楊銀潔

內(nèi)皮祖細(xì)胞亞群與顱內(nèi)外腦動(dòng)脈粥樣硬化癥嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究

楊銀潔

目的：探討內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）亞群與腦動(dòng)脈粥樣硬化癥嚴(yán)重程度的相關(guān)性。方法：全腦血管造影受試者64例，無(wú)腦動(dòng)脈狹窄26例為對(duì)照組，存在腦動(dòng)脈狹窄38例為觀察組，其中顱外動(dòng)脈狹窄（EAS）18例，顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄（IAS）15例，混合狹窄（Mixed-type）5例。運(yùn)用流式細(xì)胞儀行血管EPCs定量分析，觀察CD45-/dimCD34+CD309+、CD45-/dimCD133+CD309+與CD45-/dimCD34+CD133+CD309+水平，分析其與腦動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重程度的關(guān)系。結(jié)果：對(duì)照組CD34+CD309+，CD133+CD309+與CD34+CD133+CD309+均顯著高于觀察組的EAS、IAS、Mixed-type（P＜0.05）；IAS患者CD45-/dimCD133+CD309+明顯高于EAS、Mixed-type患者（P＜0.05）；EPCs水平與腦動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重程度存在相關(guān)性（P＜0.05）；EPCs水平與EAS、Mixed-type有相關(guān)性（P＜0.05）。結(jié)論：EPCs亞群與EAS、Mixed-type嚴(yán)重程度可能相關(guān)，但與IAS無(wú)相關(guān)性。

內(nèi)皮祖細(xì)胞亞群；腦動(dòng)脈粥樣硬化；相關(guān)性

目前認(rèn)為在動(dòng)脈粥樣硬化病變進(jìn)程中，內(nèi)皮功能障礙致使內(nèi)皮細(xì)胞缺失是早期表現(xiàn)，血管內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs）在維護(hù)血管內(nèi)皮功能及幫助血管內(nèi)皮損傷修復(fù)中發(fā)揮了重要作用[1]。內(nèi)皮祖細(xì)胞能夠歸巢到受損的內(nèi)皮細(xì)胞，并可分化、替換受損及成熟的內(nèi)皮細(xì)胞，對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化[2]。本研究通過(guò)對(duì)EPCs水平與腦動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重程度的相關(guān)性的探討，了解EPCs水平是否能夠作為腦動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重程度的判斷指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年1月至2014年12月我院神經(jīng)內(nèi)科接診的全腦血管造影者64例。其中無(wú)腦動(dòng)脈狹窄26例納入對(duì)照組，男16例，女10例，平均年齡（59.1±8.1）歲，弗雷明漢總體風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分（Framingham，F(xiàn)RS）為（7.1±7.5）分；存在腦動(dòng)脈狹窄38例納入觀察組，男27例，女11例，平均年齡（61.6±10.8）歲，F(xiàn)RS為（12.7±4.1）分；其中顱外動(dòng)脈狹窄（extracranial artery stenosis，EAS）18例，顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄（intracranial atherosclerotic stenosis，IAS）15例，混合狹窄（Mixed-type）5例。2組年齡、性別、FRS評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批同意，受試者均自愿簽訂知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 EPCs定量分析 行DSA造影前，取受試者外周血5 mL，置于含有EDTA的試管內(nèi)，送至到我院流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。取200 μL血液樣品，加入抗體室溫孵育30 min；取2.5 ml 1×裂解緩沖液加入樣品，裂解10 min，F(xiàn)ACS緩沖液連續(xù)清洗2次。取樣品置于流式細(xì)胞儀（貝克曼庫(kù)爾特，CytoFLEX）檢測(cè)，上樣量為107個(gè)細(xì)胞，采用配套軟件完成分析。

EPCs為低表達(dá)CD45，并經(jīng)由VEGFR2（CD309）與CD34或CD133的共表達(dá)對(duì)其進(jìn)行鑒定。為此，在CD45弱表達(dá)的門選擇細(xì)胞群體進(jìn)行了CD133（CD45-/dimCD133+CD309+）或CD34與CD309（CD45-/dimCD34+CD309+）共表達(dá)細(xì)胞數(shù)進(jìn)行測(cè)定。EPCs亞群的水平均表示每107事件細(xì)胞百分比。所有測(cè)量均在不了解臨床數(shù)據(jù)的情況下，由操作者獨(dú)立完成。

1.2.2 腦動(dòng)脈粥樣硬化負(fù)荷評(píng)估 所有患者行DSA造影檢查，動(dòng)脈病變的位置主要分為顱外病變、顱內(nèi)病變或混合病變。根據(jù)北美癥狀性頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)試驗(yàn)（NASCET）計(jì)算顱外動(dòng)脈狹窄；根據(jù)WASID方法來(lái)衡量顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄。根據(jù)腦動(dòng)脈狹窄程度及病變數(shù)量對(duì)腦動(dòng)脈粥樣硬化狹窄負(fù)荷進(jìn)行評(píng)估。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[3]：2分（狹窄100%），1分（狹窄50%～99%），0分（狹窄＜50%）。若出現(xiàn)1個(gè)動(dòng)脈段存在多個(gè)病灶的情況，則以狹窄程度最嚴(yán)重的病灶評(píng)分結(jié)果為準(zhǔn)。同時(shí)對(duì)狹窄≥50%的動(dòng)脈段數(shù)量進(jìn)行計(jì)算。在腦動(dòng)脈粥樣硬化負(fù)荷評(píng)估中由2名醫(yī)師同時(shí)進(jìn)行，評(píng)估結(jié)果一致的情況，經(jīng)討論后確定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 腦動(dòng)脈粥樣硬化不同部位EPCs水平比較

對(duì)照組與觀察組中EAS、IAS、Mixed-type不同部位 EPCs水平比較，其 CD45-/dimCD34+CD309+、CD45-/dimCD133+CD309+與 CD45-/dimCD34+CD133+CD309+均更高（P＜0.05）；IAS與EAS、Mixed-type EPCs水平比較，其CD45-/dimCD133+CD309+明顯更高（P＜0.05）；但CD45-/dimCD34+CD309+、CD45-/dimCD34+CD133+CD309+差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；EAS與Mixedtype EPCs水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)圖1。

2.2 腦動(dòng)脈粥樣硬化與EPCs的關(guān)系

校正混雜因素，行二元邏輯回歸分析，根據(jù)結(jié)果顯示，EPCs水平與腦動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重程度存在相關(guān)性（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 腦動(dòng)脈粥樣硬化與EPCs的關(guān)系

2.3 EPCs水平與不同血管部位動(dòng)脈硬化負(fù)荷的關(guān)系

通過(guò)多因素Logistic回歸模型結(jié)果顯示，EPCs與IAS無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）；EPCs水平與EAS、Mixed-type有相關(guān)性（P＜0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，腦動(dòng)脈粥樣硬化負(fù)荷與EPCs水平之間密切相關(guān)。EPCs是Mixed-type和EAS的危險(xiǎn)因素之一，與IAS之間無(wú)相關(guān)性。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，38例患者中，EAS占47.37%，IAS占39.47%，Mixed-type占13.16%。EAS比例較多，可能的因素：動(dòng)脈硬化危險(xiǎn)因素可能會(huì)對(duì)分布造成較大的影響；生活方式的轉(zhuǎn)變也使得各種風(fēng)險(xiǎn)因素發(fā)生變化[4]；不同的研究所選取的病例特征有所差異[5]。

大量研究報(bào)道證實(shí)[6]，在對(duì)各種傳統(tǒng)心臟危險(xiǎn)因素進(jìn)行有效控制后，EPCs水平仍然是預(yù)測(cè)腦動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立指標(biāo)。最近有報(bào)道證實(shí)[7]，在人體中存在著由EPCs介導(dǎo)的新的內(nèi)源性血管修復(fù)機(jī)制。而EPCs的骨髓主要來(lái)自多能成體干細(xì)胞，主要為3個(gè)不同的亞群，分別為：CD34+133+、CD34+133+CD309+與CD34+CD309+細(xì)胞。筆者推測(cè)EPCs與腦動(dòng)脈硬化之間存在相關(guān)性，可能是因EPCs減少或內(nèi)皮功能發(fā)生紊亂致使硬化出現(xiàn)及發(fā)展，但尚未找到直接的證據(jù)，可以肯定的是當(dāng)EPCs水平下降時(shí)，腦動(dòng)脈粥樣硬化程度逐漸加重。已有觀點(diǎn)證實(shí)EPCs水平上升可有效提高血管受損后內(nèi)皮修復(fù)能力[8]。以往研究認(rèn)為致使血管內(nèi)皮受損后的主要因素是動(dòng)脈硬化。但近期觀點(diǎn)認(rèn)為[9]，內(nèi)膜修復(fù)失衡和受損是引起動(dòng)脈硬化的主要原因，EPCs是機(jī)體內(nèi)膜修復(fù)能力中的代表。根據(jù)本研究結(jié)果來(lái)看，相較于對(duì)照組，EAS、IAS、Mixed-type患者其CD34+133+、CD34+133+CD309+與CD34+CD309+水平均明顯更低（P＜0.05）。但多因素Logistic回歸模型分析結(jié)果顯示，EPCs與IAS無(wú)相關(guān)性（P＞0.05，與EAS、Mixed-type有相關(guān)性（P＜0.05）。因此，在腦動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重程度的衡量中，EPCs水平可能可作為重要的指標(biāo)，但是否可用于IAS的衡量，還需做進(jìn)一步的探討[10]。

Association of Subtypes of Endothelial Progenitor Cells with the Severity of Cerebral Athero?sclerosis

YANG Yin-jie.Department of Neurology,The No.425 Hospital of Sanya,Hainan 572012,China

Objective：To investigate the correlation between subtypes of endothelial progenitor cells(EPCs) and the severity of cerebral atherosclerosis.Methods：A total of 64 patients who had cerebral angiography were enrolled.Out of them,26 patients without cerebral arterial stenosis were treated as controls and compared with 38 cases with cerebral arterial stenosis(the study group).In the study group,there were 18 cases with extracranial arteriostenosis(EAS),15 with intracranial arteriostenosis(IAS)and 5 with mixed-type arteriostenosis(Mixedtype).Quantitative analysis of EPCs was performed by flow cytometry,and the correlation between the levels of CD45-/dimCD34+CD309+,CD45-/dimCD133+CD309+and CD45-/dimCD34+CD133+CD309+and the severity of cerebral atherosclerosis was evaluated.Results：The levels of CD34+CD309+,CD133+CD309+and CD34+CD133+CD309+in the control group were significantly higher than those in the EAS,IAS and Mixed-type groups(P＜0.05).The level of CD45-/dimCD133+CD309+was significantly higher in patients with IAS than those in the EAS and Mixedtype groups(P＜0.05).Binary Logistic regression analysis showed a correlation between the level of EPCs and the severity of cerebral atherosclerosis(P＜0.05).Multi-factorial logistic regression analysis showed a correlation between the level of EPCs and Mixed-type and EAS(P＜0.05).Conclusion：The subtypes of EPCs may be closely associated with the severity of Mixed-type and EAS,but not IAS.

endothelial progenitor cell subtypes；cerebral atherosclerosis；correlation

R741；R741.1

ADOI10.16780/j.cnki.sjssgncj.2016.05.004

三亞市第425醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科海南 三亞 572012

2015-12-03

楊銀潔1650460042@qq. com