謝琳玲

(四川省三臺(tái)蠶種場(chǎng)，四川 三臺(tái) 621100)

淺談如何提高家蠶微粒子病預(yù)知檢查的檢出率

謝琳玲

(四川省三臺(tái)蠶種場(chǎng)，四川 三臺(tái) 621100)

在蠶種生產(chǎn)中常遇到微粒子病預(yù)知檢查時(shí)檢出的微粒子很少，但在母蛾檢驗(yàn)時(shí)卻出現(xiàn)超毒的現(xiàn)象。筆者結(jié)合工作實(shí)際對(duì)這種現(xiàn)象的發(fā)生進(jìn)行了分析，并提出了相應(yīng)的改進(jìn)辦法，以提高預(yù)知檢查的檢出率，促進(jìn)家蠶微粒子病的有效防治，提高蠶種生產(chǎn)質(zhì)量。

微粒子病 預(yù)知檢查 檢出率

家蠶微粒子病(Nosemabombycis)是由微粒子原蟲(chóng)感染而引起的疾病，主要傳染途徑有胚種傳染和食下傳染，對(duì)蠶業(yè)生產(chǎn)特別是蠶種生產(chǎn)的危害極大，是嚴(yán)重威脅蠶種繁育的毀滅性病害。法國(guó)生物學(xué)家巴斯德(L.Pasteur)于1865-1870年對(duì)家蠶微粒子病作了系統(tǒng)研究，花費(fèi)五年時(shí)間終于創(chuàng)立了母蛾鏡檢方法，剔除病卵，有效防止了胚種傳染。后來(lái)巖淵、三谷等又輔以預(yù)知檢查、補(bǔ)正檢查方法為無(wú)毒蠶種的生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。目前，各蠶種場(chǎng)在蠶種生產(chǎn)過(guò)程中都加強(qiáng)了蠶期的預(yù)知檢查，以便確切掌握原蠶飼養(yǎng)中微粒子病的發(fā)生及分布情況，及早發(fā)現(xiàn)病蠶、病蛹、病蛾，盡早采取淘汰和消毒等措施，防止家蠶微粒子病蔓延，以減少經(jīng)濟(jì)損失和環(huán)境污染，保證蠶種生產(chǎn)順利進(jìn)行。但根據(jù)本人近年的工作體會(huì)和對(duì)其他蠶種場(chǎng)的了解，發(fā)現(xiàn)現(xiàn)在的預(yù)知檢查和最終的母蛾鏡檢結(jié)果有時(shí)呈負(fù)相關(guān)，即在蠶期和種繭期的預(yù)知檢查中沒(méi)有或極少發(fā)現(xiàn)微粒子，但在母蛾檢驗(yàn)中卻出現(xiàn)大量的超毒蠶種，這說(shuō)明預(yù)知檢查普遍存在檢出率低的問(wèn)題。然而，要提高蠶種場(chǎng)預(yù)知檢查的檢出率，就須認(rèn)真分析影響預(yù)知檢查檢出率的原因，并采取相應(yīng)的對(duì)策和措施，以提高家蠶微粒子病預(yù)知檢查的檢出率。下面筆者結(jié)合近幾年的工作經(jīng)驗(yàn)，淺談如何提高預(yù)知檢查的檢出率。

1 影響檢出率的原因分析

1.1 抽樣代表性差

從目前的生產(chǎn)實(shí)踐看，不少蠶種場(chǎng)微粒子病預(yù)知檢查抽樣的準(zhǔn)確性不夠，樣本的代表性差，一是抽樣的數(shù)量少，代表性不夠；二是抽樣的方法不正確，影響預(yù)知檢查的檢出率。因此，改進(jìn)預(yù)知檢查抽樣方法，加強(qiáng)預(yù)知檢查抽樣力度，增強(qiáng)抽樣樣本的代表性，是提高微粒子病預(yù)知檢查檢出率的基礎(chǔ)和重要手段。

1.2 樣本處理不當(dāng)

預(yù)知檢查一般是在蠶期或蛹期，屬微粒子病感染的前期，所形成的微粒子孢子少，影響檢出率，所以，抽取的樣本應(yīng)進(jìn)行檢驗(yàn)前處理，使微粒子孢子繁殖集聚，以提高檢出率，但生產(chǎn)中往往忽視樣本的前處理或處理不當(dāng)，如對(duì)樣本沒(méi)有進(jìn)行適宜的溫濕度和相應(yīng)的時(shí)間保存，磨碎液沒(méi)有進(jìn)行離心處理等，嚴(yán)重影響預(yù)知檢查的檢出率。

1.3 檢驗(yàn)儀器設(shè)備差

目前，部份蠶種場(chǎng)質(zhì)檢室儀器設(shè)備條件差，沒(méi)有離心機(jī)，沒(méi)有恒溫培養(yǎng)箱，無(wú)法進(jìn)行樣本的前處理，顯微鏡也比較陳舊，鏡面不清晰，影響預(yù)知檢查的檢出率。

1.4 檢驗(yàn)人員素質(zhì)不高

預(yù)知檢查的樣本微粒子孢子數(shù)少，要在多個(gè)視野中找微粒子孢子并準(zhǔn)確判斷，要求預(yù)知檢查的鏡檢人員必須具有豐富的經(jīng)驗(yàn)和強(qiáng)烈的責(zé)任心，但是，有的蠶種場(chǎng)由于人員調(diào)換頻繁和培訓(xùn)不到位，檢驗(yàn)人員素質(zhì)不高，影響檢出率。

2 提高檢出率的措施和建議

2.1 確保抽樣的代表性

抽樣中樣本的代表性直接影響到鏡檢的結(jié)果，所以，抽樣樣本的質(zhì)量至關(guān)重要。應(yīng)在每個(gè)飼育區(qū)按照各齡規(guī)定的蠶頭數(shù)抽取，并及時(shí)裝入樣品袋內(nèi)，注明組別、品種、批次、飼育號(hào)、抽樣時(shí)間等。

2.1.1 遲眠蠶抽樣。微粒子病是一種慢性病，患病蠶兒遲眠遲起，故在蠶種繁育中每個(gè)齡期都要抽取遲眠蠶。在抽樣過(guò)程中一定要注重樣本的準(zhǔn)確性和代表性，小蠶期可抽取收蟻2d后不疏毛、體色深暗、體軀瘦小、行動(dòng)遲緩的蠶，還可以抽一些蠶糞參與鏡檢。

2.1.2 各齡弱小蠶抽樣。選擇抽取體軀瘦小、多皺，特別是尾端細(xì)小的蠶或者萎縮的病態(tài)蠶、遲發(fā)育蠶、半脫皮蠶、斑點(diǎn)蠶、遲起蠶等進(jìn)行鏡檢。遇特殊情況如蠶兒發(fā)育不齊，病態(tài)蠶較多時(shí)整批蠶應(yīng)適當(dāng)增加抽樣次數(shù)和抽樣頭數(shù)。

2.1.3 蔟中抽樣。在上蔟后抽取蔟中死蠶、不結(jié)繭蠶、薄皮繭、死籠繭、小繭、不正形繭、蠶糞(20～50粒)等鏡檢。

2.1.4 蛹期抽樣。削繭時(shí)每飼育區(qū)病死蛹分區(qū)抽樣，但在削繭和鑒蛹期間，由于每位員工會(huì)操作多個(gè)飼育區(qū)，所以一定要注意樣本分區(qū)準(zhǔn)確，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的正確對(duì)應(yīng)。蛹期選擇抽取裸蛹、死蛹，或體表無(wú)光澤、有黑色斑點(diǎn)、腹部膨大、環(huán)節(jié)松弛、反應(yīng)遲鈍、蛹皮易破的蛹做樣本。

2.1.5 發(fā)蛾促進(jìn)抽樣。每一飼育批(區(qū))取早熟和遲熟蠶10～100頭單獨(dú)上蔟，用27～29℃的高溫和80%～85%相對(duì)濕度保護(hù)，促進(jìn)提早發(fā)蛾，然后按區(qū)分別包樣送檢。如所取樣本中有微粒子病病蠶，經(jīng)過(guò)蛹期微孢子的發(fā)育繁殖，可提高檢出率，同時(shí)根據(jù)檢測(cè)的結(jié)果決定該批種繭是否制種。

2.1.6 苗蛾抽樣。苗蛾抽樣重點(diǎn)在“苗”，要在大批發(fā)蛾之前抽樣。抽樣數(shù)量可適當(dāng)多一些，要明確規(guī)定原原種、原種、一代雜交種每飼育批(區(qū))抽取的數(shù)量。其次，除苗蛾抽樣外，在投蛾前選擇淘汰的卷翅蛾、黑環(huán)節(jié)蛾、焦尾蛾、禿蛾、夾灰蛾、大肚蛾及尾蛾也應(yīng)分區(qū)抽樣送檢，以達(dá)到摸底的效果。

在保證抽樣樣本代表性的同時(shí)，蠶種場(chǎng)一定要重視養(yǎng)蠶后期用具不潔凈的接觸性感染和制種期蜀柏毒蛾對(duì)環(huán)境的污染。養(yǎng)蠶后期食桑結(jié)束，飼養(yǎng)人員警惕性降低，上蔟時(shí)蔟具直接堆放在地上，種繭保護(hù)和削繭鑒蛹時(shí)用前期被污染的用具(如蠶墊紙)接觸蠶繭和蛹體，制種期的蛾灰與蛹、蛾接觸。制種期蜀柏毒蛾正是發(fā)蛾高峰期，有可能引起病原的傳播擴(kuò)散。微粒子孢子從感染到繁殖并形成新的孢子直至被檢出，需要一定的時(shí)間，感染時(shí)期越早，數(shù)量越多，檢出的時(shí)期就越早。感染時(shí)期越晚，數(shù)量越少，檢出的時(shí)期就越晚。如果在種繭保護(hù)和制種期微量感染，蛹體和苗蛾鏡檢時(shí)帶毒量會(huì)很少，檢出率就會(huì)很低。

2.2 加強(qiáng)鏡檢人員培訓(xùn)

鏡檢人員是預(yù)知檢查工作的主體，高素質(zhì)的檢驗(yàn)隊(duì)伍是確保檢驗(yàn)質(zhì)量的根本。要加強(qiáng)鏡檢人員政治思想教育和業(yè)務(wù)技術(shù)培訓(xùn)，牢固樹(shù)立鏡檢人員的質(zhì)量意識(shí)，明確工作職責(zé)，堅(jiān)持原則、忠于職守、熟練掌握鏡檢的業(yè)務(wù)技能及儀器設(shè)備的使用維護(hù)，嚴(yán)格按照《DB51/T 844-2008桑蠶微粒子病防治技術(shù)規(guī)程》中預(yù)知檢查的要求開(kāi)展鏡檢工作，做到檢驗(yàn)準(zhǔn)確、記載清楚、報(bào)告及時(shí)。蠶種場(chǎng)要保持鏡檢隊(duì)伍的穩(wěn)定，熟練的鏡檢人員不能隨意更換。

2.3 完善檢驗(yàn)儀器設(shè)備

檢驗(yàn)儀器設(shè)備是正常開(kāi)展預(yù)知檢查工作的基本條件。檢驗(yàn)人員應(yīng)在檢驗(yàn)使用前對(duì)檢驗(yàn)儀器設(shè)備進(jìn)行調(diào)試和校驗(yàn)，凡是對(duì)檢驗(yàn)準(zhǔn)確性有影響的儀器設(shè)備，需校準(zhǔn)到正常使用狀態(tài)，維修調(diào)試不能達(dá)到要求的，應(yīng)立即停止使用，同時(shí)更換和配套完善新的檢驗(yàn)儀器設(shè)備，如顯微鏡、高速離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、高溫處理室等等，提高預(yù)知檢查的檢出率。

2.4 做好樣本的前處理

2.4.1 加強(qiáng)樣本保護(hù)。每齡抽取的遲眠蠶、弱小蠶、遲起蠶、病態(tài)蠶等樣本送到品檢室后，須進(jìn)行檢驗(yàn)前處理，在溫度29～32℃、相對(duì)濕度85%～90%的環(huán)境中放置3～4d后，再磨碎制樣鏡檢。

2.4.2 嚴(yán)格樣本的制樣。抽取的每個(gè)樣本按規(guī)定頭數(shù)置于乳缽或分碗中，進(jìn)行充分研磨后制樣鏡檢。5齡期蠶兒體型大，制作的樣本水分多,可取中腸(中腸是微粒子孢子最早感染的組織器官)或血液制作鏡檢樣本。早熟蠶絲腺特別多，研磨難度大，可采用剪刀將樣本盡量剪碎，減小研磨難度。蠶蛹的鏡檢，為使鏡面清晰，減少脂肪球?qū)σ暰€的干擾，可將蠶蛹浸在70℃熱水中，經(jīng)7～10 min后取出，放入增加1倍左右濃度的堿液中磨碎制樣鏡檢。一般預(yù)知檢查的樣本量大、磨碎液多，應(yīng)盡量采用過(guò)濾和離心(3000 rpm，3 min)的方法，通過(guò)樣本濃縮處理后制樣鏡檢，可大大提高檢出率。

2.5 嚴(yán)把鏡檢質(zhì)量關(guān)

一是鏡檢人員應(yīng)熟悉掌握微粒子孢子的屬性，微粒子孢子比重大于水，為1.30～1.35，通常沉于樣本液的底層，在鏡檢前一定要先讓蓋玻片和載玻片充分接觸，再調(diào)試顯微鏡，才能看清樣本底層的微孢子。二是嚴(yán)格執(zhí)行檢驗(yàn)規(guī)程，每個(gè)鏡檢樣本的觀察視野數(shù)一定要看夠，不能減少，要求預(yù)知檢查每個(gè)鏡檢樣本觀察不少于20個(gè)視野。三是當(dāng)天鏡檢結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)對(duì)鏡檢用具如試管、玻片、研磨棒、乳缽、碗、點(diǎn)樣板等進(jìn)行清洗后，用1%有效氯漂白粉澄清液浸漬30min消毒，有毒樣本所用的工具用濃鹽酸液浸漬2h后，清洗干凈才能再次使用，防止污染，確保檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

綜上所述，要提高家蠶微粒子病預(yù)知檢查的檢出率，須各生產(chǎn)班組和品檢室認(rèn)真嚴(yán)格進(jìn)行每項(xiàng)工作，才能提高檢出率，達(dá)到預(yù)知檢查的目的，減少超毒蠶種，提高蠶種質(zhì)量，提高蠶種場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益。

謝琳玲(1977-)，女，大學(xué)，農(nóng)藝師，從事蠶種檢驗(yàn)工作。