郇秀榮

（山東安池農(nóng)牧科技有限公司，山東濟南250000）

影響蛋雞抗體檢測結(jié)果的因素

郇秀榮

（山東安池農(nóng)牧科技有限公司，山東濟南250000）

隨著養(yǎng)雞業(yè)的不斷發(fā)展以及養(yǎng)雞密度的增大，環(huán)境污染日益嚴重，新城疫、禽流感等病已成為困擾養(yǎng)雞業(yè)最嚴重、最難控制的疾病，給廣大養(yǎng)雞戶造成嚴重的經(jīng)濟損失。而注射新城疫及禽流感疫苗是預(yù)防該病發(fā)生的有效且經(jīng)濟的手段，可大大降低雞群的發(fā)病機率和經(jīng)濟損失。但疫苗防疫后產(chǎn)生抗體的高低直接影響免疫效果。為了及時了解和掌握免疫效果，抗體檢測是一個非常有效的工具，它能從數(shù)據(jù)上讓我們直觀地了解免疫后雞體產(chǎn)生相應(yīng)抗體的高低，指導(dǎo)我們更加合理的制定免疫程序和確定免疫時間，確保雞群健康，發(fā)揮優(yōu)良的生產(chǎn)性能。

抗體檢測是利用某些病毒（如新城疫、禽流感病毒等）能夠與雞紅細胞作用發(fā)生凝集現(xiàn)象（紅細胞凝集），而這種紅細胞凝集現(xiàn)象又可被特異性的免疫血清所抑制，即紅細胞凝集抑制現(xiàn)象這一結(jié)果并通過換算成直觀的數(shù)值來判定免疫效果。在進行抗體檢測的實際操作中，抗體結(jié)果受到諸多因素的影響，現(xiàn)對其影響分析因素分析總結(jié)了六個，以便正確進行檢測實驗，使檢測結(jié)果能最大程度反映實際免疫效果，保證雞群健康，確保生產(chǎn)性能發(fā)揮正常。

1 抗原因素

抗原保存的溫度和時間要嚴格按要求進行，抗原保存溫度要求-15℃，最好加1%的甘油做保護劑，否則效價會降低。免疫抗體檢測實質(zhì)上是一個抗原抗體反應(yīng)的過程。每次檢測之前一定先準確標定抗原的效價，最好同時標定2～3遍取其平均值，抗原效價低于26則不能使用，然后根據(jù)其準確效價配制所需濃度的病毒液(如4單位和8單位病毒)。配制的抗原效價過高或過低對結(jié)果都有很大影響。過高，測定樣品的抗體效價偏低；過低，測定樣品的效價偏高。

抗原所用病毒毒株要和生產(chǎn)疫苗所用毒株一致，否則對檢測的抗體數(shù)值影響較大。如禽流感疫苗毒株用RE-7，而抗原毒株用RE-6則會影響抗體結(jié)果1～2個滴度。用甲廠生產(chǎn)的抗原檢測乙廠生產(chǎn)的疫苗免疫后的抗體結(jié)果也不一致，一般也至少有1～2個滴度的誤差。

2 紅細胞因素

不同來源的紅細胞會使結(jié)果出現(xiàn)差異，所以紅細胞來源一定要相同且是未免疫的公雞。但要注意有時不同的公雞提供的紅細胞對新城疫、禽流感H9亞型的檢測影響不大，但對禽流感H5亞型抗體測定效價差異很大。臨床上常用0.5%或1%的公雞紅細胞，但不管用哪個濃度，配制時一定要準確，不同濃度的紅細胞對抗體測定也有影響。

3 樣品因素

被檢樣品要求足量、新鮮，按要求存放和處理。血清無雜質(zhì)、無污染、無溶血現(xiàn)象，雞蛋無變質(zhì)、污染、散黃現(xiàn)象。

4 溫度因素

檢測時若室溫較高，血凝和血凝抑制試驗的反應(yīng)速度就會加快，同時紅細胞的解凝時間也變短，室溫低時則呈現(xiàn)相反的結(jié)果。當室溫過高時，配制的各種試劑應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用或及時存放于4℃冰箱中，使用時再取出。由于室溫高時反應(yīng)速度加快，故判定結(jié)果的時間也要相應(yīng)提前，否則測出的抗體結(jié)果會偏高。當冬季溫度低時可延長反應(yīng)時間，或者把反應(yīng)板置37℃培養(yǎng)箱中進行實驗。

5 儀器用具因素

96孔V型反應(yīng)板洗刷不及時或洗刷不徹底，有時會使反應(yīng)前后跳孔而無法判定結(jié)果，反應(yīng)板使用前要檢查是否清潔。在實驗做完后，反應(yīng)板應(yīng)先用自來水反復(fù)沖洗甩干后浸泡在1%～3%的鹽酸溶液中24h，然后再用蒸餾水反復(fù)沖洗，見V型孔孔底無任何沉積物后自然干燥或烘干后備用。采公雞血使用的離心管、注射器和裝血清或卵黃用的小瓶以及配制抗原用的燒杯、移液器的吸頭等都要照此程序洗滌使用。

移液器在使用前要檢查移液器嘴是否擰緊，使用前在液體中反復(fù)吸排，檢查吸排量是否準確，移液器用完后要回到松弛狀態(tài)，即擰到最大刻度。

6 操作人員因素

配制抗原、1%的雞紅細胞時用量的計算和取樣量一定要準確，確保配制出符合濃度要求的試劑。

加樣時，不管抗原還是血清，一定要掌握準確的劑量，通常為30μl。移液器是定量的，但操作人員用力大小不勻時，吸取的量就不均勻，取樣不準確就會造成檢測結(jié)果的誤差。

稀釋血清時，先把移液器內(nèi)的液體排空，再吸出30μl，排至下一孔去稀釋，反復(fù)吸排3次以上，依此類推。在移去液體時，移液器盡量呈垂直狀態(tài)。加完樣的96孔V型反應(yīng)板要充分振蕩，以便反應(yīng)完全徹底。

結(jié)果讀數(shù)應(yīng)在規(guī)定作用時間之后進行，過短出現(xiàn)凝集不完全；過長則會出現(xiàn)洗脫現(xiàn)象。能完全抑制紅細胞凝集的樣品最高稀釋倍數(shù)為該檢測樣品的凝集抑制效價。即抗原對照孔內(nèi)的紅細胞完全凝集，陽性血清對照孔內(nèi)的紅細胞完全沉淀，樣品檢測孔內(nèi)完全凝集抑制時，才判定結(jié)果。

以上所述是抗體檢測容易出現(xiàn)影響結(jié)果的因素，所以進行抗體檢測實驗時一定要嚴格操作，出現(xiàn)誤差時要認真分析查找原因，使檢測結(jié)果準確，客觀評價免疫效果，指導(dǎo)養(yǎng)雞適時免疫，預(yù)防雞群疾病的發(fā)生，保證雞群健康生產(chǎn)?！?/p>

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