章 為，李文波，李曉燕，王偉姣，譚桂山（.湖南省藥品檢驗研究院，長沙 4000；.中南大學(xué)湘雅藥學(xué)院，長沙 400；.中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院，長沙 400）

頂空氣相色譜法同時測定甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中6種有機(jī)溶劑的殘留量

章 為1，2＊，李文波3，李曉燕1，王偉姣1，譚桂山2（1.湖南省藥品檢驗研究院，長沙 410001；2.中南大學(xué)湘雅藥學(xué)院，長沙 410013；3.中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院，長沙 410013）

目的：建立同時測定甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯等有機(jī)溶劑殘留量的方法。方法：采用頂空氣相色譜法。色譜柱為以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細(xì)管柱，程序升溫，進(jìn)樣口溫度為180℃，檢測器為氫火焰離子化檢測器，溫度為300℃，載氣為高純氮氣，載氣流速為1.5 mL/min，分流比為10∶1，頂空平衡溫度為100℃，平衡時間為40 min，頂空瓶裝樣量為10 mL，頂空進(jìn)樣量為1 mL。結(jié)果：甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為178.3～1 782.7 μg/mL（r＝0.999 1）、301.2～3 012.1 μg/mL（r＝0.999 7）、33.81～338.10 μg/mL（r＝0.999 3）、18.02～180.22 μg/mL（r＝0.999 1）、43.26～432.58 μg/mL（r＝0.999 1）、0.126 8～1.268 1 μg/mL（r＝0.999 1）；定量限分別為0.31、3.00、0.67、0.02、0.005、0.10μg/mL，檢測限分別為0.15、1.51、0.22、0.01、0.001、0.05μg/mL；精密度試驗的RSD≤3.1%；穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗中甲醇、正己烷的RSD≤5%；加樣回收率分別為93.72%～102.20%（RSD＝3.1%，n＝9）、90.10%～101.79%（RSD＝4.0%，n＝9）、97.07%～103.11%（RSD＝2.0%，n＝9）、92.38%～103.83%（RSD＝3.9%，n＝9）、95.44%～103.62%（RSD＝2.8%，n＝9）、94.00%～104.73%（RSD＝4.1%，n＝9）。結(jié)論：該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，適用于甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯等有機(jī)溶劑殘留量的同時測定。

甲苯磺酸妥舒沙星原料藥；氣相色譜法；頂空進(jìn)樣；有機(jī)溶劑；殘留量

1 材料

1.1 儀器

GC-2010 PLUS型氣相色譜儀，包括AOC-5000型自動頂空進(jìn)樣器、氫火焰離子化檢測器（日本Shimadzu公司）；XS205DU型十萬分之一電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；CSR-1-05型實驗室超純水機(jī)（北京愛思泰爾技術(shù)開發(fā)有限公司）。

1.2 藥品與試劑

甲苯磺酸妥舒沙星原料藥（湖南天地恒一制藥有限公司，批號：141201、141202、141203）；甲醇對照品（美國Burdick＆Jackson公司，批號：Q6CG1H，純度：99.9%）；四氫呋喃對照品（批號：I773601 515，純度：99.9%）、正己烷對照品（批號：K44699691 329，純度：98.0%）均購自美國Merk公司；乙醇對照品（批號：20140823，純度：99.7%）、二氯甲烷對照品（批號：20140617，純度：99.5%）、苯對照品（批號：20120516，純度：99.5%）均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細(xì)管柱（30 m×0.54 mm，3.0 μm）；程序升溫：初始溫度60℃，保持10 min，以50℃/min升溫至250℃，保持15 min；進(jìn)樣口溫度：180℃；檢測器：氫火焰離子化檢測器；溫度：300℃；載氣：高純氮氣；載氣流速：1.5 mL/min；分流比：10∶1；頂空平衡溫度：100℃；平衡時間：40 min；頂空瓶裝樣量：10 mL；頂空進(jìn)樣量：1 mL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液 精密稱取甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯對照品各適量，置于100 mL量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，制成每1 mL約含甲醇900 μg、乙醇1 500 μg、二氯甲烷180 μg、正己烷87 μg、四氫呋喃216 μg、苯0.6 μg的混合對照品溶液。精密量取上述溶液10 mL，置于頂空瓶中，密封。

2.2.2 供試品溶液 取本品適量，精密稱定，加DMF溶解并定容，搖勻，制成每1 mL含0.3 g的供試品溶液。精密量取上述溶液10 mL，置于頂空瓶中，密封。

2.2.3 空白對照溶液 精密量取DMF 10 mL作為空白對照溶液，置于頂空瓶中，密封。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

取“2.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液、空白對照溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達(dá)到基線分離，分離度＞1.5，理論板數(shù)以甲醇峰計≥10 000，保留時間為2.66 min。結(jié)果表明，其他成分對測定無干擾。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，加DMF稀釋制備甲醇的質(zhì)量濃度分別為178.3、534.8、891.4、1 247.9、1 782.7μg/mL，乙醇的質(zhì)量濃度分別為301.2、903.6、1 506.1、2 108.5、3 012.1μg/mL，二氯甲烷的質(zhì)量濃度分別為33.81、101.43、169.05、236.67、338.10μg/mL，正己烷質(zhì)量濃度分別為18.02、54.06、90.10、126.14、180.22 μg/mL，四氫呋喃質(zhì)量濃度分別43.26、129.78、216.30、302.82、432.58μg/mL，苯質(zhì)量濃度分別為0.126 8、0.380 4、0.634 0、0.887 6、1.268 1μg/mL的系列混合對照品溶液。取上述混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以待測成分質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，各殘留溶劑的回歸方程與線性范圍見表1。

表1 回歸方程與線性范圍Tab 1 Regressive equations and linear ranges

2.5 定量限與檢測限考察

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時，得定量限（LOQ）；當(dāng)信噪比為3∶1時，得檢測限（LOD）。結(jié)果，甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃、苯的LOQ分別為0.31、3.00、0.67、0.02、0.005、0.10μg/mL（n＝6）；LOD分別為0.15、1.51、0.22、0.01、0.001、0.05μg/mL（n＝6）。

2.6 精密度試驗

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯峰面積的RSD分別為1.0%、1.2%、1.8%、2.0%、1.9%、3.1%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：141201）適量，分別于室溫下放置0、1、2、4、6、8 h時按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，樣品中僅有微量甲醇和正己烷殘留（≤0.14%），其他成分均未檢出；甲醇峰面積的RSD＝2.8%（n＝6），正己烷峰面積的RSD＝2.9%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗

取樣品（批號：141201）適量，共6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計算平均含量。結(jié)果，樣品中僅有微量甲醇和正己烷殘留（≤0.14%），其他成分均未檢出；甲醇峰面積的RSD＝4.5%（n＝6），正己烷峰面積的RSD＝5.0%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取樣品（批號：141201）適量，共9份，精密稱定，各置于20 mL量瓶中，分別加入一定質(zhì)量的甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率[10]，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab 2 Results of recovery test（n＝9）

續(xù)表2Continued tab 2

2.10 樣品有機(jī)溶劑殘留量測定

取3批樣品（批號：141201、141202、141203）各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并以外標(biāo)法計算甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯的殘留量，結(jié)果見表3。

表3 樣品有機(jī)溶劑殘留量測定結(jié)果（n＝4，%）Tab 4 Results of residual determination of samples（n＝4，%）

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

本試驗分別考察了PEG-20M（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、DB-624（30 m×0.54 mm，3.0 μm）、HP-5（30 m× 0.32 mm，0.25 μm）3種氣相色譜柱。結(jié)果，采用PEG-20M氣相色譜柱進(jìn)行測定時，乙醇、二氯甲烷與正己烷色譜峰無法達(dá)到基線分離；采用HP-5氣相色譜柱進(jìn)行測定時，二氯甲烷與正己烷色譜峰的分離度無法達(dá)到要求；采用DB-624氣相色譜柱進(jìn)行測定時，各有機(jī)溶劑均能達(dá)到有效分離。因此，選擇DB-624為本試驗的氣相色譜柱。

3.2 溶劑的選擇

甲苯磺酸妥舒沙星易溶于DMF，微溶于甲醇，極微溶解于乙酸乙酯、乙醇、丙酮、水，幾乎不溶于氯仿或乙醚[1]，且頂空氣相色譜法常用溶劑為水、DMF、二甲基亞砜，故選擇DMF作為本試驗的溶劑。

3.3 殘留溶劑限度的確定

參考2015年版《中國藥典》（四部）“通則0861”和人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會有關(guān)規(guī)定，建議制訂各溶劑的檢測限為：甲醇≤0.3%、乙醇≤0.5%、二氯甲烷≤0.06%、正己烷≤0.029%、四氫呋喃≤0.072‰、苯≤0.002‰。本試驗中的方法檢測限都遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于上述限度，3批樣品檢驗結(jié)果均符合要求。

綜上所述，本方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，適用于甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯等有機(jī)溶劑殘留量的同時測定。

[1] Chu DT，Lico IM，Swanson RN，et al.Synthesis and biological properties of A-71497：a prodrug of tosufloxacin [J].Drugs Exp Clin Res，1990，16（4）：435-443.

[2] 李為，陳鷹，潘明杰，等.2008－2013年武漢地區(qū)32家醫(yī)院喹諾酮類藥應(yīng)用分析[J].藥物流行病學(xué)雜志，2015，24（1）：56-59.

[3] 林魯飛，盧維城，吳艷洪.大環(huán)內(nèi)酯類、二甲胺四環(huán)素、妥舒沙星對大環(huán)內(nèi)酯類抗藥性兒童肺炎支原體肺炎療效與抗菌作用的對比研究[J].中國生化藥物雜志，2014，3（34）：84-90.

[4] 王陸軍，劉慧，彭婕，等.南京地區(qū)35家醫(yī)院2009－2011年常用喹諾酮類藥利用分析[J].中國藥房，2013，24（10）：879-882.

[5] 張雪峰，胡燕.甲苯磺酸妥舒沙星滴眼液的制備與穩(wěn)定性考察[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，30（7）：934-935.

[6] 歐年春，胡慧冰，彭艷梅.甲苯磺酸妥舒沙星分散片含量及溶出度的研究[J].中南藥學(xué)，2012，10（1）：23-25.

[7] 門曰利.HPLC對甲苯磺酸妥舒沙星片含量的測定分析[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，3（15）：161-162.

[8] 崔華莉，孫雪花，田銳，等.鋱離子熒光增敏光度法測定甲苯磺酸妥舒沙星[J].西北大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2013，43（4）：571-573.

[9] 孫雪花，高樓軍，于浩，等.基于鋁敏化熒光法測定甲苯磺酸妥舒沙星的研究與應(yīng)用[J].內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2012，43（1）：59-62.

[10] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：105-109、375.

[11] 周海鈞.藥品注冊的國際技術(shù)要求[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：134-136.

（編輯：劉 柳）

Simultaneous Determination of 6 Organic Solvents in Tosufloxacin Tosylate by Headspace GC

ZHANG Wei1，2，LI Wenbo3，LI Xiaoyan1，WANG Weijiao1，TAN Guishan2（1.Hunan Institute for Drug Control，Changsha 410001，China；2.Xiangya School of Pharmaceutical Sciences，Central South University，Changsha 410013，China；3.Third Xiangya Hospital，Central South University，Changsha 410013，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the residual simultaneous determination of methanol，alcohol，dichloromethane，n-hexane，tetrahydrofuran and benzene in tosufloxacin tosylat.METHODS：Headspace GC was performed on the capillary column with 6%cyanopropylphenyl-94%dimethylpolysiloxane（DB-624）as fixative lipid，temperature programmed，the inlet temperature was 180℃，detector was flame ionization detector with temperature of 300℃，carrier gas was high purity N2at a flow rate of 1.5 mL/min，split ratio was 10∶1，headspace equilibrium temperature was 100℃，equilibrium time was 40 min，headspace sample volume was 10 mL，and the headspace sample volume was 1 mL.RESULTS：The linear range was 178.3-1 782.7 μg/mL for methanol（r＝0.999 1），301.2-3 012.1 μg/mL for alcohol（r＝0.999 7），33.81-338.10 μg/mL for dichloromethane（r＝0.999 3），18.02-180.22 μg/mL for n-hexane（r＝0.999 1），43.26-432.58 μg/mL for tetrahydrofuran（r＝0.999 1）and 0.126 8-1.268 1 μg/mL for benzene（r＝0.999 1）；limits of quantification were 0.31，3.00，0.67，0.02，0.005，0.10μg/mL，limits of detection were 0.15，1.51，0.22，0.01，0.001，0.05μg/mL；RSD of precision test was no higher than 3.1%；RSDs of methanol and n-hexane in stabili-ty and reproducibility tests were no higher than 5%；recoveries were 93.72%-102.20%（RSD＝3.1%，n＝9），90.10%-101.79%（RSD＝4.0%，n＝9），97.07%-103.11%（RSD＝2.0%，n＝9），92.38%-103.83%（RSD＝3.9%，n＝9），95.44%-103.62%（RSD＝2.8%，n＝9），and 94.00%-104.73%（RSD＝4.1%，n＝9）.CONCLUSIONS：The method is rapid，sensitive，accurate，and suitable for the residual determination of methanol，alcohol，dichloromethane，n-hexane，tetrahydrofuran and benzene in tosufloxacin tosylat.

Tosufloxacin tosylate；Gas chromatography；Headspace sampling；Organic solvent；Residual甲苯磺酸妥舒沙星（Tosufloxacin tosylate）原料藥是日本富山化學(xué)工業(yè)株式會社于1990年開發(fā)上市的氟喹諾酮類抗菌藥，對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌和厭氧菌均有很好的抗菌作用。臨床常用于呼吸道、尿路、膽道、皮膚軟組織、五官科感染的治療[1-4]。該藥在生產(chǎn)過程中采用了甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯等有機(jī)溶劑。已有文獻(xiàn)報道了甲苯磺酸妥舒沙星制劑中相關(guān)含量的測定[5-9]，但尚未見有關(guān)甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中有機(jī)溶劑殘留量檢測的報道。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，筆者根據(jù)2015年版《中國藥典》（四部）中殘留溶劑測定法[10]以及人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會有關(guān)規(guī)定[11]，首次采用頂空氣相色譜法測定甲苯磺酸妥舒沙星原料藥中甲醇、乙醇、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃和苯等有機(jī)溶劑的殘留量。

R927.2

A

1001-0408（2017）06-0847-04

2016-06-26

2016-12-11）

＊副主任藥師，博士研究生。研究方向：藥品檢驗。E-mail：Zw5890@qq.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.06.35