龐國龍，孫河

不同麻醉方式對大鼠高眼壓模型眼壓值的影響

龐國龍1，孫河2

目的為測量大鼠高眼壓模型的眼壓選擇理想的麻醉方式。方法將構(gòu)建成功后的高眼壓模型大鼠30只，運用隨機數(shù)字法隨機分為水合氯醛組10只，七氟烷組10只，倍諾喜組10只；各組均給與相應(yīng)組的麻醉藥物進行麻醉后，分別在第8、11、14、17、20、24、27、30 d的上午10點用Tono-pen-avia眼壓計進行眼壓測量，每只大鼠測量5次，取平均值。結(jié)果水合氯醛組和七氟烷組的眼壓值在相應(yīng)的時間點，結(jié)果基本相似，而倍諾喜組眼壓值在相應(yīng)的時間點較其他兩組眼壓值偏高，即水合氯醛組與七氟烷組在七個眼壓監(jiān)測點眼壓差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；倍諾喜組眼壓同其他兩組相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），因此認為倍諾喜組的眼壓值高于實際眼壓值，水合氯醛組與七氟烷組眼壓值更接近真實眼壓值。結(jié)論三種麻醉方式中，七氟烷麻醉簡便易行，測量的眼壓值可靠性高，可在測眼壓時選用。

麻醉方式；眼壓；高眼壓模型；Tono-pen-avia眼壓計

在我國青光眼是僅次于白內(nèi)障的第二大致盲性眼病[1]，由高眼壓導(dǎo)致的視神經(jīng)不可逆損害和視野缺損，嚴重影響了青光眼患者的生產(chǎn)和生活，因此研究青光眼的發(fā)病機制、機理以及治療尤為迫切。研究青光眼疾病需要有理想的模型做基礎(chǔ)，廣大眼科科研工作者研究出了多種方法構(gòu)建青光眼模型，例如鞏膜靜脈結(jié)扎[2]，基因青光眼鼠模型，前房注入微球[3]或是復(fù)方卡波姆[4]等。然而，對于模型眼壓的測量，各研究團隊都運用各自的麻醉方式，對于各種麻醉方式對眼壓的準確性是否有影響，還沒有相關(guān)的研究報告，本文基于此進行了實驗對照，研究不同麻醉方式測量出的大鼠高眼壓模型的眼壓值是否有差異。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與儀器藥品

SPF級SD大鼠（北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK-（京）2012-0001）40只，7～9周齡，雌雄各半，體重范圍為（221.20± 15.30）g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進入實驗。Tono-penavia眼壓計（美國Mentor公司）。

1.2 造模方法及分組

造模方法參照以往實驗[4]，通過前房注射10 μL復(fù)方卡波姆溶液構(gòu)建高眼壓模型，右眼為模型眼，左眼作對照眼，造模不成功的大鼠以及模型質(zhì)量差的剔除實驗（對包括大鼠的體重、精神狀態(tài)、角膜情況、前房情況、死亡情況等進行觀察，如果術(shù)后大鼠出現(xiàn)前房積膿、滲出、積血等情況，則將該大鼠從研究中剔除。大鼠角膜在造模后呈現(xiàn)輕度水腫，房水輕度混濁，屬于正常反應(yīng)；對于角膜水腫程度明顯，前房炎癥嚴重的大鼠模型給予剔除）。剩余造模成功大鼠共30只，運用隨機數(shù)字法隨機分為水合氯醛組10只，七氟烷組10只，倍諾喜組10只。

1.3 觀察指標

選擇在造模后第8、11、14、17、20、24、27、30 d，每日上午10點運用Tono-pen-avia眼壓計觸壓角膜測量大鼠眼壓，每只眼測量5次，取平均值；其中水合氯醛組按照10%水合氯醛3.8 ml/kg腹腔注射；七氟烷組在七氟烷密閉空間內(nèi)吸入30 s；倍諾喜組則給予鼠眼點眼3次每次1滴后進行測量。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS18.0（漢化版）軟件進行分析。多組間的比較采用單因素方差分析，計量資料采用x±s表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組動物一般情況比較

麻醉后三組大鼠的精神狀態(tài)：倍諾喜組的大鼠處于清醒狀態(tài)；七氟烷組的大鼠處于昏睡狀態(tài)；水合氯醛組則處于輕度昏迷。三組大鼠的麻醉持續(xù)時長分別為：倍諾喜組30分鐘；七氟烷組2～3分鐘；水合氯醛組60～180分鐘。麻醉后三組大鼠在體重變化上沒有統(tǒng)計學差異。三組大鼠在麻醉后的死亡率沒有統(tǒng)計學差異（預(yù)實驗中死亡率有統(tǒng)計學差異，水合氯醛組＞七氟烷組＞倍諾喜組，因此正式實驗中請謹慎掌握運用麻醉的劑量和時間）。

2.2 麻醉方式與眼壓

經(jīng)單因素方差分析，除時間點30 d以外的其他時間點，倍諾喜組（P＜0.05）同其他兩組相比均有統(tǒng)計學差異，而水合氯醛組同七氟烷組之間沒有統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；在30 d這個時間點各組之間差異無統(tǒng)計學意義（表1）。

表1三組高眼壓模型大鼠在不同時間點的眼壓值（mmHg）

注：除30 d外，其他時間倍諾喜組與另兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而水合氯醛組與七氟烷組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；30 d時各組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）

3 討論

實驗中選擇哪種麻醉方式進行測眼壓，對實驗的成功、實驗數(shù)據(jù)的準確性等，至關(guān)重要。如何才能高效、準確、安全的進行眼壓測量？這種麻醉方式既不能讓測眼壓浪費太久的時間，又要使眼壓值盡可能的準確，還不能因為麻醉導(dǎo)致大鼠大量的死亡。鑒于以上原因我們選擇了表面麻醉、氣體麻醉、液體注射麻醉進行比較，以期找到盡可能理想的麻醉方式。

通過實驗我們可以看出，倍諾喜麻醉組眼壓值高于其他兩組，且具有統(tǒng)計學意義，說明倍諾喜麻醉后測量的眼壓值要高于實際值，其準確性略差；水合氯醛組和七氟烷組眼壓值無明顯差別，更貼近實際眼壓值，其準確性較高。但是水合氯醛組和七氟烷組哪個麻醉方式對測眼壓這個常規(guī)的檢查更適合呢？

水合氯醛為催眠藥、抗驚厥藥。消化道或直腸給藥均能迅速吸收，1小時達高峰，維持4～8小時。脂溶性高，易通過血腦屏障，分布全身各組織。催眠劑量30分鐘內(nèi)即可誘導(dǎo)入睡，催眠作用溫和，不縮短REMS睡眠時間，無明顯后遺作用。催眠機理可能與巴比妥類相似，引起近似生理性睡眠，無明顯后作用。較大劑量有抗驚厥作用，大劑量可引起昏迷和麻醉，抑制延髓呼吸及血管運動中樞，導(dǎo)致死亡。曾作為基礎(chǔ)麻醉的輔助用藥，麻醉前、手術(shù)前和睡眠腦電圖檢查前用藥，可鎮(zhèn)靜和解除焦慮，使相應(yīng)的處理過程比較安全和平穩(wěn)。實驗中采用腹腔注射，通過血液循環(huán)進入大腦，發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用，使模型全身進入安靜狀態(tài)，此時測量的眼壓能夠客觀反映出模型的真實眼壓值。

吸入用七氟烷用于成人和兒科患者的院內(nèi)手術(shù)及門診手術(shù)的全身麻醉的誘導(dǎo)和維持，實驗中通過模型大鼠呼吸道吸入，再通過血液循環(huán)進入全身各部位發(fā)揮麻醉鎮(zhèn)靜作用，同樣使模型大鼠全身處于安靜狀態(tài)，使得眼壓值貼近真實眼壓值。

雖然以上兩種麻醉鎮(zhèn)靜藥物均為全身麻醉鎮(zhèn)靜藥物[5]，但是都有各自不同的特點：（1）水合氯醛腹腔注射，位置選擇要嚴格，不能打進腸管及內(nèi)臟，否則模型大鼠就會腹脹或死亡，嚴重影響實驗進程，同時劑量一定要在預(yù)實驗時找到最佳劑量值，防止模型大鼠死亡數(shù)量過大；（2）水合氯醛麻醉時間長，大約1～3個小時，適合長時間對模型進行干預(yù)處理；測量完眼壓后模型一定要單獨放置，防止被同一籠內(nèi)早醒的模型吃掉。（3）吸入用七氟烷為呼吸道吸入麻醉，吸入時間要控制好，時間稍久就會導(dǎo)致模型死亡，太短則不能達到麻醉效果，這個要在實驗中逐漸摸索。（4）七氟烷麻醉時間短，一般為1～3分鐘，適合短時間的干預(yù)處理。

究其差異性產(chǎn)生的原因，我們總結(jié)為以下幾點：（1）倍諾喜為表面麻醉藥物，僅對角膜或粘膜產(chǎn)生麻醉作用，模型其他部位均能正常感知。（2）水合氯醛和七氟烷均為全身麻醉藥物，麻醉成功后，模型全身處于麻醉狀態(tài)，意識不清晰，不能正常感知，這時的眼壓不受任何其它因素的干擾，能準確地體現(xiàn)真實的眼壓水平。（3）倍諾喜僅對角膜進行麻醉，模型的其他感知都存在，因此測量時模型的對抗情緒導(dǎo)致眼壓值偏高。（4）倍諾喜麻醉時要對模型用手對身體進行按壓，一定程度上存在將眼壓提高的可能性。

綜上所述，水合氯醛和吸入七氟烷這兩種麻醉鎮(zhèn)靜藥物，在測眼壓過程中，測量值基本符合真實眼壓值，倍諾喜作為表麻藥物，不能對模型全身肢體及情緒進行控制，其測出值偏高，因此，在高眼壓實驗?zāi)Ｐ蜏y眼壓過程中，不建議采用表麻藥物作為測眼壓的麻醉方式，以防止眼壓值偏高，影響整個實驗的準確性，綜合本實驗來看，測眼壓的三種麻醉方式中，七氟烷麻醉簡便易行，測出的眼壓值準確性高，推薦在測眼壓時選用。

[1]Quigley HA，Broman AT.The number of people with glaucoma world-wild in 2010 and 2020[J].Br J Ophthalmol，2006，90（3）：262-267.

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[3]Chen H，Wei X，Cho KS，et al.Optic Neuropathy Due to Microbead-Induced Elevated Intraocular Pressure in the Mouse[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci，2011，52（1）：36-44.

[4]孫河，龐國龍，尹麗穎.復(fù)方卡波姆前房注射構(gòu)建大鼠慢性高眼壓模型的實驗研究[J].中國中醫(yī)眼科雜志，2014，24（3）：157-162.

[5]龐國龍.基于疏肝通竅法對青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞保護通路激活的實驗研究[D].黑龍江中醫(yī)藥大學：2014.

Influence of different anesthetic methods on intraocular pressure in intraocular hypertension rat model

PANG Guolong，SUN He.
Taian City Center Hospital，Taian271000，China

OBJECTIVE To find the ideal way of anesthesia for measurement of intraocular pressure in intraocular hypertension rat model.METHODS After high intraocular pressure model establishment，30 experimental rats were randomly divided into chloral hydrate group（10 rats），sevoflurane group（10 rats），Benoxil group（10 rats），and rats in each group were anesthetized with corresponding drugs.Then their intraocular pressures were detected with Tono-pen avia tonography at 10 o'clock of 8th，11th，17th，20th，24th，27thand 30thday after anesthesia. Each time，intraocular pressure was presented by the average value of five-times’result.RESULTS The intraocular pressures of 8th，11th，17th，20th，24th，27thand 30thday after anesthesia in chloral hydrate group and sevoflurane group were similar，while result of Benoxil group was higher than the other two groups.In other words，there was no significant difference between chloral hydrate group and sevoflurane group at seven time point（P＞0.05）;while differences between Benoxil group and other two groups had statistical difference（P＜0.05）.Thus，intraocular pressure of Benoxil group was higher than actual result while it of chloral hydrate group and sevoflurane group was more approximate to actual result.CONCLUSIONS Among the three kinds of anesthesia，sevoflurane anesthesia was easy to perform and reliable in result，thus it should be preferred in intraocular pressure measurement.

anesthesia;intraocular pressure;high intraocular pressure model;Tono-pen-avia

R775.9；R285.5

A

1002-4379（2017）01-0008-03

10.13444/j.cnki.zgzyykzz.2017.01.002

山東省自然科學基金聯(lián)合專項（ZR2015HL112）

1山東省泰安市中心醫(yī)院，泰安271000 2黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院，哈爾濱154000

龐國龍，E-mail：pglltt1982@163.com