張 萍，柴向斌?

（1.山西醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)系,山西太原030001；2.大同市第五人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，山西大同037009；3.山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院耳鼻咽喉科，山西太原030001）

白介素13在慢性鼻竇炎伴鼻息肉組織中的表達(dá)

張 萍1，2，柴向斌3?

（1.山西醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)系,山西太原030001；2.大同市第五人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，山西大同037009；3.山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院耳鼻咽喉科，山西太原030001）

目的比較白介素13(IL—13)在慢性鼻竇炎不伴鼻息肉(CRSsNP)和慢性鼻竇炎伴鼻息肉(CRSwNP)患者中的差異性表達(dá)。方法選取10例CRSsNP和20例CRSwNP患者作為研究對(duì)象。根據(jù)鼻竇CT反映的病變范圍評(píng)估患者病情，采用模擬視覺量表(VAS)評(píng)估慢性鼻竇炎輕重程度；術(shù)后采用PCR法分析IL-13在CRSsNP和CRSwNP組患者鼻黏膜及息肉中的差異性表達(dá)。結(jié)果CRSwNP組鼻息肉組織IL-13 mRNA表達(dá)明顯高于臨近黏膜及CRSsNP黏膜組織；CRSsNP組和CRSwNP組鼻竇黏膜組織IL-13 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論IL-13mRNA表達(dá)水平在CRSsNP和CRSwNP組患者鼻黏膜或息肉中存在差異；白介素13(IL—13)在慢性鼻竇炎伴鼻息肉的病理過程中發(fā)揮有重要的作用。

白介素13(IL-13)；慢性鼻竇炎不伴鼻息肉(CRSsNP)；慢性鼻竇炎伴鼻息肉(CRSwNP)

慢性鼻竇炎是鼻科常見病，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和工作效率，在世界范圍內(nèi)受到極大的關(guān)注[1]。慢性鼻竇炎臨床定義是指鼻竇炎癥狀持續(xù)發(fā)作，超過12周。按照慢性鼻竇炎是否伴有鼻息肉，將慢性鼻竇炎分為慢性鼻竇炎伴息肉(CRSwNP)和慢性鼻竇炎不伴鼻息肉(CRSsNP)2個(gè)亞組[2]。慢性鼻竇炎發(fā)生是一個(gè)多因素、多環(huán)節(jié)的過程，臨床表現(xiàn)具有很大差異，由于其發(fā)病機(jī)理仍不清楚，缺乏有效的治療手段。本研究從細(xì)胞因子水平探討IL—13在慢性鼻竇炎的病理過程中發(fā)揮的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取201608-201610期間在大同市第五人民醫(yī)院耳鼻咽喉科因慢性鼻竇炎就診的30例患者作為研究對(duì)象，包括10例CRSsNP患者，20例CRSwNP患者。入選標(biāo)準(zhǔn)：①患者年齡〉18歲，男女不限；②通過CT或鼻鏡檢查；③術(shù)后病理學(xué)檢查確認(rèn)是CRSwNP；④病例符合中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志編委會(huì)發(fā)布的慢性鼻竇炎診斷標(biāo)準(zhǔn)和治療指南。排除上頜竇后鼻孔息肉、霉菌性鼻竇炎、鼻竇腫瘤等?。慌懦羞^鼻竇手術(shù)病史患者。所有患者或其家屬均簽署知情同意書。

1.2研究分組

所有受試者分為CRSsNP組、CRSwNP(黏膜)組和CRSwNP(鼻息肉)組，每組均為10例患者。對(duì)CRSsNP患者鼻黏膜和RSwNP患者鼻息肉及其臨近的鼻黏膜標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。

1.3儀器和試劑

廣州Ribobio公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒和PCR反應(yīng)試劑盒，上海權(quán)陽生物科技有限公司IL-13引物。美國(guó)Agilent公司生產(chǎn)的Mx3000PTM儀器實(shí)時(shí)定量PCR儀。

2 研究方法

2.1視覺模擬量表(VAS)評(píng)分

采用VAS對(duì)慢性鼻竇炎患者的膿涕、頭痛、鼻塞、嗅覺減退等癥狀的嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)分。此方法是患者根據(jù)自身的癥狀，對(duì)慢性鼻竇炎嚴(yán)重程度進(jìn)行主觀評(píng)估[3]。

2.2鼻竇病變?cè)u(píng)價(jià)

根據(jù)鼻竇CT對(duì)慢性鼻竇炎病變范圍及其嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)估。依據(jù)Lund-Mackay評(píng)分法[4]，依照鼻竇CT所顯示的竇口鼻道復(fù)合體、上頜竇、前組篩竇、后組篩竇、額竇和蝶竇的病變程度評(píng)分。鼻竇：0分=正常；1分=部分渾濁；2分=全部渾濁；竇口鼻道復(fù)合體：0分=無阻塞，2分=阻塞；每一側(cè)0～12分，總分是0～24分。

2.3實(shí)時(shí)定量RCR方法

按照RNA提取試劑盒的程序進(jìn)行總RNA的提取，首先研磨鼻黏膜或息肉樣品約30～100 mg，后加入500 μL裂解液，充分搖勻，放在冰盒上面；加30～100 μL的勻漿液添加劑，充分搖勻，再放在冰上10 min；然后加入500 μL酸性苯酚，渦旋30～60 min，之后離心5 min(10 000 r/min)。提取的總RNA樣品中加入用DEPC處理過的水，通過A260/A280比值來反應(yīng)提取RNA的純度。對(duì)提取的RNA反轉(zhuǎn)錄，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析PCR反應(yīng)中混合物。

2.4統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)或百分?jǐn)?shù)表示。采用單因素方差分析組間IL-13mRNA表達(dá)差異。采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析評(píng)價(jià)CRSwNP患者鼻息肉及臨近黏膜組織IL-13 mRNA表達(dá)的相關(guān)性。以P〈0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

VAS評(píng)分：CRSsNP組是16.3±2.5；CRSwNP組是17.5±4.3。CT評(píng)分：CRSsNP組10分和CRSwNP組14分。二者均無明顯差異。

CRSwNP組鼻息肉組織IL-13 mRNA表達(dá)0.605±0.192明顯高于臨近鼻竇黏膜0.358±0.137及CRSsNP黏膜組織0.360±0.104(P 〈 0.05)；CRSsNP組和CRSwNP組鼻竇黏膜組織IL-13 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

4 討論

慢性鼻竇炎伴鼻息肉(CRSwNP)是上呼吸道黏膜炎癥性疾病，是耳鼻咽喉頭頸外科常見病之一。其特點(diǎn)是復(fù)發(fā)性強(qiáng)，發(fā)病率高。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，慢性鼻竇炎伴鼻息肉(CRSwNP)發(fā)病率占總?cè)丝诘?%～4%，在歐洲成人中的發(fā)病率達(dá)1%～2%，各年齡組均有發(fā)病，男女比例約為2∶1。手術(shù)復(fù)發(fā)率為15%～20%[5]。慢性鼻竇炎伴鼻息肉發(fā)病原因的研究較多，學(xué)說各有所長(zhǎng)。慢性鼻竇炎伴鼻息肉的發(fā)生是一個(gè)多因素，多環(huán)節(jié)的過程，主要原因有慢性炎癥、黏液纖毛清除受阻、鼻道竇口阻塞、變態(tài)反應(yīng)、嗜酸性粒細(xì)胞的作用、細(xì)胞因子的作用等。近幾年，隨著細(xì)胞生物學(xué)及免疫學(xué)的不斷發(fā)展，細(xì)胞因子逐漸成為學(xué)者研究的方向，目前已有較多的文獻(xiàn)報(bào)道，鼻息肉組織中的多種細(xì)胞因子如IL-4、IL-17、IL-15、IL-33等表達(dá)有顯著增高。這說明，各種細(xì)胞因子的協(xié)同作用，參與慢性鼻竇炎伴鼻息肉的發(fā)生發(fā)展。細(xì)胞因子在慢性鼻竇炎伴鼻息肉的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用。通過研究慢性鼻竇炎伴鼻息肉發(fā)病機(jī)制，為疾病預(yù)防及治療提供新的思路。目前仍存在許多問題值得深入研究，利用分子生物學(xué)前沿理論和臨床結(jié)合，尋找關(guān)鍵細(xì)胞因子做為靶點(diǎn)，提供有效的預(yù)防和治療疾病措施，將是學(xué)者繼續(xù)研究的課題。

IL-13主要是T細(xì)胞生成，也可由多種其他細(xì)胞產(chǎn)生，如Th2/CD4+細(xì)胞、Thl/CD4+細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、肥大細(xì)胞等。同時(shí)，IL-13也可調(diào)節(jié)多種參與變態(tài)反應(yīng)的細(xì)胞。IL-13及其受體IL-13R在慢性鼻竇炎伴鼻息肉的病理過程中發(fā)揮有重要的作用：①IL-13刺激嗜酸性粒細(xì)胞活化、促使嗜酸性細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，抑制嗜酸性粒細(xì)胞凋亡；②IL-13可使鼻腔鼻竇上皮細(xì)胞產(chǎn)生嗜酸性細(xì)胞化學(xué)因子Eotaxin[6]；③IL-13促使B細(xì)胞產(chǎn)生IgE，增強(qiáng)過敏反應(yīng)，促進(jìn)黏蛋白分泌；④IL-13使B細(xì)胞產(chǎn)生IgE，增強(qiáng)過敏反應(yīng)，促進(jìn)黏蛋白分泌；⑤IL-13通過上調(diào)p-catenin蛋白的表達(dá)而促使嗜酸性細(xì)胞遷移至鼻竇黏膜，促進(jìn)息肉形成。

本研究發(fā)現(xiàn)，IL-13mRNA表達(dá)水平在慢性鼻竇炎不伴鼻息肉和慢性鼻竇炎伴鼻息肉組患者鼻黏膜或息肉中存在差異性，在慢性鼻竇炎伴鼻息肉組患者的鼻息肉組織中，IL-13 mRNA表達(dá)明顯高于慢性鼻竇炎不伴鼻息肉患者的黏膜組織。這說明IL—13在慢性鼻竇炎伴鼻息肉的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮有重要的作用。

[1]鐘竹青，李曼鴻，王天生，等．鼻竇炎特異性生活質(zhì)量量表評(píng)價(jià)慢性鼻竇炎鼻內(nèi)鏡手術(shù)后的生活質(zhì)量及療效[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2012，37(6)：625-628．

[2]王芳玲，徐智廣，馬小允.慢性鼻竇炎治療研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，20(33)：4321-4322．

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[4]杜純忠.Lund-Mackay CT系統(tǒng)在慢性鼻-鼻竇炎中的應(yīng)用分析[J].全科醫(yī)學(xué)臨床與教育，2014(3)：310-311．

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Expression of Interleukin-13 in Chronic Sinusitis with Nasal Polyps

ZHANG Ping1，2，CHAI Xiang-bin3
（1.Shanxi Medical University，Taiyuan Shanxi，030001；2.Otolaryngology head and Neck Surgery,Fifth People's Hospital of Datong，Datong Shanxi,037009；3.Department of Otorhinolaryngology,First Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan Shanxi，030001）

ObjectiveTo compare the expression of interleukin-13(IL-13)in chronic sinusitis without nasal polyps(CRSsNP)and chronic sinusitis with nasal polyps(CRSwNP).MethodsTen patients with CRSsNP and 20 patients with CRSwNP were selected as the study subjects.The severity of chronic sinusitis was assessed by visual analogue scale(VAS).The difference of expression of IL-13 in nasal mucosa and polyp of CRSsNP and CRSwNP was analyzed by PCR.ResultsThe expression of IL-13 mRNA in CRSwNP group was significantly higher than that in adjacent mucosa and CRSsNP mucosa.There was no significant difference in the expression of IL-13 mRNA between CRSsNP group and CRSwNP group.Conclusion The expression of IL-13mRNA in nasal mucosa or polyps of patients with CRSsNP and CRSwNP is different.Interleukin 13(IL-13)plays an important role in the pathogenesis of chronic sinusitis with nasal polyps．

interleukin 13(IL-13);chronic sinusitis without nasal polyps(CRSsNP);chronic sinusitis with nasal polyps(CRSwNP)

R284.2

A

〔責(zé)任編輯 楊德兵〕

1674-0874(2017)01-0047-02

2016-10-06

張萍(1973-),女，山西大同人，主治醫(yī)師，研究方向：耳鼻咽喉科疾病。?柴向斌（1968-），男，博士，主任醫(yī)師，通信作者。