張耀武，陳萬(wàn)光，喬明超，阿古葉赫，張亞男，蘇家宜

（1.洛陽(yáng)師范學(xué)院，河南洛陽(yáng) 471000；2.河南省冷水魚(yú)養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，河南洛陽(yáng)471000；3.洛陽(yáng)昌盛水產(chǎn)有限公司，河南洛寧471700；4.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南洛陽(yáng)471000）

西伯利亞鱘魚(yú)的人工繁殖試驗(yàn)總結(jié)

張耀武1,2，陳萬(wàn)光1,2，喬明超3，阿古葉赫1，張亞男4，蘇家宜4

（1.洛陽(yáng)師范學(xué)院，河南洛陽(yáng) 471000；2.河南省冷水魚(yú)養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，河南洛陽(yáng)471000；3.洛陽(yáng)昌盛水產(chǎn)有限公司，河南洛寧471700；4.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南洛陽(yáng)471000）

選取故縣水庫(kù)性成熟的西伯利亞鱘魚(yú)作為親魚(yú)，采用人工技術(shù)對(duì)4尾雄性及6尾雌性西伯利亞鱘進(jìn)行人工繁殖。催產(chǎn)前將親魚(yú)雌雄分開(kāi)暫養(yǎng)，并且將水溫逐步提升到15～16℃。經(jīng)過(guò)人工催產(chǎn)，4尾雄魚(yú)通過(guò)人工擠壓腹部順利排精，6尾雌魚(yú)通過(guò)微創(chuàng)手術(shù)獲得成熟卵子，再通過(guò)人工授精、脫粘、孵化，共獲得受精卵61.5萬(wàn)粒，鱘魚(yú)稚魚(yú)58.2萬(wàn)尾，受精率89.98%，孵化率94.5%。

西伯利亞鱘；人工繁殖；總結(jié)

西伯利亞鱘（Acipenser baeri）為鱘科、鱘屬魚(yú)類。鱘魚(yú)類由于其特有的經(jīng)濟(jì)價(jià)值、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和生物學(xué)特性而備受人們的關(guān)注。古羅馬、古俄羅斯和中國(guó)皇室均視其為珍品[1]。西伯利亞鱘魚(yú)目前是豫西山區(qū)冷水魚(yú)養(yǎng)殖的主要品種,其產(chǎn)量占鱘魚(yú)、虹鱒、三文魚(yú)等冷水性魚(yú)類產(chǎn)量的85%。長(zhǎng)期以來(lái)，鱘魚(yú)苗種全部依靠從省外購(gòu)進(jìn)，隨著鱘魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，其苗種供應(yīng)的矛盾越來(lái)越突出，嚴(yán)重地制約了河南鱘魚(yú)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。為解決鱘魚(yú)苗種的瓶頸問(wèn)題，筆者于2015年4月2日開(kāi)始對(duì)西伯利亞鱘魚(yú)的人工繁殖進(jìn)行了試驗(yàn)研究?，F(xiàn)把試驗(yàn)情況總結(jié)如下。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 親魚(yú)：雌、雄親魚(yú)均為8齡性成熟的西伯利亞鱘魚(yú)，由洛陽(yáng)昌盛水產(chǎn)有限公司培育。2015年4月2日，實(shí)驗(yàn)選取8齡的體表光滑無(wú)傷、體質(zhì)健壯的親魚(yú)雌魚(yú)6尾,雄魚(yú)4尾。

1.1.2 催產(chǎn)藥物：寧波三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的促黃體素釋放激素類似物（LRH-A2）。

1.1.3 產(chǎn)卵池：6個(gè)直徑3 m，深1.2 m的圓形亞克力池子，水位控制在0.6 m。

1.1.4 孵化器：自己研發(fā)的鱘魚(yú)篩式孵化器，主體包括：支架、水槽、盛卵槽(每臺(tái)16個(gè))、翻斗(16個(gè))、分水器、供水管、排水槽和接苗器等。水槽左右各1只，每只中間是不分割的盛卵槽，8只盛卵槽放在一個(gè)水槽中。盛卵槽除不銹鋼板的4個(gè)筐和不銹鋼網(wǎng)底外，還有一個(gè)很精密的氣箱和接水槽。在正常狀態(tài)下，接水槽是放空的，氣箱使盛卵槽浮在水槽內(nèi)，接水槽加滿水后，在重力和水重量的共同作用下，盛卵槽被壓入水中。接水槽下面有一個(gè)孔，在幾秒鐘內(nèi)將水排凈，盛卵槽再度浮出水面，完成下一次往返動(dòng)作。

1.2 親魚(yú)培養(yǎng)

水溫達(dá)到14℃時(shí)，把發(fā)育成熟的親魚(yú)雌魚(yú)6尾、雄魚(yú)4尾移入產(chǎn)卵池中，通過(guò)深層水和淺層水的相互注入調(diào)控產(chǎn)卵池的水溫，逐漸提升池內(nèi)溫度，使水溫保持在15～16℃。

1.3 人工催產(chǎn)

1.3.1 催產(chǎn)部位

背骨板左右兩側(cè)兩骨板之間的肌肉部位或者胸鰭基部。

1.3.2 催產(chǎn)時(shí)間及藥量

雄魚(yú)為一次注射，時(shí)間為早上9∶00，劑量為4 mg/kg；雌魚(yú)分2次注射，第一針晚上9:00，劑量為1 mg/kg，第二針間隔12 h，劑量為7 mg/kg。親魚(yú)注射催產(chǎn)激素后按雌雄性別分池放回暫養(yǎng)觀察。雌魚(yú)在第2次注射后，每隔3～4 h檢查有無(wú)排卵情況。

1.4 人工采精和擠卵

1.4.1 人工采精

雄魚(yú)在注射10～12 h后，將雄魚(yú)放置在小木臺(tái)上，用手輕敲魚(yú)的腹部，即可采出精液，取1滴精液放在載玻片上于顯微鏡下觀察其活性(精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間不低于30 s)。合格后，擠壓雄魚(yú)腹部，擠出精液貯存于3～4℃冰箱內(nèi)備用[2-4]。

1.4.2 人工采卵

檢查發(fā)現(xiàn)暫養(yǎng)池底有游離卵粒出現(xiàn)時(shí)，把排卵親魚(yú)用擔(dān)架抬至手術(shù)床，用干毛巾擦干鱘魚(yú)生殖孔，擠壓腹部，將卵直接從生殖孔擠出。當(dāng)擠卵、排卵不暢時(shí)，在鱘魚(yú)生殖孔前端4～6 cm處，用手術(shù)刀縱向切開(kāi)2～3 cm，形成出卵口，用手從上至下輕度擠壓腹部使成熟卵不經(jīng)輸卵管而直接排出體外[5]，待卵基本排凈后將親魚(yú)尾部抬高，從出卵口用500～1000 mL生理鹽水灌洗腹腔，排出腹腔中的游離卵并清洗腹腔。產(chǎn)出的卵用燒杯或量筒測(cè)量產(chǎn)卵量[5]。手術(shù)的時(shí)候還要不斷向魚(yú)鰓內(nèi)淋水，保證魚(yú)在手術(shù)時(shí)的呼吸，避免造成親魚(yú)死亡。采卵結(jié)束后用縫合針、線將傷口縫合，用藥物對(duì)縫合傷口及周圍進(jìn)行局部涂抹消毒、消炎處理后放回養(yǎng)殖池，并連續(xù)3 d對(duì)雌親魚(yú)注射消炎藥物。

1.5 人工授精

采用半干法受精，將收集好的親魚(yú)的卵和低溫收藏的精液混入無(wú)水容器中，每1000 mL魚(yú)卵用10mL精原液，精液的稀釋比例為精液：水=1：150[6]。待受精卵充分接觸后加清水漂洗。

1.6 人工脫粘

加入20%的滑石粉溶液手工攪拌，時(shí)間為1 h，期間每隔20 min換一次滑石粉溶液。等到魚(yú)卵脫粘后移入孵化箱中進(jìn)行孵化。

1.7 人工孵化

把受精卵放入篩式孵化器中，保持水溫在16℃-19℃，約110 h出膜。孵化的過(guò)程中，要不斷注意水的流速，保證水中溶氧充足，還要注意魚(yú)卵密度及清除死卵等雜物。

2 孵化效果

2.1 雄魚(yú)催產(chǎn)

雄鱘魚(yú)4尾經(jīng)過(guò)注射催產(chǎn)激素后，效應(yīng)時(shí)間12～14 h采出活力正常的精子，共采集到550 mL精液。

2.2 雌魚(yú)催產(chǎn)及手術(shù)取卵

雌鱘魚(yú)6尾經(jīng)過(guò)2次催產(chǎn)注射后，全部在30～42 h出現(xiàn)排卵反應(yīng)。采用微創(chuàng)手術(shù)，共采集魚(yú)卵13.3 L(共有62.1萬(wàn)粒)。經(jīng)手術(shù)縫合后的所有親魚(yú)，產(chǎn)后恢復(fù)良好，檢查手術(shù)創(chuàng)口無(wú)發(fā)炎和潰爛現(xiàn)象。

2.3 授精與孵化

經(jīng)半干法授精，共獲得受精卵55.9萬(wàn)粒，受精率89.98%。經(jīng)過(guò)96～120 h的孵化，共獲得52.8萬(wàn)尾鱘魚(yú)稚魚(yú)，孵化率達(dá)94.5%。

3 討論

3.1 性成熟年齡和時(shí)間

自然狀態(tài)下西伯利亞鱘的性成熟年齡，在鄂畢河為10～12齡，在葉尼塞河為17～23齡，其產(chǎn)卵時(shí)間為5～6月，水溫在9～18℃之間[7]。故縣水庫(kù)培育達(dá)到8齡的西伯利亞鱘親魚(yú)，同樣能夠性成熟，催產(chǎn)前將親魚(yú)的水溫逐步提升到15～16℃，刺激雌魚(yú)排卵，通過(guò)人工繁殖技術(shù)可以順利進(jìn)行西伯利亞鱘魚(yú)人工繁殖。鱘魚(yú)的繁殖技術(shù)關(guān)鍵在于營(yíng)造好鱘魚(yú)親魚(yú)生長(zhǎng)最佳的生態(tài)環(huán)境，包括水質(zhì)、水溫、光照和營(yíng)養(yǎng)[8]。

3.2 催產(chǎn)藥物選擇

西伯利亞鱘在人工養(yǎng)殖過(guò)程中不能主動(dòng)排卵主要是因?yàn)榄h(huán)境與原生環(huán)境不同，所以在人工繁殖過(guò)程中需要注射催產(chǎn)針，實(shí)驗(yàn)證明這次選用的寧波三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的促黃體素釋放激素類似物（LRH-A2）是有效果的，催產(chǎn)效果良好。

3.3 精子保存

采集到精子后要低溫保存，魚(yú)類精子糖酵解能力很弱，主要靠氧化代謝獲取能量。精子產(chǎn)出體外后基本不能利用環(huán)境中的碳水化合物，只能依靠自身儲(chǔ)存能量進(jìn)行生命活動(dòng)[9]。在高溫環(huán)境中，精子很難存活，因此采用低溫保存，能夠提高精子存活時(shí)間。

3.4 手術(shù)后的防范措施

在手術(shù)完成之后，及時(shí)將傷口縫合牢固，并要進(jìn)行傷口的消毒等防范措施。傷口在水中暴露，容易引發(fā)疾病感染[10]。要及時(shí)檢查親魚(yú)手術(shù)后的狀況，對(duì)開(kāi)線的傷口進(jìn)行二次縫合，出現(xiàn)感染的部位及時(shí)用藥，避免親魚(yú)手術(shù)后死亡，該親魚(yú)經(jīng)培育2-3年后仍可用于繁殖。

[1]石振廣，董雙林，王云山，等，我國(guó)鱘魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)現(xiàn)狀及問(wèn)題分析[J].中國(guó)漁業(yè)經(jīng)濟(jì)，2008，26（2）：58-62.

[2]鄧岳松，林浩然.魚(yú)類精子活力研究進(jìn)展[J].生命科學(xué)研究，1999，3(4)：27l-278．

[3]孫大江，曲秋芝，馬國(guó)軍，等.養(yǎng)殖史氏鱘的人工繁殖[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2003，10(6)：485-490．

[4]何珍，許平，周效廣.鱘魚(yú)人工繁殖獲取精液新方法試驗(yàn)[J]．黑龍江水產(chǎn)，2002(4)：29-30．

[5]楊興，劉霆，周洲，等.貴州山區(qū)西伯利亞鱘人工繁殖研究[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2012，40(10)：139-140.

[6]李禾,李軍,王澤仁.池養(yǎng)西伯利亞鱘的人工繁殖試驗(yàn)[J].水產(chǎn)科技情報(bào),2015,04:202-204,208.

[7]謝忠明,孫大江,王樹(shù)京,等.鱘魚(yú)養(yǎng)殖技術(shù)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.2000.258-263.

[8]任華,蘭大華.鱘魚(yú)人工繁殖關(guān)鍵技術(shù)探討[J].河北漁業(yè),2011,(08):41-42.

[9]陳松林,劉憲亭.魚(yú)類精液超低溫冷凍保存的基本原理、研究現(xiàn)狀及應(yīng)用前景[J].淡水漁業(yè),1991,(05): 43-46.

[10]潘鵬,劉曉勇,齊茜,等.西伯利亞鱘產(chǎn)后護(hù)理技術(shù)[J].中國(guó)水產(chǎn),2016,03:88-90.

A summary of artificial propagation experiment on Siberian sturgeon (Acipenser baeri)

Zhang Yaowu1,2,Chen Wanguang1,2,Qiao Mingchao3,Agu Yehe1,Zhang Yanan4,Su Jiayi4

(1 Luoyang Normal University,Luoyang 471000;2 Research Center of Aquaculture Engineering Technology of Cold Water Fish in Henan Province, Luoyang 471000;3 Changsheng Limited Company of Aquculture in Luoyang City,Luoning 471700;4 College of Animal Science&Technology,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471000,Henan,China)

The mature Siberian sturgeons were selected from the reservoir of Guxian County.Four male and six female Siberian sturgeons were used for artificial propagation.The parent fishes were separately cultured before induced spawning and the temperature of culturing water was gradually raised to 15-16℃.After induced spawning, four males were squeezed abdomen to obtain the sperm,and six females were carried out minimally invasive surgery to obtain the eggs.Then,by artificial insemination,unsticking and hatching,615,000 embryos and 58.2 million juveniles were obtained,and the fertilization and hatching rate were 89.98%and 94.5%respectively.

Siberian sturgeon(Acipenser baeri);artificial propagation;summary

2017-02-20

河南省產(chǎn)學(xué)研合作計(jì)劃（162107000035）。

張耀武（1967-），男，漢族，河南鄧州人，副教授，主要從事水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)相關(guān)教學(xué)科研及技術(shù)推廣等工作。