王振濤常紅波吳 鴻柴松波韓麗華

（1.河南省中醫(yī)院，河南 鄭州 450002；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450046）

·研究報告·

抗纖益心濃縮丸對擴(kuò)張型心肌病大鼠心功能及心室重構(gòu)的影響*

王振濤1常紅波2吳 鴻1柴松波1韓麗華1

（1.河南省中醫(yī)院，河南 鄭州 450002；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450046）

目的觀察抗纖益心濃縮丸對擴(kuò)張型心肌病大鼠心功能及心室重構(gòu)的影響，探討其防治擴(kuò)張型心肌病（DCM）部分作用機(jī)制。方法通過大鼠自主飲用呋喃唑酮水溶液，建立DCM模型。8周后，將LVEF≤45%的大鼠隨機(jī)分為模型組、抗纖益心濃縮丸高、中、低劑量組、卡托普利組、中西藥聯(lián)合組，另設(shè)有正常對照組，采用相對應(yīng)藥物進(jìn)行灌胃治療。16周后，超聲心動圖測定心功能的變化，稱左室質(zhì)量及電子顯微鏡下觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果與模型組比較，各治療組左室收縮末期內(nèi)徑 （LVESD）、左室舒張末期內(nèi)徑（LVEDD）減低（P＜0.05），左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）及左室短軸縮短率（LVFS）均明顯提高（P＜0.05），中西藥聯(lián)合組效果最好（P＜0.01）；與模型組比較，左室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）各治療組均明顯減少（P＜0.05）；電子顯微鏡觀察結(jié)果：正常組大鼠心肌細(xì)胞膜完整，肌原纖維排列整齊，肌小節(jié)及肌絲結(jié)構(gòu)清晰，未見孿縮帶和異常電子致密物沉積；與其相比，模型組心肌細(xì)胞肌膜溶解，肌原纖維排列紊亂，局部可見肌絲斷裂，線粒體腫脹、變形；與模型組相比，抗纖益心濃縮丸中、低劑量組均稍有改善，中西藥聯(lián)合組大鼠心肌改善最明顯。結(jié)論抗纖益心濃縮丸能改善擴(kuò)張型心肌病大鼠心功能及心室重構(gòu)作用。

擴(kuò)張型心肌病 抗纖益心濃縮丸 心功能及心室重構(gòu)

擴(kuò)張型心肌?。―CM）是一種以左心室或雙心室擴(kuò)大伴收縮功能障礙為特征的心肌病，臨床多表現(xiàn)為進(jìn)行性心力衰竭、血栓栓塞、心律失常及猝死等。目前尚無特異性治療方法，其預(yù)后極差，大多發(fā)病后5~10年生存率僅為25%~50%［1］。近些年，中醫(yī)藥治療DCM發(fā)揮了重要作用，中西醫(yī)結(jié)合治療大大提高了本病的治療效果，其預(yù)后得到了改善。筆者在長期治療DCM的臨床實(shí)踐中，結(jié)合前人經(jīng)驗(yàn)，提出益氣升陽、活血利水法治療DCM，并自擬抗纖益心方。在前期的臨床觀察和實(shí)驗(yàn)研究中顯示其能明顯延緩病情發(fā)展，改善心功能，部分能逆轉(zhuǎn)心室肥厚、縮小心臟［2-4］。本實(shí)驗(yàn)通過大鼠自主飲用呋喃唑酮水溶液建立DCM模型［5-6］，觀察抗纖益心濃縮丸對DCM大鼠心功能及心室重構(gòu)的影響，探討其治療DCM的部分作用機(jī)制，為抗纖益心濃縮丸的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 SPF級Wistar大鼠，雄性，體質(zhì)量60~ 70 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，許可證號：SCXK（京）2012-0001。動物飼料：60Co照射后的動物飼料［河南省實(shí)驗(yàn)動物中心，許可證號：SCXK（豫）2010-0002］。本實(shí)驗(yàn)在河南省中醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室完成，設(shè)施證明：00000860。

1.2 試藥與儀器 抗纖益心濃縮丸 （紅參、黃芪、丹參、澤蘭、益母草、升麻、白術(shù)、茯苓、麥冬9味組成，河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院制劑室提供，批號：20150423）；卡托普利片（25 mg/片，上海信宜天平藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號：國家準(zhǔn)字H31021832）；呋喃唑酮片（100 mg/片，山西云鵬制藥有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號：國家準(zhǔn)字H14023917）；水合氯醛由鄭州派尼有限公司生產(chǎn)，規(guī)格10 mL：0.5 g，批號：20100614。IVC獨(dú)立送風(fēng)隔離籠具：CA25籠一拖二PSU觸摸型（蘇州馮氏實(shí)驗(yàn)動物設(shè)備有限公司），超凈工作臺型號：JB-CJ-2FC型（蘇州馮氏實(shí)驗(yàn)動物設(shè)備有限公司），動物飲水機(jī)型號：Master-Q型 （上海和泰儀器有限公司），電子天平：BS224S德國220 g/0.1 mg。超速低溫離心機(jī)型號：SIGMA3-K（美國Sigma-Aldrich公司）。超聲診斷系統(tǒng)：ACUSON Cypress（美國西門子醫(yī)療系統(tǒng)公司），配備有西門子acuson7L3型探頭，B超耦合劑：YY0299，天津；手術(shù)針、線、剪刀、鑷子、止血鉗等。以上儀器均由河南省中醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一提供。

1.3 分組與造模 采用隨機(jī)方法按7∶1分為造模組和正常對照組，造模組采用自主飲用呋喃唑酮水溶液（按1 kg水加700 mg呋喃唑酮片配置），每日更換1次，8周后，將LVEF≤45%的大鼠隨機(jī)分為模型組、抗纖益心濃縮丸高、中、低劑量組、卡托普利組、中西藥聯(lián)合組（抗纖益心濃縮丸高劑量與卡托普利片）。

1.4 給藥方法 模型組每日灌胃與治療組同等容積的去離子水；卡托普利對照組卡托普利片10.125 mg/kg溶于去離子水灌胃；抗纖益心濃縮丸高、中、低劑量組，每日灌胃抗纖益心濃縮丸（18.8、9.4、4.7 g/kg）分別溶于去離子水；中西藥聯(lián)合組是抗纖益心濃縮丸高劑量和卡托普利的混合溶液每日灌胃。根據(jù)成人劑量換算得到灌胃劑量，大鼠每公斤體質(zhì)量用藥量為成人體質(zhì)量的6.35倍。公式：dB（mg/kg）=dA·（RB/RA）·（WA/WB）1/3（RB，RA是體形系數(shù)；WA/WB是已知動物體質(zhì)量）。

1.5 標(biāo)本采集及檢測 各組大鼠藥物干預(yù)療程結(jié)束后，禁食不禁水12 h，稱體質(zhì)量，麻醉各組大鼠進(jìn)行超聲心動圖檢測LVESD、LVEDD，然后迅速開胸提取心臟，用生理鹽水打入主動脈充分沖洗心臟殘血，紗布吸干水分，分離心室，再沿室壁剪開，分離左、右心室，電子天平準(zhǔn)確稱量左心室質(zhì)量（LVW），用銳利的刀片切取左心室心尖部心內(nèi)膜下小塊心肌，4%戊二醛固定，送電鏡室待檢。將固定好的樣品用牙簽取出置于EP管內(nèi)并標(biāo)記，0.1 mol/L PBS 0.5 mL漂洗，每次10 min，反復(fù)4次；1%鋨酸0.5 mL做后固定，靜置1.5 h；0.1 mol/L PBS 0.5 mL漂洗，每次10 min，反復(fù)4次；30%丙酮脫水，10 min；50%丙酮脫水，10 min；70%丙酮脫水，10 min或過夜；90%丙酮脫水，10 min；100%丙酮，45 min，反復(fù)2次；其間配置環(huán)氧樹脂；滲透：無水丙酮：環(huán)氧樹脂812=1∶1滲透封閉1 h，開蓋0.5 h。硅膠板滲透：純環(huán)氧樹脂812 4 h或過夜；走聚合37℃12 h，45℃12 h，45℃24~48 h；切片；染色；電鏡觀察。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析。組間比較符合正態(tài)分布且方差齊者，用單因素方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)；如果符合正態(tài)分布但未通過方差齊性檢驗(yàn)，則采用單因素方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組超聲心動圖檢測及左心室質(zhì)量指數(shù)結(jié)果比較 見表1。與正常組比較，各組LVEF、LVFS均有所降低（P＜0.05），LVMI有所增加（P＜0.05）；與模型組比較，各治療組大鼠LVEF、LVFS都有不同程度的上升，LVMI有所減輕（P＜0.05），中西藥聯(lián)合組效果最明顯（P＜0.01）。

表1 各組超聲心動圖檢測及左心室質(zhì)量指數(shù)結(jié)果比較（s）

表1 各組超聲心動圖檢測及左心室質(zhì)量指數(shù)結(jié)果比較（s）

與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

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2.2 各組大鼠心肌組織電鏡觀察 見圖1。正常大鼠心肌細(xì)胞排列整齊，肌小節(jié)和肌絲結(jié)構(gòu)清晰，線粒體線狀排列，呈橢圓形，未見膠原蛋白沉著和膠原纖維沉積。模型組大鼠心肌細(xì)胞肌膜溶解，排列紊亂、稀疏，局部肌絲斷裂，可見線粒體腫脹、變形、空泡樣變化，成纖維細(xì)胞周圍聚集大量膠原纖維沉積。中藥高劑量、卡托普利組電鏡下觀察大鼠心肌細(xì)胞形態(tài)接近，肌膜較完整，其明暗帶尚清晰，線粒體絕大部分接近正常，呈線狀排列。中藥中劑量組介于高劑量與低劑量組之間。低劑量組大鼠心肌細(xì)胞肌膜大部分溶解，可見少量線粒體肌游離于細(xì)胞外，局部可見肌絲斷裂。中西藥聯(lián)合組心肌細(xì)胞肌膜較完整，肌小節(jié)和肌絲結(jié)構(gòu)相對清晰，明暗帶明顯，線粒體呈線狀排列較整齊可見，未見明顯膠原纖維沉積。

圖1 各組大鼠電鏡下心肌組織超微結(jié)構(gòu)圖（12000倍）

3 討 論

中醫(yī)學(xué)無擴(kuò)張型心肌病之病名，但很早就有關(guān)于類似證候的記載，歷代醫(yī)家對其認(rèn)識散見于“心悸”“水腫”“喘證”“心水”等證。筆者在長期治療DCM的臨床實(shí)踐中，結(jié)合前人經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為本病早期氣虛為本，瘀血為標(biāo)；晚期心腎陽氣虛衰，溫煦失職，導(dǎo)致諸臟腑功能失調(diào)。其中氣虛陽虛為本，瘀血、痰濁、水濕為標(biāo)。心氣虛不能鼓動血液運(yùn)行而血脈瘀滯，腎陽虛則不能溫化津液則水濕內(nèi)停。其中氣虛是中心環(huán)節(jié)，存在于病變發(fā)展過程中的各個階段，因而提出益氣升陽、活血利水法治療DCM，并根據(jù)本法自擬抗纖益心方。在前期的臨床觀察和實(shí)驗(yàn)研究中顯示能明顯延緩病情發(fā)展，改善心功能，部分能逆轉(zhuǎn)心室肥厚、縮小心臟［2-4］。為方便患者使用，現(xiàn)已將其研發(fā)制作丸劑，進(jìn)一步探討其治療DCM作用機(jī)制，為抗纖益心濃縮丸的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

本研究通過大鼠自主飲用呋喃唑酮水溶液建立DCM模型［5-6］，觀察抗纖益心濃縮丸對DCM大鼠心功能及心室重構(gòu)的影響，探討其治療DCM的部分作用機(jī)制。結(jié)果顯示：與模型組比較，抗纖益心濃縮丸高、中劑量組及卡托普利組LVEF有不同程度的上升，有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），中西藥聯(lián)合組有顯著性差異（P＜0.01），表明抗纖益心濃縮丸能改善DCM大鼠心功能。心室重構(gòu)是DCM發(fā)生、發(fā)展的基本病理環(huán)節(jié)，可以導(dǎo)致心功能的進(jìn)一步惡化。電鏡結(jié)果顯示：抗纖益心濃縮丸高、中劑量組及卡托普利組在不同程度上能改善DCM大鼠心肌供血、供氧，抑制心肌細(xì)胞肥大和膠原產(chǎn)生，逆轉(zhuǎn)心腔擴(kuò)大、心室肥厚，這可能是抗纖益心濃縮丸在一定程度上抑制DCM大鼠心室重構(gòu)的作用機(jī)制之一?？估w益心濃縮丸在一定程度上能夠抑制心肌細(xì)胞肥大和膠原產(chǎn)生，逆轉(zhuǎn)心腔擴(kuò)大、心室肥厚，干預(yù)DCM大鼠心室重構(gòu)，但其最佳有效劑量以及用藥時間還有待進(jìn)一步深入研究。

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Effect of Kangxian Yixin Concentrated Pill on the Serum Cardiac Function and Ventricular Remodeling of Rats with Dilated Cardiomyopathy

Wang Zhentao，Chang Hongbo，Wu Hong，et al.Henan Province Hospital of TCM，Henan，Zhengzhou 450002，China.

Objective：To observe effect of Kangxian Yixin concentrated pill on the serum cardiac function and ventricular remodeling of Rats with DCM and discuss part of its action mechanism on the treatment of DCM.Methods：Through rats drinking furazolidone aqueous solution，DCM model were set up.After 8 weeks，rats with LVEF acuities≤45%were randomly divided into model group，Kangxian Yixin high dose，midium dose and low dose group，captopril group，Chinese and western medicine group.The normal control group was also set up with the corresponding drug lavage therapy.After 16 weeks，the changes of cardiac function were measured by echocardiography.Left ventricular mass was measured and myocardial tissue ultrastructure changes were observed under electron microscope.Results：Compared with model group，left ventricular end systolic diameter（LVESD），left ventricular end-diastolic diameter（LVEDD）reduced（P＜0.05），left ventricular ejection fraction（LVEF）and left ventricular short axis reduced rate（LVFS）were significantly increased（P＜0.05）in the treatment groups.The result in the Chinese and western medicine group was the best among the groups（P＜0.01）.Compared with model group，left ventricular weight in each treatment group was significantly decreased（P＜0.05）.According to the electron microscope observation：normal group of rats'myocardial cell membrane integrity，neat myofibril，and clear muscle sarcomere structure could be observed with no twin shrink belt and abnormal electron dense deposit. By contrast，myocardial cell membrane dissolved，myofibril was arranged in disorder，muscle wire fracture was partially visible，mitochondria swelling and deformation was observed in the model group.Compared with model group，a slight improvement was got in Kangxian Yixin concentrated pill medium and low dose group.The curative effect in the Chinese and western medicine combined group was the most obvious.Kangxian Yixin concentrated pill high dose group and captopril group played a similar role.Conclusion：Kangxian Yixin concentrated pill can improve cardiac function and ventricular remodeling of rats with DCM.

DCM；Kangxian Yixin concentrated pill；Cardiac function and ventricular remodeling

R285.5

A

1004-745X（2017）03-0394-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.03.006

河南省科技創(chuàng)新人才計劃項(xiàng)目（144200510016）