李紅梅 劉水和 葉震璇 張 華

(貴州省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴陽550002)

Ⅰ型干擾素通路IRF5基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)聯(lián)性研究①

李紅梅 劉水和②葉震璇 張 華

(貴州省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴陽550002)

目的：研究Ⅰ型干擾素通路IRF5基因rs2004640、 rs10954213、rs4728142位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡易感性之間的關(guān)聯(lián)。方法：運(yùn)用Taqman熒光定量PCR檢測(cè)218例SLE患者及200例健康對(duì)照者IRF5基因 rs10954213、rs4728142、rs2004640位點(diǎn)基因型，計(jì)算等位基因頻率，分析其與SLE的關(guān)系；用IIF法和LIA法測(cè)定218例SLE患者血漿中抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體和特異性抗體，并分析其與IRF5 rs2004640、rs10954213位點(diǎn)基因頻率的關(guān)系。結(jié)果：IRF5 rs2004640位點(diǎn)等位基因T頻率分布SLE組高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.809，P=0.009)，基因型GG/TT分布在兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.111，P=0.024，)；IRF5 rs10954213位點(diǎn)等位基因G頻率分布在SLE組高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.332，P=0.037)；基因型GG在兩組的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.805，P=0.016)；IRF5 rs4728142位點(diǎn)等位基因頻率及基因型，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SLE組IRF5 rs2004640位點(diǎn)等位基因T和抗Sm抗體、抗Rib-P抗體相關(guān)(χ2=8.512、4.057；P=0.005、0.048)。218例SLE患者中活動(dòng)期患者特異性抗體主要以Anti-NUC、Anti-His、Anti-Rib-P為主，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：IRF5基因rs2004640、rs10954213基因位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與SLE 易感性相關(guān)，rs4728142基因位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)與SLE易感性不相關(guān)；IRF5 rs2004640 T等位基因和抗Sm抗體、Anti-Rib-P抗體相關(guān)，SLE活動(dòng)期患者特異性抗體主要以抗ds-DNA抗體、抗NUC抗體、抗His抗體、抗Rib-P抗體為主。

SLE；Ⅰ型干擾素通路；干擾素調(diào)節(jié)因子；基因多態(tài)性；抗核抗體

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythemato-sus，SLE)是一種自身免疫性疾病，以體內(nèi)大量自身抗體產(chǎn)生和免疫復(fù)合物形成為特點(diǎn)，發(fā)病機(jī)制不明。近年來的研究發(fā)現(xiàn) SLE 患者血清中含有大量的IFN-α，體內(nèi)多種免疫細(xì)胞，如T 細(xì)胞、B細(xì)胞和粒細(xì)胞，均高表達(dá)IFN誘導(dǎo)基因[1，2]。IFN-α 能夠通過多種不同的機(jī)制調(diào)控樹突狀細(xì)胞及 T 細(xì)胞等免疫細(xì)胞的生存、活化及功能，進(jìn)而促進(jìn) SLE 的發(fā)生發(fā)展[3]。IFN-α 的表達(dá)或者相關(guān)信號(hào)通路的活化失衡，導(dǎo)致自身免疫耐受被打破、機(jī)體的免疫系統(tǒng)異?；罨瑥亩餝LE的發(fā)生。干擾素調(diào)節(jié)因子(Interferon regulator factor，IRF)是一類多功能的轉(zhuǎn)錄因子，目前已發(fā)現(xiàn)10個(gè)IRFs成員：IRF1-IRF9和病毒IRF(V-IRF)。IRF可誘導(dǎo)干擾素的產(chǎn)生及調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)，在SLE的發(fā)病中起作用。目前已知 IRF5 不僅可以誘導(dǎo)干擾素的產(chǎn)生,并且通過 Toll 樣受體通路激活干擾素下游靶基因,在SLE發(fā)病中起重要的作用[4]。IRF5作為歐洲人群SLE的易感基因[5],目前在國內(nèi)已有關(guān)于中國漢族人群的研究報(bào)道，但在貴州地區(qū)少見相關(guān)報(bào)道，且貴州是多民族地區(qū)，單核甘酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphisms，SNPs)的等位基因頻率存在種族和地區(qū)差異。因此本研究擬對(duì)貴州地區(qū)人群SLE患者與健康人群IRF5基因rs2004640、rs10954213、rs4728142位點(diǎn)進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，以探討IRF5基因多態(tài)性與SLE易感性之間的關(guān)系及其等位基因?qū)购丝贵w、特異性抗體的影響，為SLE的診治提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

1.1.1 SLE組 獲取知情同意后、收集2010年10月至2014年12月在貴州省人民醫(yī)院門診及住院患者218例，其中女195例、男23例，平均年齡(36.51±12.41)歲。全部病例符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(American College of Rheumatology，ACR)關(guān)于SLE的分類修訂標(biāo)準(zhǔn)[2]。疾病分期標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)病人主訴及實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)合系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)性指數(shù)(Systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI )評(píng)分[3]。

1.1.2 對(duì)照組 獲取知情同意后收集2014年11月至2014年12月在貴州省人民醫(yī)院門診健康體檢人員200例，其中女168例、男32例,平均年齡(38.20±9.91)歲。對(duì)照組組成的選擇滿足以下條件：①不滿足SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)；②無其他自身免疫性疾病及家族史；③無過敏史；④無慢性疾病史及家族史。

1.1.3 主要試劑與儀器 血液基因組DNA提取系統(tǒng)(非離心柱法) 、Taqman master mix擴(kuò)增預(yù)混試劑、單核苷酸多態(tài)性基因分型試劑，均購于美國ABI公司；抗核抗體IgG檢測(cè)試劑盒(IIF)、抗雙鏈DNA抗體IgG檢測(cè)試劑盒(IIF)、抗核抗體譜IgG檢測(cè)試劑盒(LIA)均購于德國歐蒙醫(yī)學(xué)診斷有限公司；7500 FAST熒光定量PCR儀購于美國ABI公司；EUROBLotMaster-44免疫印跡自動(dòng)操作儀、IF Sprinter熒光自動(dòng)操作儀、EUROStar 熒光顯微鏡均購于德國歐蒙醫(yī)學(xué)診斷有限公司；ASP-2680微量核酸檢測(cè)分光光度計(jì)購于美國 ACTGene公司。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取和定量 采集受檢者靜脈血2.0 ml于EDTA-K2抗凝管內(nèi)，根據(jù)血液基因組DNA提取系統(tǒng)(非離心柱法)操作步驟，提取DNA。在核酸定量儀進(jìn)行測(cè)定，當(dāng)OD260/OD280=1.6～1.8時(shí)為合格，要求DNA定量終濃度為10 ng/μl。

1.2.2 引物設(shè)計(jì)與合成 由美國ABI公司設(shè)計(jì)合成，在特異性雜交熒光探針的5′端結(jié)合報(bào)告基團(tuán)(FAM)，在3′端結(jié)合淬滅熒光基團(tuán)(VIC)。產(chǎn)品目錄號(hào)：rs4728142(IRF5)，C_2691222_10；rs2004640(IRF5)，C_9491614_10；rs10954213(IRF5)，C_31283335_10。

1.2.3 Taqman-PCR擴(kuò)增 PCR反應(yīng)體系總體積25 μl。PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)：50℃ 2 min；95℃ 10 min；95℃ 15 s，60℃ 1 min，共40個(gè)循環(huán)。熒光收集設(shè)置在60℃。

1.2.4 等位基因分型 ABI 7500 FAST 通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度來確定基因型，并利用終點(diǎn)法對(duì)等位基因進(jìn)行定性,SDS軟件檢測(cè)和分析處理PCR擴(kuò)增后的FAM和VIC熒光信號(hào)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。樣本的群體代表性采用Hardy-weinberg平衡檢驗(yàn)檢測(cè)。等位基因頻率=(2×純合子+雜合子)/(2×受檢人數(shù))?；蛐图暗任换蝾l率組間，抗核抗體和特異性抗體譜組間計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLE組與患者組一般資料的分析 本次研究共收集SLE病例組218例，平均年齡(36.51±12.41)歲，其中女195例，占89.45%，男23例，占10.55%；對(duì)照組200例，平均年齡(38.20±9.91)歲，其中女168例，占84.0%，男32例，占16.0%。兩組比較，年齡與性別差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

2.2 活動(dòng)期與緩解期SLE患者抗核抗體與特異性抗體檢測(cè)結(jié)果的比較 218例SLE患者經(jīng)SLEDAI評(píng)分分為活動(dòng)期和緩解期，其中活動(dòng)期125例(55.96%)，緩解期93例(44.04%)。在SLE活動(dòng)期，熒光模型以核均質(zhì)型為主，而在緩解期組則以核顆粒型為主，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在特異性抗體譜的檢測(cè)中，活動(dòng)期組主要以Anti-NUC(71.32%)、Anti-His(72.07%)、Anti-Rib P(62.63%)為主，而緩解期組則以Anti-nRNP(48.76%)、Anti-Sm(48.28)、PCNA(71.43%)為主,見表2。

表1 SLE組與對(duì)照組一般資料分析

Tab.1 Basic characteristics of SLE group and control group

GenderSLEgroup[n(%)]Controlgroup[n(%)]Male23(10 60)32(16 00)Female195(89 40)168(84 00)Age(x±s)36 51±12 4138 20±9 91

表2 SLE活動(dòng)期組與緩解期抗核抗體譜結(jié)果的比較

Tab.2 Comparison of autoantibodies spectrum of results in SLE remission patients and activity patients

Fluorescenremodel/specificityantibodiesTotal(%)Activitypatients(%)Remissionpatients(%)ANA?IIF212(97 25)123(58 02)89(41 98)ds?DNA?IIF125(57 33)125(100 0)0(0 00)FluorescencemodelNuclearhomogeneous93(42 66)71(76 34)2)22(23 66)Nuclearparticles126(57 80)61(48 41)1)65(51 59)Cytoplasmparticles89(40 83)58(65 17)31(34 83)Other16(7 34)8(50 00)8(50 00)SpecificityantibodiesAnti?nRNP121(55 50)62(51 24)1)59(48 76)Anti?Sm87(39 91)45(51 72)42(48 28)Anti?SSA141(64 68)80(56 74)61(43 26)Anti?SSB27(12 39)16(59 26)11(40 74)PCNA14(6 42)4(28 57)1)10(71 43)Anti?NUC136(62 39)97(71 32)2)39(28 68)Anti?His111(50 92)80(72 07)2)31(27 93)Anti?Rib?P99(45 41)62(62 63)37(37 37)AMA?M216(7 34)6(37 50)10(62 50)

Note：1)P<0.05,2)P<0.01,compared with SLE remission patients.

2.3 IRF5基因rs2004640、rs10954213、rs4728142基因型、等位基因頻率分布比較

2.3.1 IRF5基因rs2004640位點(diǎn)基因型、等位基因

表3 IRF5 rs2004640位點(diǎn)基因型和等位基因在SLE組和對(duì)照組間的頻率分布比較

Tab.3 Allele and genotype frequencies of IRF5 rs2004640 in SLE cases and controls

Genotypes/alleleSLEgroup[n(%)]Controlgroup[n(%)]OR(95%CI)GG36(16 51)1)51(25 50)0 578(0 358?0 932)GT94(43 12)86(43 00)1 005(0 682?1 481)TT88(40 37)1)63(31 50)1 579(1 058?2 357)G166(38 037)1)188(47 00)0 693(0 526?0 913)T270(61 92)1)212(53 00)1 442(1 095?1 9)

Note：1)P<0.05,compared with controls group.

表4 IRF5 rs10954213位點(diǎn)基因型和等位基因在SLE組和對(duì)照組間的頻率分布比較

Tab.4 Allele and genotype frequencies of IRF5 rs10954213 in SLE cases and controls

Genotypes/alleleSLEgroup[n(%)]Controlgroup[n(%)]OR(95%CI)GG83(38 07)1)54(27 5)1 662(1 098?2 517)AG93(42 66)101(50 5)0 729(0 496?1 073)AA42(19 27)45(22 5)0 822(0 512?1 319)G259(59 40)1)209(52 25)1 337(1 017?1 759)A177(40 60)1)191(47 75)0 748(0 569?0 983)

Note：1)P<0.05,compared with controls group.

表5 IRF5 rs4728142位點(diǎn)基因型和等位基因在SLE組和對(duì)照組間的頻率分布比較

Tab.5 Allele and genotype frequencies of IRF5 rs4728142 in SLE cases and controls

Genotypes/alleleSLEgroup[n(%)]Controlgroup[n(%)]OR(95%CI)AA5(2 29)1(0 5)4 671(0 541-40 333)AG52(23 85)40(20 00)1 253(0 786-1 997)GG161(73 85)159(79 5)0 728(0 461-1 151)A62(14 22)42(10 50)1 413(0 931-2 146)G374(85 78)358(89 50)0 708(0 466-1 075)

表6 SLE組特異性抗體與rs2004640、rs10954213等位基因的相關(guān)性分析

Tab.6 Correlation analysis of specificity antibodies and rs2004640，rs10954213 SNPs in SLE cases

Specificityantibodiesrs2004640(n)TGOR(95%CI)rs10954213(n)GAOR(95%CI)ANA(+)2651591 6672531711 480ANA(-)66(0 528-5 256)66(0 469-4 664)dsDNA(+)153970 930156941 401dsDNA(-)11769(0 629-1 376)10383(0 799-2 455)Anti?nRNP(+)156861 273145971 049Anti?nRNP(-)11480(0 863-1 877)11480(0 714-1 541)Anti?Sm(+)122521 807102720 947Anti?Sm(-)148114(1 204-2 713)157105(0 642-1 399)PCNA(+)16120 80814140 665PCNA(-)254154(0 373-1 754)245163(0 309-1 432)Anti?NUC(+)1661060 9031641081 103Anti?NUC(-)10460(0 605-1 348)9569(0 744-1 635)Anti?Rib?P(+)135601)1 847120781 096Anti?Rib?P(-)142106(1 242-2 746)13999(0 746-1 609)

Note:1)P<0.05,compared with controls group.

頻率分布比較 SLE患者IRF5 rs2004640位點(diǎn)GG/GT/TT基因型分布頻率分別為16.51%、43.12%、40.37%，基因型GG、TT在兩組中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。等位基因T頻率分布在SLE組(61.92%)高于對(duì)照組(53.00%)，在兩組中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

2.3.2 IRF5基因rs10954213位點(diǎn)基因型、等位基因頻率分布比較 SLE患者IRF5 rs10954321位點(diǎn)GG/AG/AA基因型分布頻率分別為38.07%、42.66%、19.27%?；蛐虶G在兩組人群中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。等位基因A/G在兩組人群中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中等位基因G的頻率分布SLE組(59.40%)高于對(duì)照組(52.25%)。見表4。

2.3.3 IRF5 rs4728142位點(diǎn)基因型、等位基因頻率分布比較 SLE患者IRF5 rs4728142基因型AA/AG/GG分布頻率分別為2.29%、23.85%、73.85%，兩組間的基因型頻率和等位基因A/G頻率分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，如表5。

2.4 SLE組IRF5基因rs2004640、rs10954213位點(diǎn)等位基因與特異性抗體的相關(guān)性分析 通過病例-病例分析[(比如抗Sm抗體(+)的SLE患者與抗Sm抗體(-)的SLE患者之間rs2004640、rs10954213等位基因頻率的差異]， rs2004640位點(diǎn)等位基因 T 和抗Sm抗體、抗Rib-P抗體相關(guān)，與其余抗體差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。等位基因T可能是抗Sm抗體、抗Rib-P抗體的危險(xiǎn)因素(OR=1.972，1.530；95%CI=[1.236-3.003]，[1.010-2.317])。rs10954213位點(diǎn)與各特異性抗體之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表6。

3 討論

系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種以產(chǎn)生多種自身抗體、激活補(bǔ)體、免疫復(fù)合物沉積,導(dǎo)致組織和器官的損傷為特征的自身免疫性疾病[6]。可累及多系統(tǒng)、多臟器、臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣。迄今為止，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，但多數(shù)學(xué)者認(rèn)為遺傳因素、環(huán)境因素及激素水平在本病的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。近年來許多學(xué)者認(rèn)為Ⅰ型干擾素參與 SLE的病理生理學(xué)機(jī)制,研究表明Ⅰ型干擾素(IFN)通路是SLE發(fā)病中重要的功能通路之一[7]，SLE 患者血清中含有大量的IFN-α，其能夠通過調(diào)控多種免疫細(xì)胞的分化、 活化及功能影響免疫系統(tǒng)的活化，促進(jìn) SLE 的發(fā)生發(fā)展[8，9]。IRF5為IFN通路的重要調(diào)控因子,IRF5與TLRs形成通路來誘導(dǎo)表達(dá)炎性因子[10]。因此，對(duì)SLE相關(guān)易感基因的研究，除可發(fā)現(xiàn)SLE易感基因外,還可從基因組水平認(rèn)識(shí)SLE的發(fā)病機(jī)制。在本次研究中，SLE活動(dòng)期患者的熒光模型主要以核均質(zhì)型為主，而緩解組則以核顆粒型為主，可能是由于多數(shù)活動(dòng)期病人都伴有抗dsDNA抗體，該抗體的熒光模型多表現(xiàn)為核均質(zhì)型，有可能會(huì)掩蓋其他的熒光模型，而隨著病情的緩解，抗dsDNA抗體的滴度下降，SLE其他特異性抗體的熒光模型隨之表現(xiàn)出來。在對(duì)抗核抗體譜的研究中，發(fā)現(xiàn)活動(dòng)組患者的靶抗原以dsDNA、NUC、His、Rib P為主，這幾種靶抗原在以往的文獻(xiàn)報(bào)道中均與疾病的活動(dòng)性相關(guān)[11]。所以聯(lián)合檢測(cè)ANA與特異性抗體譜，可以對(duì)SLE進(jìn)行早期診斷，利于病情和療效的觀察，并對(duì)臨床用藥有一定的指導(dǎo)作用。

IRFs是一類轉(zhuǎn)錄因子，主要參與調(diào)節(jié)Ⅰ型IFN和干擾素刺激性應(yīng)答基因的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄，參與Th細(xì)胞的分化調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞發(fā)育和抑制腫瘤細(xì)胞生長。

IRF5基因主要在B細(xì)胞和樹突細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，誘導(dǎo)IL-6、IL-12等炎性細(xì)胞因子表達(dá)；反之，IFN-α信號(hào)也會(huì)進(jìn)一步活化IRF5，從而促使IRF5在Ⅰ型IFN產(chǎn)生中發(fā)揮重要作用，形成一個(gè)正反饋環(huán)，相互作用，可能是SLE疾病發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制之一。許多研究顯示歐洲人此基因的多個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)與SLE相關(guān)，對(duì)亞洲人SLE的相關(guān)研究也證實(shí)IRF5是亞洲人的易感基因。不同研究結(jié)果顯示致病性rs2004640 T 等位基因頻率中國人群的分布頻率為31.6%，本次研究檢測(cè)的頻率較其他地區(qū)的高，可能與樣本量不夠大及貴州是多民族地區(qū)，種族差異較大有關(guān)。此次研究對(duì)IRF5 rs2004640 T的多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)并分析，發(fā)現(xiàn)基因型TT和等位基因T在兩組人群中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示該基因型可能是SLE的相關(guān)易感因子，攜帶等位基因T增加了SLE的患病風(fēng)險(xiǎn)。

rs10954213位于IRF5基因的非編碼區(qū)，在歐洲人的研究中已證實(shí)了 rs10954213與SLE的關(guān)系，并發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)使IRF5基因產(chǎn)生更穩(wěn)定的mRNA，從而增強(qiáng)其生物學(xué)作用[12]。本次研究顯示IRF5 rs10954213位點(diǎn)基因型GG、等位基因G在SLE組與對(duì)照組人群中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中等位基因G在SLE組的頻率分布顯著高于對(duì)照組,這與宋衛(wèi)青等[13]對(duì)中國山東漢族人群的研究結(jié)果相同。結(jié)合國內(nèi)外的研究結(jié)果,我們認(rèn)為等位基因G可能與IRF5基因的高表達(dá)有關(guān)，影響干擾素的表達(dá)，增加SLE患者的患病風(fēng)險(xiǎn)。

rs4728142位于IFR5基因的基因間隔區(qū)，國內(nèi)學(xué)者張鵬等[14]有研究表明該位點(diǎn)的多態(tài)性SLE易感性相關(guān)。但在本研究中,其基因型及等位基因在SLE組與對(duì)照組間的頻率總體分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究結(jié)果跟以上研究結(jié)果不符，可能是由于地區(qū)差異不同造成的。

通過病例-病例分析表明不同的特異性抗體如抗Sm抗體、抗Rib-P抗體的產(chǎn)生可能和IRF5 rs2004640 T相關(guān)。IRF5 作為IRF家族成員之一，可誘導(dǎo)產(chǎn)生Ⅰ型IFN。Ⅰ型IFN誘導(dǎo)DC分化成熟，遞呈自身抗原，活化T細(xì)胞并逃避中樞清除，促進(jìn)活化T細(xì)胞刺激自身反應(yīng)性B細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)DNA、RNA及凋亡細(xì)胞成分的自身抗體，形成免疫復(fù)合物，該復(fù)合物作為內(nèi)源性的IFN誘導(dǎo)物進(jìn)一步促進(jìn)漿細(xì)胞樣DC產(chǎn)生更多的Ⅰ型IFN，更多的IFN又進(jìn)一步促進(jìn)自身抗體的產(chǎn)生，免疫復(fù)合物的形成及pDC活化，形成惡性循環(huán)。從而導(dǎo)致SLE患者對(duì)自身抗原喪失免疫耐受，自身免疫反應(yīng)不斷加劇。本次研究結(jié)果間接提示等位基因可能在一定程度上影響SLE患者體內(nèi)自身抗體的產(chǎn)生，這可能對(duì)評(píng)估SLE的遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制有一定的提示作用，但由于樣本量較小，其具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

我們采用群體相關(guān)研究策略，運(yùn)用TaqMan-PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)IRF5基因SNP rs2004640、rs10954213 與SLE易感性相關(guān)聯(lián)，IRF5基因SNP rs4728142與SLE易感性無關(guān)。SLE作為復(fù)雜的多因素疾病，受到眾多危險(xiǎn)因素的影響。同時(shí)由于受到樣本大小、人種的選擇、地區(qū)差異等的影響，都可能導(dǎo)致研究結(jié)果差異。因此在本研究的基礎(chǔ)上，選擇其他人群進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)并擴(kuò)大樣本量，將有利于對(duì)SLE發(fā)病相關(guān)機(jī)制的深入研究；同時(shí)對(duì)攜帶易感基因人群的早期發(fā)現(xiàn)，利于對(duì)其進(jìn)行早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，提高患者的生活質(zhì)量和延長生命。

[1] Crow MK.Type Ⅰ interferon in the pathogenesis of lupus[J].J Immunol,2014,192(12):5459-5468.

[2] Fan H，Liu F，Dong G，etal.Activation-induced necroptosis contributes to B-cell lymphopenia in active systemic lupus erythematosus[J].Cell Death Dis，2014,5:e1416.

[3] Bezalel S，Guri KM，Elbirt D，etal.TypeⅠinterferon signature in systemic lupus erythematosus [J].Isr Med Assoc J,2014,16(4):246-249.

[4] Graham RR,Kyogoku C,Sigurdsson S,etal.Three functional variants of IFN regulatory factor 5(IRF5)define risk and protective haplotypes for human lupus[J].PNAS,2007,104:6758-6763.

[5] Radtke MA,Augustin M.Economic considerations in psoriasis management [J].Clin Dermatol,2008,26(5):424-431.

[6] Crispin JC，Liossis SN，Kis-Toth K,etal.Pamogenesis of human systmic lupus erythematosus：recent advances[J].Trends Molecular Med，2010，16(2)：47-57.

[7] Balasubramanian S,Ecker RL.Keratinocyte proliferation,differe-ntiation,and apoptosis-differential mechanisms of regulation by curcumin,EGCG and apigenin [J].Toxicol Appl Pharma Col,2007,224(3):214-219.

[8] Mavragani CP,Niewold TB,Chatzigeorgiou A，etal.Increased serum typeⅠinterferon activity in organ-specific autoimmune disorders:clinical,imaging,and serological associations[J].Front Immunol,2013,4:238.

[9] Bezalel S,Guri KM,Elbirt D,etal.TypeⅠinterferon signature in systemic lupus erythematosus[J].Isr Med Assoc J,2014,16(4):246-249.

[10] Artavanis-Tsakonas S,Rand MD,Lake RJ.Notch signaling:cell fate control and signal integrationb in development[J].Science,1999,284(5415):770-776.

[11] Riboldi P,Gerosa M,Moroni G,etal.Anti-DNA antibodies:a diagnostic agnostic and prognostic tool for systemic lupus erythematosus [J].Autoimmunity,2005,38(1)：39.

[12] 沈金花,呂 印,劉慶華.干擾素調(diào)節(jié)影子的研究進(jìn)展[J].中南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2014,33(2):41-44.

[13] 宋衛(wèi)青,李化會(huì),陳華波,等.IRF5 rs10954213基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2009，13(8):1082-1084.

[14] 張 鵬,陳日新,李存濤，等.IRF5基因多態(tài)性與中國漢族人系統(tǒng)性紅斑狼瘡表型的相關(guān)性[J].中國皮膚性病學(xué)雜志,2011，25(7):497-500.

[收稿2016-07-20 修回2016-10-17]

(編輯 許四平)

Study on associations between type Ⅰ interferon pathway IRF5 gene polymorp-hisms and SLE

LIHong-Mei,LIUShui-He,YEZhen-Xuan,ZHANGHua.

ClinicalLaboratory,GuizhouProvincePeople′sHospital，Guiyang550002，China

Objective:To investigate the IRF5 rs2004640，rs10954213,rs4728142 loci gene polymorphisms in the progress of Systemic lupus erythematosus(SLE),and explore the influence of the IRF5 gene polymorphisms to the SLE.Methods：218 patients with SLE and 200 health controls were analyzed by using TaqMan-PCR.And all allele frequencies were calculated.The risk factors were compared between cases and controls.At the same time,antinuclear antibodies and double-stranded DNA antibody of 218 SLE cases were analysed with indirect immunefluorescence method,specific autoantibodies in plasma spectrometry were determined using linear immunoassay in plasma.Results：T allele frequency of IRF5 rs2004640 loci in SLE was higher than the controls,allele frequency of the G/T distribution differences in two groups were statistically significant(χ2=6.809,P=0.009).The GG/TT genotype frequencies between the control and the SLE were statistically significant(χ2=5.111,5.035;P=0.024,0.025).Compared control group with SLE group,G allele frequency of IRF5 rs10954213 loci in SLE group was higher than the controls,the difference was statistically significant(χ2=4.332，P=0.037).And GG genotype distribution had significant difference in the two groups(χ2=5.805，P=0.016).SLE group AA/AG/GG genotype distribution of IRF5 rs4728142 loci,compared with control group,there were no statistically difference(χ2=1.273,0.902,1.853;P=0.259,0.342,0.173).And allele frequency A/G also were not statistically differences in two groups(χ2=2.651,P=0.104).The T allele frequency of IRF5 rs2004640 and autoantibodies(anti-Sm,anti-Rib-P)significant associations were found with SLE patient.There were no statistically significant difference between IRF5 rs10954213 with autoantibodies.Compared with SLE remission patients，ANA,ds-DNA increased obviously.Anti-NUC,anti-His,anti-Rib-P were higher,there were statistically significant differences betwen two groups.Conclusion：The GG/GT/TT polymorphism of IRF5 rs2004640,GG/GA/AA polymorphism of rs10954213 were related to SLE.But the GG/GA/AA polymorphism of IRF5 rs4728142 were not significant difference.IRF5 rs2004640 T comtributed to the anti-Sm,anti-Rib-P.In active SLE patients,anti-ds-DNA,anti-NUC,anti-His,anti-Rib-P were higher than the other group.

SLE;Ⅰtype interferon pathway;IRF;Gene polymorphism;ANA

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.04.020

李紅梅(1981年-)，女，碩士，主管技師，主要從事自身免疫性疾病致病機(jī)制的研究。

及指導(dǎo)教師：張 華(1970年-)，女，博士，主任技師，主要從事自身免疫病發(fā)病機(jī)制方面的研究。

R593.241 R394.112

A

1000-484X(2017)04-0574-06

①本文為貴州省科技廳國際合作項(xiàng)目(黔科合外G字[2012]7046號(hào))。

②貴州省人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，貴陽550002。