劉智，楊娜，夏勤，李林豐，梁鵬，夏涌然，劉汝藝，劉祿

(遂寧市中心醫(yī)院，四川 遂寧 629000)

輔助檢查醫(yī)學(xué)

論述免疫組織化學(xué)染色中抗原修復(fù)方式及對(duì)比分析

劉智，楊娜，夏勤，李林豐，梁鵬，夏涌然，劉汝藝，劉祿*

(遂寧市中心醫(yī)院，四川 遂寧 629000)

目的：探討分子生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)免疫組織化學(xué)染色中抗原修復(fù)的最佳方式。方法：采用高溫高壓修復(fù)法和微波修復(fù)法對(duì)病理科采用的四項(xiàng)免疫組織化學(xué)標(biāo)記(ER、PR、C-erbB-2及E-Cadherin)進(jìn)行染色對(duì)比以獲取最佳抗原修復(fù)方法，在顯微鏡下評(píng)判其統(tǒng)計(jì)陽性率及陽性程度對(duì)兩種方法進(jìn)行比較。結(jié)果：ER、PR、C-erbB-2及E-Cadherin四項(xiàng)標(biāo)記在高溫高壓抗原修復(fù)法與微波抗原修復(fù)法均具有較高的陽性率，在陽性程度、顯色強(qiáng)度及背景清晰度方面高溫高壓抗原修復(fù)法要優(yōu)于微波抗原修復(fù)法。結(jié)論：高溫高壓抗原修復(fù)法與微波抗原修復(fù)法均是簡(jiǎn)便實(shí)用的方法，兩者相比高溫高壓抗原修復(fù)法具有更強(qiáng)適用性。

免疫組化；抗原修復(fù)；方法對(duì)比；分析

病理診斷工作中免疫組織化學(xué)染色技術(shù)(IHC，簡(jiǎn)稱免疫組化)是一項(xiàng)重要參考，其被廣泛應(yīng)用于診斷與鑒別診斷中[1]。免疫組化是一項(xiàng)由多步驟組成的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，具體為：組織固定、切片制備、抗原修復(fù)、抗原抗體反應(yīng)、目標(biāo)抗原顯色等[2]。其對(duì)試劑、實(shí)驗(yàn)室條件、實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)操作都有嚴(yán)格的要求。在以上步驟中抗原修復(fù)為重要環(huán)節(jié)，其目的為使經(jīng)4%中性甲醛固定液處理的標(biāo)本中被封閉的抗原決定簇表達(dá)，為病理診斷及疾病預(yù)后判斷提供事實(shí)依據(jù)[3]。目前，抗原修復(fù)有多種方法，如酶修復(fù)法、加熱修復(fù)法、微波修復(fù)法、高溫高壓修復(fù)法等。本實(shí)驗(yàn)室在結(jié)合自身實(shí)際條件及查閱文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，選取微波修復(fù)法、高溫高壓修復(fù)法兩種方法對(duì)ER、PR、C-erbB-2及E-Cadherin四項(xiàng)進(jìn)行染色比較來獲取最佳抗原修復(fù)方法。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年8月—2016年8月遂寧市中心醫(yī)院病理科乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌標(biāo)本100 份。經(jīng)兩位病理醫(yī)師診斷確診，組織直徑在3 cm以上，蘇木精—伊紅染色法(HE)染色切片細(xì)胞清晰，對(duì)比度明顯、顏色鮮艷。

1.2 試劑及儀器

即用型ER、PR、C-erbB-2、E-Cadherin一抗，二抗，DAB試劑均購(gòu)自福州邁新試劑公司(邁新，福州)；微波爐及高壓鍋均為市售產(chǎn)品。

1.3 染色方法

烘烤切片過夜(60 ℃，12 h)，采用TO環(huán)保試劑組織切片脫蠟，蒸餾水沖洗切片10 min，共2次。高溫高壓法采用高壓鍋進(jìn)行，微波法在微波爐環(huán)境中產(chǎn)生。免疫組化染色步驟均按照實(shí)驗(yàn)操作步驟完成。

1.4 結(jié)果判斷

染色結(jié)果依據(jù)部位不同分為細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜，以陽性表達(dá)為準(zhǔn)，染色需均勻、清晰，背景無著色，無非特異性著色。ER、PR均為細(xì)胞核陽性，C-erbB-2為細(xì)胞膜陽性，E-Cadherin為細(xì)胞膜陽性。免疫組化表達(dá)陽性程度評(píng)判方法[4-5]分為：-(腫瘤細(xì)胞無表達(dá))、-或+(腫瘤細(xì)胞陽性表達(dá)<1/3)、+(腫瘤細(xì)胞陽性表達(dá)占癌細(xì)胞總數(shù)<1/3)、++(腫瘤細(xì)胞陽性表達(dá)占癌細(xì)胞總數(shù)1/3～2/3)、+++(腫瘤細(xì)胞陽性表達(dá)占癌細(xì)胞總數(shù)>2/3)。本研究以腫瘤細(xì)胞表達(dá)為+、++、+++判定為陽性組；腫瘤細(xì)胞表達(dá)為-、-或+判定為陰性組。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 兩種方法下四項(xiàng)標(biāo)記陽性率比較

四項(xiàng)標(biāo)記在兩種抗原修復(fù)方法下陽性率均>50%，ER標(biāo)記陽性率最高，達(dá)到80%以上；其次為PR及E-Cadherin兩項(xiàng)，達(dá)到70%以上，C-erbB-2標(biāo)記陽性率>60%。兩種抗原修復(fù)法下四項(xiàng)標(biāo)記的陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表1)。

表1 兩種方法下四項(xiàng)標(biāo)記陽性率比較

2.2 兩種方法下四項(xiàng)標(biāo)記陽性程度比較

兩種方法下對(duì)四項(xiàng)標(biāo)記進(jìn)行陽性程度統(tǒng)計(jì)(統(tǒng)計(jì)中去除陰性標(biāo)記)。將兩組分別按照陽性程度分為+++組與++組、+組。四項(xiàng)標(biāo)記在兩種方法下其陽性程度組內(nèi)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；四項(xiàng)標(biāo)記在兩種方法下其++組進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

ER標(biāo)記+++組和++組的陽性程度在兩種方法間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，+組陽性例數(shù)微波法明顯多于高溫高壓法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PR與E-Cadherin標(biāo)記表現(xiàn)相似，+++組陽性例數(shù)高溫高壓法明顯多于微波法，而+組均為高溫高壓法低于微波法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C-erbB-2標(biāo)記在兩種方法下+++組、++組、+組三組分布較均勻，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 兩種抗原修復(fù)法對(duì)四項(xiàng)標(biāo)記免疫組化的陽性程度比較

2.3 兩種方法對(duì)四項(xiàng)標(biāo)記免疫組化陽性的顯色強(qiáng)度

在陽性標(biāo)記顯色強(qiáng)度上與微波抗原修復(fù)法相比，高溫高壓抗原修復(fù)法具有顯色深、陽性標(biāo)記明顯、背景清晰、假陽性顯色低等優(yōu)點(diǎn)。

3 討 論

免疫組化的染色質(zhì)量及效果受多種因素影響，在眾多因素中抗原修復(fù)最為重要，不恰當(dāng)?shù)目乖迯?fù)可導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果[6]。高溫高壓抗原修復(fù)法與微波抗原修復(fù)法的原理大致相同，通過高溫高壓作用或高頻電磁波將組織中交聯(lián)的醛鏈打開，使抗原充分暴露，達(dá)到修復(fù)抗原的目的[7]。

本研究表1結(jié)果顯示在相同實(shí)驗(yàn)條件下高溫高壓抗原修復(fù)法與微波抗原修復(fù)法均能保證較高陽性率，表明兩種抗原修復(fù)方法均具有較高的可靠性和實(shí)用性，能夠保證病理科免疫組化工作的開展。表2結(jié)果顯示高溫高壓抗原修復(fù)法與微波抗原修復(fù)法相比，ER、PR與E-Cadherin標(biāo)記為+++組占多數(shù)，而+組數(shù)量少。C-erbB-2標(biāo)記也表現(xiàn)為+++組數(shù)量較多，+組數(shù)量較少。表明高溫高壓抗原修復(fù)法的抗原陽性程度更明顯，可靠性更高。

免疫組化對(duì)病理診斷具有重要的指導(dǎo)意義，某些指標(biāo)是臨床治療及預(yù)后判斷的重要指標(biāo)，如ER、PR、C-erbB-2、E-Cadherin關(guān)系到患者能否接受針對(duì)性治療[8]。2008年全國(guó)病理學(xué)技術(shù)進(jìn)展和應(yīng)用研討會(huì)上提出將質(zhì)控工作應(yīng)用于免疫組化技術(shù)，免疫組化技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)控管理日趨受到重視，從各省市三級(jí)甲等醫(yī)院到各地市州各級(jí)醫(yī)院逐步實(shí)行免疫組化質(zhì)控工作，進(jìn)一步規(guī)范免疫組化操作[9]。由于受條件限制，二級(jí)醫(yī)院還未全面參與，目前免疫組化的操作方法多樣，結(jié)果準(zhǔn)確性令人擔(dān)憂[10]。隨著患者法律知識(shí)的加強(qiáng)，醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)越來越大，迫切要求開展免疫組化的醫(yī)院實(shí)施有效途徑，提高免疫組化質(zhì)量控制。

綜上所述，高溫高壓抗原修復(fù)法要優(yōu)于微波抗原修復(fù)法，在今后工作中病理科需加強(qiáng)免疫組化染色質(zhì)量控制，以期提供更加準(zhǔn)確優(yōu)質(zhì)的免疫組化報(bào)告，為患者臨床診斷、治療及疾病預(yù)后提供參考。

[1]吳秉銓，劉彥仿.免疫組織化學(xué)病理診斷[M].北京：科學(xué)技術(shù)出版社，2007：34-45.

[2]駱新蘭，蔡秀珍，劉艷輝，等.不同的抗原修復(fù)條件對(duì)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的影響[J].中華病理學(xué)雜志，2005，34(1)：52-56.

[3]郭麗，祁榮，吳鵬.不同的抗原修復(fù)方法在免疫組織化學(xué)染色中的應(yīng)用[J].沈陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，14(3)：152-155.

[4]余杏娟，王博，許靜.不同抗原修復(fù)方法在免疫組化染色的應(yīng)用比較[J].國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2009，15(11)：1-4.

[5]郭秀芳.高溫高壓抗原修復(fù)法提高乳腺癌免疫組化準(zhǔn)確率的應(yīng)用研究[J].河北醫(yī)藥，2010，32(6)：674-677.

[6]王濤，江澤飛.美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)和美國(guó)病理醫(yī)師學(xué)院乳腺癌激素受體檢測(cè)指南的臨床意義[J].中華病理學(xué)雜志，2010，39(11)：721-722.

[7]劉海洋，王效軍，張海宇，等.微波夾肉修復(fù)和鹽酸水解修復(fù)方法對(duì)大鼠腦組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的影響[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，33(11)：1 115-1 116.

[8]萬俊峰，王影.改良高壓鍋修復(fù)法對(duì)提高免疫組化檢測(cè)ER、Ki-67抗原表達(dá)水平的影響[J].腫瘤預(yù)防與治療，2013，26(3)：155-158.

[9]楊瑩，魏兵，步宏.固定和處理對(duì)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的影響及其標(biāo)準(zhǔn)化探討[J].中華病理學(xué)雜志，2009，38(12)：852-855.

[10]齊文娟，申洪.提高陳舊性石蠟標(biāo)本抗原檢出率的抗原修復(fù)方法[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26(10)：1 761-1 763.

Discusses the immunohistochemical staining of antigen repairing method and comparative analysis

LIU Zhi，YANG Na，XIA Qin，LI Linfeng，LIANG Peng，XIA Yongran，LIU Ruyi，LIU Lu

(Suining Central Hospital，Suining 629000，China)

Objective：To discuss molecular biochemistry laboratory undergraduate course room immunohistochemical staining in antigen repair the best way.Methods：The four immunohistochemical markers (ER，PR，C-erbB-2 and E-cadherin) were stained and contrasted in the pathology by high temperature and high pressure repair method and microwave repair method to obtain the best antigen retrieval method.Its statistical positive rate and positive degree of two methods were compared and evaluated under the microscope.Results：ER，PR，C-erbB-2 C and E - Cadhrin four tags in high temperature and high pressure antigen repairing method and the microwave antigen repair method has higher positive rate，background of positive degree，color depth and clarity in high temperature and high pressure antigen repairing method is superior to the microwave antigen repair method.Conclusion：High temperature and high pressure antigen repairing method and the microwave antigen repair method is simple and practical method，both，compared to high temperature and high pressure antigen repair method has better applicability.

immunohistochemical；antigen repair；contrast method；analysis

1671-8631(2017)03-0217-03

*本文通訊作者：劉祿

R361.2

A

2016-08-14

(本文編輯：王作利)

劉智(1982— )，男，四川省遂寧市人，主管技師。研究方向：分子免疫技術(shù)、病理實(shí)驗(yàn)室管理及質(zhì)量控制。