文/孫玉芝 李征遠 張巖巖 李曉晨 孫兆旭

虹鱒魚免疫滅活疫苗在養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應用研究

文/孫玉芝1李征遠1張巖巖1李曉晨2孫兆旭2

鮭鱒魚作為遼寧省水產(chǎn)業(yè)的特色養(yǎng)殖魚類，已經(jīng)成為本溪地區(qū)漁業(yè)增效，農(nóng)村增收，農(nóng)民致富的重要產(chǎn)業(yè)。但是隨著產(chǎn)業(yè)的發(fā)展壯大，隨之而來的魚類病害也時常發(fā)生，現(xiàn)已經(jīng)蔓延至全市的虹鱒魚養(yǎng)殖場、戶，特別是IHN病毒的大面積爆發(fā)，已成為目前制約鮭鱒魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸問題。

一、試驗項目背景及本溪地區(qū)虹鱒魚養(yǎng)殖現(xiàn)狀

本溪市位于遼東山區(qū)，冷泉水、山泉水資源豐富，水量充沛，還有一些山谷型的水庫,水庫底排水水溫常年在20℃以下，均適合鮭鱒魚類養(yǎng)殖生長。

本溪地區(qū)的鮭鱒魚人工養(yǎng)殖在我國是起步最早的地區(qū)之一。從上世紀80年代后期即開始了引種養(yǎng)殖，其產(chǎn)量在全國都占有一定的份額。鮭鱒魚作為遼寧省水產(chǎn)業(yè)的特色養(yǎng)殖魚類，已經(jīng)成為本溪地區(qū)漁業(yè)增效，農(nóng)村增收，農(nóng)民致富的重要產(chǎn)業(yè)。但是隨著產(chǎn)業(yè)的發(fā)展壯大，隨之而來的魚類病害也時常發(fā)生，現(xiàn)已經(jīng)蔓延至全市的虹鱒魚養(yǎng)殖場、戶，特別是IHN病毒的大面積爆發(fā)，已成為目前制約鮭鱒魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸問題。

2008年春季本溪市南芬區(qū)思山嶺鄉(xiāng)一戶虹鱒魚養(yǎng)殖戶，虹鱒魚種發(fā)病，死亡量高達60%左右；2009年疾病開始蔓延到整個思山嶺地區(qū)的50多個養(yǎng)殖戶；2010年病害開始大面積爆發(fā)，我市的虹鱒魚主產(chǎn)區(qū)南芬區(qū)思山嶺鄉(xiāng)、下馬塘鎮(zhèn)，本溪縣小市鎮(zhèn)久才峪村、草河掌地區(qū)的虹鱒魚養(yǎng)殖場都爆發(fā)魚病，涉及到整個本溪市的虹鱒魚養(yǎng)殖場、戶，是虹鱒魚養(yǎng)殖損失最嚴重的一年。

2011年始，由于疫病開始是虹鱒魚苗大面積發(fā)病，養(yǎng)殖戶開始購買發(fā)病后對病毒有免疫力的魚種進行成魚養(yǎng)殖，發(fā)展到2013年，成魚養(yǎng)殖也開始發(fā)病，陸續(xù)死亡?，F(xiàn)在，各虹鱒魚養(yǎng)殖場從魚苗、魚種及成魚都有發(fā)病，死亡率30%～80%不等，有的甚至全軍覆沒。

經(jīng)大連海洋大學及中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所鑒定，病魚感染的是傳染性造血器官壞死病毒，即IHN。病害給漁農(nóng)造成嚴重的經(jīng)濟損失，直接影響到我市的鮭鱒魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)，致使部分養(yǎng)殖場終止了養(yǎng)殖多年的虹鱒魚養(yǎng)殖，有的改養(yǎng)鱘魚、細鱗魚、哲羅魚等其它鮭科魚類，有的停止?jié)O業(yè)生產(chǎn)。現(xiàn)在虹鱒魚養(yǎng)殖戶由原來的400多家，僅剩100家左右。

2010年到2013年期間，有的虹鱒養(yǎng)殖場開始進口基因疫苗或采取其它中藥預防措施等，疫病得到緩解，但效果都不明顯。

2014年，遼寧省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站病害處，在大連口岸檢疫局監(jiān)測IHN病毒期間，用本溪市的病料魚，同大連口岸檢疫局一同研發(fā)了虹鱒魚IHN滅活免疫疫苗，在本溪縣小市鎮(zhèn)久才峪村進行試驗。把注射過疫苗的魚種混入病魚養(yǎng)殖池中養(yǎng)殖，沒有注射疫苗的魚種陸續(xù)死亡，而注射疫苗的魚種成活率達到100%,現(xiàn)已養(yǎng)成成魚出售。由此證明我們研發(fā)的免疫滅活疫苗對虹鱒魚無毒副作用，且免疫有效，可以進行下一步試驗。

由于試驗表明了疫苗的無毒性和可操作性，2015年遼寧省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站病害處，聯(lián)合大連口岸檢疫局及本溪市漁業(yè)管理總站，在遼寧省漁業(yè)廳申請立項，正式進行虹鱒魚疫苗免疫對比項目試驗。

二、2015年虹鱒滅活免疫疫苗試驗的基本情況

2015年在本溪市京溪虹鱒魚養(yǎng)殖場進行了疫苗對比試驗（試驗數(shù)據(jù)見附表1、附表2），試驗組分疫苗的不同濃度，浸泡疫苗和注射疫苗及無注射疫苗的對照組，分九組、五組兩個批次進行了對比試驗，試驗結(jié)果除了魚種注射死亡6%左右外，對照組和實驗組的死亡數(shù)據(jù)均無明顯差距。

而2015年同時在下游水域發(fā)病漁場進行的疫苗注射試驗，同漁池沒有注射疫苗的虹鱒魚死亡率達60%左右，而注射免疫滅活疫苗的虹鱒魚除注射死亡10%左右外，成活率達100%。同年實驗組的一組虹鱒魚也放入下游的虹鱒魚養(yǎng)殖場進行感染試驗一個月，后期又移回原養(yǎng)殖試驗場，亦沒有發(fā)現(xiàn)死魚現(xiàn)象。由此證明，滅活疫苗對虹鱒魚IHN病毒免疫有效。

試驗結(jié)果不明顯只是因為，試驗漁場由于虹鱒魚疫病已停虹鱒魚養(yǎng)殖數(shù)年，且暴曬了數(shù)年，且為源頭水源，上游沒有污染，已無虹鱒魚IHN病毒感染。

三、2016年虹鱒魚滅活免疫疫苗試驗的基本情況

2016年虹鱒免疫滅活疫苗試驗數(shù)據(jù)見附表3。

借鑒2015年的試驗經(jīng)驗，2016年我們在本溪地區(qū)選擇了一家IHN疫病感染比較嚴重的本溪縣文華虹鱒魚養(yǎng)殖場進行虹鱒魚滅活免疫疫苗的對比試驗。

試驗魚池為山泉水流水水泥池，長18.5m，寬5.3m，一般水深保持在0.6m左右。用1cm網(wǎng)眼的硬塑隔斷成6個虹鱒養(yǎng)殖區(qū)，用于疫苗對比試驗。

試驗用的魚種為虹鱒和金鱒的魚種，金鱒每尾30g左右；治療性疫苗用的虹鱒，每尾150g左右。2016年10月中旬，虹鱒長至750g左右，金鱒長至500g左右，可能是放養(yǎng)密度較小，長勢優(yōu)于其它養(yǎng)殖場的虹鱒、金鱒養(yǎng)殖。

我們還對正在發(fā)病的虹鱒魚種進行了治療性疫苗的注射試驗，從目前的對比數(shù)據(jù)觀察結(jié)果看，試驗效果理想。試驗注射治療性疫苗的虹鱒種魚長勢良好，沒發(fā)現(xiàn)死魚現(xiàn)象，而沒注射治療性疫苗的同批虹鱒魚種，死亡明顯，死亡率達50%。

因進口藥劑研制的滅活疫苗每尾注射成本在1元錢左右，國產(chǎn)藥劑制作的滅活疫苗注射成本每尾魚在0.1元左右，所以2016年試驗，部分用的是國產(chǎn)藥劑制作的滅活疫苗，以利以后試驗結(jié)果在虹鱒魚養(yǎng)殖生產(chǎn)上的推廣應用。

2016年的試驗，同樣對照組、實驗組的死亡率區(qū)別不明顯，我們推測是放養(yǎng)密度的關(guān)系。試驗魚放養(yǎng)密度僅為平時魚戶養(yǎng)殖虹鱒魚放養(yǎng)密度的四分之一。由于生長環(huán)境的優(yōu)越，溶氧充足，導致死亡率下降。對此我們也呼吁虹鱒魚養(yǎng)殖戶降低養(yǎng)殖密度。

四、虹鱒親魚注射虹鱒魚免疫滅活疫苗試驗

2016年7月中旬，在虹鱒種魚增加營養(yǎng)育卵之前，我們在本溪縣王經(jīng)綸虹鱒魚孵化場，對虹鱒種魚進行滅活免疫疫苗注射對比試驗，試驗滅活疫苗是否在虹鱒第二代魚苗體內(nèi)產(chǎn)生抗體。

本溪市漁業(yè)管理總站今年在本溪縣王經(jīng)綸虹鱒魚孵化場，為虹鱒種魚注射了進口1:10免疫滅活疫苗的試驗，每尾注射0.2mL。注射4kg左右的虹鱒種魚14尾，1.5kg左右虹鱒雄魚4尾。注射疫苗的種魚同其它種魚一樣進行了光控育卵培育。從目前虹鱒種魚的懷卵量、受精率、上浮率的情況來看，虹鱒免疫滅活疫苗的注射對虹鱒種魚的正常培育、育卵、稚魚的發(fā)育（沒有畸形的稚魚）都沒有任何影響，可以進行大批量的試驗。

由于處于試驗階段，我們并沒有進行大批量的虹鱒種魚的疫苗注射，所以，14條親魚雌魚，分3批成熟了11條，3條沒有成熟產(chǎn)卵。

第一批只有1條雌性虹鱒種魚和1條雄性虹鱒種魚達到了性成熟，能夠進行產(chǎn)卵孵化。受精卵量為7000粒左右，卵粒發(fā)育正常，成活率比其它虹鱒魚卵要高，只撿出死卵100粒。分析是因為受精時，用了兩條虹鱒雄魚進行受精（1條注射了疫苗，1條沒有注射），導致成活率偏高。魚卵發(fā)眼率98%，上浮率95%，現(xiàn)培育稚魚5000尾。

第二批有2條虹鱒雌魚成熟，由于人工受精操作原因，發(fā)眼卵8500粒，發(fā)眼率95%，上浮率65%，現(xiàn)處于卵黃囊吸收階段，以以往孵化效果估計得上浮稚魚5000尾左右。

第三批其余8條雌魚全部成熟，現(xiàn)魚卵已發(fā)眼，發(fā)眼率95%，沒有破膜，得發(fā)眼卵40000粒左右。

本溪縣王經(jīng)綸虹鱒魚孵化場源頭水溫9℃，PH7.6，氨氮0.0mg/L，溶解6mg/L～9 mg/L（試劑盒數(shù)據(jù)范圍比較大），符合虹鱒魚養(yǎng)殖水體標準。

四、虹鱒免疫滅活疫苗推廣情況

雖然我們的虹鱒免疫滅活疫苗試驗數(shù)據(jù)不太理想，但通過兩年多的試驗，得到了周邊養(yǎng)殖戶的認可。我們亦本著邊試驗邊推廣、縮短疫苗在虹鱒魚生產(chǎn)應用上的時間的目的，本著自愿的原則，為周邊養(yǎng)殖戶進行了虹鱒免疫滅活疫苗的注射。

2015年10月，本溪縣金宥利虹鱒魚養(yǎng)殖場，注射了進口虹鱒免疫滅活疫苗800尾40g左右的虹鱒魚種，每尾注射0.1mL，放入了40g左右沒有注射疫苗的4500尾金鱒魚養(yǎng)殖池中，進行試驗養(yǎng)殖。由于放養(yǎng)密度偏大，虹鱒、金鱒長至350g～750g不等。虹鱒魚死亡70尾，死亡率8.75%，金鱒魚死亡1400尾，死亡率31.1%。

2016年9月14日，本溪縣金宥利虹鱒魚養(yǎng)殖場，又注射了25g左右的虹鱒魚種850尾（國產(chǎn)疫苗），25g左右的金鱒魚種4500尾（進口疫苗），2016年11月，虹鱒養(yǎng)殖水溫開始下降，為虹鱒魚IHN高發(fā)季節(jié)，虹鱒、金鱒成活率均為95%，照比同期養(yǎng)殖的虹鱒魚成活率提高40%，面前長勢良好。

本溪縣金宥利虹鱒魚養(yǎng)殖場，測量水溫9℃，氨氮0.1mg/L，PH 8，溶解氧6hg/L～9hg/L，符合虹鱒魚養(yǎng)殖水體標準。

五、試驗小結(jié)

1.取當?shù)氐牟×萧~制作的滅活免疫疫苗，對虹鱒疫病效果明顯的原因之一，可能是因為病毒變異或多種病毒的并發(fā)，所以采取當?shù)睾琪V魚發(fā)病的魚做病料魚制作疫苗是本次試驗效果明顯的關(guān)鍵。

2.病毒性魚病無藥可治，可通過暴曬池塘的方法（兩年以上），消滅病毒源。

3.此次制作疫苗的是大連口岸檢疫局的病毒專業(yè)專家，制作疫苗，還是要病毒專業(yè)的專家，專業(yè)水平很重要。

4.注射疫苗要專業(yè)，要注意角度、注射針頭進入魚體的長度等，否則會增加死亡率。

5.亦可通過降低虹鱒魚放養(yǎng)密度、提高虹鱒魚的生活環(huán)境品質(zhì)、投喂優(yōu)質(zhì)飼料、在病毒發(fā)病季節(jié)對虹鱒魚IHN進行中藥、預防提高虹鱒魚的自身免疫力，達到降低死亡率的效果。但這些在虹鱒養(yǎng)殖戶的實際生產(chǎn)上很難達到。

6.我們試驗的最終目的是虹鱒種魚注射疫苗，使虹鱒二代產(chǎn)生抗體，使虹鱒苗種生長到30克左右不發(fā)病。虹鱒苗種再注射一次虹鱒免疫滅活疫苗，以正常的死亡率（10%左右）養(yǎng)殖到成魚。從現(xiàn)在的試驗情況及根據(jù)國家漁業(yè)教授陳昌福提出的“本土疫苗”的概念，通過本次試驗，我們認為虹鱒IHN免疫滅活疫苗試驗項目可行。

附表1 2015年虹鱒魚免疫滅活疫苗對比試驗數(shù)據(jù)一、第一批試驗數(shù)據(jù)

附表2二、2015年第二批試驗數(shù)據(jù)

附表3 2016年虹鱒魚免疫滅活疫苗對比試驗數(shù)據(jù)

作者單位：遼寧省本溪市漁業(yè)管理總站