□ 余方林 恒楓食品科技有限公司 包秀秀 杭州市食品藥品檢驗(yàn)研究院 嚴(yán)大迅 宏勝飲料集團(tuán)有限公司

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

儀器：Agilent1260高效液相色譜儀，配紫外檢測器。

試劑：檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)品（GBW(E)100001a）、乙酸銨（HPLC）、甲醇（HPLC）、冰醋酸（HPLC）、無水乙醇（HPLC）、甲酸（AR）、檸檬酸（AR）、氨水（AR），超純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和樣品前處理

準(zhǔn)確移取0.500 mg/mL的檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)溶液用超純水逐級稀釋至1.0～50.0 μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后上機(jī)。

稱取適量飲料樣品至100mL燒杯內(nèi)，加檸檬酸溶液調(diào)pH至3～4，60℃水浴10min。將1g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入樣品中，攪拌并水浴10 min，以沙芯漏斗過濾，用60℃ pH為3～4的水洗滌3～5次，用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至10 mL，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾后分析。

1.2.2 液相色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150mm，5μm）。

流動相：A：0.02mol/LNH4AC，B：甲醇。（0-3 min：從95%A到65%A；3-7 min： 從 65%A到 0%A；7-10 min： 從0%A到 0%A；10-10.1 min： 從 0%A到95%A；10.1-21 min：維持95%A）。

流速 1.0mL/min； 進(jìn) 樣 量 10μL；柱溫35℃；檢測器1260DAD VL+ 檢測器；檢測波長254 nm、428 nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同檢測波長比對

檸檬黃在254 nm和428 nm波長下均有最大吸收峰，因此考察了254 nm和428 nm波長下對檢測結(jié)果的影響。結(jié)果表明，254 nm波長下的樣品譜圖雜峰較多，428 nm波長下的樣品譜圖峰干凈，雜峰少。另外，直接進(jìn)樣在254 nm波長下的結(jié)果高于在428 nm時的結(jié)果，而用聚酰胺處理后的樣品在254 nm和428 nm時的結(jié)果基本一致，說明直接進(jìn)樣的樣品在254 nm處有雜質(zhì)吸收，對檸檬黃的檢測結(jié)果造成干擾，使結(jié)果偏高。因此，選擇428 nm為檢測波長。

2.2 pH值對聚酰胺吸附的影響

選擇pH為3.75的飲料樣品，考察了pH對聚酰胺吸附效果的影響，結(jié)果表明，將樣品溶液pH調(diào)至6后，樣品檸檬黃加標(biāo)回收率為65.0%，而不調(diào)pH的樣品檸檬黃的加標(biāo)回收率高達(dá)92.8%，說明在pH為6的溶液環(huán)境下聚酰胺吸附檸檬黃的能力變?nèi)?。因此，選擇將pH至3～4較為合適。

2.3 聚酰胺使用量對吸附的影響

在檢測波長為428nm條件下，分別稱取0.5、1.0、1.5 g聚酰胺對果汁飲料樣品（pH值為3.75）進(jìn)行吸附處理，考察聚酰胺的用量對吸附過程的影響。結(jié)果表明，當(dāng)聚酰胺用量為1.0 g時，檸檬黃回收率最高，0.5 g次之，用量為1.5 g時加標(biāo)回收率最低，說明聚酰胺用量過少時，對檸檬黃吸附能較弱，洗脫時檸檬黃易被洗脫出來導(dǎo)致結(jié)果偏低；聚酰胺用量過多時，吸附充分，部分檸檬黃殘留在聚酰胺中，無法被完全洗脫也導(dǎo)致結(jié)果偏低。因此，選擇聚酰胺用量為1.0 g。

2.4 微孔濾膜對吸附的影響

劉勝男等[1]認(rèn)為使用微孔濾膜過濾對色素有吸附作用，使結(jié)果偏低。因此本文考察了微孔濾膜的使用對色素吸附的影響，結(jié)果表明，20 μg/mL與50 μg/mL標(biāo)液過不過微孔濾膜得到的結(jié)果無顯著變化，在本實(shí)驗(yàn)條件下微孔濾膜對色素吸附作用不明顯。

2.5 不同處理方式的影響

考察了直接進(jìn)樣和聚酰胺處理進(jìn)樣兩種方式對飲料中檸檬黃檢測結(jié)果的影響。相對于聚酰胺處理方式，直接進(jìn)樣得到的檢測結(jié)果及加標(biāo)回收率比較高，說明聚酰胺對檸檬黃有吸附作用。因此，測定澄清的果汁飲料樣品中的檸檬黃含量選擇直接進(jìn)樣方式。

3 結(jié)論

采用聚酰胺吸附法提取飲料中的檸檬黃色素，前處理繁瑣，還存在吸附不完全或者洗脫不完全的情況，造成色素?fù)p失，使得回收率偏低。樣品pH值影響吸附過程，pH≥6會造成吸附不完全，而聚酰胺質(zhì)量較大時，使得洗脫不完全。采用最優(yōu)的聚酰胺處理?xiàng)l件，檸檬黃的加標(biāo)回收率只能達(dá)到92.8%。因此，對于組分簡單、澄清的飲料樣品采用428 nm波長下直接稀釋進(jìn)樣，可以得到較準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，加標(biāo)回收率高達(dá)99.5%，樣品的色譜峰干凈，雜質(zhì)干擾少。

[1]劉勝男,張國慶,王素方,等.高效液相色譜法同時測定果蔬汁飲料中20種禁限用食品添加劑[J].輕工學(xué)報 ,2016(4)：23-29．