趙海寧，謝瑩?dān)L，馬德壽，才旦多杰，劉震，陳鵬，劉燕

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院，西寧810001)

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趨化因子受體4在乳腺癌組織中的表達(dá)變化及意義

趙海寧，謝瑩?dān)L，馬德壽，才旦多杰，劉震，陳鵬，劉燕

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院，西寧810001)

目的 觀察乳腺癌組織中趨化因子受體4(CXCR4)的表達(dá)變化并探討其意義。方法 采用SP法檢測60例乳腺癌組織及癌旁正常乳腺組織中CXCR4表達(dá),分析其表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 乳腺癌組織中CXCR4表達(dá)水平明顯高于癌旁正常乳腺組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；CXCR4表達(dá)與乳腺癌的臨床 TNM 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，與患者年齡、腫瘤大小及病理類型無明顯相關(guān)性(P均>0.05)。結(jié)論 乳腺癌組織中CXCR4表達(dá)明顯升高，檢測CXCR表達(dá)有助于乳腺癌的臨床診斷及預(yù)后判斷。

乳腺腫瘤;趨化因子受體4；基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α受體

乳腺癌是起源于乳腺導(dǎo)管、小葉的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅女性健康。當(dāng)今社會每年全世界約800萬人死于癌癥，其中女性最主要的癌癥包括乳腺癌、卵巢癌、胃癌等。乳腺癌的發(fā)病率呈逐年遞增趨勢[1,2]，且發(fā)病年齡趨于年輕化[3]，目前乳腺癌的治療方式仍主要為手術(shù)切除治療，輔以化療、內(nèi)分泌治療、放療、靶向治療等綜合治療方法。其早期診斷、早期治療及預(yù)后是現(xiàn)今研究的熱點。趨化因子受體4(CXCR4)為趨化因子CXCL12，即基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α的受體。近年來，有研究顯示CXCR4與CXCL12間相互作用，在乳腺癌發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移中起一定作用[4]。因而在乳腺癌早診斷、早治療的同時，能找到可合理預(yù)測乳腺癌浸潤、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的標(biāo)記物，對于判斷乳腺癌的預(yù)后和指導(dǎo)治療有重要意義。2012年12月～2014年12月，我們采用SP法檢測了CXCR4在乳腺癌組織中的表達(dá)，并探討了其與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2012年12月～2014年12月青海大學(xué)附屬醫(yī)院行乳腺癌根治術(shù)的60例女性乳腺癌患者癌組織及癌旁(距腫瘤邊緣5 cm)正常組織新鮮標(biāo)本，患者術(shù)前均未行放化療、內(nèi)分泌治療及其他針對腫瘤的特殊治療，且患者的臨床資料完整，術(shù)后標(biāo)本HE切片后經(jīng)兩位高年資病理醫(yī)師雙盲法確診為乳腺癌及癌旁正常組織。患者均為女性，年齡27～61歲,平均42.1歲，其中≤35歲者16例，>35歲者44例；腫塊直徑>2 cm者42例,其中2～5 cm者38例，>5 cm者4例，≤2 cm者18例;浸潤性導(dǎo)管癌47例、導(dǎo)管內(nèi)癌13例;按WHO(2012)乳腺腫瘤標(biāo)準(zhǔn)對乳腺癌進(jìn)行分期：Ⅰ期4例、Ⅱ期27例、Ⅲ期29例；伴腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例、無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。

1.2 CXCR4表達(dá)檢測 取60例乳腺癌及癌旁組織石蠟包埋，行HE染色，免疫組化法檢測。嚴(yán)格參照試劑盒的說明書進(jìn)行操作，用試劑盒所帶陽性切片作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性。取厚度4 μm的甲醛固定、石蠟包埋組織切片，采用SP(鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法)免疫組化技術(shù)檢測 CXCR4表達(dá)。二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水,3%H2O237 ℃孵育10 min，PBS沖洗3×5 min。抗原修復(fù)：置0.01 mol/L枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)中煮沸(95 ℃，15～20 min)，自然冷卻20 min以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3×5 min。封閉：山羊血清用PBS稀釋，稀釋比例1∶20，封閉1 h。封一抗，室溫1 h或過夜孵育。PBS浸泡3次，每次5 min。加入生物素標(biāo)記二抗工作液室溫孵育15 min，在37 ℃下避光孵育1 h。PBS浸泡3次，每次5 min。DAB顯色，蘇木素復(fù)染。常規(guī)脫水，透明，干燥，用中性樹脂封片。顯微鏡下觀察拍照。陽性結(jié)果為棕褐色產(chǎn)物，主要定位于細(xì)胞核。每張切片選取5個高倍鏡視野，由兩名高年資病理醫(yī)師采用雙盲法判讀。細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。率的比較用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CXCR4在乳腺癌及癌旁組織中表達(dá)水平比較 乳腺癌及癌旁組織中CXCR4表達(dá)陽性分別為35、7例，陽性率分別為58.33%、11.67%，二者比較，P<0.01。

2.2 CXCR4表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 CXCR4表達(dá)與乳腺癌的臨床TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，分期越晚，CXCR4陽性表達(dá)率越高(P<0.01)；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織CXCR4陽性表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。而CXCR4陽性表達(dá)率與患者年齡、腫瘤大小及病理類型無明顯相關(guān)性(P均>0.05)，見表1。

表1 CXCR4表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

近年來，隨著“精準(zhǔn)醫(yī)療”概念的提出，腫瘤的治療不僅要求規(guī)范化、個體化，更是進(jìn)入一個診斷治療一體化的新時代。由于分子生物學(xué)的研究進(jìn)展，乳腺癌分為Luminal(A)、Luminal(B)、基底細(xì)胞型、正常細(xì)胞型、Her-2過表達(dá)型。不同分型的乳腺癌有其規(guī)范化的診療流程[5]，如何提高乳腺癌的預(yù)后成為當(dāng)下研究熱點。乳腺位于體表，其病變能通過查體及臨床輔助檢查手段，如乳腺淺表B超檢查、MRI及乳腺細(xì)針穿刺等，使病變相較其他癌腫更易發(fā)現(xiàn)，這些均為腫瘤標(biāo)志物的基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)。

腫瘤標(biāo)志物為腫瘤組織產(chǎn)生，并可以反映腫瘤細(xì)胞存在于生物體內(nèi)的化學(xué)分子。伴隨醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)發(fā)展，腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用得到了普及。近年來，對于乳腺癌的腫瘤標(biāo)志物研究熱點為21基因、nm23基因、p53基因、CA19-9、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)等，目前已發(fā)現(xiàn)約50多種趨化因子，20多種趨化因子受體，CXCR4的研究逐漸受到重視。

CXCR4為編碼352個氨基酸的受體，屬于GPCRs超家族，參與信號傳導(dǎo)。CXCR4與Gi蛋白鏈接，表達(dá)于部分特定細(xì)胞，如T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等淋巴細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞表面[6～8]。CXCR4的組成部分為胞外N端、7次跨膜域、細(xì)胞外環(huán)路(ECL)、細(xì)胞內(nèi)環(huán)路(ICL)、胞內(nèi)C-末端。

趨化因子受體分為四個家族：CXC受體、C受體、CX3C受體。當(dāng)趨化因子與其相應(yīng)配體結(jié)合后，激活相互偶聯(lián)G蛋白，引起下游信號激活從而傳導(dǎo)。CXCR4是趨化因子CXCL12的受體。CXCL12的cDNA克隆首次是從鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞系中分離得出，而該基因最初命名為SDF-1，故此CXCR12亦被稱為SDF-1[9]。SDF-1溶液立體結(jié)構(gòu)為單倍體，包含68個氨基酸，其中3個反平行β折疊和1個C末端α螺旋。

CXCR4與SDF-1構(gòu)成的生物學(xué)軸，SDF-1通過G蛋白與CXCR4結(jié)合后，激活下游信號通路開放，進(jìn)行信息傳導(dǎo)[10]。已有報道CXCR4表達(dá)于多種腫瘤組織中，如胃癌、乳腺癌、胰腺癌、大腸癌等。是腫瘤組織細(xì)胞中趨化因子受體表達(dá)最普遍的，大多與腫瘤進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及病變預(yù)后有關(guān)[8]。張孟賢等[11]提出CXCR4在大腸癌中的表達(dá)，與患者年齡、性別、腫瘤類型無關(guān)，與腫瘤臨床分期、腫瘤復(fù)發(fā)、無病生存率有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，乳腺癌癌組織中CXCR4表達(dá)水平明顯高于癌旁正常乳腺組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；CXCR4表達(dá)與乳腺癌的臨床TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與患者的年齡、腫瘤大小及病理類型無明顯相關(guān)性，與研究[12]結(jié)果一致。侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的標(biāo)志，能判斷患者預(yù)后、制定合理的治療方案。CXCR4與SDF-1的作用機(jī)制目前較為統(tǒng)一的認(rèn)知是表達(dá)CXCR4的腫瘤細(xì)胞，在SDF-1趨化下，趨化因子的濃度梯度使腫瘤細(xì)胞做定向運動，從而形成腫瘤的轉(zhuǎn)移。

現(xiàn)如今學(xué)者們的研究已指出，腫瘤組織中確實存在CXCR4，CXCR4表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展存在一定作用，但其準(zhǔn)確性、可靠性，具體的分子作用機(jī)制仍不十分清晰。本實驗研究出CXCR4在腫瘤組織中的表達(dá)與腫瘤生物學(xué)特性間的關(guān)系，對于判定腫瘤的預(yù)后十分關(guān)鍵。檢測CXCR4表達(dá)對于乳腺癌的臨床診斷及預(yù)后判斷有一定指導(dǎo)意義。

[1] Kettritz U. Screening of Breast Cancer-an Eternal Discussion Revisited[J]. Breast Care(Basel), 2010,5(2):119-120.

[2] Jiwa M, Halkett G, Deas K, et al. How do specialist breast nurses help breast cancer patients at follow-up[J]. Collegian, 2010,17(3):143-149.

[3] Forouzanfar MH, Forem an KJ, Delossantos Am, et al. Breast and cervical cancer in 187 countries between 1980 and 2010: a systematic analysis[J]. Lancet, 2011,378(9801):1461-1484.

[4] 魏發(fā)強(qiáng).趨化因子受體4在乳腺癌中的表達(dá)及意義[J].包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2016，32(7)：11-12.

[5] 趙毅，鄧鑫.乳腺癌分子分型與治療策略[J].中國實用外科雜志，2015,35(7)：704-708.

[6] Murphy PM, Baggio lini M, Charo IF, et al. International union of pharmacology. XXII. Nomenclature for chemokine receptors[J]. Pharmacol Rev, 2000,52(1):145-176.

[7] 姜和，劉杰，陸榮健.以CXCR4為靶點的抗HIV藥物研究進(jìn)展[J].重慶理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2012,26(2)：40-46,70.

[8] Balkwill F. The significance of cancer cell expression of the chemokine receptor CXCR4[J]. Semin Cancer Biol, 2004,14(3):171-179.

[9] Tashiro K, Tada H, Heilker R, et al. Signal sequence trap: a cloning strategy for secreted proteins and type I membrane proteins[J]. Science, 1993,261(5121):600-603.

[10] Aiuti A, Webb IJ， Bleul C, et al. The chemokine SDF-1 is a chemoattractant for human CD34+hematopoietic progenitor cells and provides a new mechanism to explain the mobilization of CD34+ progenitors to peripheral blood[J]. J Exp Med, 1997,185(1):111-120.

[11] 張孟賢，Kashif Iqbal,于世英.趨化性細(xì)胞因子受體CXCR4在大腸癌中的表達(dá)及臨床意義[J].世界華人消化雜志,2007,15(7):772-775.

[12] 吳唯，錢立元，戴荊,等.乳腺癌組織中趨化因子CXCL12及其受體CXCR4、CXCR7的表達(dá)及臨床意義[J].中國普通外科雜志,2015,24(11):1577-1582.

青海大學(xué)中青年科研基金項目(2014-QYY-5)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.41.027

R737.9

B

1002-266X(2016)41-0079-03

2016-06-10)