朱　麗，何　嵐

(西安交通大學第一附屬醫(yī)院風濕免疫科， 西安 710061)

B細胞為多效性細胞，傳統(tǒng)認為，B細胞主要通過產(chǎn)生抗體及遞呈抗原在免疫相關(guān)性疾病中發(fā)揮致病效應。但是新近的研究發(fā)現(xiàn)，B細胞可以產(chǎn)生多種細胞因子，其中產(chǎn)生白細胞介素10(interleukin 10，IL- 10)的B細胞能夠抑制炎癥反應，從而在自身免疫中發(fā)揮負向調(diào)節(jié)功能，這種特殊的B細胞亞群被命名為調(diào)節(jié)性B細胞(regulatory B cells, Bregs)。深入研究Bregs及其在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus, SLE)中發(fā)揮功能的作用機制，有助于了解B細胞亞群的功能，為探索SLE新的治療策略提供依據(jù)，本文就Bregs的來源、表型、功能及其在SLE中的研究進展作一綜述。

Bregs的發(fā)現(xiàn)

早在1974年，Katz等[1]就發(fā)現(xiàn)清除掉B細胞的脾臟細胞移植進入天竺鼠體內(nèi)后，這些脾臟細胞不再能阻礙遲發(fā)型高敏反應癥(delayed-type hypersensitivity，DTH)的皮膚反應，這項研究首次提出了B細胞在免疫反應中具有抑制免疫應答的作用，同時發(fā)現(xiàn)，DTH的皮膚反應發(fā)生于抗體產(chǎn)生之前，進一步說明B細胞的抑制功能并非由抑制性抗體發(fā)揮；2002年，Mizoguchi等[2]通過腸炎模型，發(fā)現(xiàn)了一種能夠產(chǎn)生IL- 10的B細胞亞群，這種細胞亞群通過下調(diào)促炎因子IL- 1及阻止信號轉(zhuǎn)導子和轉(zhuǎn)錄活化子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)的活化阻止腸道炎癥的進展；Mizoguchi和Bhan[3]于2006年將這群具有負向調(diào)節(jié)功能的B細胞命名為“調(diào)節(jié)性B細胞”。隨后，在SLE、實驗性自身反應性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)、接觸性過敏性皮炎(allergic contact dermatitis，ACD)和膠原誘導性關(guān)節(jié)炎(collagen induced arthritis，CIA)等免疫相關(guān)性疾病中均發(fā)現(xiàn)了Bregs的存在。

Bregs的表型

目前對Bregs表型的確定尚存在爭議，不同的研究中確定的Bregs表型不同。目前在動物和人類研究中的表型見表1。Saraiva和O’Garra[11]發(fā)現(xiàn)在野生鼠和人類CD19轉(zhuǎn)基因(human CD19 transgenic，hCD19Tg)鼠脾臟中分泌IL- 10的B細胞主要為表型為CD5+CD19hi的B- 1a細胞，且這些B細胞還高表達CD1d。在人類的CD19+IL- 10+B細胞也表達高水平的CD1d，Blair等[7]發(fā)現(xiàn)表型為CD19+CD24hiCD38hiB細胞中含有豐富的IL- 10+B細胞。而Iwata等[12]通過表型篩選發(fā)現(xiàn)，無論在健康對照還是患有自身免疫性疾病的患者體內(nèi)表型為CD19+CD24hiCD27+的B細胞中IL- 10+B細胞所占的比例均最多。

目前還未發(fā)現(xiàn)Bregs的獨特表型，在B細胞發(fā)育的各個階段都存在能夠產(chǎn)生IL- 10的細胞亞群，其表達不同的表型。對Bregs表型的確定還有待進一步研究。

Bregs的功能

Bregs主要通過分泌IL- 10、白細胞介素35(interleukin 35，IL- 35)及轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factor β,TGF-β)發(fā)揮抗炎功能。IL- 10的抗炎作用由多種機制介導，其在先天性免疫和獲得性免疫中均發(fā)揮重要作用。

在先天性免疫中的作用

Gu等[13]發(fā)現(xiàn) IL- 10能夠下調(diào)促炎因子如γ-干擾素(interferon-γ,IFN-γ)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、IL- 17等的產(chǎn)生；隨后的研究發(fā)現(xiàn)IL- 10降低主要組織相容性復合體(major histocompatibility complex Ⅱ,MHC Ⅱ)分子和共刺激分子表達[11]；并抑制樹突狀細胞(dendrtic cells,DCs)遞呈抗原[14]。另外，由DCs產(chǎn)生的IL- 10對于維持Foxp3的表達和調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cell,Tregs)的功能非常重要[14- 15]。

表1　人及動物外周血中調(diào)節(jié)性B細胞亞群的表型Table 1　Phenotype of Breg subsets in peripheral blood of human and animal

IL- 10：白細胞介素10；TGF-β：轉(zhuǎn)化生長因子β；Tregs：調(diào)節(jié)性T細胞; CTLA- 4:細胞毒T淋巴細胞相關(guān)抗原4

在獲得性免疫中的作用

IL- 10改變CD4+T細胞的分化。Ding等[16]發(fā)現(xiàn)IL- 10能夠抑制Th0細胞向Th1分化而促進其向Th2分化，從而影響Th1/Th2細胞平衡。共培養(yǎng)鼠CD1dhiCD5+B細胞和原始CD4+T細胞后，CD4+T細胞向Th17細胞的分化減少[13]。在人類的研究中發(fā)現(xiàn)，表型為CD19+CD24hiCD27+的B細胞通過分泌IL- 10阻礙單核細胞產(chǎn)生TNF-α[12]。此外，Bregs還能夠影響Tregs的形成。Tadmor等[17]發(fā)現(xiàn)和野生鼠相比，缺乏CD19+B細胞的μMT鼠的Tregs的數(shù)目明顯下降，且患有EAE的鼠病情明顯加重，由此提出B細胞具有維持Tregs穩(wěn)定的作用。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，T2-MZP Bregs可通過誘導CD4+CD25+Foxp3+Tregs在肺部的浸潤，從而控制過敏性氣道炎癥，抑制鼠的過敏反應及氣道高反應性[18]。

Bregs和SLE

Bregs在SLE動物模型中的研究

Bregs首次在Palmerston north鼠中發(fā)現(xiàn)，將鼠B細胞經(jīng)過CpG刺激后產(chǎn)生IL- 10的水平明顯增加。對SLE的兩種鼠模型NZB/W F1 和MRL/lpr進行研究發(fā)現(xiàn)，在NZB/W F1鼠12～14周時，用單克隆抗體CD20單抗清除成熟B細胞能夠延長NZB/W F1鼠的存活時間，并增加鼠的總體存活率；但是，在NZB/W F1 SLE鼠第4周時，用CD20單克隆抗體消耗B細胞會導致該鼠存活率的下降，同時還導致Tregs水平的下降[19]。這說明B細胞除了產(chǎn)生致病作用外，還存在保護效應。

為了進一步探究具有保護效應的B細胞在SLE中的作用，比較NZB/W F1野生鼠和CD19-/-NZB/W F1鼠的患病情況，發(fā)現(xiàn)CD19-/-NZB/W F1鼠的蛋白尿增加，腎小球性腎炎增加，同時生存率下降，同時比較CD19-/-NZB/W F1鼠和NZB/W F1野生鼠中的Bregs的數(shù)目，發(fā)現(xiàn)CD19-/-NZB/W F1鼠中Bregs數(shù)目明顯減少，且表現(xiàn)在表型CD1dhiCD5+的Bregs的缺失[14]。而將野生型NZB/W F1鼠的脾臟CD1dhiCD5+B細胞轉(zhuǎn)入CD19-/-NZB/W F1鼠中后會導致其病情好轉(zhuǎn)，同時Tregs的比例增加[20]，Bregs部分通過促進Treg生成發(fā)揮抑炎作用，這為SLE的治療提供新的提示，體外擴增Bregs并將其導入患者體內(nèi)可改善病情。

Bregs在人類SLE患者中的研究

SLE患者體內(nèi)Bregs功能及變化：Blair等[7]發(fā)現(xiàn)在人類SLE患者的外周血中表型為CD19+CD24hiCD38hiB細胞具有免疫調(diào)節(jié)功能，在健康人群中，經(jīng)CD40刺激后，CD19+CD24hiCD38hiBregs能夠抑制CD4+T細胞促炎因子如IFN-γ、TNF-α的釋放；同樣的研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過金黃色葡萄球菌cowan 1株(staphylococcus aureus cowan 1，SAC)刺激后活化的Bregs(CD19+FSChiB細胞)能夠促進Th細胞的失能和壞死。SLE和健康對照的研究中發(fā)現(xiàn)，SLE患者中的CD19+CD24hiCD38hiBregs比例低于健康對照[21]，同時發(fā)現(xiàn)SLE患者外周血中的Bregs并不能抑制CD4+T細胞促炎因子的釋放；進一步研究發(fā)現(xiàn)這些細胞可能對CD40的刺激產(chǎn)生抵抗，從而產(chǎn)生更少的IL- 10，以至于其負向免疫調(diào)節(jié)功能受損；但在有腎臟受累的患者中，分泌IL- 10的Bregs水平顯著下降，并和疾病活動度無相關(guān)性[22]。

Yanaba等[20]在SLE患者中發(fā)現(xiàn)，CD40刺激后并不能導致 STAT的磷酸化，從而導致基因轉(zhuǎn)錄翻譯受損，以至于Bregs的分化擴增受影響。但對于不同表型的Bregs在SLE中功能及數(shù)量的變化還存在爭議，Yang等[23]研究發(fā)現(xiàn)SLE患者中表型為CD19+CD5+CD1dhi的Bregs的功能并未受損，且和健康對照相比，SLE患者中的CD19+CD5+CD1dhiBregs數(shù)目明顯增加，在活動性SLE患者中的比例高于非活動性SLE患者。

除了以上兩種Bregs亞群，還有研究發(fā)現(xiàn)初發(fā)未治療SLE患者外周血中 CD19+CD24hiCD27+Bregs水平明顯下降，且和SLE患者的疾病活動度指數(shù)(systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)呈反比；而經(jīng)過1年的激素及緩解疾病的抗風濕性藥物作用后，CD19+CD24hiCD27+Bregs的數(shù)目明顯增加[8]。

SLE患者Bregs和漿細胞樣樹突狀細胞(plasmacytoid dendritic cells,pDCs)間存在相互作用，pDCs為重要的抗原遞呈細胞，以分泌Ⅰ型IFN及介導獲得性免疫應答為主要特征。除此以外，pDCs還能夠擴增Tregs，從而導致免疫耐受[24]。Bregs主要通過分泌IL- 10發(fā)揮負向免疫調(diào)節(jié)功能，Zhang等[25]在動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過Toll樣受體9(Toll-like receptors 9,TLR- 9)激動劑刺激后，pDCs 促進B細胞分泌IL- 10。Menon等[26]純化健康人外周血中的B細胞，共培養(yǎng)pDCs和B細胞后發(fā)現(xiàn)，其分泌IL- 10的水平是CpG單獨刺激的4倍，且分泌IL- 10的主要表型為CD24+CD38hi；但是SLE患者的pDCs并不能促進CD24+CD38hiBregs的分化，pDCs 和CD24+CD38hiBregs之間的環(huán)路在SLE患者體內(nèi)受損。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過CD20單克隆抗體治療后，pDCs 和CD24+CD38hiBregs之間的環(huán)路又得以恢復。

SLE患者Bregs和濾泡性T細胞間也存在相互作用， 濾泡性T輔助細胞(T follicular helper,Tfh)位于生發(fā)中心，為CD4+T細胞的一個亞群，以分泌細胞因子IL- 21為主要特征[27]，可表達趨化因子受體5(C-X-C chemokine receptor type 5，CXCR5)，程序性死亡受體1(programmed death- 1, PD- 1)和可誘導共刺激分子(inducible costimulatory molecule，ICOS)，Tfh能夠促進B細胞分化發(fā)育為漿細胞，分泌抗體從而促進自身免疫反應。Yang等[23]于2014年發(fā)現(xiàn)，SLE患者外周血中CD4+CXCR5+PD- 1+Tfh的水平和Bregs的水平具有非常強的相關(guān)性，說明Tfh可能促進Bregs的擴增；進一步驗證后發(fā)現(xiàn)，將B細胞和由Tfh細胞分泌的IL- 21共培養(yǎng)后，其分泌IL- 10的水平顯著增加。

總　　結(jié)

Bregs的發(fā)現(xiàn)及對其作用機制的研究為自身免疫性疾病的研究提供新的視角。但是對于Bregs的表型以及分化發(fā)育過程還需要深入研究。SLE 作為一種常見的自身免疫性疾病，其發(fā)病的主要因素為自身免疫系統(tǒng)的紊亂，其中B細胞在SLE發(fā)病中起重要作用；通過調(diào)節(jié)免疫反應、抑制促炎因子產(chǎn)生以及抑制CD4+T細胞的增殖，Bregs對于SLE的疾病的控制起非常重要的作用；但是Bregs在SLE中的存在狀態(tài)以及與其發(fā)揮功能相關(guān)的具體機制還有待進一步研究。

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