徐亞東，李華，宋春霞

(1海陽市人民醫(yī)院，山東海陽265100;2海陽市婦幼保健計劃生育服務(wù)中心)

甲狀腺癌組織中Stat3、Survivin、MMP-13的表達(dá)變化及對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響

徐亞東1，李華2，宋春霞1

(1海陽市人民醫(yī)院，山東海陽265100;2海陽市婦幼保健計劃生育服務(wù)中心)

目的探討信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(Stat3)、凋亡抑制基因(Survivin)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)在甲狀腺癌患者癌組織中的表達(dá)及其對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響。方法選取接受根治術(shù)治療的甲狀腺癌患者60例。采集患者甲狀腺癌組織以及癌旁正常組織，以免疫組化法分別檢測Stat3、Survivin、MMP-13的表達(dá)，并比較甲狀腺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Stat3、Survivin、MMP-13表達(dá)水平。結(jié)果甲狀腺癌組織中Stat3、Survivin 、MMP-13陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織(P均<0.05)。甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達(dá)率均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)。結(jié)論甲狀腺癌患者癌組織中Stat3、Survivin、MMP-13表達(dá)升高，且可促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

甲狀腺癌；Stat3；Survivin；基質(zhì)金屬蛋白酶13；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

甲狀腺癌屬于臨床上最常見的頸部惡性腫瘤[1]。臨床上根據(jù)患者分化程度的不同分為乳頭狀癌、濾泡樣癌、鱗癌以及髓樣癌等。其中鱗癌、髓樣癌均屬于高度惡化的癌腫，具有發(fā)展迅速、預(yù)后差等特點，臨床上常規(guī)治療以及放、化療均無顯著效果[2]。有研究報道顯示，甲狀腺癌存在早期侵襲四周組織，以及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況的傾向，對患者的預(yù)后以及生存期具有不同程度的影響[3]。本文通過研究信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(Stat3)、凋亡抑制基因(Survivin)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)在經(jīng)根治術(shù)治療的甲狀腺癌患者組織中的表達(dá)變化及其對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響，旨在為臨床診治提供新型靶點。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年2月～2017年2月于海陽市人民醫(yī)院接受根治術(shù)治療的甲狀腺癌患者60例，均經(jīng)病理檢查確診。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：均經(jīng)手術(shù)病理檢查確診為甲狀腺癌；均行根治術(shù)治療；入院前未接受任何抗腫瘤治療；臨床病歷資料完整。其中患者男34例、女26例，年齡22～72(45.4±10.4)歲；病理組織類型：乳頭狀腺癌30例，濾泡狀腺癌18例，髓樣癌7例，鱗癌5例；伴頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。術(shù)中取患者甲狀腺癌組織60例份，癌旁組織(距癌組織5 cm)60例份?；颊呔椴⒑炇鹆送鈺?，且經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 組織Stat3、Survivin、MMP-13表達(dá)的檢測 采用免疫組化法。所有組織標(biāo)本通過10%甲醛固定，予以常規(guī)石蠟包埋，而后取4 μm厚連續(xù)切片。對組織切片實施常規(guī)脫蠟水化，經(jīng)高溫高壓法給予抗原修復(fù)；再滴加一抗置于4 ℃孵育箱內(nèi)過夜；隨后嚴(yán)格按試劑盒內(nèi)說明書滴加試劑，行DAB顯色；然后行蘇木素復(fù)染、脫水、封片，最后在高倍顯微鏡下進(jìn)行結(jié)果評價。將已知陽性標(biāo)本用于陽性對照，并以PBS代替一抗用于陰性對照。其中兔抗人Stat3多克隆抗體與兔抗人Survivin多克隆抗體均購自武漢博士德公司，兔鼠共用二抗購自北京中山金橋生物技術(shù)有限公司。兔抗人MMP-13型多克隆抗體購自北京博奧森生物公司。DAB顯色劑和免疫組化染色有關(guān)試劑盒均購自北京中山金橋公司。評價標(biāo)準(zhǔn)[5，6]：切片均選擇雙盲法，并由本院兩名病理科醫(yī)師進(jìn)行獨立閱片。其中Stat3染色陽性信號呈棕黃色或棕色顆粒狀，定位于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜；Survivin染色陽性信號棕色或棕褐色顆粒狀，定位于細(xì)胞質(zhì)。MMP-13染色陽性信號呈棕褐色顆粒，定位于細(xì)胞質(zhì)。每張切片隨機(jī)選取10個高倍鏡視野，根據(jù)染色程度以及陽性細(xì)胞占比進(jìn)行結(jié)果判定：其中不著色計為0分，染色強(qiáng)度較差計為1分，染色強(qiáng)度中等計為2分，染色強(qiáng)度較深計為3分；陽性細(xì)胞占比<5%計為0分，陽性細(xì)胞占比5%～25%計為1分，陽性細(xì)胞占比26%～50%計為2分，陽性細(xì)胞占比>50%計為3分。兩項得分相乘所得結(jié)果即為最終判斷結(jié)果。其中0～1分計為陰性，2～3分計為弱陽性，4～6分計為中度陽性，>6分計為強(qiáng)陽性。陽性率=弱陽性占比+中度陽性占比+強(qiáng)陽性占比。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以頻次或百分比表示，比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同甲狀腺組織中Stat3、Survivin、MMP-13表達(dá)比較 甲狀腺癌組織中Stat3表達(dá)陰性、弱陽性、中度陽性、強(qiáng)陽性及陽性表達(dá)率分別為13、11、19、17例，78.33%； Survivin表達(dá)分別為17、11、21、10例，71.67%；MMP-13表達(dá)分別為16、12、20、12例，73.33%；癌旁組織中分別為43、6、7、4例，28.33%；48、6、4、2例，20.00%；54、4、1、1例，10.00%。甲狀腺癌組織中各指標(biāo)表達(dá)陽性率均高于癌旁組織(χ2值分別為30、134、30、303，49.509，P均<0.05。

2.2 甲狀腺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達(dá)率比較 甲狀腺癌淋巴轉(zhuǎn)移患者的Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達(dá)率分別為86.84%(33/38)、92.11%(35/38)、89.47%(34/38，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者分別為63.64%(14/22)、36.36%(8/22)、45.45%(10/22)，兩者比較，χ2值分別為4.421、21.321、13.806，P均<0.05。

3 討論

近年，隨著人們生活水平提高以及飲食習(xí)慣改變，甲狀腺癌發(fā)病率逐年上升。該病具有較高的局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率，患者預(yù)后較差[7，8]。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移通常是多步驟的復(fù)雜性過程，可涉及到腫瘤細(xì)胞與宿主間的相互作用，常有多種基因及其產(chǎn)物在該過程中起著至關(guān)重要作用[9，10]。Stat3信號傳導(dǎo)通路和細(xì)胞的增殖、分化與凋亡存在一定相關(guān)性，且該通路的持續(xù)激活使得細(xì)胞異常增殖并向惡性轉(zhuǎn)化，屬于癌基因之一[11]。Survivin是凋亡抑制基因，具有抑制細(xì)胞凋亡以及調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的雙重作用，其不但在細(xì)胞凋亡抑制、腫瘤血管形成中發(fā)揮著至關(guān)重要作用，同時還可在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)[12]。MMP-13則是參與細(xì)胞外基質(zhì)Ⅲ型膠原降解的重要酶，其主要是通過破壞腫瘤細(xì)胞周邊，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤及轉(zhuǎn)移，與患者的預(yù)后密切相關(guān)[13，14]。

本研究結(jié)果顯示，甲狀腺癌組織中Stat3陽性表達(dá)率較癌旁組織高，與張晨蕾等[15，16]的研究報道一致，說明Stat3可能參與了甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程，可能成為臨床上診斷甲狀腺癌的指標(biāo)之一。其中激活的Stat3可通過提高部分影響下游生長、凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展；而部分受Stat3調(diào)節(jié)的下游靶基因可通過與這些相關(guān)基因共同調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和凋亡。目前，已有學(xué)者在胃癌、乳腺癌以及前列腺癌中發(fā)現(xiàn)，CyclinD1等蛋白的表達(dá)存在異常。筆者認(rèn)為，通過對Stat3基因表達(dá)進(jìn)行抑制或間接阻斷Stat3的活化，可能有效治療甲狀腺癌，值得臨床進(jìn)行更深入的研究。此外，甲狀腺癌組織中Survivin陽性表達(dá)率也較癌旁組織高，與黃海燕等[17，18]的研究報道一致，表明Survivin在甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮著重要作用，可能成為臨床上診斷甲狀腺癌的指標(biāo)之一。另外，甲狀腺癌組織中MMP-13陽性表達(dá)率高于癌旁組織，與侯繼院等[19，20]的研究報道相似，提示MMP-13與甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本文結(jié)果還顯示甲狀腺癌淋巴轉(zhuǎn)結(jié)移患者Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達(dá)率均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。提示Stat3、Survivin、MMP-13的表達(dá)與甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，臨床工作中可通過對上述三項指標(biāo)的表達(dá)進(jìn)行有效抑制，從而達(dá)到改善患者預(yù)后的目的。

綜上所述，Stat3、Survivin、MMP-13在甲狀腺癌患者癌組織中表達(dá)升高，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。上述三項指標(biāo)可能成為甲狀腺癌診斷、治療以及評估預(yù)后的新靶點。

[1] Li N, Fu S, Cui MM, Niu Y, et al. Platelet distribution width and serum albumin levels for discrimination of thyroid cancer from benign thyroid nodules[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2017,18(7):1773-1777.

[2] 段睿,劉正人,張浩,等.Survivin siRNA對甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞裸鼠移植瘤血管生成的影響[J].海南醫(yī)學(xué),2015,26(1):5-6.

[3] 何穎,楊美玉,匡莉,等.超聲檢查聯(lián)合基質(zhì)金屬蛋白酶檢測對甲狀腺癌的診斷價值[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2017,25(2):279-282.

[4] 姚宏,魏正琍,梁曉燕,等.腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS-1在甲狀腺癌組織中表達(dá)和預(yù)后的研究[J].中國藥物與臨床,2012,12(11):1408-1411.

[5] 王娟,俞力,范鈺,等.miR-155反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染對甲狀腺癌細(xì)胞遷移、侵襲和MMP-13表達(dá)的影響[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2013,23(6):526-528.

[6] 汪永旭,蔣偉豐,朱陳宏,等.STAT3和VEGF-C在甲狀腺癌中表達(dá)及其與臨床病理特征關(guān)系[J].腫瘤學(xué)雜志,2013,19(2):118-121.

[7] Jaap K, Campbell R, Dove J, et al. Disparities in the care of differentiated thyroid cancer in the united states: exploring the national cancer database[J]. Am Surg, 2017,83(7):739-746.

[8] 龔龍,許穎,溫颯颯,等.SATB1在甲狀腺癌啟動PI3K/Akt信號通路中的作用研究[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志,2016,15(14):1352-1355.

[9] 阿布來提·麥麥提艾力,哈德提·別克米托夫,哈力木拉提·木爾提扎,等.甲狀腺乳頭狀癌與基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP3)基因啟動子甲基化的關(guān)系研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2014,22(7):841-845.

[10] 楊傳家,宮建,劉臻,等.乙酰肝素酶及基質(zhì)金屬蛋白酶-9在甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用[J].廣東醫(yī)學(xué),2014,35(20):3173-3175.

[11] 黃雋,蘇榕.鈣結(jié)合蛋白S100A4和信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3在甲狀腺癌及腺瘤組織中表達(dá)及其臨床意義[J].中華實驗外科雜志,2015,32(5):1144-1146.

[12] 劉衛(wèi)國.Survivin、BRAF、Notch1在甲狀腺良惡性腫瘤中的差異表達(dá)及其與血清指標(biāo)的關(guān)系[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2015,21(2):250-252.

[13] 周少飛,苗蕾,毛偉征,等.外周血基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑與甲狀腺癌相關(guān)性分析[J].中華腫瘤防治雜志,2013,20(12):942-944.

[14] 劉詠,吳秀葵,黃昕,等.基質(zhì)金屬蛋白酶-9和骨橋蛋白在甲狀腺癌和腺瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].中華實驗外科雜志,2015,32(1):151-153.

[15] 張晨蕾,李燕萍,吳靖芳,等.STAT3,pSTAT3與TFF3在甲狀腺乳頭狀癌中的臨床意義[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2016,43(1):182-186.

[16] 王翡,羅大虎,劉雪梅,等.甲狀腺乳頭狀癌組織中STAT3和核因子κB水平增加[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2016,32(10):1386-1389.

[17] 黃海燕,劉細(xì)榮,李小虎,等.Survivin蛋白在甲狀腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2017,34(5):733-735.

[18] 張丹,馬瑞,林從堯,等.甲狀腺癌組織中Survivin蛋白的表達(dá)及其意義的Meta分析[J].醫(yī)學(xué)綜述,2016,22(10):1973-1977.

[19] 侯繼院,劉興安,單國用,等.S100A4調(diào)節(jié)MMP-13表達(dá)對甲狀腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響[J].中華腫瘤防治雜志,2015,22(7):514-518.

[20] 蔣福平,陳力,鄒勇德,等.MMP-13在甲狀腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].腫瘤藥學(xué),2013,3(4):271-273.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.45.024

R736.1

B

1002-266X(2017)45-0074-03

山東省優(yōu)秀中青年科學(xué)家科研獎勵基金項目(BS2014SW052)。

2017-09-07)