□ 鹿文紅 方夢(mèng)漁 郭 飛 張 娟 梁志桃 上海格瑞產(chǎn)品檢測(cè)有限公司，農(nóng)業(yè)部設(shè)施園藝產(chǎn)品質(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中磺胺醋酰殘留量的測(cè)量不確定度評(píng)定

□ 鹿文紅 方夢(mèng)漁 郭 飛 張 娟 梁志桃 上海格瑞產(chǎn)品檢測(cè)有限公司，農(nóng)業(yè)部設(shè)施園藝產(chǎn)品質(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

根據(jù)《動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（GB/T21316-2007）[1]規(guī)定的測(cè)量步驟對(duì)雞肉中磺胺醋酰的含量進(jìn)行了測(cè)定，根據(jù)測(cè)量不確定度的評(píng)定理論，分析整個(gè)測(cè)試過程中的不確定度來源，結(jié)果表明擬合直線求樣品溶液濃度和標(biāo)準(zhǔn)溶液配制是該方法不確定度的主要來源。

磺胺醋酰；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；不確定度

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)《測(cè)量不確定度的要求》（CNAS-CL07：2011）[2]中有關(guān)測(cè)量不確定度的要求，對(duì)高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中磺胺醋酰殘留的不確定度進(jìn)行分析與評(píng)定，找出主要分量，為測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性提供科學(xué)依據(jù)。

1 測(cè)量方法和數(shù)學(xué)模型

1.1 材料與試劑

上海市2014年農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)抽查任務(wù)中于市場(chǎng)抽樣雞肉樣品。

乙腈（色譜純，CNW TechnologiesGmbH，德國(guó)），正己烷（色譜純，CNW Technologies GmbH，德國(guó)），正丙醇（色譜純，CNW Technologies GmbH，德國(guó)）。

1.2 儀器與設(shè)備

液相質(zhì)譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀XEVOTQ(Waters，美國(guó))，離心機(jī)（D-37520，ThermoFisher，德國(guó)），微波爐（M1-211A，美的，中國(guó)），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（2034，Welch，美國(guó)）。

1.3 前處理方法

1.3.1 提取

精確稱取雞肉2.00 g置于玻璃研缽中，再稱取6.00 g C18填料加至試樣上用玻璃杵輕輕研磨，使樣品與填料混合均勻，裝于50 mL具螺旋蓋聚四氟乙烯離心管中，加入25 mL乙腈-水溶液，渦旋震蕩1 min，放入家用微波爐中在光波模式下微波輻照30 s，3 000 r/min離心5 min，將乙腈層移入100 mL棕色分液漏斗中。離心后的沉淀物再加入25 mL乙腈搖勻，微波輻照提取30 s，3 000 r/min離心5 min，合并乙腈提取液，待凈化。

1.3.2 凈化

提取液中加入25 mL乙腈飽和正己烷溶液，振搖5 min，將底層乙腈溶液移入150 mL棕色雞心瓶中，加入10 mL正丙醇，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于45 ℃水浴中減壓蒸發(fā)至近干，氮?dú)饬鞔蹈?。?zhǔn)確加入1 mL乙腈-水溶液，超聲30 s溶解殘?jiān)瑢⑷芙庖阂迫?0 mL棕色離心管中，加0.5 mL乙腈飽和正己烷，渦旋震蕩2 min，于3 000 r/min離心5 min，棄去正己烷溶液，取下層乙腈-水溶液過0.22 μm微孔濾膜，供高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定。

1.4 液相色譜條件

色譜柱：BEH C18（100 mm×2.1 mm×1.7 μm）；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相及配比：0.1%甲酸水+乙腈；流速：0.3 mL/min。

樣品中磺胺醋酰的含量按公式（1）計(jì)算：

式中：X—試樣中磺胺醋酰的含量，μg/kg；

C—標(biāo)準(zhǔn)溶液中磺胺醋酰的含量，μg/mL；

V—試樣溶液定容體積，mL；

m—試樣溶液所代表的質(zhì)量，g。

2 測(cè)量不確定度的來源

雞肉中磺胺醋酰的測(cè)量不確定度的來源包括：試樣溶液中磺胺醋酰濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（c0）；樣品提取物溶液體積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（V）；試樣溶液所代表的質(zhì)量m的不確定度u（m）。

3 測(cè)量不確定度的計(jì)算

3.1 試樣液中磺胺醋酰濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（c0）

用99.5%磺胺醋酰標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制成10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，然后用該貯備液分別配制磺胺醋酰濃度為0.1、0.2、0.4、1.0 μg/mL和2.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，每種標(biāo)準(zhǔn)工作溶液測(cè)定1次，并通過線性擬合得出校準(zhǔn)曲線和相關(guān)系數(shù)。C0的不確定度有三個(gè)來源：（1）擬合校準(zhǔn)曲線引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u1；（2）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制引入的不確定度u2；（3）重復(fù)測(cè)量產(chǎn)生的不確定度u3。

3.1.1 擬合校準(zhǔn)曲線引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u1

由于儀器系統(tǒng)的限制，只能選取1次響應(yīng)的參與曲線擬合，因此不確定度包含兩個(gè)因素：（1）儀器穩(wěn)定性帶來的不確定度us（C0）；（2）相關(guān)系數(shù)帶來的不確定度u1（r）。儀器穩(wěn)定性的不確定度在磺胺醋酰含量重復(fù)性檢測(cè)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度評(píng)定中進(jìn)行評(píng)估，在這里只評(píng)定相關(guān)系數(shù)帶來的不確定度u1（r）。

u1（r）=（1-r2）/r2

=（1-0.9992）/0.9992=0.002

u1=u1（r）=0.002

樣品測(cè)得的濃度C0=200 μg/kg

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

u1（CX）/CX=0.002/201=0.00001

3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量u2

標(biāo)準(zhǔn)溶液和標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)配制過程如下：用天平準(zhǔn)確稱取0.0043 g含量為99.5%的磺胺醋酰標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于25 mL容量瓶中，定容，配制濃度為171 μg/mL磺胺醋酰標(biāo)準(zhǔn)貯備液。然后用移液槍準(zhǔn)確移取1.462 mL濃度為171 μg/mL的磺胺醋酰標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于25 mL容量瓶中，定容，配制成濃度為10 μg/mL磺胺醋酰標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。用時(shí)先用0～1 000 μL移液槍吸800 μL濃度為10 μg/mL磺胺醋酰標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液到5 mL樣品瓶中，取3 200 μL甲醇定容到4 mL，配制成濃度為2 μg/mL磺胺醋酰標(biāo)準(zhǔn)工作液。再分別準(zhǔn)確移取100、100、200 μL和500 μL濃度為2 μg/mL磺胺醋酰標(biāo)準(zhǔn)工作液于2 mL樣品瓶，吸1 900 μL甲醇定容到2 mL，吸取900 μL、800 μL和500 μL甲醇定容到1 mL，得到濃度為0.1、0.2、0.4、1.0 μg/mL和2.0 μg/mL的磺胺醋酰標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。稀釋時(shí)使用0～1 000 μL移液槍，經(jīng)校準(zhǔn)移液槍100 μL時(shí)誤差為1.2%，500 μL時(shí)誤差為0.3%，1 000 μL時(shí)誤差定度為0.9%。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的不確定度分量u2分為兩部分，外購(gòu)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度u（bw）；和標(biāo)準(zhǔn)工作液配制過程中引入的不確定度u（pz）。

3.1.2.1 外購(gòu)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)帶來的不確定度u（bw）

本實(shí)驗(yàn)使用的外購(gòu)磺胺醋酰標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其純度為（99.5±0.5）%，引用的不確定度假定為矩形分布。

標(biāo)準(zhǔn)不確定度

相對(duì)不確定度u（bw）/99.5%=0.0029

3.1.2.2 配制標(biāo)準(zhǔn)工作液引入的不確定度u（pz）

（1）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱量引入的相對(duì)不確定度

最大量程200g的天平，法定允許誤差為±0.1mg，按均勻分布轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.1/false=0.058mg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.058/4.3=0.013

（2）移液槍引入的相對(duì)不確定度

移取1 462 μL、3 200 μL和1 900 μL時(shí)不確定度以0.9%計(jì)，移取100 μL時(shí)不確定度以1.2%計(jì)，移取200 μL、2個(gè)500 μL、800 μL和900 μL時(shí)不確定度以0.3%計(jì)。按均勻分布，

相對(duì)不確定度為：

（3）容量瓶定容引入的相對(duì)不確定度

將標(biāo)樣溶液移入經(jīng)鑒定為A級(jí)的25 mL容量瓶中，國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程《常用玻璃量器檢定規(guī)程》（JJG196-90）中規(guī)定，該容器的允許誤差為±0.03 mL，按均勻分布評(píng)定；水的膨脹系數(shù)為2.1×10-4，均勻分布評(píng)定：

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

u（V25）/V25=0.0009

配制標(biāo)準(zhǔn)工作液引入的不確定度u（pz）：（0.0132+0.0142+0.00092）1/2=0.019

標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對(duì)不確定度分量u2：

u2=（0.00292+0.0192）1/2=0.019

3.1.3 重復(fù)測(cè)量產(chǎn)生的相對(duì)不確定度u3

樣品溶液重復(fù)測(cè)量2次，測(cè)定結(jié)果及相對(duì)誤差見表1。

表1 重復(fù)測(cè)量結(jié)果

按矩形分布，由表1數(shù)據(jù)計(jì)算重復(fù)測(cè)量產(chǎn)生的相對(duì)不確定度u3：

將上述不確定度分量合成得：u（CX）/CX=（0.000012+0.0192+0.0062）1/2=0.020

3.2 定容體積產(chǎn)生的相對(duì)不確定度u（V）/V

樣品凈化時(shí)，氮吹干后，準(zhǔn)確加入1 mL乙腈-水溶液，超聲30s溶解殘?jiān)?，將溶解液移?0 mL棕色離心管中，加0.5 mL乙腈飽和正己烷，渦旋震蕩2 min，于3 000 r/min離心5 min，棄去正己烷溶液，取底層乙腈-水溶液過0.22 μm微孔濾膜，供高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定。經(jīng)校準(zhǔn)移液槍1 000 μL時(shí)誤差定度為0.9%，500 μL時(shí)誤差定度為0.3%，按均勻分布，相對(duì)不確定度為：

3.3 稱量樣品產(chǎn)生的相對(duì)不確定度u（m）/m

最大量程200g的天平，法定允許誤差為±0.1mg，按均勻分布轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為根據(jù)資料，在50 g以內(nèi)稱樣量變動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07mg，因此標(biāo)準(zhǔn)不確定度為如稱取10g，則相對(duì)不確定度為u（m）/ m=0.09/10000=0.000009。

4 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（X）及擴(kuò)展不確定度U

取包含因子k=2，則擴(kuò)展不確定度為：

U=u（X）×2=8.4μg/kg

5 結(jié)果報(bào)告

液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中磺胺醋酰含量，稱樣量2g時(shí)，測(cè)量結(jié)果為（200±8.4）μg/kg，k=2。

6 結(jié)語

由計(jì)算結(jié)果可以看出，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中磺胺醋酰含量的測(cè)定過程中，有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、檢定合格的玻璃儀器、樣品稱量和測(cè)量重復(fù)性所帶來的不確定度分量均遠(yuǎn)小于由擬合直線求樣品溶液濃度和標(biāo)準(zhǔn)溶液配制所帶來的不確定度分量，因此由擬合直線求樣品溶液濃度和標(biāo)準(zhǔn)溶液配制是該方法不確定度的主要來源。

[1]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.《動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》(GB/T21316-2007)[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2007.

[2]中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).《測(cè)量不確定度的要求》(CNAS-CL07) [S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2011.

鹿文紅（1986-），女，內(nèi)蒙古赤峰人，碩士研究生。研究方向：有機(jī)污染物環(huán)境行為和控制技術(shù)研究、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全控制。