廖安輝，周光明，陳軍華，高 意，于 璐，張彩虹

（西南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，發(fā)光與實(shí)時(shí)分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400715）

超聲輔助萃取-梯度波長(zhǎng)高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定金櫻子中6 種活性成分

廖安輝，周光明*，陳軍華，高 意，于 璐，張彩虹

（西南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，發(fā)光與實(shí)時(shí)分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400715）

目的：建立超聲輔助萃取高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定金櫻子中沒食子酸、兒茶素、蘆丁、槲皮素、山柰酚和芹菜素6 種活性成分的方法。方法：采用InertSustain C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；流動(dòng)相為甲醇（B）-0.1%乙酸溶液（A）；線性梯度洗脫；流速1.0 mL/min；紫外檢測(cè)梯度波長(zhǎng)為280 nm（0～5.00 min）、350 nm（5.00～20.00 min）；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量20 μL。結(jié)果：該條件下6 種成分的分離度良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍良好，r不低于0.999 1（n=6），平均加標(biāo)回收率（n=3）為96.21%～110.39%（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不高于3.14%）。結(jié)論：方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可為藥用植物金櫻子的定量檢測(cè)和質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

超聲輔助萃取；高效液相色譜；金櫻子；梯度波長(zhǎng)；黃酮類化合物

中藥金櫻子（Rosae Laevigatae Fructus）為薔薇科常綠蔓性灌木金櫻子的種子，又名刺榆子、金罌子等[1-2]。金櫻子作為一種傳統(tǒng)中藥，其味酸、甘、澀、平；歸腎、膀胱、大腸經(jīng)；果實(shí)入藥，有利尿、降血脂作用[3-4]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，金櫻子具有收澀、固精、止瀉等功效，具有良好的生物活性和藥用功能，是一味很有價(jià)值的藥食兩用中藥[5-8]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，金櫻子中的化學(xué)成分主要有甾體、三萜、酚酸、苯丙素和多糖等化合物，還含有維生素、氨基酸、檸檬酸、亞油酸及其衍生物等成分[9-11]。其中黃酮類化合物、有機(jī)酸化合物等具有非常好的抗氧化[12-13]、抗炎[14]和抗腫瘤作用[15-16]，Zhang Shuai等[17]研究表明黃酮類化合物可以有效地提高缺血性腦卒患者的生存率；Liu Yuetao等[18]研究表明黃酮類化合物可明顯降低小白鼠的血脂含量。此外，黃酮類化合物對(duì)小鼠肝臟急性損傷還具有保護(hù)作用[19-21]。因此很有必要對(duì)金櫻子中黃酮和有機(jī)酸成分進(jìn)行定性和定量分析。

金櫻子中黃酮類化合物提取方法主要有超聲波輔助提取[22]、酶法提取[23]、微波技術(shù)提取[24]等；檢測(cè)方法包括紫外光譜檢測(cè)[25]、雙波長(zhǎng)薄層掃描法[26]、大孔樹脂注層法[27]等。目前，對(duì)于金櫻子中總黃酮測(cè)定的研究較多，如薛梅等[28]報(bào)道了金櫻子中的總黃酮的提取及含量測(cè)定；陳乃富等[29]對(duì)金櫻子中總黃酮高效液相色譜指紋圖譜進(jìn)行了研究。但是，鮮見金櫻子多種黃酮的分離和定量的報(bào)道，黃云祥等[30]利用高效液相法僅僅分離了金櫻子中的3 種黃酮類化合物。為了更好地評(píng)估金櫻子的藥材質(zhì)量，有必要進(jìn)一步研究其中黃酮等成分的含量。因此，本實(shí)驗(yàn)利用超聲輔助萃取-高效液相色譜法完成了金櫻子中沒食子酸、兒茶素、蘆丁、槲皮素、山柰酚和芹菜素6 種成分的同時(shí)分離和定量分析。該方法測(cè)定快速、重復(fù)性好且檢測(cè)限低，這為金櫻子的質(zhì)量控制和評(píng)估提供新的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

金櫻子購(gòu)于重慶市藥房。

沒食子酸、兒茶素、蘆丁、槲皮素、山柰酚和芹菜素對(duì)照品（純度均≥98.5%） 上海晶純實(shí)業(yè)有限公司；乙酸（分析純）、甲醇（色譜純） 重慶川東化工有限公司化學(xué)試劑廠；二次蒸餾水 實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 儀器與設(shè)備

LC-20A高效液相色譜儀（包括SPD-20A紫外檢測(cè)器、CTO-10AS柱溫箱、LC-20AT泵） 日本島津公司；KH-3200B型超聲波清洗器 昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；SZ-2自動(dòng)雙重純化水蒸餾器 上海滬西分析儀器廠有限公司；XY型電熱恒溫干燥箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；FA2004A型分析天平 上海精天電子儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 對(duì)照品溶液的配制

精密稱定各對(duì)照品適量于10 mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，分別配制成質(zhì)量濃度500.0 μg/mL沒食子酸、760.0 μg/mL兒茶素、500.0 μg/mL蘆丁、500.0 μg/mL槲皮素、460.0 μg/mL山柰酚和700.0 μg/mL芹菜素的對(duì)照品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液各1.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制成混合對(duì)照品溶液，置于冰箱（4 ℃）內(nèi)避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 樣品溶液的配制

精密稱取去核金櫻子果實(shí)殼干燥粉末（過60 目篩）0.1 g，置于具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入80%甲醇溶液8 mL，稱定質(zhì)量，超聲20 min（120 W，40 kHz），放冷，再稱定質(zhì)量，用80%甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜止，取上清液用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得樣品溶液。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：InertSustain C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇為流動(dòng)相B，乙酸（pH 3.0）為流動(dòng)相A，梯度洗脫（0～5 min，28%～50% B；5～1 5 m i n，5 0%～6 0% B；1 5～2 0 m i n，60%～28% B）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：0～5 min，280 nm；5～20 min，350 nm；柱溫：35 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品和對(duì)照品的色譜圖

圖1 樣品（A）和混合對(duì)照品（B）色譜圖Fig.1 Chromatograms of sample (A) and mixed standards (B)

樣品和標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的色譜圖見圖1。當(dāng)兩相鄰峰之間的分離度R（兩峰保留時(shí)間差與兩峰峰底寬平均值之商）大于1.5即為完全分離；經(jīng)計(jì)算得6 個(gè)成分與相鄰組分的分離度介于1.51～4.8，說明已得到完全分離。圖譜選用拖尾因子T（5%峰高處峰寬與峰頂點(diǎn)至前沿的距離比）作為評(píng)價(jià)峰形的參數(shù)，T在0.95～1.05之間則說明峰形良好，經(jīng)計(jì)算得組分1、3和6的T值1.09～1.13，說明存在一定的拖尾現(xiàn)象，這可能是因?yàn)闃悠啡芤褐泻衅渌y分離的雜質(zhì)所致；而組分2、4和5的T值均在0.96～1.03之間，說明峰形良好。

2.2 實(shí)驗(yàn)條件考察結(jié)果

2.2.1 流動(dòng)相對(duì)分離效果的影響

本實(shí)驗(yàn)分別比較了甲醇、乙醇與不同pH值乙酸溶液作為流動(dòng)相的分離效果。結(jié)果表明當(dāng)pH 3.0時(shí)的乙酸溶液作為流動(dòng)相A時(shí)能夠有效改善芹菜素色譜峰的拖尾現(xiàn)象。對(duì)比甲醇和乙醇作為流動(dòng)相B時(shí)的色譜峰，發(fā)現(xiàn)甲醇作為流動(dòng)相時(shí)山柰酚和芹菜素的分離度明顯大于乙醇作為流動(dòng)相的分離度，這可能是由于乙醇的極性弱于甲醇，使得山柰酚和芹菜素的分離效果較差。為了改善色譜峰的峰形和避免樣品基質(zhì)中雜質(zhì)對(duì)分析目標(biāo)物的干擾，不斷調(diào)節(jié)流動(dòng)相的比例，最終確定了1.3.3節(jié)中的梯度洗脫條件。

2.2.2 波長(zhǎng)對(duì)檢測(cè)效果的影響

查閱文獻(xiàn)可知沒食子酸、兒茶素、蘆丁分別在273、280、360 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，而槲皮素、山柰酚和芹菜素分別在360、360、350 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。綜合考慮后，實(shí)驗(yàn)比較了樣品在254、280、320、350 nm波長(zhǎng)處的吸收強(qiáng)度。結(jié)果表明待測(cè)成分在280 nm波長(zhǎng)條件下均有較強(qiáng)吸收，但在此條件下也有較多雜質(zhì)吸收峰，且在15 min后出現(xiàn)基線漂移現(xiàn)象；而在350 nm波長(zhǎng)條件下，雖然沒食子酸和兒茶素?zé)o吸收，但蘆丁、槲皮素、山柰酚和芹菜素的出峰效果良好，且基線平穩(wěn)、雜峰較少；所以最終采用1.3.3節(jié)中的梯度波長(zhǎng)為最佳檢測(cè)條件。

2.3 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 甲醇溶液體積分?jǐn)?shù)的確定

圖2 甲醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)提取量的影響Fig.2 Effect of methanol concentration on the extraction eff i ciency

實(shí)驗(yàn)比較了40%、50%、60%、80%和100%甲醇體積分?jǐn)?shù)作為提取溶劑的提取效果，圖2表明：6種分析物的提取量隨著甲醇體積分?jǐn)?shù)的增大而先增大后減小，最終確定60%甲醇體積分?jǐn)?shù)作為最佳提取溶劑體積分?jǐn)?shù)。

2.3.2 固液比的確定

圖3 固液比對(duì)提取量的影響Fig.3 Effect of solid-to-liquid ratio on the extraction eff i ciency

本實(shí)驗(yàn)還比較了固液比分別為1∶20、1∶40、1∶60、1∶80、1∶100（g/mL）的提取效果，結(jié)果如圖3所示，當(dāng)固液比為1∶60時(shí)，所測(cè)組分總提取量最高，故選擇1∶60的固液比進(jìn)行下一步試驗(yàn)。

2.3.3 超聲時(shí)間的確定

本實(shí)驗(yàn)比較了甲醇超聲時(shí)間分別為10、20、30、40、50 min時(shí)所測(cè)6 種目標(biāo)組分含量，結(jié)果表明樣品超聲10、30 min時(shí)提取量較低，在20 min得到的所測(cè)組分的總含量最高，40、50 min時(shí)提取量較30 min有所增加，但增量不明顯，故選擇20 min為最佳超聲時(shí)間，超聲時(shí)間對(duì)6 種活性成分提取量的影響見圖4。

圖4 超聲時(shí)間對(duì)提取量的影響Fig.4 Effect of ultrasound treatment time on the extraction eff i ciency

2.3.4 超聲功率的確定

實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步比較了40%、60%、70%、80%、100%功率條件下所測(cè)組分提取量，結(jié)果表明在最大功率的60%（120 W）時(shí)提取出的6種活性成分量最高，故選擇最大功率的60%（120 W）為最佳超聲功率，超聲功率對(duì)6 種活性成分提取量的影響見圖5。

圖5 超聲功率對(duì)提取量的影響Fig.5 Effect of ultrasound power on the extraction eff i ciency

2.4 正交試驗(yàn)結(jié)果

為進(jìn)一步優(yōu)化提取條件，本實(shí)驗(yàn)采用L9（34）正交試驗(yàn)優(yōu)化各參數(shù)，其中主要考察甲醇體積分?jǐn)?shù)、固液比、超聲時(shí)間和超聲功率4 個(gè)影響因素，各取3 個(gè)水平，試驗(yàn)中利用6 種成分的提取總量來評(píng)價(jià)提取性能。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的結(jié)果及直觀分析見表1。從表1的極差R可知，各因素對(duì)6種成分提取總量的影響程度依次為B＞D＞C＞A，即超聲功率和甲醇體積分?jǐn)?shù)是影響6種成分提取總量的主要因素，兩因素影響值接近且遠(yuǎn)大于超聲時(shí)間的影響值。從直觀分析結(jié)果（表1）中可得提取6 種成分的最佳條件為A1B3C3D3，即超聲時(shí)間20 min、超聲功率200 W、固液比1∶100、甲醇體積分?jǐn)?shù)60%。

表1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果的直觀分析Table1 Orthogonal array design with intuitive analysis of experimental results

2.5 實(shí)驗(yàn)方法學(xué)結(jié)果

2.5.1 線性關(guān)系考察結(jié)果

精確吸取混合對(duì)照品溶液（1.3.1節(jié)制得），以50%甲醇溶液逐步稀釋為8 個(gè)不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，由低質(zhì)量濃度到高質(zhì)量濃度每個(gè)質(zhì)量濃度依次進(jìn)樣3 次，并在1.3.3節(jié)色譜條件下進(jìn)行分析。最后以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)X，平均峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸分析。6 種被測(cè)成分的線性關(guān)系考察結(jié)果見表2。該條件下6 種成分的分離度良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍良好，相關(guān)系數(shù)r不低于0.999 1（n=6）。

表2 6 種被測(cè)成分的線性方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)Table2 Regression equations, linear ranges and correlation coeff i cients of 6 compounds

2.5.2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

取混合對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定各個(gè)對(duì)照品的峰面積，結(jié)果沒食子酸、兒茶素、蘆丁、槲皮素、山柰酚和芹菜素平均峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.76%、1.63%、1.45%、1.21%、1.33%、1.26%，表明儀器精確度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

吸取同一供試溶液2 d內(nèi)每隔3 h進(jìn)樣測(cè)分析，結(jié)果表明沒食子酸、兒茶素、蘆丁、槲皮素、山柰酚和芹菜素平均峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.57%、1.34%、1.52%、1.19%、1.27%、1.42%，由此表明該方法具有良好的穩(wěn)定性。稱取同一批樣品6份制備供試品溶液（按照1.3.2節(jié)方法制備），分別進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示沒食子酸、兒茶素、蘆丁、槲皮素、山柰酚和芹菜素平均峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）分別為1.37%、1.37%、1.29%、1.04%、0.95%、0.93%，表明儀器重復(fù)性良好。

2.5.4 樣品的含量測(cè)定及回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

取金櫻子粉末制備供試品溶液3 份（以1.3.2節(jié)中的方法），每份樣品進(jìn)樣測(cè)定分析，根據(jù)表2中的線性方程得出樣品中各個(gè)成分的含量，結(jié)果表明金櫻子中含有沒食子酸450.1 μg/g、兒茶素2 324.6 μg/g、蘆丁182.4 μg/g、槲皮素20.8 μg/g、山柰酚8.2 μg/g、芹菜素12.1 μg/g。稱取9 份同一批次粉末各0.1 g，每3 個(gè)為一組，每組按照低、中、高分別加入對(duì)應(yīng)含量的對(duì)照品溶液，再按照1.3.1節(jié)制備供試品溶液，得到3 組9 個(gè)樣品溶液，從低質(zhì)量濃度到高質(zhì)量濃度分別進(jìn)樣2 次測(cè)定分析，計(jì)算平均回收率，見表3。平均加標(biāo)回收率（n=3）為96.21%～110.39%（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不高于3.14%）。

表3 樣品含量測(cè)定及加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)（n=3）Table3 Contents and spiked recovery of the analytes in real samples (n= 3)

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)采用超聲輔助萃取的方法，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化了金櫻子中沒食子酸、兒茶素、蘆丁、槲皮素、山柰酚和芹菜素的最佳提取條件，并采用梯度波長(zhǎng)同時(shí)測(cè)定金櫻子中的6 種有效成分，確立了最佳檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm（0～5 min）、350 nm（5～20 min），甲醇體積分?jǐn)?shù)60%，固液比1∶60（g/mL），超聲時(shí)間20 min，超聲功率100%，其中對(duì)提取結(jié)果影響最大的是甲醇體積分?jǐn)?shù)和超聲功率；結(jié)果表明金櫻子中含有沒食子酸450.1 μg/g、兒茶素2 324.6 μg/g、蘆丁182.4 μg/g、槲皮素20.8 μg/g、山柰酚8.2 μg/g、芹菜素12.1 μg/g；本實(shí)驗(yàn)通過高效液相色譜法實(shí)現(xiàn)了對(duì)金櫻子中沒食子酸、兒茶素、蘆丁、槲皮素、山柰酚和芹菜素的同時(shí)分離和定量測(cè)定；具有方法穩(wěn)定性強(qiáng)，檢測(cè)限低等優(yōu)點(diǎn)；這給中藥金櫻子中有效成分的研究提供了新的參考價(jià)值，也給測(cè)定金櫻子中的其他有效成分提供了可行的實(shí)驗(yàn)參考條件。

[1] AZIMOVA S S, GLUSHENKOVA A I. Rosa laevigata Michx.[M]. London: Springer, 2012: 764-764.

[2] 國(guó)家藥典編委會(huì). 中國(guó)藥典: 一部[M]. 2005年版. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 153.

[3] 趙德貴. 固精縮尿要藥——金櫻子[J]. 中國(guó)保健食品, 2014(6): 82-82.

[4] DONG D, QI Y, XU L, et al. Total saponins from Rosa laevigata Michx. fruit attenuates hepatic steatosis induced by high-fat diet in rats[J]. Food and Function, 2014, 5(12): 3065-3075. DOI:10.1039/ C4FO00491D.

[5] 周鈺娟. 金櫻子對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病腎病抗氧化和抗炎作用機(jī)制研究[D].長(zhǎng)沙: 中南大學(xué), 2012.

[6] 周俊, 何湘珍, 肖啟國(guó), 等. 金櫻子對(duì)大鼠糖尿病性白內(nèi)障細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激的影響[J]. 中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志, 2014(3): 241-245. DOI:10.15972/j.cnki.43-1509/r.2014.03.014.

[7] MENG J F, FANG Y L, GAO J S, et al. Phenolics composition and antioxidant activity of wine produced from Spine Grape (Vitis davidii, Foex) and Cherokee Rose (Rosa laevigata Michx.) fruits from South China[J]. Journal of Food Science, 2012, 71(1): C8-C14. DOI:10.1111/ j.1750-3841.2011.02499.

[8] 劉學(xué)貴, 李佳駱, 高品一, 等. 藥食兩用金櫻子的研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(11): 392-398. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201311081.

[9] GAO P Y, LI L Z, PENG Y, et al. Triterpenes from fruits of Rosa laevigata[J]. Biochemical Systematics and Ecology, 2010, 38(3): 457-459. DOI:10.1016/j.bse.2010.03.014.

[10] YUAN J Q, YANG X Z, MIAO J H, et al. New triterpene glucosides from the roots of Rosa laevigata Michx.[J]. Molecules, 2008, 13(9): 2229-2237. DOI:10.3390/molecules13092229.

[11] 王進(jìn)義, 張國(guó)林, 程?hào)|亮, 等. 中藥金櫻子的化學(xué)成分[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2001, 13(1): 21-23. DOI:10.3969/ j.issn.1001-6880.2001.01.006.

[12] LIU Y T, LU B N, XU L N, et al. The antioxidant activity and hypolipidemic activity of the total flavonoids from the fruit of Rosa laevigata Michx.[J]. Natural Science, 2010, 2(3): 175-183. DOI:10.4236/ns.2010.23027.

[13] DIAZ P, SANG C J, LEE S, et al. Antioxidant and anti-inf l ammatory activities of selected medicinal plants and fungi containing phenolic and flavonoid compounds[J]. Chinese Medicine, 2012, 7(1): 1-9. DOI:10.1186/1749-8546-7-26.

[14] TAO X F, SUN X C, XU L N, et al. Total flavonoids from Rosa laevigata Michx. fruit ameliorates hepatic ischemia/reperfusion injury through inhibition of oxidative stress and inflammation in rats[J]. Nutrients, 2016, 8(7): 418-426. DOI:10.3390/nu8070418.

[15] XIAO K J, ZHANG L, LIU X H, et al. In vitro anti-tumor effects of chemically modified polysaccharides from Cherokee rose fruit[J]. International Journal of Food Engineering, 2014, 10(3): 473-479. DOI:10.1515/ijfe-2014-0065.

[16] SAKAGAMI H, SATOH K. Prooxidant action of two antioxidants: ascorbic acid and gallic acid[J]. Anticancer Research, 1997, 17(1A): 221-224.

[17] ZHANG S, QI Y, XU Y W, et al. Protective effect of fl avonoid-rich extract from Rosa laevigata Michx. on cerebral ischemia-reperfusion injury through suppression of apoptosis and inflammation[J]. Neurochemistry International, 2013, 63(5): 522-532. DOI:10.1016/ j.neuint.2013.08.008.

[18] LIU Y T, LU B N, PENG J Y. Hepatoprotective activity of the total flavonoids from Rosa laevigata, Michx. fruit in mice treated by paracetamol[J]. Food Chemistry, 2011, 125(2): 719-725. DOI:10.1016/ j.foodchem.2010.09.080.

[19] ZHANG S, ZHENG L L, DONG D S, et al. Effects of fl avonoids from Rosa laevigata Michx fruit against high-fat diet-induced non-alcoholic fatty liver disease in rats[J]. Food Chemistry, 2013, 141(3): 2108-2116. DOI:10.1016/j.foodchem.2010.09.080.

[20] HE R R, YAO X S, YAO N, et al. Protective effects of Radix Rosa laevigata against Propionibacterium acnes and lipopolysaccharideinduced liver injury[J]. Bioscience Biotechnology and Biochemistry, 2009, 73(5): 1129-1136. DOI:10.1271/bbb.80897.

[21] SHUAI Z, LU B N, XU H, et al. Protection of the fl avonoid fraction from Rosa laevigata Michx. fruit against carbon tetrachloride-induced acute liver injury in mice[J]. Food and Chemical Toxicology, 2013, 55(3): 60-69. DOI:10.1016/j.fct.2012.12.041.

[22] 劉焱, 張延魯, 覃克鳳. 金櫻子中總黃酮的超聲提取及抗氧化活性分析[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué), 2016(5): 1256-1258. DOI:10.14088/j.cnki. issn0439-8114.2016.05.042.

[23] 林宣賢. 酶法提取金櫻子總黃酮的研究[J]. 中國(guó)食品添加劑, 2009(4): 117-121.

[24] 王慧竹, 陳帥, 朱巖, 等. 纖維素酶-微波輔助法提取金櫻子總皂苷的工藝研究[J]. 中國(guó)釀造, 2016, 35(3): 84-88. DOI:10.11882/ j.issn.0254-5071.2016.03.019.

[25] 安冬琴, 晏建新, 王曉麗. 紫外測(cè)定不同產(chǎn)地不同采收期金櫻子中總黃酮的含量[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2015(14): 79-80. DOI:10.13989/ j.cnki.0517-6611.

[26] 盧靜華, 于玲. 雙波長(zhǎng)薄層掃描法測(cè)定金櫻子中總黃酮的含量[J].中國(guó)藥房, 2008, 19(21): 1636-1637.

[27] 陳乃富, 陳科, 張莉, 等. 大孔樹脂柱層析法純化金櫻子總黃酮的初步研究[J]. 中藥材, 2007, 30(8): 1013-1016. DOI:10.13863/ j.issn1001-4454.

[28] 薛梅, 王魯石, 杜華, 等. 金櫻子中總黃酮的提取及含量測(cè)定[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐, 2003, 17(5): 16-17. DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2005.10.036.

[29] 陳乃富, 韓邦興, 張莉, 等. 金櫻子總黃酮的HPLC指紋圖譜的初步研究[J]. 安徽農(nóng)學(xué)通報(bào), 2007, 13(3): 34-35. DOI:10.16377/j.cnki. issn1007-7731.2007.03.016.

[30] 黃云祥, 王錦軍, 張秀梅. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定金櫻子中槲皮素、山萘酚、芹菜素的含量[J]. 現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐, 2009(1): 33-36. DOI:10.13728/j.1673-6427.2009.01.020.

Simultaneous Determination of Six Active Compounds in Rosae Laevigatae Fructus by Ultrasonic-Assisted Extraction and HPLC with Gradient Wavelength Detection

LIAO Anhui, ZHOU Guangming*, CHEN Junhua, GAO Yi, YU Lu, ZHANG Caihong
(Key Laboratory on Luminescence and Real-Time Analysis, Ministry of Education, School of Chemistry and Chemical Engineering, Southwest University, Chongqing 400715, China)

Objective: To establish a method for and the simultaneous determination of gallic acid, catechin, rutin, quercetin, kaempferol and apigenin in Rosae Laevigatae Fructus by ultrasonic-assisted extraction combined with high performance liquid chromatography (HPLC). Methods: The analytes in Rosae Laevigatae Fructus were separated on an InertSustain C18column (150 mm × 4.6 mm, 5 μm). The mobile phase consisted of methanol and 0.1% acetic acid (pH 3.0) for gradient elution at a fl ow rate of 1.0 mL/min. The UV gradient wavelength for detection was set at 280 nm (0–5.00 min) and 350 nm (5.00–20.00 min). The column temperature was kept at 35 ℃. Results: The complete separation of 6 active ingredients was achieved under the above conditions. The calibration curves of the analytes showed a good linear relationship (r ≥ 0.999 1, n = 6). The average recoveries were in the range of 96.21%–110.39% with relative standard deviation (RSD) ≤ 3.14%. Conclusion: The method is simple, rapid and accurate and can provide a basis for the quantitative detection and quality control of Rosae Laevigatae Fructus.

ultrasonic-assisted extraction; HPLC; Rosae Laevigatae Fructus; gradient wavelength; fl avonoid compounds

10.7506/spkx1002-6630-201704023

O657.72

A

1002-6630（2017）04-0141-05

廖安輝, 周光明, 陳軍華, 等. 超聲輔助萃取-梯度波長(zhǎng)高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定金櫻子中6 種活性成分[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(4): 141-145. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201704023. http://www.spkx.net.cn

LIAO Anhui, ZHOU Guangming, CHEN Junhua, et al. Simultaneous determination of six active compounds in Rosae Laevigatae Fructus by ultrasonic-assisted extraction and HPLC with gradient wavelength detection[J]. Food Science, 2017, 38(4): 141-145. (in Chinese with English abstract)

10.7506/spkx1002-6630-201704023. http://www.spkx.net.cn

2016-05-26

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（21277110）；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（100030-2120130993）

廖安輝（1992—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)殡x子色譜。E-mail：lah166@email.swu.edu.cn

*通信作者：周光明（1964—），男，教授，博士，研究方向?yàn)樯V及其聯(lián)用技術(shù)。E-mail：gmzhou@swu.edu.cn