜圖,2為F酶酶解產物HPLC譜圖,3為F酶與G酶共同酶解后產物HPLC譜圖。

分子量范圍(u)水解前濃縮乳清蛋白(WPC80，%)F酶單獨酶解后(%)F酶與G酶共同酶解后(%)>1000055192888196110000～30008997615983000～200019095526402000～10001033126213911000～50027513671888500～18016325163288<180203654235

以相對分子質量的對數(shù)(lg Mr)對保留時間作圖得到相對分子質量校正曲線方程:lg Mr=6.62-0.259T,所以出峰時間在14 min之前的為分子量分布在10000 u以上的片段,β-乳球蛋白的分子量為18.4 ku,主要分布在10000 u以上的組分中,通過圖7與表4分子量分布檢測結果可以看出,水解前濃縮乳清蛋白的HPLC譜圖共有7個峰,但是由于個別峰出現(xiàn)疊加,導致直觀很難辨別,通過譜圖可以看出水解前濃縮乳清蛋白以分子量分布在10000 u以上的組分占主要比例,單獨加入F酶時,對10000 u以上的組分有明顯的水解效果,>10000 u以上的組分比例由55.19%下降到28.88%,F酶與G酶共同作用時底物蛋白中>10000 u的組分有更進一步的水解,這說明F酶與G酶都具備水解底物蛋白大分子的作用,但是F酶的作用效果更加明顯,即F酶是導致β-乳球蛋白水解的主要因素;單獨加入F酶以后分子量<1000 u組分所占的比例較水解前增加了38.96%,而加入G酶后該比例僅在單獨加入F酶的基礎上提高了不到10%,這說明F酶的加入是提高小肽比例的決定性因素;添加G酶以后游離氨基酸組分(<180 u)的比例明顯降低,說明G酶除了能使原本大分子量的肽段進一步水解成小肽以外,還能使部分游離氨基酸再度交聯(lián)形成小肽,這對平衡乳清水解蛋白產品攝入人體以后的滲透壓以及改善水解產物的風味起到一定作用。

分析以上分子量變化的原因可能是由于F酶是內肽酶,主要作用于肽鏈內部,可以使大分子蛋白斷裂成分子量相對較少的片斷,加之其酶活力較G酶更高一些,所以其對β-乳球蛋白這樣的大分子片段的水解效果更強;而G酶雖然也有內肽酶的成分,但是其酶活力相對較低,所以對大分子肽片段的水解能力相對弱一些;至于G酶能使部分游離氨基酸再度交聯(lián)形成小肽的原因主要是受蛋白酶固有特性的影響,其深層次機理還需要進一步研究。

2.4 水解產物的凝膠電泳分析

采用上述復合中性蛋白酶對濃縮乳清蛋白進行水解,水解前后的SDS-PAGE電泳圖如圖8所示,WHP1、WHP2、WHP3是采用相同方法三次實驗制備的水解產物,其水解度分別為9.75%、10.40%、9.53%。

圖8 濃縮乳清蛋白水解前后的電泳結果Fig.8 Electrophoresis results of whey protein concentrate before and after hydrolysis

表5 不同品牌乳清水解蛋白關鍵指標比較Table 5 Comparison of key indicators among different brands of whey protein hydrolyzate

由圖8可以看出,經過復合中性蛋白酶水解以后,10000 u以上的組分含量明顯降低,經計算WHP1、WHP2、WHP3三個樣品的β-乳球蛋白水解率分別為60%、73%、55%,平均水解率為62.6%,說明當水解產物的水解度控制在10%左右時,采用上述優(yōu)化的復合中性蛋白酶酶解工藝對乳清蛋白中β-乳球蛋白具有較好的水解效果。

2.5 與市售同類產品關鍵指標對比

按照上述確定的工藝制備乳清水解蛋白,并與三款市售同類競品進行對比,主要對比指標為水解度、β-乳球蛋白水解率、1000～180 u肽段比例和游離氨基酸(<180 u)比例,測定結果如表5所示。

從表5可以看出,在水解度相近的情況下,本研究使用的復合中性蛋白酶酶解工藝生產的乳清水解蛋白的β-乳球蛋白水解率最高,達到60%以上,與其他市售同類產品相比,酶解產物分子量分布在1000～180 u之間的肽段比例最大,而游離氨基酸組分(分子量<180 u)所占的比例明顯低于市售同類產品,這說明在適度水解條件下,由F酶和G酶組成的復合中性蛋白酶體系對底物乳清蛋白中β-乳球蛋白有較好的水解效果,同時可以有效控制水解產物中游離氨基酸的形成,采用該復合中性蛋白酶酶解工藝生產的乳清水解蛋白在抗原水解率和消化吸收率上更有優(yōu)勢。

3 結論

利用Box-Behnken實驗設計和響應面分析,探討提高β-乳球蛋白水解率的最佳酶解工藝參數(shù),所建立的實驗模型能夠反映響應值的變化,對實驗的擬合較好。優(yōu)化結果顯示,在F酶與G酶同時添加,F酶添加量0.44%、G酶添加量0.08%、酶解溫度55.2 ℃條件下生產的水解乳清蛋白β-乳球蛋白水解率為58.99%±0.02%。以此條件為基礎生產的水解乳清蛋白與市售三款同類產品相比較抗原β-乳球蛋白水解率最高,分子質量處于1000～180 u的肽段所占比例明顯高于市售同類產品,且產品中游離氨基酸組分所占比例得到明顯的控制。按照生產嬰幼兒配方奶粉對乳清水解蛋白的要求,在該條件下制備的水解乳清蛋白更適合添加到嬰幼兒配方奶粉中,同時,本研究中確定的復合中性蛋白酶酶解工藝及研究思路為后續(xù)提高嬰幼兒配方粉母乳化和舒適化程度的研究奠定了基礎。

[1]Guo H,Kong BH. Health and Function Food[M]. Harbin:Heilongjiang science and technology press,1996.

[2]Adler-Nissen J. Enzymic hydrolysis of food proteins[M]. London,UK:Elsevier Applied Science Publishers,1986.

[3]Renate Jonker,Nicolaas EP,Deutz,et al. Hydrolyzed casein and whey protein meals comparably stimulate net whole-body protein synthesis in COPD patients with nutritional depletion without an additional effect of leucine co-ingestion[J]. Clinical Nutrition,2014,33(2):211-220.

[4]Argyri K,Theophanidi A,Kapna A,et al. Iron or zinc dialyzability obtained from a modified in vitro digestion procedure compare well with iron or zinc absorption from meals[J]. Food Chemistry,2011,127(2):716-721.

[5]Caroline Mellinger-Silva,Luisa OL,Rosa,et al. Dual function peptides from pepsin hydrolysates of whey protein isolate[J]. International Dairy Journal,2015,48:73-79.

[6]Tavares,Tania,Contreras,et al. Novel whey-derived peptides with inhibitory effect against angiotensin-converting enzyme:In vitro effect and stability to gastrointestinal enzymes[J]. Peptides,2011,32:1013-1019.

[7]DERECK E W C,GEOFFREY S,PETER R,et al. Bioactivity ofβ-Lactoglobulin andα-lactalbumin-Technological Implications for Processing[J]. International Dairy Journal,2006 16(11):1229-1240.

[8]Barros RM,Malcata FX. Molecular characterization of peptides released fromβ-lactoglobulin andα-lactalbumin via cardosins A and B[J]. Dairy Sci,2006,89(2):483-494.

[9]Lucia de la Hoz,Vera S,Nunes da Silva,et al. Small peptides from enzymatic whey hydrolyzates increase dialyzable iron[J]. International Dairy Journal,2014,38(2):145-147.

[10]WEBB K E. The Developments in Gastrointestinal Absorption Tissue Utilization of Peptides[J].Dairy Science,1993,76(1):351-361.

[11]趙新淮,馮志彪.蛋白質水解物水解度的測定[J].食品科學,1994,15(11):65-67.

[12]張俊英,王彩云,靳燁,等.酶水解乳清蛋白工藝條件的研究[J].農產品加工,2009(6):35-37.

[13]楊章昀,馮鄭珂,潘家榮.脫鹽牛乳乳清粉中β-乳球蛋白的分離純化[J].中國乳品工業(yè),2015,43(4):10-12.

Optimization of compound neutral enzymatic hydrolysis ofβ-lactoglobulin in whey protein

HAN Ren-jiao1,2,WANG Cai-yun1,2,LUO Shu-bo1,2,CHENG Ying1,2,YUN Zhan-you1,2

(1.Inner Mongolia Research Center of Diary Technology Co.,Ltd.,Hohhot 010110,China; 2.Inner Mongolia Yili Industrial Group Co.,Ltd.,Hohhot 010110,China)

The purpose was to optimize the production of hydrolyzed whey protein by double enzyme hydrolysis technology,and to explore the optimal process ofβ-lactoglobul hydrolysis under moderate hydrolysis conditions. The enzymatic hydrolysis of whey protein with F-Neutral protease and G-Neutral protease was optimized using a Box-Behnken design with response surface methodology. Theβ-lactoglobulin hydrolysis rate of whey protein hydrolysate was 58.99%±0.02% when the optimal hydrolysis conditions were established as follows:0.44%(equivalent to 2672.32 U/g)F-protease,0.08%(equivalent to 362.24 U/g)G-protease,and hydrolysis at 55.2 ℃,which represented a maximum value over that reported for commercial whey protein hydrolyzate. Mass fraction of molecular weight 1000～180 u was 51.76%,and the free amino acid was 2.34%,significantly lower than the market similar products.

whey protein;complex neutral protease;β-lactoglobulin hydrolysis rate;molecular weight distribution;response surface methodology

2016-10-14

韓仁嬌(1986-)，女，碩士研究生，研究方向：乳品加工，E-mail:hanrenjiao@yili.com。

TS201.1

A

1002-0306(2017)08-0203-06

10.13386/j.issn1002-0306.2017.08.031