石昌杰，花秋紅，張麗紅， 張儒

(上海市信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與疾病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 同濟(jì)大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院, 上海 200092)

神經(jīng)干細(xì)胞特異性LSD1基因敲除對(duì)小鼠情緒及記憶的影響

石昌杰，花秋紅，張麗紅， 張儒*

(上海市信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與疾病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 同濟(jì)大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院, 上海 200092)

目的 條件敲除小鼠神經(jīng)干細(xì)胞LSD1基因后，通過(guò)觀察小鼠神經(jīng)細(xì)胞增殖情況及小鼠行為的表現(xiàn)，揭示LSD1的神經(jīng)生物學(xué)功能。方法 將LSD1(flox/flox) 轉(zhuǎn)基因小鼠與神經(jīng)干細(xì)胞特異性表達(dá)Cre重組酶的Nestin-cre(Tg)轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行的雜交，即利用Cre-LoxP系統(tǒng)，繁殖出LSD1(flox/flox)Nestin-cre(Tg) 基因型小鼠，即為所需神經(jīng)干細(xì)胞LSD1條件性敲除小鼠(LSD1-CKO)，LSD1(flox/ flox)做為對(duì)照小鼠。進(jìn)一步運(yùn)用免疫熒光染色方法檢測(cè)小鼠海馬DG區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的增殖；并通過(guò)小鼠的糖水偏好、強(qiáng)迫游泳及新物體識(shí)別等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠的行為表現(xiàn)。結(jié)果 與LSD1(flox/flox)小鼠相比，LSD1-CKO小鼠海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞增殖顯著降低(P=0.023)；糖水偏好系數(shù)降低(P=0.0075)；強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間明顯增加(P<0.05)；并在新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出記憶力顯著下降現(xiàn)象(P=0.0019)。結(jié)論 小鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞敲除LSD1基因，海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞增殖降低，LSD1-CKO小鼠表現(xiàn)出負(fù)面情緒和記憶障礙。

賴氨酸特異的脫甲基酶1；基因敲除；神經(jīng)細(xì)胞增殖；情緒；記憶;小鼠

賴氨酸特異性組蛋白去甲基化基酶( lysine specific demethylase 1, LSD1)可以使組蛋白H3第四位上的賴氨酸(H3-K4)或H3第九位上的賴氨酸(H3-K9)脫去一個(gè)或二個(gè)甲基進(jìn)而影響基因的轉(zhuǎn)錄水平。通常H3-K4脫甲基化抑制靶基因轉(zhuǎn)錄活性，而H3-K9脫甲基化則導(dǎo)致靶基因轉(zhuǎn)錄被激活[1]。表觀遺傳調(diào)控在發(fā)育及疾病中起著重要作用，其中組蛋白賴氨酸甲基化和去甲基化介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控是表觀遺傳調(diào)控的重要組成部分。目前關(guān)于LSD1的研究主要集中在細(xì)胞水平，研究發(fā)現(xiàn)LSD1可以影響多種干細(xì)胞的增殖，如神經(jīng)干細(xì)胞、腫瘤干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞等[2]。而對(duì)LSD1在哺乳動(dòng)物體內(nèi)的研究，尤其是對(duì)體內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞的調(diào)控功能研究較少。Nestin是一種中間絲類(lèi)型的蛋白，能夠特異性的表達(dá)在神經(jīng)干細(xì)胞 (neural stem cell) 上，為神經(jīng)干細(xì)胞的特征性標(biāo)志物。神經(jīng)干細(xì)胞是一類(lèi)具有分裂潛能的母細(xì)胞，具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力。鑒于LSD1基因全身敲除的小鼠具有胚胎致死性[3]，我們構(gòu)建了LSD1基因條件性敲除小鼠(LSD1-CKO)，即利用Cre-LoxP重組酶系統(tǒng)，條件性敲除小鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞中的LSD1基因，通過(guò)觀察小鼠神經(jīng)細(xì)胞增殖情況和行為的改變，來(lái)研究LSD1在哺乳動(dòng)物體內(nèi)的神經(jīng)生物學(xué)功能。

1 材料與方法

1.1 試劑

鼠尾PCR試劑盒購(gòu)(Selleck公司)；冰凍包埋液NEG 50TM(Thermo)；鼠抗BrdU，兔抗nestin，鼠抗LSD1一抗(Millipore公司)；相應(yīng)二抗(Invetrogen公司)。

1.2 儀器

PCR儀(Eppendorf)；凝膠成像儀(Tanon 3500R)；冰凍切片機(jī)(美康 Microm)；激光共聚焦顯微鏡(Olympus FV10i)；倒置熒光顯微鏡(Olympus)；物體識(shí)別箱(上海吉量?jī)x器)。

1.3 小鼠的飼養(yǎng)與繁殖

LSD1(flox/flox) 轉(zhuǎn)基因小鼠在南方模式動(dòng)物研究中心訂制[SCXK(滬)2009-0023]，此鼠與Nestin-cre(Tg)轉(zhuǎn)基因小鼠(從同濟(jì)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心丁玉強(qiáng)老師獲得)進(jìn)行雜交，繁殖出LSD1(flox/wild)Nestin-cre(Tg) 雙轉(zhuǎn)基因小鼠。然后利用LSD1(flox/wild)Nestin-cre(Tg) 雙轉(zhuǎn)基因小鼠再與LSD1(flox/flox)轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行雜交，繁殖培育出在神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)特異敲除LSD1基因的LSD1(flox/flox)Nestin-cre(Tg)小鼠(簡(jiǎn)寫(xiě)為L(zhǎng)SD1-CKO)。同窩LSD1(flox/flox) 轉(zhuǎn)基因小鼠(非敲除小鼠，簡(jiǎn)寫(xiě)為L(zhǎng)SD1(f/f))為對(duì)照，并且行為學(xué)實(shí)驗(yàn)小鼠數(shù)目N值均大于8。小鼠飼養(yǎng)繁殖于同濟(jì)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SYXK(滬)2009-0022]SPF級(jí)環(huán)境內(nèi)，室溫控制在20～25℃，濕度控制在40%～70%。

1.4 方法

1.4.1LSD1-CKO小鼠的PCR鑒定

Loxp與Cre基因片段的鑒定， 使用Selleck公司的鼠尾一步法PCR試劑盒。LSD1基因上的Loxp基因片段鑒定，設(shè)計(jì)上游引 物：5′-AAATGTTTCCTCCGGGCCTC-3′，下游引物：5′- GCAAATGAGCAGAGACCAGC -3′；PCR 條件為： 94℃ 預(yù)變性 5 min，繼之 94℃ 變性 30 s，60℃ 退火 1min，72℃ 延伸 1 min，共 35 個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸 5 min。Loxp基因片段插入的后，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小為426 bp，而野生型未插入Loxp基因擴(kuò)增產(chǎn)物為356 bp。Cre重組酶基因片段鑒定，上游引物：5′- TCGATGCAACGAGTGATGAG-3′，下游引物：5′- TCCATGAGTGAACGAACCTG -3′；PCR 條件為：94℃預(yù)變性 5 min， 然后 94℃變性30 s，65℃ 退火 1 min，72℃ 延伸 1 min，共 35個(gè)循環(huán)，最后 72 ℃延伸 5 min。Cre基因鑒定的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小為300～400 bp。

1.4.2 LSD1與Nestin熒光共染

4周齡LSD1(f/f) 和LSD1-CKO小鼠，心臟灌流后取腦，4%多聚甲醛固定24 h，30%蔗糖脫水后包埋劑包埋，冰凍切片厚度為30 μm。取海馬區(qū)腦片，95℃預(yù)熱檸檬酸鈉緩沖液中水浴腦片5 min，勻速慢搖1 h至室溫，PBS洗3次后，上LSDI和Nestin一抗(各1∶1000, 0.3% Triton-X100, 1% goat serum in PBS)4℃過(guò)夜；PBS洗3次后換二抗(1∶1000 goat anti rabbit 488 +1∶1000 goat anti mouse 546 in PBS)室溫1 h。Hoechst33342染核后，封片后經(jīng)激光共聚焦顯微鏡下觀察拍照。

1.4.3 神經(jīng)細(xì)胞增殖的Brdu染色

8周齡LSD1(f/f)和LSD1-CKO小鼠，腹腔注射BrdU 100 mg/kg，每隔2 h 注射1次，共5次。第2天處死小鼠取腦，腦片處理方法同上文。BrdU染色：每只小鼠取6～8片海馬DG區(qū)腦片，PBS洗三遍，每次5 min；2 mol/L HCl(濃HCl用水1∶5稀釋)處理1 h；換硼酸緩沖液(A液： 硼酸 3.1 g/500 mL，B液: 硼酸鈉·10H2O 7.6 g/200 mL，400 mL A + 100 mL B，pH 8.5)處理30 min，然后PBS洗三邊，每次5 min；上BrdU一抗體(1∶2000，0.3% Triton-X100，1% goat serum in PBS)4度過(guò)夜，PBS洗3次后換二抗(1∶1000 goat anti-rat 488 in PBS)室溫1 h。PBS洗后封片，倒置熒光顯微鏡下觀察拍照。

注：A：LSD1(flox/ flox) 與nestin-cre(Tg)小鼠雜交后代鑒定；B：LSD1 (flox/ flox) 與LSD1(flox/wild) nestin-cre(Tg)小鼠雜交后代LSD1(flox/flox) nestin-cre(Tg)鑒定(1/4純合敲除)；C：LSD1 和 nestin的免疫熒光共染色。圖1 神經(jīng)干細(xì)胞LSD1基因特異性敲除小鼠的基因鑒定及免疫熒光染色Note. A: Identification of LSD1(flox/wild) Nestin-cre(Tg) offsprings. B: Identification of LSD1(flox/flox) nestin-cre(Tg) ( 1/4 chance) offsprings. C: Immunofluorescence staining of LSD1 and nestin.Fig.1 Generation of LSD1- CKO mice and immunofluorescence staining

1.4.4 糖水偏好實(shí)驗(yàn)

9周齡LSD1(f/f)和LSD1-CKO小鼠，雌雄各半單籠放置。方法為每籠放置兩個(gè)水瓶，

一個(gè)為無(wú)菌水，另一個(gè)為2%的蔗糖水，稱重后放置24 h，小鼠自由進(jìn)食進(jìn)水。計(jì)算24 h內(nèi)的糖水消耗占液體總消耗的百分比。

1.4.5 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

糖水偏好實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，小鼠進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，操作為每只小鼠分別放在水中游泳適應(yīng)15 min，在24 h后，每只小鼠再放水中6 min，記錄小鼠的不動(dòng)時(shí)間。統(tǒng)計(jì)不動(dòng)時(shí)間有兩種方法：前5 min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間；后4 min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。不動(dòng)表現(xiàn)為不爬缸、不游動(dòng)。不動(dòng)時(shí)間反映小鼠的抑郁情緒。

1.4.6 新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)

10周齡LSD1(f/f)和LSD1-CKO小鼠進(jìn)行新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)，方法參照我們實(shí)驗(yàn)室之前發(fā)論文[4]。識(shí)別指數(shù)(recognition index)=新物體識(shí)別時(shí)間/新物體 + 舊物體識(shí)別的總時(shí)間。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以mean±S.E.M.形式表示，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件Graphpad Prism 5.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)干細(xì)胞LSD1基因敲除小鼠的基因鑒定及免疫熒光染色

圖1A-B為L(zhǎng)SD1-CKO小鼠的繁殖策略及后代PCR鑒定電泳結(jié)果。圖A中標(biāo)記1和6號(hào)小鼠為L(zhǎng)SD1(flox/wild)Nestin-cre(Tg) 小鼠。圖B中標(biāo)記為1和2號(hào)的小鼠為神經(jīng)干細(xì)胞LSD1特異性敲除小鼠LSD1(flox/flox)Nestin-cre(Tg)；4號(hào)LSD1(flox/flox) 為非條件敲除小鼠對(duì)照。為進(jìn)一步觀察LSD1-CKO小鼠在nestin 表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞內(nèi)是否無(wú)LSD1表達(dá)，我們共染了LSD1與nestin。熒光染色結(jié)果顯示，在LSD1(f/f)小鼠海馬區(qū)，表達(dá)nestin (紅色)的細(xì)胞內(nèi)有LSD1(綠色)表達(dá)，而在條件敲除小鼠中，nestin標(biāo)記的細(xì)胞中無(wú)LSD1表達(dá)，表明在LSD1-CKO小鼠中表達(dá)nestin陽(yáng)性細(xì)胞內(nèi)，LSD1確實(shí)被敲除而不再表達(dá)(圖1C)。

2.2 神經(jīng)細(xì)胞增殖的Brdu染色

通過(guò)BrdU染色實(shí)驗(yàn)，觀察了敲除小鼠的神經(jīng)細(xì)胞的增殖情況，亮綠色為標(biāo)記的陽(yáng)性增殖細(xì)胞(圖2A)。并對(duì)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)做了統(tǒng)計(jì)(圖2B)，結(jié)果顯示與對(duì)照小鼠相比，敲除小鼠的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目變少，即增殖降低，統(tǒng)計(jì)具有顯著差異(P=0.023)。這與Sun 等[5]抑制LSD1 的活性或siRNA 敲除LSD1 的表達(dá)后，所看到的致神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力下降及導(dǎo)致野生鼠大腦海馬齒狀回細(xì)胞增殖的大幅減少這些現(xiàn)象，具有一致性。

注：A：海馬區(qū)細(xì)胞增殖的BrdU熒光染色(×200)；B：陽(yáng)性BrdU細(xì)胞個(gè)數(shù)統(tǒng)計(jì)，P=0.023。圖2 海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞增殖的BrdU染色Note. A: Fluorescent staining of BrdU in the hippocampus, ×200. B: Count of positive BrdU-stained cells, P=0.023.Fig.2 Proliferation of neural cells in the hippocampus. BrdU staining

注：A：糖水偏好統(tǒng)計(jì)，P =0.0075；B：強(qiáng)迫游泳前5 min內(nèi)不動(dòng)時(shí)間統(tǒng)計(jì)，P =0.03；C：強(qiáng)迫游泳后4 min內(nèi)不動(dòng)時(shí)間統(tǒng)計(jì)，P=0.029。圖3 LSD1-CKO小鼠抑郁癥表現(xiàn)Note. A: Results of sucrose preference test, P =0.0075. B: Immobility time at 5 minutes before forced swimming test, P =0.03. C: Immobility time at 4 minutes after forced swimming test, P =0.029. Fig.3 Depressive behavior of the LSD1-CKO mice

2.3 行為學(xué)改變

2.3.1 條件敲除LSD1對(duì)小鼠情緒影響

神經(jīng)干細(xì)胞的增殖抑制是抑郁癥的關(guān)鍵因素，所以LSD1-CKO小鼠海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞增殖數(shù)目減少及神經(jīng)干細(xì)胞中LSD1失活，可能會(huì)對(duì)小鼠情緒造成影響。在對(duì)小鼠進(jìn)行了糖水偏好實(shí)驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)LSD1-CKO小鼠對(duì)糖水的依賴性降低(P=0.0075)，即糖水快感降低(圖3A)。小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，LSD1-CKO小鼠無(wú)論是在前5 min，還是在后4 min中內(nèi)，與LSD1(f/f)小鼠相比，不動(dòng)時(shí)間都明顯增加(P=0.03或P=0.029，見(jiàn)圖3B-C)。糖水偏好實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)是判斷小鼠是否具有一定的抑郁癥的兩種快速簡(jiǎn)單的方法[6]。從這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)我們初步判斷這種LSD1-CKO小鼠具有情緒低落的抑郁癥狀。

2.3.2 條件敲除LSD1對(duì)小鼠記憶的影響

條件敲除LSD1后導(dǎo)致海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞增殖的降低，而海馬是小鼠學(xué)習(xí)記憶的主要腦區(qū)部分[7]，所以條件敲除LSD1是否對(duì)小鼠的記憶產(chǎn)生影響，尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)，是利用動(dòng)物先天對(duì)新物體有探索傾向的特性而建立的非空間短期記憶測(cè)試方法[4]。我們應(yīng)用新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)，在小鼠10周齡時(shí)，檢測(cè)了條件敲除小鼠的記憶力情況。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示LSD1敲除后，小鼠對(duì)新物體的識(shí)別系數(shù)降低(P=0.0019)，即記憶障礙。實(shí)驗(yàn)同時(shí)發(fā)現(xiàn)，LSD1-CKO小鼠還表現(xiàn)出對(duì)新舊兩個(gè)物體總探索時(shí)間降低的趨勢(shì)，也反映出LSD1-CKO小鼠運(yùn)動(dòng)活躍程度降低，結(jié)果見(jiàn)圖4A-B。

注：A：小鼠新物體識(shí)別指數(shù), P =0.0019； B：小鼠探索新舊物體的總時(shí)間。圖4 新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)Note. A: Object recognition index, P=0.0019. B: Total time of exploration(s) in the object recognition test.Fig.4 Novel object recognition test

3 討論

組蛋白氨基端的共價(jià)修飾大多是可逆的，如組蛋白的乙?；?、磷酸化和泛素化等。然而組蛋白甲基化的發(fā)生，在很長(zhǎng)一段時(shí)間被認(rèn)為是非常穩(wěn)定且不可逆的，直到2004年Shi 等[8]發(fā)現(xiàn)了第一個(gè)賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1 (lysine specific demethylase 1, LSD1)才改變了科研人員對(duì)組蛋白甲基化修飾機(jī)制的認(rèn)知，組蛋白修飾在基因調(diào)節(jié)過(guò)程中更具動(dòng)態(tài)性。

關(guān)于LSD1最初的研究，主要集中在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用，LSD1也成為抗腫瘤藥物新的靶點(diǎn)。隨著不斷深入的對(duì)LSD1調(diào)節(jié)組蛋白甲基化修飾機(jī)制的研究，發(fā)現(xiàn)LSD1參與了動(dòng)植物胚胎發(fā)育、干細(xì)胞分化、免疫等多種生物學(xué)功能，與很多疾病發(fā)生有著密切的關(guān)系[2,9,10]。

有文獻(xiàn)報(bào)道，LSD1在斑馬魚(yú)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育及體外干細(xì)胞增殖分化上具有重要作用[5,11]。全身敲除LSD1 導(dǎo)致圍產(chǎn)期小鼠死亡，也充分體現(xiàn)的LSD1在哺乳動(dòng)物發(fā)育中的重要作用。為了更好的觀察LSD1基因缺失后，在體神經(jīng)發(fā)生及神經(jīng)功能行為體現(xiàn)，課題組制作并繁殖出神經(jīng)干細(xì)胞LSD1基因敲除小鼠。條件敲除小鼠的nestin熒光標(biāo)記細(xì)胞中不表達(dá)LSD1。神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)的LSD1基因敲除并不導(dǎo)致小鼠的死亡，但是條件敲除小鼠海馬DG區(qū)Brdu標(biāo)記后，染色顯示神經(jīng)細(xì)胞增殖降低。對(duì)于沉默LSD1導(dǎo)致細(xì)胞增殖降低，也存在多種可能機(jī)制[1,2]。海馬在小鼠的學(xué)習(xí)記憶及情緒活動(dòng)中具有重要作用，海馬DG區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的增殖降低可能會(huì)對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶及情緒產(chǎn)生影響。在利用糖水消耗實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳及新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中，9～10周齡的LSD1-CKO小鼠就表現(xiàn)出了抑郁癥及記憶力下降的癥狀，揭示條件敲除神經(jīng)干細(xì)胞LSD1基因后，會(huì)導(dǎo)致情緒及記憶障礙。Jarome等[12]認(rèn)為，組蛋白甲基化是記憶和行為的關(guān)鍵調(diào)節(jié)者。神經(jīng)干細(xì)胞及之后分化的各類(lèi)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)組蛋白的甲基化與脫甲基化，進(jìn)一步會(huì)影響到DNA甲基化與脫甲基化的調(diào)節(jié)，而這可能是情緒抑制和認(rèn)知損傷的因素。所以LSD1對(duì)組蛋白的甲基化與脫甲基化修飾的調(diào)節(jié)，對(duì)動(dòng)物的行為及認(rèn)知可能具有重要的調(diào)節(jié)作用，但是具體的作用機(jī)制尚不清楚。

基于LSD1在小鼠神經(jīng)發(fā)生、學(xué)習(xí)記憶及情緒表現(xiàn)行為方面的作用，我們認(rèn)為 LSD1 的調(diào)節(jié)機(jī)制與功能，可能為抑郁與神經(jīng)退行性疾病治療提供一種新的思路，當(dāng)然還需要進(jìn)一步深入研究。

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Effects of neural stem cellLSD1 conditional knockout on the mood and memory in mice

SHI Chang-jie, HUA Qiu-hong, ZHANG Li-hong, ZHANG Ru*

(Shanghai Key Laboratory of Signaling and Disease Research, School of Life Sciences and Technology, Tongji University, Shanghai 200092, China)

Objective To study the function ofLSD1 in the development of neurons and the influence ofLSD1 on mood and memory-related behavior in mice. Methods TheLSD1(flox/flox) transgenic mice were crossed withNestin-cre(Tg) transgenic mice, using Cre-LoxP recombination system, to generateLSD1 conditional knockout of neural stem cell (LSD1-CKO) mice,LSD1(flox/flox)Nestin-cre(Tg) mice, andLSD1(flox/flox) mice as control. The neuron proliferation inLSD1-CKO mice was further detected by immunofluorescence staining. At the same time, the mood and memory-related behavior ofLSD1-CKO mice were examined using several methods: sucrose preference test (SPT), forced swimming test (FST) and novel-object recognition (NOR) assay. Results In theLSD1 brain-specific CKO mice, the neuron proliferation rate in the hippocampus was significantly reduced (P=0.023), the preference for sucrose was reduced (P=0.0075), immobility duration during the forced swimming test was increased (P<0.05), andLSD1-CKO mice also exhibits memory-decline (P=0.0019) during the novel-object recognition test. Conclusions Depletion ofLSD1 in mouse brain neural stem cells leads to significant reduction of the neuron proliferation in the hippocampus.LSD1-CKO mice show more negative emotions and memory impairment.

LSD1; Gene knockout; Neuron proliferation; Mood; Memory； Mice

ZHANG Ru， E-mail: ru.zhang@#edu.cn

石昌杰(1981-)，男，工程師，碩士，研究方向：神經(jīng)疾病動(dòng)物模型研究。E-mail： shichangjie@#edu.cn

張儒，女，副教授， E-mail： ru.zhang@#edu.cn

Q95-33

A

1005-4847(2017) 01-0079-06

10.3969/j.issn.1005-4847.2017.01.015

2016-05-18