国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

梓樹根皮總黃酮分離純化及其抑菌活性研究

2017-04-12 10:20邵金華何福林
食品與機(jī)械 2017年2期
關(guān)鍵詞:梓樹樣液大孔

邵金華 何福林 陳 霞 謝 雨

(湖南科技學(xué)院湖南省銀杏工程技術(shù)研究中心湘南優(yōu)勢(shì)植物資源綜合利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南 永州 425199)

梓樹根皮總黃酮分離純化及其抑菌活性研究

邵金華 何福林 陳 霞 謝 雨

(湖南科技學(xué)院湖南省銀杏工程技術(shù)研究中心湘南優(yōu)勢(shì)植物資源綜合利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南 永州 425199)

以吸附率和解析率為評(píng)價(jià)指標(biāo),用大孔樹脂對(duì)梓樹根皮總黃酮的分離純化工藝進(jìn)行優(yōu)化,并研究純化后梓樹根皮總黃酮的抑菌活性。結(jié)果表明,梓樹根皮總黃酮分離純化最佳工藝條件為:采用NKA-II樹脂,上樣液質(zhì)量濃度0.538 mg/mL,上樣液流速1.66 mL/min,上樣液pH值4.01,洗脫劑乙醇濃度70%,洗脫流速2.5 mL/min。該條件下,梓樹根皮總黃酮純度為(77.43±0.23)%,吸附率為(93.36±0.25)%,解析率為(95.51±0.17)%。抑菌活性表明,梓樹根皮總黃酮對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌抑菌作用為極敏,對(duì)青霉菌、釀酒酵母菌抑菌作用為高敏;金黃色葡萄球菌的MIC值為(6.25±0.25) mg/mL;枯草芽孢桿菌、大腸桿菌MIC值為(12.50±0.36) mg/mL;釀酒酵母、青霉菌,MIC值為(25.00±0.27) mg/mL。

梓樹;根皮;黃酮;大孔吸附樹脂;分離純化;抗菌活性

梓樹 (CatalpaovataG.Don) 為紫葳科梓屬喬木植物,它的皮稱為梓皮、梓根白皮、梓白皮、土杜促、梓木白皮;樹皮的韌皮部 (名梓白皮) 或根皮可做藥用,嫩葉可食[1-2]。研究[3-6]發(fā)現(xiàn),梓樹果實(shí)、葉、莖皮、根皮等部位都含有大量活性成分,如環(huán)烯醚萜類、黃酮類、生物堿等。

黃酮類化合物在保健、醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用,是天然產(chǎn)物領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。黃酮類物質(zhì)常用的分離純化方法有金屬試劑絡(luò)合沉淀法[7]、雙水相萃取法[8]、柱層析法[9]、高效液相色譜法[10]、膜分離法[11]、薄層層析法[12]、大孔樹脂吸附法[13]等。與其它純化方法比較,大孔樹脂吸附法具有選擇性較好、理化性質(zhì)穩(wěn)定、機(jī)械強(qiáng)度高、不溶于酸、堿及有機(jī)溶劑、比表面積較大、易于再生、交換速度較快[14]等優(yōu)點(diǎn),因此,其在黃酮類物質(zhì)純化中被廣泛應(yīng)用,效果也較好??股氐臑E用,導(dǎo)致病原菌具有廣泛的耐藥性,新抗菌藥物的研發(fā)亟待解決。大量的文獻(xiàn)[15-17]表明,自然界從低等到高等植物各部分提取的黃酮類化合物都有較好的抑菌作用。

目前對(duì)梓樹根皮總黃酮的分離純化以及抗菌活性研究未見報(bào)道。本研究擬采用大孔樹脂吸附法對(duì)梓樹根皮中總黃酮進(jìn)行分離純化,以提高粗提取物中總黃酮的純度,并研究純化后梓樹根皮總黃酮的抑菌活性,旨在為其綜合利用以及開發(fā)具有保健功能的天然抗菌劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

1.1.1 試驗(yàn)材料

梓樹根皮:采自湖南省永州市祁陽(yáng)縣白水鎮(zhèn),將梓樹根皮用毛刷刷洗干凈,再用剪刀將其剪碎,然后放入真空干燥箱中烘干至恒重,最后用植物粉碎機(jī)將其粉碎,過100 目篩,室溫保存于實(shí)驗(yàn)室備用。

1.1.2 試劑

槲皮素、山奈酚,純度≥98%,上海源葉生物科技有限公司;

枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大腸桿菌(Escherichiacoli):中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所菌種保藏中心;

青霉菌(Penicilliumnotatum)、釀酒酵母菌 (Saccharomycescerevisiae):湖南科技學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室;

AB-8、NKA-II、X-5、D3520、D101、ADS-7大孔樹脂:天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所;

無(wú)水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、鹽酸、乙酸鉛、鎂粉、甲醇、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉等:分析純,上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑廠。

1.1.3 主要儀器

高效液相色譜:LC-20A型,日本島津制作所;

電子天平:JA3003型,上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司;

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:R201D-II型,鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)易有限公司;

酸度計(jì):PHS-802型,貴陽(yáng)學(xué)通儀器儀表有限公司;

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱:DHG-06型,武漢海聲達(dá)設(shè)備儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 總黃酮提取液的制備 稱取1 000 g梓樹根皮干粉,以料液比為1∶10(g/mL)加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇,回流提取3次,每次3 h,過濾,合并提取液,75 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后60 ℃真空干燥,備用。

1.2.2 梓樹根皮總黃酮含量的測(cè)定

(1) 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制:精密稱取槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品3.7 mg,山奈酚標(biāo)準(zhǔn)品5.4 mg,加80%甲醇溶解并用容量瓶定容至50 mL,搖勻,即得混合標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。

(2) 色譜條件:島津LC-20A型高效液相色譜;Shimadzu C18色譜柱(4.6 μm×250 mm,5 μm);以體積比為1∶1的甲醇—0.4%磷酸為流動(dòng)相;檢測(cè)器紫外波長(zhǎng)為360 nm;進(jìn)樣量10~20 μL;流速1.0 mL/min;柱溫箱40 ℃。

(3) 總黃酮測(cè)定:根據(jù)文獻(xiàn)[18]的方法,將總黃酮苷水解成為槲皮素和山奈酚,使用 HPLC 測(cè)定槲皮素和山奈酚的含量,根據(jù)式(1)計(jì)算總黃酮醇苷的含量。

m總=(m1×1.65+m2×1.74),

(1)

式中:

m總——總黃酮苷含量,mg/L;

m1——槲皮素含量,mg/L;

m2——山奈酚含量,mg/L。

1.2.3 靜態(tài)吸附試驗(yàn) 將大孔吸附樹脂AB-8、NKA-II、X-5、D3520、D101、ADS-7用乙醇浸泡24 h,然后用乙醇繼續(xù)洗滌至洗滌液加水稀釋不渾濁,用蒸餾水洗至無(wú)醇味后抽濾。精確稱取大孔樹脂各2.0 g置于干燥錐形瓶中,各加入總黃酮濃度為0.489 1 mg/mL的提取液20 mL,置于25 ℃恒溫?fù)u床進(jìn)行靜態(tài)吸附,直至吸附平衡(10 h)。吸附后,按照1.2.2方法測(cè)定溶液中總黃酮含量。分別對(duì)各吸附后的樹脂進(jìn)行抽濾,并用蒸餾水洗滌3次,然后用70%乙醇溶液(35 mL)于25 ℃恒溫?fù)u床解析10 h,按照1.2.2方法測(cè)定溶液中總黃酮含量。分別計(jì)算靜態(tài)吸附時(shí)每種大孔樹脂的吸附量和解析率。

(2)

(3)

式中:

Q——樹脂吸附量,mg/g·干樹脂;

Mr——濕樹脂質(zhì)量,g;

a——樹脂含水率,%;

M——吸附前溶液中總黃酮質(zhì)量,mg;

Md——吸附后溶液的總黃酮質(zhì)量,mg;

W解——樹脂解析率,%;

Me——洗脫液中總黃酮質(zhì)量,mg。

1.2.4 大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn) 將預(yù)處理后的大孔樹脂抽濾,準(zhǔn)確稱取樹脂各15.00 g,用蒸餾水濕法裝柱。將35 mL總黃酮濃度為0.538 mg/mL的吸附液加入層析柱,流速為1 BV/h,上樣后,先用1 BV水洗,然后用70%乙醇溶液洗脫3 BV,收集洗脫液,65 ℃真空干燥成粉末狀,按照1.2.2方法測(cè)定其中總黃酮含量。分別計(jì)算解析率、吸附率和純度。

(4)

(5)

式中:

W吸——樹脂吸附率,%;

M——上樣液中總黃酮,mg;

Md——流出液中總黃酮,mg;

P——總黃酮純度,%;

Me——洗脫液蒸干后測(cè)定總黃酮質(zhì)量,mg;

M烘干——溶液烘干后質(zhì)量,mg。

1.2.5 NKA-II大孔樹脂純化梓樹根皮總黃酮條件的研究

(1) 上樣液濃度:將預(yù)處理后的大孔樹脂抽濾,準(zhǔn)確稱取樹脂各15.00 g,用蒸餾水濕法裝柱。將35 mL總黃酮濃度分別為0.302,0.538,0.893,1.285,1.594 mg/mL的吸附液加入層析柱,流速為1 BV/h,上樣后,先用1 BV水洗,然后用70%乙醇溶液洗脫3 BV,收集洗脫液,65 ℃真空干燥成粉末狀,按照1.2.2方法測(cè)定其中總黃酮含量,并計(jì)算各自的吸附率,以確定最佳上樣液濃度。

(2) 上樣液pH值:將預(yù)處理后的大孔樹脂抽濾,準(zhǔn)確稱取樹脂各15.00 g,用蒸餾水濕法裝柱。將35 mL總黃酮濃度為0.538 mg/mL、不同pH(3.04,4.01,5.08,6.05,7.09)的吸附液加入層析柱,流速為1.5 mL/min,上樣后,先用1 BV水洗,然后用70%乙醇溶液洗脫3 BV,收集洗脫液,65 ℃真空干燥成粉末狀,按照1.2.2方法測(cè)定其中總黃酮含量,并計(jì)算各自的吸附率,以確定最佳pH。

(3) 上樣液流速:將預(yù)處理后的大孔樹脂抽濾,準(zhǔn)確稱取樹脂各15.00 g,用蒸餾水濕法裝柱。將35 mL總黃酮濃度為0.538 mg/mL、pH 4.01的吸附液加入層析柱,流速分別為1.38,1.66,1.90,2.18,2.40 mL/min,上樣后,先用1 BV水洗,然后分別用70%乙醇水溶液洗脫3 BV,收集洗脫液,65 ℃ 真空干燥成粉末狀,按照1.2.2方法測(cè)定其中總黃酮含量,并計(jì)算各自的吸附率,以確定最佳洗脫液濃度。

(4) 洗脫劑濃度:將預(yù)處理后的大孔樹脂抽濾,準(zhǔn)確稱取樹脂各15.00 g,用蒸餾水濕法裝柱。將35 mL總黃酮濃度為0.538 mg/mL、pH 4.01的吸附液加入層析柱,流速為1.66 mL/min,上樣后,先用1 BV水洗,然后分別用40%,50%,60%,70%,80%乙醇水溶液洗脫3 BV,收集洗脫液,65 ℃真空干燥成粉末狀,按照1.2.2方法測(cè)定其中總黃酮含量,并計(jì)算各自的解析率,以確定最佳洗脫液濃度。

(5) 洗脫劑流速:將預(yù)處理后的大孔樹脂抽濾,準(zhǔn)確稱取樹脂各15.00 g,用蒸餾水濕法裝柱。將35 mL總黃酮濃度為0.538 mg/mL、pH 4.01的吸附液加入層析柱,上樣流速為1.66 mL/min,先用1 BV水洗,然后分別用70%乙醇水溶液洗脫3 BV,洗脫液流速分別為1.6,1.9,2.2,2.5,2.8 mL/min 收集洗脫液,65 ℃真空干燥成粉末狀,按照1.2.2 方法測(cè)定其中總黃酮含量,并計(jì)算各自的解析率,以確定最佳洗脫液濃度。

1.2.6 NKA-II大孔樹脂最佳條件分離純化梓樹根皮總黃酮

NKA-II大孔樹脂15.00 g,用蒸餾水濕法裝柱,按照最佳吸附和洗脫條件,對(duì)梓樹根皮總黃酮進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附,收集洗脫液,65 ℃真空干燥成粉末狀,按照1.2.2方法測(cè)定其中總黃酮含量,計(jì)算解析率、吸附率和純度。

1.2.7 梓樹根皮總黃酮進(jìn)一步純化 取NKA-II大孔樹脂純化后的樣品2 g(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、烘干后),一定量甲醇溶解,用100~200目硅膠混勻,通風(fēng)櫥揮干(備用)。稱取60 g硅膠,干法裝柱,裝于1.6 cm×400.0 mm層析柱中,干法上樣,分別用體積比為10∶1,9∶1,8∶1,7∶1,6∶1,5∶1,4∶1,3∶1,2∶1,1∶1的氯仿—甲醇溶液及純甲醇進(jìn)行梯度洗脫,收集各部分洗脫液,高效液相測(cè)定其含量,合并含總黃酮高的流分,稍微濃縮,放置析晶,再重復(fù)一次硅膠柱層析,合并總黃酮含量高流分,析晶,即得到較高純度總黃酮。按照1.2.2方法測(cè)定其中總黃酮含量,經(jīng)計(jì)算,總黃酮純度達(dá)到(89.59±0.19)%。

1.2.8 梓樹根皮總黃酮抗菌活性測(cè)定 將硅膠柱純化后梓樹根皮總黃酮用75%乙醇配制成8.25 mg/mL溶液備用。采用紙片擴(kuò)散法[19]測(cè)定其抑菌圈直徑;最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定方法參照文獻(xiàn)[20]進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 大孔樹脂對(duì)總黃酮靜態(tài)吸附

由表1可知,6種樹脂中對(duì)總黃酮的吸附效量最大的為ADS-7,其次為NKA-Ⅱ;解析率最大的為NKA-Ⅱ,最小為ADS-7;綜合考慮,靜態(tài)吸附選擇NKA-Ⅱ。

表1 不同類型大孔樹脂靜態(tài)吸附對(duì)總黃酮吸附量和解析率Table 1 Adsorption and analytical results of different types of macroporous resin

2.2 大孔樹脂對(duì)總黃酮?jiǎng)討B(tài)吸附

為了更全面研究各種大孔樹脂對(duì)總黃酮的吸附性能,將6種大孔樹脂都進(jìn)行了動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn),結(jié)果見表2。由表2可知,6種大孔樹脂對(duì)梓樹根皮總黃酮都有不同程度純化效果,其中NKA-Ⅱ純化效果最好,經(jīng)NKA-Ⅱ純化后,總黃酮純度由原來(lái)的14.16%提高到54.26%,吸附率為89.37%,解析率為90.16%。最終確定用NKA-Ⅱ大孔樹脂對(duì)梓樹根皮總黃酮進(jìn)行分離純化。

2.3 NKA-Ⅱ純化梓樹根皮總黃酮條件研究

2.3.1 上樣液濃度 由圖1可知,上樣液濃度在0.302~0.538 mg/mL時(shí),隨著樣品溶液濃度的增大,對(duì)總黃酮的吸附率增大;當(dāng)上樣液濃度為0.538 mg/mL時(shí),總黃酮吸附率達(dá)到最大值,為(93.6±0.23)%;上樣液濃度在0.538~1.594 mg/mL時(shí),樹脂吸附率隨樣品溶液濃度的增大而減小??赡苁巧蠘右簼舛冗^大時(shí)會(huì)發(fā)生絮凝和沉淀,造成樹脂堵塞使吸附率降低;濃度過低時(shí),吸附率不高又容易造成樹脂的浪費(fèi)[21]。所以確定0.538 mg/mL為最佳上樣液濃度。

表2 動(dòng)態(tài)吸附中大孔樹脂對(duì)黃酮吸附率、解析率及純化效果

Table 2 Adsorption rate, desorption rate and purification effect of macroporous resin in dynamic adsorption %

樹脂類型上柱前黃酮純度上柱后黃酮純度吸附率解析率AB-814.16±0.3143.27±0.3179.52±0.2886.19±0.23ADS-714.16±0.3135.60±0.1691.05±0.3248.62±0.36D10114.16±0.3149.55±0.2781.13±0.2477.35±0.27D352014.16±0.3131.51±0.3367.97±0.2963.52±0.31NKA-Ⅱ14.16±0.3154.26±0.3689.37±0.3190.16±0.33X-514.16±0.3129.59±0.3275.38±0.1981.65±0.25

不同字母表示組間差異顯著

Figure 1 Effect of different sample solution concentration on the adsorption rate of flavonoids

2.3.2 上樣液pH值 由圖2可知,樣品溶液在pH 3.04~4.01時(shí),隨著pH值的增大,黃酮的吸附率增大;在pH 4.01時(shí)黃酮吸附率達(dá)到峰值,為(92.5±0.22)%;在pH 4.01~7.09時(shí),黃酮吸附率隨著pH值的增大而減小。根據(jù)李淑珍等[22]的研究,一般情況下,酸性化合物在酸性條件下更容易被吸附,堿性化合物在堿性條件下更容易被吸附,而黃酮類化合物具有酚羥基結(jié)構(gòu),呈現(xiàn)一定的酸性,它在弱酸條件下以分子狀態(tài)存在,可以憑借范德華力和樹脂發(fā)生吸附作用,但溶液酸性太強(qiáng)時(shí)會(huì)有少量沉淀析出,因此確定最佳pH值為4.01。

不同字母表示組間差異顯著

Figure 2 Effect of different sample solution pH on the adsorption rate of flavonoids

2.3.3 上樣液流速 由圖3可知,上樣液流速在1.38~1.66 mL/min時(shí),隨著流速的增大,黃酮的吸附率增大;當(dāng)流速為1.66 mL/min時(shí),黃酮吸附率達(dá)到最大值,為(91.59±0.35)%,當(dāng)流速在1.66~2.4 mL/min時(shí),隨著流速的增大,黃酮吸附率減小。趙玉芬等[23]研究表明,流速過低時(shí)溶液與樹脂的接觸時(shí)間雖長(zhǎng),但也會(huì)提高解吸率,適當(dāng)增大流速可使吸附率提高,而流速過高時(shí)溶液與樹脂的接觸時(shí)間太短,有效成分不能完全吸附在樹脂上,從而導(dǎo)致黃酮的泄漏量增加,吸附率降低。因此確定1.66 mL/min為最佳上樣流速。

2.3.4 洗脫劑濃度 由圖4可知,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為40%~70%時(shí),隨乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大解析率增大;當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%時(shí),解吸率達(dá)到最大值,為(95.46±0.26)%;當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%~80%時(shí),隨乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大解吸率下降。乙醇體積分?jǐn)?shù)過低時(shí),解吸量較低,不能將吸附的黃酮完全解吸,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%時(shí)解吸率最高,根據(jù)相似相溶原理可能是梓樹根皮中黃酮的極性和70%乙醇極性相似[24],因此選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%。

不同字母表示組間差異顯著

不同字母表示組間差異顯著

2.3.5 洗脫劑流速 由圖5可知,流速在1.6~2.5 mL/min時(shí),黃酮解析率逐漸增大;流速為2.5 mL/min時(shí),黃酮的解析率達(dá)到最高??赡苁禽^低流速下洗脫劑能較充分地進(jìn)入樹脂空隙中將吸附在樹脂表面上的黃酮溶解洗脫下來(lái),而過高的流速使得洗脫劑尚未充分進(jìn)入樹脂空隙中就流出了樹脂柱,造成黃酮類化合物未能被充分解吸[25]。因此選擇洗脫液流速為2.5 mL/min。

2.4 NKA-Ⅱ大孔樹脂最佳條件分離純化梓樹根皮總黃酮

NKA-Ⅱ大孔樹脂在最優(yōu)條件下對(duì)總黃酮進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附3次,平均吸附率為(93.36±0.25)%,解析率為(95.51±0.17)%,總黃酮純度為(77.43±0.23)%。標(biāo)準(zhǔn)品、梓樹根皮總黃酮上柱前以及二次純化后HPLC圖見圖6~8。由圖6~8可知,大孔樹脂純化效果明顯。

不同字母表示組間差異顯著

圖6 槲皮素和山奈酚標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC圖譜

Figure 6 The High Performance Liquid Chromatography of quercetin and kaempferol standard

圖7 上柱前樣品的HPLC圖譜

Figure 7 High Performance Liquid Chromatography spectra of pre column samples

圖8 二次純化后樣品的HPLC圖譜Figure 8 High Performance Liquid Chromatography map of two purified samples

2.5 硅膠柱純化后梓樹根皮總黃酮抗菌試驗(yàn)

抑菌能力的強(qiáng)弱可以用抑菌圈直徑大小表示,抑菌能力越強(qiáng)直徑越大。以硅膠柱純化后梓樹根皮總黃酮進(jìn)行抑菌試驗(yàn),濃度為(8.25±0.15) mg/mL。由表3可知,其對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌能力最強(qiáng),枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、釀酒酵母、青霉菌次之。根據(jù)藥敏試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn),直徑20 mm以上為極敏;15~20 mm為高敏;10~14 mm為中敏;10 mm以下為低敏;0 mm為不敏[26]。梓樹根皮總黃酮對(duì)細(xì)菌抑菌作用屬于極度敏感,對(duì)真菌屬于高度敏感。其對(duì)各供試菌種的MIC進(jìn)行測(cè)定,金黃色葡萄球菌的MIC值最低,為(6.25±0.25) mg/mL;枯草芽孢桿菌、大腸桿菌MIC值為(12.50±0.36) mg/mL;釀酒酵母、青霉菌MIC值為(25.00±0.27) mg/mL。

表3 梓樹根皮總黃酮抑菌圈直徑以及MICTable 3 Antibacterial activity of total flavonoids fromCatalpa tree roots in vitro

3 結(jié)論

本試驗(yàn)以吸附率和解吸率為評(píng)價(jià)指標(biāo),用大孔樹脂對(duì)梓樹根皮總黃酮的分離純化工藝進(jìn)行優(yōu)化,并對(duì)純化后梓樹根皮總黃酮的抑菌活性進(jìn)行研究。結(jié)果表明,梓樹根皮總黃酮分離純化最佳工藝條件為NKA-II樹脂,上樣液質(zhì)量濃度0.538 mg/mL,上樣液流速1.66 mL/min,上樣液pH值4.01,洗脫劑乙醇的濃度70%,洗脫流速2.5 mL/min。此條件下,梓樹根皮總黃酮純度為(77.43±0.23)%,吸附率為(93.36±0.25)%,解析率為(95.51±0.17)%。梓樹根皮總黃酮對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌抑菌作用為極敏,對(duì)青霉菌、釀酒酵母菌抑菌作用為高敏;金黃色葡萄球菌的MIC值為(6.25±0.25) mg/mL;枯草芽孢桿菌、大腸桿菌MIC值為(12.50±0.36) mg/mL;釀酒酵母、青霉菌,MIC值為(25.00±0.27) mg/mL。

本研究結(jié)果表明,梓樹根皮總黃酮對(duì)細(xì)菌、真菌都有較好的抑菌作用,后續(xù)可對(duì)其結(jié)構(gòu)、活性作用方式、構(gòu)效關(guān)系、作用機(jī)制等進(jìn)行研究,以更好地為天然抗菌藥物的研發(fā)提供理論依據(jù)。

[1] 新疆維吾爾自治區(qū)革命委員會(huì)衛(wèi)生局. 新疆中草藥[M]. 烏魯木齊: 新疆人民出版社,1975: 318.

[2] 王奇志, 梁敬鈺. 梓屬植物化學(xué)成分研究進(jìn)展[J]. 中草藥, 2003, 34(27): 2-4.

[3] AN S J, PAE H O, OH G S, et al. Inhibition of TNF-a, IL-β, and IL-6 productions and NF-kB activation in lipopolysaccharide-activated RAW macrophages by catalposide,an iridoid glycoside isolated from Catalpa ovata G.Don (Bignoniaceae) [J]. Internetional Immunopharacology, 2002(2): 1 173-1 181.

[4] PAE H O, OH G S, CHOU B M, et al. Inhibitory effects of the sterm bark of Catalpa ovata G.Don. (Bignoniaceae) onthe productions of tumor necrosis factor-a and nitric oxide by the lipopolisaccharide-stimulated RAW macrophages[J]. Journal of Ethnopharmacology, 2003(88): 287-291.

[5] 陳龍, 景丹龍, 王軍輝. 6個(gè)不同種源梓樹葉片的總酚含量和抗氧化性能的比較[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào), 2015, 30(6): 222-226.

[6] 邵金華, 李軍艷, 劉歡, 等.梓樹根皮有效成分的初步研究[J]. 湖南科技學(xué)院學(xué)報(bào), 2014, 35(10): 46-49.

[7] 張靜, 張曉鳴, 佟建明, 等. 金屬絡(luò)合法純化銀杏黃酮的研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2010, 22(5): 751-754, 756.

[8] 陳叢瑾, 屈麗娟, 陳東. 雙水相萃取法分離純化黃酮類化合物的研究進(jìn)展[J]. 應(yīng)用化工, 2010, 39(10): 1 587-1 590.

[9] 陳叢瑾. 柱色譜法分離純化黃酮類化合物研究進(jìn)展[J]. 西北藥學(xué)雜志, 2011, 26(2): 150-153.

[10] CHEN Ming-lei, HU Wei, ZHANG Chao, et al. High performance liquid chromatography for the determination of flavonolids[J]. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 2011(20): 313-324.

[11] 許浮萍, 梁志家, 田娟娟. 應(yīng)用膜分離結(jié)合醇沉法純化大豆異黃酮[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(16): 78-82.

[12] 李升鋒, 徐玉娟, 陳智毅, 等. 微乳薄層層析法分離桑葉中的黃酮類化合物[J]. 食品科學(xué), 2008, 29(6): 87-89.

[13] 鐘方麗, 王曉林, 王志敏, 等. 大孔吸附樹脂純化玉竹總黃酮工藝研究[J]. 食品與機(jī)械, 2013, 29(1): 131-134.

[14] 羅艷玲, 歐仕益. 大孔樹脂在食品活性成分分離中的應(yīng)用[J]. 食品與機(jī)械, 2005, 21(5): 81-83.

[15] 遲曉喆, 曹光群. 桑葉總黃酮的提取及其抑菌活性研究[J]. 林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè), 2012, 32(2): 163-166.

[16] 陳乃東, 周守標(biāo), 羅琦, 等. 不同提取劑對(duì)春花胡枝子黃酮含量及抑菌活性影響的研[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2007, 17(2): 193-196.

[17] 李國(guó)章, 于華忠, 卜曉英, 等. 桑椹籽中黃酮的CO2超臨界流體萃取及抑菌作用研究[J]. 現(xiàn)代食品科技, 2006, 22(2): 86-88.

[18] 任萍, 王齊偉, 武彩露, 等. 大孔吸附樹脂對(duì)羅布麻葉中總黃酮的純化研究[J]. 離子交換與吸附, 2016, 32(2): 141-153

[19] 薩茹麗, 木其爾, 王翠芳, 等. 沙蔥總黃酮提取工藝優(yōu)化及其體外抗氧化、抗菌作用[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(24): 1-8.

[20] 張婷婷, 郭夏麗, 黃學(xué)勇, 等. 辛夷揮發(fā)油GC-MS分析及其抗氧化、抗菌活性[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(10): 144-150.

[21] 王國(guó)軍, 唐輝, 張淑蘭, 等. 大孔樹脂純化核桃隔膜總黃酮的工藝研究[J]. 中草藥, 2013, 44(19): 2 688-2 692.

[22] 李淑珍, 李進(jìn), 楊志江, 等. 大孔樹脂分離純化黑果枸杞總黃酮的研究[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(1): 19-24.

[23] 趙玉芬, 李佩艷, 鄭小林, 等. 大孔樹脂對(duì)紅薯葉總黃酮的吸附及解吸特性研究[J]. 生物技術(shù)進(jìn)展, 2013, 6(3): 433-438.

[24] 陳麗娜, 吳瓊, 高長(zhǎng)城. 大孔樹脂分離純化沙棘籽及果皮渣黃酮的工藝研究[J]. 農(nóng)業(yè)機(jī)械, 2012(6): 146-148.

[25] 董江濤, 李燕, 徐慧強(qiáng), 等. 大孔樹脂純化柿葉總黃酮的工藝研究[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010(11): 85-89.

[26] 李國(guó)旺, 苗志國(guó), 趙恒章. 大黃的體外抑菌實(shí)驗(yàn)[J]. 光譜實(shí)驗(yàn)室, 2011, 28(1): 66-68.

Separation,purification and antibacterial activity of total flavonoids fromCatalparoot bark

SHAO Jin-huaHEFu-linCHENXiaXIEYu

(HunanUniversityofScienceandTechnology,EngineeringTechnologyResearchCenteronGinkgoofHunan,KeyLaboratoryofComprehensiveUtilizationofAdvantagePlantsResourcesinHunanSouth,Yongzhou,Hunan425100,China)

Taking the adsorption rate and desorption rate as the evaluation indexes, macroporous resin was adopted to optimize the separation and purification technology of total flavonoids fromCatalparoot bark, and the antibacterial activity of the purified total flavonoids fromCatalparoot bark was investigated. The results indicated that the optimal technological conditions for the separation and purification of total flavonoids fromCatalparoot bark were as follows: application of NKA-II resin; mass concentration, flow rate and pH value of loading buffer of 0.538 mg/mL, 1.66 mL/min and 4.01, respectively; concentration of eluant ethyl alcohol of 70%; and elution flow rate of 2.5 mL/min. Under such conditions, the purity, adsorption rate and desorption rate of total flavonoids fromCatalparoot bark were (77.43±0.23)%, (93.36±0.25)% and (95.51±0.17)%, respectively. Antibacterial activity indicated that total flavonoids fromCatalparoot bark had extremely sensitive antibacterial activity toEscherichiacoli,Bacillussubtilis, andStaphylococcusaureus; and high antibacterial sensitivity to penicillium andSaccharomycescerevisiae. MIC values ofS.aureus,BacillussubtilisandE.coli, as well asS.cerevisiaeand penicillium were (6.25±0.25) mg/mL, (12.50±0.36) mg/mL and (25.00±0.27) mg/mL, respectively.

Catalparoot bark; flavonoid; macroporous resin; separation and purification; antibacterial activity

湖南省教育廳重點(diǎn)課題(編號(hào):16A083)

邵金華,女,湖南科技學(xué)院高級(jí)實(shí)驗(yàn)師,哈爾濱商業(yè)大學(xué)在讀博士研究生。

何福林(1967—),男,湖南科技學(xué)院教授,碩士。 E-mail:-2339695475@qq.com

2016—12—26

10.13652/j.issn.1003-5788.2017.02.030

猜你喜歡
梓樹樣液大孔
梓樹尋訪記
不同預(yù)處理方法對(duì)新疆梓樹果實(shí)脫膠效果的影響
大孔ZIF-67及其超薄衍生物的光催化CO2還原研究
蘇州城里的梓樹
羽絨清潔度檢測(cè)方法的研究
大孔吸附樹脂純化決明子總蒽醌工藝
大孔鏜刀的設(shè)計(jì)
石莼多糖及其脫蛋白與降解產(chǎn)物的相關(guān)性能
鑒別
意外之后的意外
三河市| 邵阳县| 神木县| 阜康市| 焦作市| 涟水县| 南江县| 浦江县| 当雄县| 阿荣旗| 福清市| 廉江市| 沙田区| 临江市| 信丰县| 遵义市| 阜新| 乌兰察布市| 毕节市| 玉树县| 合江县| 罗山县| 淮北市| 龙井市| 南汇区| 和田县| 六盘水市| 西畴县| 芜湖市| 香格里拉县| 岳西县| 巧家县| 蚌埠市| 独山县| 克东县| 鄂州市| 基隆市| 阿城市| 和顺县| 阿勒泰市| 武穴市|