鄭姣妹，張冬初，羅冬生

（1.湖南省長沙市動物疫病預防控制中心，湖南 長沙 410300 ；2.湖南省瀏陽市集里防疫檢疫站，湖南 瀏陽 410300；3.湖南省長沙市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖南 長沙 410300）

規(guī)模化豬場實驗室的建立和管理要求

鄭姣妹1，張冬初2，羅冬生3

（1.湖南省長沙市動物疫病預防控制中心，湖南 長沙 410300 ；2.湖南省瀏陽市集里防疫檢疫站，湖南 瀏陽 410300；3.湖南省長沙市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖南 長沙 410300）

為了幫助大中型規(guī)模化豬場建立符合要求的獸醫(yī)實驗室，文章就規(guī)模豬場獸醫(yī)實驗室建立的目的、原則展開討論，對實驗室管理和運轉中人員、制度、檢測、采樣、記錄、報告等方面的要求進行探討，以期為豬場獸醫(yī)實驗室建立和管理提供參考。

規(guī)模豬場；獸醫(yī)實驗室；建設標準；安全管理

隨著養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，國內外豬場間豬只流動頻繁，各種疾病的傳播或變異也變得更加快速，發(fā)病的臨床癥狀不再單一，很多情況下都是幾種病混合感染，根據臨床經驗很難對發(fā)病豬及時準確的診斷，必須借助獸醫(yī)實驗室的精確檢測，才能對疫病進行確診。同時，由于豬場向產業(yè)化、規(guī)?；~進，越來越多的大中型規(guī)模豬場計劃或已經準備建立獸醫(yī)實驗室，但是對獸醫(yī)實驗室建立目的和原則以及管理要求還沒有清晰的認識[1]。本人常年從事獸醫(yī)實驗室的監(jiān)測工作，熟悉實驗室的建立和管理要求，和大家一起探討規(guī)模化豬場獸醫(yī)實驗室的建立和管理。

1 建立目的

規(guī)模化豬場建立獸醫(yī)實驗室主要目的是節(jié)約診斷成本，增強豬場效益。傳統(tǒng)豬場樣品疫病檢測和抗體檢測都需要送到專業(yè)檢測機構，但豬場一般都設立在遠離城鎮(zhèn)的偏遠地區(qū)，與檢測機構都有一定距離，采集后的樣品不能及時檢測而得到最快的反饋結果，樣品保存和運輸也產生相應成本，豬場必須配備足夠樣品保存設施設備，采取相應的生物安全措施，才能保證樣品不發(fā)生影響檢測結果的變化,不對外界造成污染。豬場建立獸醫(yī)實驗室，一是采樣后可以直接對樣品前處理，快速診斷發(fā)病情況，根據診斷結果，指導合理用藥，提高預防與治療效果。二是可以按時采樣進行抗體檢測，及時了解疫苗免疫效果，對其進行安全性評價，評估群體健康，制定科學的免疫程序。三是可以進行基礎性檢測和簡單生物制品的制備，提高豬場疾病防控的能力?？偠灾?，建立獸醫(yī)實驗室，豬場的疫病防控可以由被動轉為主動，最大限度的減少經濟損失，促進養(yǎng)豬業(yè)健康長效的發(fā)展。

2 建立原則

規(guī)模化豬場獸醫(yī)實驗室的建立不是專業(yè)意義上實驗室檢測機構，但是其建立原則也必須符合相關規(guī)定，至少符合一級動物實驗生物安全實驗室即ABSL-1 標準，也稱動物實驗基礎實驗室的要求[3]。

2.1 場地的要求

應根據豬場生產規(guī)模、地勢、水源，以及交通、電力、物質供應等條件等進行全面考慮。要盡量減少對周圍環(huán)境的影響，遠離居民生活和用水區(qū)域。規(guī)模豬場獸醫(yī)實驗室要建立在一個相對獨立（建有屏障或緩沖區(qū)）或封閉的區(qū)域，選址應在離生產區(qū)1 000 米的下風方向，處于排污設施的下游[2]。處在較低的地勢和下風方向，實驗室的污水、廢棄物中可能存在的病原微生物、寄生蟲不會造成對豬場的二次污染。減少這些病原擴散和傳播，就減少了豬場疾病發(fā)生的可能性。同時，實驗室必須保證持續(xù)的電力和水的供應，以保證實驗室儀器設施和設備正常啟動和運轉。地理位置和交通條件要足夠便利，能及時運送和儲備實驗所需要的耗材和試劑以及設備。

2.2 實驗室的布局

獸醫(yī)實驗室基本的建筑設施必須包括準備室、病畜解剖室、病原檢測室、血清檢測室、樣品保存室、無菌室、檔案室等，有條件的可以增加分子生物學室、儀器室等。染病豬首先在病畜解剖室解剖，采集組織病料、血樣及微生物樣品后，到病原檢測室、血清學實驗室進行病原診斷或者血清學檢測；暫未檢測或已經檢測完成的樣品，可以標識后分區(qū)存放于樣品室；需要進行無害化高溫消毒處理的樣品或者器械，在準備室操作；采樣工具或實驗器械消毒和洗滌也在準備室完成；無菌室主要進行微生物或病毒的檢測及培養(yǎng)。各功能室要求地面平整、防滑、易清潔、不滲水，墻面光滑，實驗臺面耐化學和消毒品的腐蝕和防水，門窗密閉性良好。各室入口及功能區(qū)要求有明顯標識，如有危險區(qū)域（高溫高壓或病菌）則在明顯位置設立警告標識。

2.3 工作人員的要求

2.3.1 具備生物安全意識，實驗室的進出具備嚴格的消毒制度，進出時消毒、更衣，防止病原隨意傳播。

2.3.2 能將實驗室的工作與養(yǎng)豬生產緊密結合起來，能根據實驗結果對生產實際給出合理化的建議，能有意識的保存有用的生物樣品，為今后的生產提供方便或降低成本。

2.3.3 工作要求一絲不茍、耐心細致，結果記錄詳實，生物樣品妥善保存等均需要工作人員嚴謹，科學的態(tài)度。

2.3.4 具備分析實驗結果的能力，能準確判斷實驗結果的成立，綜合分析實驗結果說明的問題,不是機械地向生產人員給出得到的結果，將實驗結果與生產很好的結合起來，給技術人員提供免疫和治療方案。

3 實驗室管理要求

3.1 服務宗旨：專業(yè)，高效，及時，準確

實驗室工作人員必須具有專業(yè)理論基礎知識，能熟練操作檢測儀器設備，根據檢測項目的國家標準檢測方法，按照實驗室的生物安全管理規(guī)定對樣品進行準確檢測。實驗人員接到樣品后，在最快的時間內對樣品進行及時檢測，把實驗數據第一時間反饋到豬場技術員，使其能抓住有效治療時機，減少損失，這就要求實驗室工作高效、及時、準確。

3.2 工作原則：客觀，獨立，公正，嚴謹

實驗室的檢測結果直接影響豬場的免疫程序的制定，治療措施以及管理方案，檢測工作與豬場經濟效益息息相關，檢測服務于豬場，檢測工作必須以事實說話，結果必須真實、客觀、符合實際，不受任何個人和其他外界因素的影響，獨立、公正是檢測工作的基本要求。實驗操作的一個細微處理措施都有可能影響檢測結果，尤其是微生物的檢測，處理過程中的任何馬虎細節(jié)都可能造成污染，實驗操作和數據判斷要求有嚴謹的工作態(tài)度，才能得出準確的結論。客觀、獨立、公正、嚴謹的原則必須在檢測工作中貫穿始終。

3.3 管理手冊的建立

建立與工作相適宜的管理文件，作為指導獸醫(yī)實驗室管理的綱領和行為準則，能使檢測工作更加規(guī)范、有序。管理文件可以根據實際要求，規(guī)定檢測方法、儀器管理，報告出具、樣品處理流程、人員管理、培訓與考核等方面的要求；還包括制定實驗室管理制度；編寫儀器操作規(guī)程；設計記錄表格等。

為使實驗室人員明確各自崗位職責及工作要求，實驗室應該把部分制度內容在醒目位置張貼上墻。包括實驗室崗位責任制、實驗室儀器設備操作使用管理制度、衛(wèi)生安全制度、病料采集保存制度，生物安全管理制度、實驗記錄制度、檔案資料管理制度等等。

3.4 人員技能考核

實驗室的管理不僅對工作人員資質、專業(yè)基礎、工作崗位責任有要求，還需要定期開展技能考核，通過開展實驗室不同人員、不同儀器、不同方法的實驗室比對，盲樣檢測或者留樣復測等方式進行技能考核，以保證實驗結果的準確，也可以通過人員互相監(jiān)督，實際現(xiàn)場查看，查閱記錄，與同類型實驗室或第三方實驗室開展比對實驗等多種方式，考核檢測人員的操作能力和技術水平，考核時可以根據檢測結果的準確性、過程的規(guī)范性、操作時限性、記錄的完整性等進行比較，對技術人員的考核，可以盡量減少由于人的因素造成的試驗結果的誤差，保證結果的真實可靠。

3.5 人員技能培訓

隨著現(xiàn)代科學技術的飛速發(fā)展，檢測儀器設備不斷推陳出新，雖然越來越朝簡化易行發(fā)展，但是了解新儀器設備檢測原理，熟悉其操作技術，掌握樣品處理方法，是實驗室人員必備技能。檢測方法一直都在不斷的更新進步，國家每年都有新的檢測標準方法更新替換舊的標準，從簡單的感官判斷、生化反應，到分子生物學檢測、精密儀器測定，檢測工作隨著日益高精尖研究發(fā)展的科技向更加具有科技性和精準性的方向進步，因此也要求工作人員必須隨時加強學習培訓，適應方法和高端設備的進步。定期開展培訓，是實驗室人員的不斷學習，及時掌握最新檢測方法的有效途徑。

3.6 采樣及保存

檢測結果準確不僅要求檢測過程的精確無誤，還要求采集的樣品符合檢測要求，采樣過程不規(guī)范會直接影響檢測診斷結論。采樣和保存主要有以下一些要求：

3.6.1 采樣的記錄填寫

采樣單要詳細記錄包括豬場免疫時間、種類、發(fā)病豬的日齡、體重、發(fā)病時間、臨床癥狀、發(fā)病率、死亡率等信息，實驗室的工作人員才能全面了解樣品相關的具體情況，根據檢測結果與采樣單信息，再聯(lián)系實際情況，分析結果反饋到技術人員或管理人員。某一項或某一方面的信息不完整，都可能造成檢測結果分析的誤讀，例如抗體的檢測，就需要聯(lián)系免疫時間、程序、疫苗的種類等相關信息進行分析，錯誤的記錄填寫不僅不能分析出正確的結論，還可能導致完全相反的結論，另外，采樣記錄單上必須填寫采樣時間，聯(lián)系人，樣品類型等，這些信息記錄全面清楚有利于分析反饋豬場發(fā)病或免疫情況。

3.6.2 樣品的完整性

采集的樣品要求具有完整性，一是要求有足夠能反應出病原存在的病料組織，如淋巴，扁桃體，腦、肺臟，肝臟，脾臟、全血或血清等，不同檢測目的采集不同病原組織，一般盡量采集目的病原存在較多的部位，例如豬瘟采集的是脾臟，淋巴、扁桃體；藍耳病料采集的是肺臟、淋巴、血等。而不是采集與發(fā)病無關的其他組織，如豬瘦肉、肥油等。二是采集足夠份量作為檢測用量，一般組織樣品不少于15～20g，血清樣品不少于 500μL ，樣品一般根據實際檢測需要量稍多外，還需要多采集一份作為備份，但不需要把完整肺臟或肝臟全部做為樣品保存。

3.6.3 樣品的包裝和標記

樣品采集后，按照樣品性狀及時用對應的包裝或容器分類包裝好。并在樣品的包裝外表上做好標記，上面的信息應與采樣單記錄的內容一一對應，這樣不同批次樣品不會混淆，樣品之間也不會交叉污染。微生物檢測用樣品的采集更需要特別注意包裝的密封性，做到既不污染外界，也不被外界所污染。

3.6.4 樣品的保存

豬場實驗室樣品采集后即可送實驗室處理檢測，但也有因為樣品量大，人手少，不能及時檢測的情況，需要正確保存樣品，如果距檢測時間短，組織病料和血清樣品可以 0～8℃保存，如時間長則必須在 -20℃保存。血液樣品如果用全血檢測，就必須采樣后立即進行，或者根據需要加抗凝劑處理。如進行抗體檢測，采樣后離心取血清樣品，冷凍可以長期保存。不同類型樣品一定分類保存，每個實驗室根據自己的需要，可以按照收樣時間順序、樣品類型、不同實驗項目、不同疾病或者最后的實驗結果等分類方式保存樣品。

每份樣品在檢測完成后都應按照生物安全管理要求處理好樣品，不能造成污染。

3.7 樣品的檢測流程

規(guī)范樣品檢測流程是做好實驗室管理的關鍵要素，一般常規(guī)檢測流程是：接收樣品—實驗員進行檢測、復核—出具報告—對檢測完畢樣品進行無害化處理—報告簽字后交生產部門。對檢測報告有異議的，根據具體情況安排不同實驗員，在有人監(jiān)督的情況下，提取備份樣品重新按流程檢測。檢測過程的每一步都需要簽字確認，包括樣品接收、流轉、檢測、復核、儀器使用、報告簽字確認等，必要時有雙人或三人簽字。

3.8 記錄與報告

3.8.1 實驗室要求使用統(tǒng)一規(guī)范的記錄表格和檢測報告，對采樣，收樣，流轉，檢測，儀器使用，出具報告等事實客觀準確記錄全過程，記錄不僅要求能夠清晰復現(xiàn)檢測過程的關鍵步驟及數據，還要有詳實的具體信息，包括檢測樣品的名稱、編號、檢測方法、步驟、時間、地點、檢測人、使用的儀器。要求數據真實，信息與實際情況相符，且有具體實施人的簽字確認。

3.8.2 除檢測工作記錄要即時準確的填寫外，其他與檢測工作相關的記錄，如儀器的維修維護、計量檢定、樣品無害化處理情況、質量控制、服務的購買與供應，試劑和耗材的評價都需要客觀真實、及時、清晰記錄，不允許事后補記，如需修改都按照統(tǒng)一規(guī)定的要求進行修改，一般每頁記錄紙上修改次數不得超過三處。

3.8.3 檢測報告是檢測工作的最終體現(xiàn)，報告的信息不僅體現(xiàn)的是具體數據和結果，還是所有工作能力和水平的表現(xiàn)，豬場要根據檢測報告對樣品的結果進行判斷和分析。因此，報告一是具有時限性，從采樣檢測到報告的出具都應該在最短的時間內盡快完成。二是具有權威性，檢測工作全部按照國家標準要求操作，任何簽字確認都是具有資質的人員才能授權操作。三是報告具有科學性和真實性，報告所包含的信息和數據不可隨意篡改和否定。

3.8.4 各項實驗活動及管理工作的原始記錄和報告都需要按照檔案管理的要求，整理成冊，統(tǒng)一歸檔。

3.9 實驗室生物安全

3.9.1 生物安全管理：實驗室的生物安全管理是實驗室建立和運行最重要的關鍵因素。實驗室不能發(fā)生例如菌毒種外泄，試劑藥品污染、爆炸，火災等任何生物安全事件，除建筑結構需要按照生物安全管理規(guī)定設置功能分區(qū)、內外部裝修符合要求外，還需要配備應急照明設施、防火設施、貴重精密儀器標識、有毒有害警示標識等。

3.9.2 實驗安全：包括實驗操作安全；慎用危險實驗用品；實驗前做好準備工作，實驗之后操作臺應清理消毒，氣溶膠類實驗在通風柜里進行等。

3.9.3 個人安全：做好個人安全防護措施；明確實驗室準入制度；儀器設備的安全使用。

3.9.4 環(huán)境安全：廢水污水經過無害化處理；微生物培養(yǎng)滅菌后統(tǒng)一處理；實驗耗材和廢品應做無害化處理。

4 小結

總之，規(guī)?；i場建立起良好的獸醫(yī)實驗室，不僅要求環(huán)境、儀器、材料、設備這些硬件條件達標，人員、技術、方法、管理措施這些都是重要的影響因素，實驗室的正常運轉可以為豬場的養(yǎng)殖保駕護航，否則帶來的是不可估量的負面影響，期待規(guī)模場獸醫(yī)實驗室能真正為養(yǎng)殖業(yè)健康、有序的發(fā)展起到積極的作用。

[1]張鳳鳴.規(guī)模豬場小型獸醫(yī)實驗室建設[J].畜禽業(yè)，2014,305（9）28-29.

[2]李潤成.大型規(guī)模豬場獸醫(yī)實驗室應該如何建立和運轉[J].豬業(yè)科學，2008,9（10）78-80.

[3]中華人民共和國國家標準.實驗室生物安全通用要求:GB 19489-2008[S].北京：國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局，2008.

[4] 農業(yè)部.關于印發(fā)《獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核管理辦法》的通知：農醫(yī)發(fā)[2009]15 號[A/OL].(2009-08-27)[2017-04-10].http://www.moa.gov. cn/zwllm/zcfg/nybgz/200908/t20090827_1340193.htm.

[5]農業(yè)部. 關于印發(fā)《獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核工作實施方案》的通知:農辦醫(yī)[2010]13 號[A/OL].(2010-03-15)[2017-04-10].http://www.moa. gov.cn/zwllm/zcfg/nybgz/201003/t20100315_1446708.htm.

S851.6

B

1006-4907（2017）03-0022-04

10.3969/j.issn.1006-4907.2017.03.010

2017-04-20