劉 鑫，王化麗，王悅陽(yáng)，姜 盟

(1.遼寧省鞍山市婦兒醫(yī)院，遼寧 鞍山 114000；2.遼寧省大連市婦幼保健院，遼寧 大連 116000)

雌激素對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞合成NGF及COX-2的影響及傳導(dǎo)通路研究

劉 鑫1，王化麗2，王悅陽(yáng)2，姜 盟2

(1.遼寧省鞍山市婦兒醫(yī)院，遼寧 鞍山 114000；2.遼寧省大連市婦幼保健院，遼寧 大連 116000)

目的 觀察雌激素(E2)對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)患者在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞(ESC)合成神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)及環(huán)氧化酶-2(COX-2)的影響，以及阻斷核因子-κB(NF-κB)信號(hào)通路后ESC合成NGF及COX-2的變化，探討雌激素導(dǎo)致EMs患者疼痛的可能信號(hào)傳導(dǎo)通路。方法 體外分離培養(yǎng)42例EMs患者在位ESC，用10-8mol/L E2(E2組)、25μmol/L NF-κB抑制劑 (PDTC)+10-8mol/L E2(E2+PDTC組)處理細(xì)胞24h后，采用Western blot及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)分別檢測(cè)ESC合成NGF、COX-2蛋白及mRNA水平的變化。結(jié)果 E2組NGF、COX-2的蛋白及mRNA均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為4.745、6.317、3.465、5.443，均P<0.05)。E2+PDTC組 NGF、COX-2的蛋白及mRNA均低于E2組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為3.675、5.319、7.132、8.514，均P<0.05)，但仍高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為3.526、4.733、4.261、5.513，均P<0.05)。結(jié)論 在體外，雌激素可促進(jìn)EMs患者在位ESC中NGF、COX-2表達(dá)，PDTC可部分抑制這種作用，說(shuō)明NF-κB通路參與了雌激素調(diào)節(jié)EMs在位ESC中NGF、COX-2表達(dá)調(diào)控，阻斷和調(diào)控NF-κB信號(hào)通路的活性可能為治療EMs提供新策略。

子宮內(nèi)膜異位癥；17β-雌二醇；神經(jīng)生長(zhǎng)因子；環(huán)氧化酶-2；NF-κB信號(hào)通路

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMs)是一種雌激素依賴性疾病，雌激素可以直接刺激異位內(nèi)膜細(xì)胞增殖、促進(jìn)新生的血管內(nèi)皮細(xì)胞增生遷移及刺激多種細(xì)胞因子產(chǎn)生，共同參與EMs的發(fā)病過(guò)程。疼痛是EMs患者的主要臨床表現(xiàn)，神經(jīng)支配、炎癥反應(yīng)是EMs患者疼痛的可能機(jī)制[1]。EMs子宮內(nèi)膜神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor，NGF)及環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)的表達(dá)與神經(jīng)纖維分布和疼痛的嚴(yán)重程度相關(guān)[2-3]。為進(jìn)一步了解雌激素對(duì)EMs疼痛產(chǎn)生的作用，本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)的方法，觀察雌激素對(duì)EMs患者在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞(endometrial stromal cells，ESC)合成NGF、COX-2的影響，以及阻斷核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信號(hào)通路后ESC合成NGF、COX-2的變化，探討雌激素作用導(dǎo)致EMs疼痛的可能信號(hào)傳導(dǎo)通路，為EMs疼痛的治療提供新思路、新方法。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1細(xì)胞來(lái)源

選取42例于2012年7月至2013年2月就診于大連市婦幼保健院因EMs行全子宮切除術(shù)患者為研究對(duì)象。該研究經(jīng)倫理委員會(huì)通過(guò)，患者亦知情同意。患者平均年齡為33.20±3.61歲。所有患者均于子宮內(nèi)膜增殖期(月經(jīng)7～14天)入院行開(kāi)腹或腹腔鏡手術(shù)，排除子宮腺肌癥、盆腔炎、子宮肌瘤，術(shù)前3個(gè)月內(nèi)未服用過(guò)激素類藥物。術(shù)中子宮離體后，立即留取部分子宮在位內(nèi)膜組織，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，各例內(nèi)膜細(xì)胞分別行分離培養(yǎng)。另取內(nèi)膜組織送病理學(xué)檢查，排除內(nèi)膜病變。收集4代以內(nèi)的在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。

1.1.2主要試劑

17β-雌二醇、兔抗人NGF單克隆抗體和鼠抗人COX-2單克隆抗體(Abcam，英國(guó))，NF-κB抑制劑(Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)(Sigma，美國(guó))，培養(yǎng)基RPMI-1640、胎牛血清、Ⅰ型膠原酶和胰蛋白酶(Gibco，美國(guó))；人B-波形蛋白單克隆抗體(person B vimentin monoclonal antibodies，DAKO，丹麥)；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠、兔抗體(福建邁新公司)；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒和ECL發(fā)光試劑盒(pierce chemieal，美國(guó))；NGF、COX-2、GAPDH引物和RT-PCR技術(shù)檢測(cè)試劑盒(大連寶生物公司)。

1.2方法

1.2.1子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的分離與純化

參照Osteen等和Mylonas等方法加以改良：去除血凝塊，將內(nèi)膜剪碎至0.5～1mm3大小，D-Hanks液反復(fù)沖洗以去除紅細(xì)胞。加入0.1%Ⅱ型膠原酶，于37℃水浴箱中振搖15min，10%胎牛血清的培養(yǎng)液終止消化，分別經(jīng)200目及400目的細(xì)胞篩網(wǎng)依次過(guò)濾，以1 000r/min離心5min，D-Hanks液沖洗2次，1 000r/min離心5min，加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)液，制成間質(zhì)細(xì)胞懸液，接種于培養(yǎng)瓶，置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔日換液。

1.2.2子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞純度鑒定

分離、純化的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)24h后，棄培養(yǎng)液，PBS洗滌；4%多聚甲醛固定15min，PBS洗滌；加入封閉液，37℃ 20 min，加入鼠抗人波形蛋白抗體，37℃孵育2h；PBS洗滌；S-P法染色，用PBS代替第一抗體作陰性對(duì)照。

1.2.3子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的傳代培養(yǎng)

待細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)瓶80%以上倒掉培養(yǎng)液，PBS清洗，加入0.1%Ⅱ型膠原酶，于37℃溫箱中消化，待基質(zhì)細(xì)胞收縮變圓時(shí)，加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)液終止消化，1 000r/min離心5min，棄上清，以含10%胎牛血清的培養(yǎng)液懸浮，按1:2或1:3的比例傳代。

1.2.4子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞體外處理

ESC培養(yǎng)體系建立后收集4代以內(nèi)的細(xì)胞以5×105/mL的細(xì)胞密度接種于12孔培養(yǎng)板行體外藥物處理。生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，將培養(yǎng)液更換為無(wú)血清的培養(yǎng)液，培養(yǎng)24h后，以減少血清對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾，分組后進(jìn)行藥物處理。對(duì)照組：無(wú)血清培養(yǎng)液；E2組：10-8mol/L E2+培養(yǎng)液；E2+PDTC組：細(xì)胞首先進(jìn)行1h的25μmol/L PDTC預(yù)培養(yǎng)，然后再加入終濃度為10-8mol/L的E2。培養(yǎng)24h后收集細(xì)胞。每組設(shè)10個(gè)平行孔。

1.2.5 Western blot檢測(cè)

用PBS清洗培養(yǎng)的ESC后刮取收集的細(xì)胞，離心后，沉淀加入100μL 4℃預(yù)冷的細(xì)胞裂解液(10% 10×PBS、1% Triton X-100、5g/L脫氧膽酸鈉、1g/L SDS、0.5g/L aprotinin、1mmol/L苯磺酰氟、1mmol/L EDTA)，將細(xì)胞裂解 13 000r/min離心20min。取上清液由蛋白濃度檢測(cè)法(bicinchoninic acid，BCA)檢測(cè)蛋白濃度。取50μg蛋白樣品進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉，加入兔抗人NGF(濃度1:100)和兔抗人COX-2(濃度1:100)單克隆抗體4℃過(guò)夜，洗滌后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔二抗，37℃孵育1 h，顯色，計(jì)算機(jī)掃描，應(yīng)用圖像分析軟件檢測(cè)各條帶吸光度值。

1.2.6 RT-PCR檢測(cè)

Trizol試劑盒一步法提取ESC的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增cDNA。NGF上游引物：5′- CTTCAGCATTCCCTTGACACT - 3′，下游引物：5′-GCTCCTGTGAGTCCTGTTGAA- 3′，擴(kuò)增片段240bp。COX- 2上游引物：5′- ACTCACTCAGTTTGT￣TGAGTCATTC-3′，下游引物：5′-TTTGATTAGTACTGT￣AGGGTTAATG -3′，擴(kuò)增片段583bp。內(nèi)參GAPDH上游引物：5′- AGAAGGCTGGGGCTCATTTG- 3′，下游引物5′-AGGG￣GCCATCCACAGTCTTC- 3′，擴(kuò)增片段258bp。引物反應(yīng)體系：RNase Free dH2O 28.75μL，5×PCR Buffer10μL。TaKaRa Ex Taq HS 0.25μL，上游引物0.5μL，下游引物0.5μL。反應(yīng)條件：94℃，預(yù)變性2min，94℃變性30s，57℃，退火30s，72℃，延伸30s，循環(huán)35次，72 ℃，最終延伸2min。擴(kuò)增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠中電泳20～30min，用凝膠圖像分析儀攝片，并進(jìn)行吸光度定量分析。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定結(jié)果

倒置顯微鏡下觀察，新分離的ESC多成圓形，接種24h后大部分可貼壁，細(xì)胞呈多邊形或梭形，外形輪廓清楚，折光性強(qiáng)，細(xì)胞質(zhì)薄，細(xì)胞核不明顯，細(xì)胞之間平行排列或放射狀排列，細(xì)胞之間較獨(dú)立。原代培養(yǎng)的ESC特異性標(biāo)記分子骨架蛋白波形蛋白染色陽(yáng)性，計(jì)數(shù)細(xì)胞波形蛋白染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，細(xì)胞純度均可達(dá)90%～95%，見(jiàn)圖1。

圖1 ESC波形蛋白免疫組化法鑒定(×100)

Fig.1 ESC vimentin identified by immunohistochemistry (×100)

2.2各組子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中NGF和COX-2 mRNA的表達(dá)

ESC在無(wú)血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)狀態(tài)下，有NGF mRNA和COX-2 mRNA的表達(dá)；E2組ESC中NGF mRNA和COX-2mRNA的表達(dá)較對(duì)照組顯著增加(t值分別為3.465、5.443，均P<0.05)；加入NF-κB的抑制劑PDTC后，NGFmRNA和COX-2mRNA的表達(dá)較E2組明顯減少(t值分別為7.132、8.514，均P<0.05)，但仍高于對(duì)照組(t值分別為4.261、5.513，均P<0.05)，見(jiàn)表1和圖2。

組別 NGF COX?2 mRNA蛋白mRNA蛋白對(duì)照組1．01±0．112．01±0．121．64±0．250．98±0．13E2組2．36±0．306．41±0．363．98±0．123．80±0．21E2+PDTC組1．68±0．255．18±0．202．73±0．192．76±0．25t3．465?4．745?5．443?6．317?P0．006 0．005 0．005 0．003 t7．132??3．675??8．514??5．319??P0．001 0．002 0．004 0．002

注：*E2組與對(duì)照組比較；**E2+PDTC組與E2組比較。

M 1 2 3 4

M 1 2 3 4

圖2 RT-PCR測(cè)定ESC中NGF和COX-2mRNA的表達(dá)情況

Fig.2 Expressions of NGF and COX-2mRNA in ESC determined by RT-PCR

2.3各組子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中NGF和COX-2蛋白的表達(dá)

ESC在無(wú)血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)狀態(tài)下，有NGF和COX-2蛋白的表達(dá)；E2組ESC中NGF和COX-2蛋白的表達(dá)較對(duì)照組顯著增加(t值分別為4.745、6.317，均P<0.05)；加入NF-κB的抑制劑PDTC后，NGF和COX-2蛋白的表達(dá)較E2組明顯減少(t值分別為3.675、5.319，均P<0.05)，但仍高于對(duì)照組(t值分別為3.526、4.733，均P<0.05)，見(jiàn)表1和圖3。

圖3 Western blot測(cè)定ESC中NGF和COX-2蛋白的表達(dá)情況

Fig.3 Expressions of NGF and COX-2 in ESC determined by Western blot

3討論

3.1子宮內(nèi)膜異位癥的概述

EMs是育齡期婦女常見(jiàn)的雌激素依賴性的慢性炎癥性疾病，疼痛是主要表現(xiàn)之一，嚴(yán)重影響患者的生活和工作質(zhì)量。EMs患者和非EMs患者在位子宮內(nèi)膜的分子及生物學(xué)特性存在差異，EMs發(fā)病取決于患者在位子宮內(nèi)膜的特性，經(jīng)血逆流只是實(shí)現(xiàn)這一由潛在到發(fā)病的橋梁，據(jù)此提出“在位內(nèi)膜決定論”的新觀點(diǎn)。故本研究選擇EMs患者的在位子宮內(nèi)膜為研究對(duì)象。

疼痛是傷害性刺激作用于機(jī)體引起的一種復(fù)雜的心理和生理過(guò)程，傷害性刺激、神經(jīng)纖維末梢和神經(jīng)介質(zhì)是疼痛產(chǎn)生的必備條件。EMs的疼痛涉及神經(jīng)系統(tǒng)、免疫細(xì)胞、炎癥反應(yīng)及激素作用，是一種包含神經(jīng)源性疼痛、炎癥性疼痛、內(nèi)臟-內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏的混雜性疼痛，并且受激素水平的調(diào)節(jié)。

3.2神經(jīng)生長(zhǎng)因子與子宮內(nèi)膜異位癥

NGF是一種具有神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)和促神經(jīng)突起生長(zhǎng)雙重生物學(xué)功能的神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子，對(duì)中樞及周圍神經(jīng)元的發(fā)育、分化、生長(zhǎng)、再生和功能特性的表達(dá)均具有重要的調(diào)控作用。有研究證實(shí)EMs患者在位子宮內(nèi)膜存在NGF和神經(jīng)纖維的異常高表達(dá)，且與疼痛的嚴(yán)重程度有關(guān)[2]。本研究證明，體外培養(yǎng)EMs患者在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞有NGFmRNA及其蛋白的表達(dá)。NGF可以使異位病灶周圍正常組織的神經(jīng)纖維向異位病灶內(nèi)生長(zhǎng)，誘導(dǎo)P物質(zhì)(SP)、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、神經(jīng)肽等致痛物質(zhì)的生成，刺激末梢神經(jīng)纖維，產(chǎn)生疼痛。本研究也表明，雌激素能夠刺激EMs患者ESC的 NGFmRNA及其蛋白的分泌。EMs患者在位子宮內(nèi)膜的神經(jīng)纖維的產(chǎn)生受性激素特別是雌激素的調(diào)控，雌激素可刺激NGF及其受體的表達(dá)，改變NGF及TrkA的分布格局[3]，進(jìn)而誘導(dǎo)神經(jīng)纖維的萌生，導(dǎo)致持續(xù)性疼痛的產(chǎn)生。應(yīng)用拮抗雌激素的口服避孕藥治療EMs后，子宮內(nèi)膜及肌層的NGF表達(dá)均明顯下降，神經(jīng)纖維也顯著減少，從而緩解了痛經(jīng)癥狀，說(shuō)明雌激素可通過(guò)調(diào)節(jié)NGF的表達(dá)介導(dǎo)疼痛的產(chǎn)生。

3.3環(huán)氧化酶-2與子宮內(nèi)膜異位癥

COX-2是花生四烯酸(AA)代謝過(guò)程中調(diào)節(jié)前列腺素(PGs)合成的一種重要的限速酶，主要參與炎癥反應(yīng)、疼痛信號(hào)的傳遞及腫瘤的發(fā)生發(fā)展。EMs患者子宮內(nèi)膜COX-2的表達(dá)與疼痛相關(guān)[4]。本研究證明，體外培養(yǎng)EMs患者子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞有COX-2 mRNA和蛋白的表達(dá)，并且雌激素能夠促進(jìn)COX-2的分泌。COX-2水平的升高促進(jìn)前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)的產(chǎn)生增加，而PGE2既是重要的炎癥介質(zhì)又是重要的致痛因子，它能增強(qiáng)血管通透性，增加血流，能激活神經(jīng)元增加神經(jīng)末梢的痛覺(jué)敏感性，它還是芳香化酶的重要激活蛋白，這便形成了一個(gè)持續(xù)產(chǎn)生E2和COX-2-PGE2的正反饋循環(huán)，從而引起EMs疼痛[5]。而特異性的COX-2抑制劑可明顯減輕EMs的疼痛[6]。

3.4 阻斷核因子-κB與子宮內(nèi)膜異位癥

NF-κB作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的樞紐，在機(jī)體的免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)，以及細(xì)胞的生長(zhǎng)調(diào)控等方面調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄。在細(xì)胞靜息狀態(tài)時(shí)，NF-κB與它的抑制因子I-κB結(jié)合，以無(wú)活性形式存在于細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)受到外界刺激時(shí)I-κB解離，NF-κB活化進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，啟動(dòng)靶基因的表達(dá)。PDTC可以抑制NF-κB的活化和向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移，阻斷NF-κB傳導(dǎo)途徑的信號(hào)傳導(dǎo)。

NF-κB可通過(guò)調(diào)節(jié)多種靶基因的表達(dá)，參與免疫和炎癥反應(yīng)、增殖和抗凋亡反應(yīng)、黏附和侵襲反應(yīng)等，從而促進(jìn)EMs的發(fā)生、發(fā)展[7]。有研究表明，在健康婦女的子宮內(nèi)膜組織中，NF-κB處于低激活狀態(tài)，而在EMs病灶中，NF-κB的活性明顯增加，阻斷NF-κB信號(hào)通路可以有效地抑制EMs的發(fā)展，一些抑制NF-κB通路的藥物已被證明可以有效地減少EMs相關(guān)的癥狀[7]。本研究表明，應(yīng)用PDTC可以使雌激素誘導(dǎo)的NGF、COX-2 mRNA和蛋白生成減少，說(shuō)明雌激素通過(guò)NF-κB途徑誘導(dǎo)NGF和COX-2的生成，NGF和COX-2基因啟動(dòng)子上存在NF-κB結(jié)合位點(diǎn)，活化的NF-κB入核后啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，刺激神經(jīng)纖維和炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致EMs疼痛。但抑制NF-κB信號(hào)通路后，并沒(méi)有完全阻斷雌激素的促進(jìn)作用，表明除了NF-κB信號(hào)通路外可能還有其他的信號(hào)通路參與此過(guò)程。

EMs是癥狀依賴性疾病，其治療應(yīng)以減輕癥狀為主，在藥物及手術(shù)治療均不理想的今天，采取新的治療方法顯得格外重要。對(duì)EMs相關(guān)疼痛的產(chǎn)生機(jī)制及其治療方法仍需不斷進(jìn)行研究。需要注意的是，完全、持續(xù)阻斷NF-κB信號(hào)通路又將導(dǎo)致免疫缺陷和健康細(xì)胞的凋亡[1]。盡管如此，抑制NF-κB信號(hào)通路的激活在治療EMs中仍有著其良好的應(yīng)用前景，可能成為EMs疼痛治療的新策略。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：呂淑蘭]

Effect of estrogen on the synthesis of NGF and COX-2 and corresponding signal transduction pathway in eutopic endometrial stromal cells of patients with endometriosis

LIU Xin1, WANG Hua-li2, WANG Yue-yang2, JIANG Meng2

(1.WomanandChildren’sHospitalofAnshanCity,LiaoningAnshan114000,China;2.DalianMaternalandChildHealthCareHospital,LiaoningDalian116000,China)

Objective To observe the effect of estrogen (E2) on synthesis of nerve growth factor (NGF) and cycloxygenase-2 (COX-2) in eutopic endometrial stromal cells (ESC) of patients with endometriosis (EMs) and the variation of NGF and COX-2 synthesis in ESC after blocking NF-κB signaling pathway and to investigate the possible signal transduction pathway of estrogen in EMs patients. Methods The eutopic ESC of EMs patients were separated and cultured in vitro. After processed with 10-8mol/L E2(E2group) or 25μmol/L PDTC+10-8mol/L E2(E2+PDTC group) for 24 hours, the synthesis of NGF and COX-2 protein as well as mRNA levels variation in eutopic ESC were detected by Western blot and reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) technology.Results The expression of NGF, COX-2 protein and mRNA in E2group were higher than those in the control group, and the differences were statistically significant (tvalue was 4.745, 6.317, 3.465 and 5.443, respectively, allP<0.05). The expression of NGF, COX-2 protein and mRNA in E2+PDTC group were lower than those in E2group, and the differences were statistically significant (tvalue was 3.675, 5.319, 7.132 and 8.514, respectively, allP<0.05), but they were higher than those in the control group with statistical significance (tvalue was 3.526, 4.733, 4.261 and 5.513, respectively, allP<0.05). Conclusion In vitro, E2can promote the expressions of NGF and COX-2 protein in eutopic ESC of EMs patients. PDTC can partially inhibit this effect. It indicates that NF-κB signal transduction pathway is involved in regulation of E2on NGF and COX-2 in eutopic ESC of EMs patients. Blocking and regulating the activity of NF-κB signal transduction pathway may provide new strategies for the treatment of EMs.

endometriosis (EMs); 17β-estradiol (E2); nerve growth factor (NGF); cyclooxygenase-2 (COX-2); NF-κB signal transduction pathway

2015-07-06

大連市科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(編號(hào)：20110659)

劉 鑫(1986-)，女，醫(yī)師，碩士，主要從事婦科臨床工作。

王化麗，主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.01.018

R711.7

A

1673-5293(2017)01-0051-03