張旖驍， 吳 斌

(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院第一泌尿外科，遼寧 沈陽 110004)

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miR-497與腎癌預(yù)后的關(guān)系及其對(duì)腎癌786-0細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲的影響

張旖驍， 吳 斌△

(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院第一泌尿外科，遼寧 沈陽 110004)

目的： 探討微小RNA-497(miR-497)與腎癌預(yù)后的關(guān)系及其對(duì)腎癌786-0細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲的影響。方法:收集2011年～2015年80例腎細(xì)胞癌患者手術(shù)切除的癌組織和癌旁組織并回顧性分析患者隨訪資料。采用實(shí)時(shí)定量PCR 法檢測(cè)癌組織及配對(duì)的癌旁組織中miR-497的表達(dá)。在腎癌細(xì)胞系786-0中轉(zhuǎn)染miR-497模擬物，應(yīng)用MTT法、臺(tái)盼蘭拒染法活細(xì)胞計(jì)數(shù)、流式細(xì)胞術(shù)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲能力的影響。通過生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-497在786-0細(xì)胞中作用的靶基因。Western blotting法檢測(cè)miR-497對(duì)靶基因蛋白表達(dá)影響。結(jié)果:腎癌組織中miR-497的表達(dá)量明顯低于癌旁組織(P<0.05)。786-0中miR-497表達(dá)量明顯低于正常腎上皮細(xì)胞中miR-497表達(dá)量(P<0.05)。隨訪時(shí)間2～48個(gè)月，中位隨訪時(shí)間29個(gè)月，失訪6例，隨訪率92.5%。76例患者3年無復(fù)發(fā)生存率(recurrence-free survival，RFS)為55.2%。高miR-497表達(dá)組和低miR-497表達(dá)組腎癌患者的RFS分別為71.2% 和40.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。過表達(dá)miR-497可顯著抑制786-0細(xì)胞的增殖和侵襲能力，顯著促進(jìn)細(xì)胞凋亡(P<0.05)。過表達(dá)miR-497可顯著抑制786-0細(xì)胞中cyclin D1蛋白的表達(dá)(P<0.05)。結(jié)論:miR-497與腎癌預(yù)后相關(guān)，miR-497能明顯抑制腎癌786-0細(xì)胞的增殖和凋亡，其機(jī)制可能與其靶向抑制cyclin D1有關(guān)。

腎細(xì)胞癌； 微小RNA-497； 細(xì)胞增殖； 預(yù)后

微小RNA(microRNA,miRNA)是存在于動(dòng)植物中的一類高度保守的非編碼小分子RNA[1-2]。它們可以特異性地與靶基因mRNA的3’非翻譯區(qū)發(fā)生互補(bǔ)結(jié)合，影響蛋白的翻譯過程或降解靶基因mRNA，以此對(duì)靶基因產(chǎn)生抑制作用[3-4]。最新研究表明，miR-497表達(dá)下調(diào)與多種腫瘤預(yù)后相關(guān)[5]，有望成為腫瘤基因治療的有力工具。我們檢測(cè)腎癌組織和細(xì)胞系786-0中miR-497的表達(dá)水平，同時(shí)分析其與腎癌患者預(yù)后的關(guān)系，以針對(duì)miR-497的模擬物轉(zhuǎn)染腎癌細(xì)胞系786-0，觀察其對(duì)786-0細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲的影響并探討其可能機(jī)制。

材 料 和 方 法

1 病例收集與實(shí)驗(yàn)材料

選擇我院2011年至2015年手術(shù)切除的原發(fā)性腎細(xì)胞癌標(biāo)本80例，病理檢查證實(shí)為透明細(xì)胞癌41例, 乳頭狀癌39例。其中男58例，女22例, 年齡46～75歲，平均49.7歲。采用美國(guó)腫瘤聯(lián)合委員會(huì)(American Joint Committee on Cancer，AJCC)標(biāo)準(zhǔn)作臨床分期：IV期21例、III期25例、II期22例、I期12例。按照世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織學(xué)分級(jí)：低分化20例、中分化22例、高分化38例。另取癌旁正常腎臟組織(距離癌灶組織邊2～5 cm)作為對(duì)照?；颊咝g(shù)前均未進(jìn)行化療和放療，所有樣本采集均符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)規(guī)定，患者均簽署知情同意書。隨訪時(shí)間2～48個(gè)月，中位隨訪時(shí)間29個(gè)月，失訪6例，隨訪率92.5%。

人腎小管上皮細(xì)胞系HK-2及人腎細(xì)胞癌細(xì)胞系786-0購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心；RPMI-1640培養(yǎng)液購(gòu)自Gibco；胎牛血清購(gòu)自HyClone；TRIzol購(gòu)自Invitrogen；miRNA分析系統(tǒng)購(gòu)自Applied Biosystems；PrimeScript RT-PCR反轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR Premix Ex-Taq 熒光定量PCR試劑盒均購(gòu)自TOYOBO；miR-497模擬物及陰性對(duì)照miRNA購(gòu)自上海吉瑪公司；細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所；兔抗人單抗cyclin D1購(gòu)自Abcam；細(xì)胞裂解液CLB購(gòu)自Cell Signaling Technology。

2 方法

2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)人腎癌組織、癌旁組織以及786-0和HK-2中miR-497的表達(dá) 采用TRIzol試劑提取相應(yīng)的人組織和細(xì)胞中總RNA。采用SYBR Premix ExTaq 熒光定量PCR試劑盒和LightCycler儀器進(jìn)行操作和分析。miR-497的逆轉(zhuǎn)錄引物序列：miR-497 模似物的上游引物為5’- CAGCAGCACACUGUGGUUUGU-3’，下游引物為5’-AAACCACAGUGUGCUGCUGUU-3’；內(nèi)參照U6的上游引物為5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’，下游引物為5’-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3’。反應(yīng)條件為94 ℃ 15 s；94 ℃ 20 s、55 ℃ 10 s、72 ℃ 10 s，40次循環(huán)；72 ℃ 10 min。腎癌組織和細(xì)胞中miR-497的表達(dá)量采用2-ΔΔCt計(jì)算。

2.2 細(xì)胞培養(yǎng)和miR-497模擬物的轉(zhuǎn)染 人腎癌細(xì)胞系786-0和腎小管上皮細(xì)胞系HK-2分別用含10%胎牛血清的RPMI-1640和DMEM/F12培養(yǎng)液培養(yǎng)，均置于37 ℃、5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的786-0細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板，每孔細(xì)胞數(shù)約為2×105個(gè)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)融合度至50%時(shí)，將其分為miR-497模擬物轉(zhuǎn)染(miR-497)組和陰性對(duì)照(control)組，培養(yǎng)液中加入INTERFERin以提高轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染時(shí)每孔miR-497模擬物或者對(duì)照miRNA的終濃度均為20 nmol /L，INTERFERin為4 μL，轉(zhuǎn)染48 h或72 h。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。2.3 MTT法檢測(cè)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞活力的影響 786-0細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-497模擬物或者陰性對(duì)照miRNA 72 h 后，將轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組細(xì)胞按照每孔細(xì)胞數(shù)量2×104個(gè)接種于96 孔培養(yǎng)板中，并各設(shè)置3個(gè)平行孔，3～4 h后，待細(xì)胞貼壁后加入100 μL 1640完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，1 d、2 d、3 d和4 d后分別每孔加入MTT 10 μL (5 g/L)，置37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)2 h后棄上清，每孔加入二甲基亞砜100 μL,酶標(biāo)儀570 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(A)值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.4 臺(tái)盼蘭拒染法活細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞增殖的影響 786-0細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-497模擬物或者陰性對(duì)照miRNA 72 h 后，將轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組細(xì)胞按照每孔細(xì)胞數(shù)量1×105個(gè)接種于6 孔培養(yǎng)板中，并各設(shè)置3個(gè)平行孔，3～4 h后，待細(xì)胞貼壁后加入100 μL RPMI-1640完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，1 d、2 d、3 d和4 d后胰酶消化各孔細(xì)胞并用臺(tái)盼蘭染色計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞凋亡的影響 收集上述各組細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞2次，2 000 r/min離心5 min收集細(xì)胞。在50 μL的binding buffer中加入5 μL Annexin Ⅴ染液，混勻；加入5 μL 7-AAD染液至收集細(xì)胞中，室溫，避光反應(yīng)5～15 min；樣品在30 min內(nèi)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用FlowJo軟件分析細(xì)胞凋亡情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

2.6 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞侵襲能力的影響 消化轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞離心后用含有0.1%牛血清白蛋白的DMEM培養(yǎng)基重懸，按照5×105個(gè)細(xì)胞接種于Transwell上室中(上室鋪60 μL稀釋后的Matrigel)。在下室中，每孔加人500 μL 含有10% 胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基, 并放置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，對(duì)小室下邊細(xì)胞應(yīng)用蘇木素染核，顯微鏡下拍照和計(jì)數(shù)。

2.7 生物信息學(xué)預(yù)測(cè) 利用生物信息學(xué)網(wǎng)站TargetScan (http://www.targetscan．org)進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測(cè)，分析結(jié)果顯示miR-497可能的靶分子為cyclin D1。

2.8 Western blotting法檢測(cè)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞cyclin D1蛋白表達(dá)的影響 786-0細(xì)胞轉(zhuǎn)染72 h后，收集轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組細(xì)胞，用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞。BCA法測(cè)定蛋白濃度，取50 μg 蛋白經(jīng)8% SDS-PAGE 分離后，轉(zhuǎn)至PVDF 膜，室溫封閉1 h，分別加入抗cyclin D1抗體(1∶500)、抗GAPDH抗體(1∶10 000)，4 ℃孵育過夜，洗膜后加過氧化物酶標(biāo)記的 II 抗，室溫孵育1 h，洗膜，最后用ECL法顯影。GeneGnome采集圖片并利用ImageJ軟件進(jìn)行灰度值分析。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 19.0軟件處理數(shù)據(jù)，隨訪數(shù)據(jù)采用Kaplan-Meier法，并繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用配對(duì)或者不配對(duì)的t檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 miR-497在腎癌細(xì)胞系786-0及腎癌組織中的表達(dá)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)腎癌細(xì)胞系786-0和人腎小管上皮細(xì)胞系HK-2的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果顯示以HK-2為對(duì)照，786-0細(xì)胞的miR-497表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。實(shí)時(shí)定量PCR 法檢測(cè)80例腎癌患者的癌組織與癌旁組織中miR-497的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果顯示癌組織中的miR-497表達(dá)明顯低于配對(duì)的癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05),見圖1。

Figure 1. Low expression of miR-497 in human renal cancer tissues and cell line. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsHK-2;#P<0.05vsadjacent tissues.

圖1 miR-497在腎癌細(xì)胞系及腎癌組織中低表達(dá)

2 腎癌組織miR-497的表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性

對(duì)80例腎癌患者進(jìn)行Kaplan-Meier生存曲線分析，結(jié)果顯示術(shù)后3年無復(fù)發(fā)生存率(recurrence-free survival，RFS)為55.2%，高表達(dá)miR-497組患者的3年RFS為71.2%，低表達(dá)miR-497組患者的3年RFS為40.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)，見圖2。

3 過表達(dá)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞增殖的影響

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后miR-497在轉(zhuǎn)染組細(xì)胞和對(duì)照或空白組細(xì)胞表達(dá)量差異，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的miR-497表達(dá)量是對(duì)照或空白組的15倍左右，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.01)。利用MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組的細(xì)胞活力，過表達(dá)miR-497抑制786-0細(xì)胞活力。臺(tái)盼蘭拒染法活細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞增殖的影響，與對(duì)照相比，過表達(dá)miR-497抑制786-0細(xì)胞的生長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)，見圖3。

4 過表達(dá)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞凋亡的影響

應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組細(xì)胞的凋亡進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，與對(duì)照相比，過表達(dá)miR-497的786-0細(xì)胞的凋亡比例明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性 (P<0.05)，見圖4。

Figure 2.Low expression levels of miR-497 were associated with a poor recurrence-free survival rate compared with high expression levels of miR-497.

圖2 低表達(dá)miR-497腎癌患者無復(fù)發(fā)生存率較低

Figure 3. miR-497 inhibited the growth of 786-0 cells. A: 786-0 cells were transfected with miR-497 mimics or negative control miRNA, and then miR-497 expression levels were analyzed by RT-qPCR; B: over-expression of miR-497 induced low viability of the indicated cells detected by MTT assay; C: over-expression of miR-497 inhibited 786-0 cell proliferation at 3 d and 4 d detected by the method of Trypan blue exclusion. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

圖3 過表達(dá)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞增殖的影響

Figure 4.Over-expression of miR-497 affected apoptosis of 786-0 cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05vscontrol group.

圖4 過表達(dá)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞凋亡的影響

5 過表達(dá)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞侵襲能力的影響

應(yīng)用體外Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)果顯示與對(duì)照相比，過表達(dá)miR-497的786-0細(xì)胞的侵襲能力受到顯著抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)，見圖5。

6 過表達(dá)miR-497抑制cyclin D1蛋白的表達(dá)

應(yīng)用Western blotting法檢測(cè)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞cyclin D1蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，過表達(dá)miR-497降低了786-0細(xì)胞中cyclin D1蛋白的表達(dá)水平，見圖6。

Figure 5.Transwell invasion assay of 786-0 cells after over-expression of miR-497. Mean±SD.n=3.*P<0.05vscontrol group.

圖5 過表達(dá)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞侵襲能力的影響

討 論

miRNA能與多種靶基因結(jié)合，具有可預(yù)測(cè)性的特點(diǎn)。越來越多的文獻(xiàn)表明，miRNA可以作為一項(xiàng)工具來調(diào)控與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)的信號(hào)通道和一些關(guān)鍵基因或因子，并將與腫瘤有關(guān)的這一類miRNA稱為oncomir[4-5]。目前，與腎癌相關(guān)的miRNA研究已取得了一些進(jìn)展，但目前明確對(duì)腎癌發(fā)生發(fā)展具有調(diào)控作用的miRNA仍需繼續(xù)發(fā)掘。

Figure 6. The protein levels of cyclin D1 were inversely related with miR-497 levels in the 786-0 cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05vscontrol group.

圖6 過表達(dá)miR-497對(duì)786-0細(xì)胞cyclin D1蛋白表達(dá)的影響

miR-497作為miRNA家族中的一員，參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在胃癌、胰腺癌和乳腺癌中發(fā)現(xiàn)miR-497表達(dá)下調(diào)，并且同腫瘤細(xì)胞增殖呈負(fù)相關(guān)[6-7]。Zhao等[5]通過芯片分析發(fā)現(xiàn)miR-497與腎癌預(yù)后相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，miR-497在腎癌細(xì)胞系786-0中表達(dá)明顯降低，提示miR-497的表達(dá)水平與腎癌的發(fā)生有顯著相關(guān)性。同時(shí)我們分析了腎癌癌組織和癌旁組織中miR-497的相對(duì)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)腎癌癌組織中miR-497表達(dá)明顯下調(diào)。通過對(duì)80例腎癌患者進(jìn)行隨訪，隨訪結(jié)果顯示，高表達(dá)miR-497組患者3年RFS為71.2%，低表達(dá)miR-497組患者3年RFS為40.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，此結(jié)果與之前文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果一致[5]，提示miR-497可能參與調(diào)控腎癌的發(fā)生發(fā)展。

為進(jìn)一步研究 miR-497在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用，我們體外構(gòu)建了過表達(dá)miR-497的786-0細(xì)胞。MTT實(shí)驗(yàn)、臺(tái)盼蘭拒染法活細(xì)胞計(jì)數(shù)、流式細(xì)胞術(shù)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組的比較，轉(zhuǎn)染 miR-497模擬物的786-0細(xì)胞的細(xì)胞增殖和侵襲能力均明顯下降，而細(xì)胞凋亡明顯增加。該結(jié)果進(jìn)一步提示，miR-497在腎癌發(fā)生發(fā)展中可能扮演著抑癌基因的作用。

Cyclin D包括D1、D2和D3 多個(gè)亞類，它們的基因序列及氨基酸序列的同源性較高，功能上也具有一定的重疊性，其中cyclin D1在大多數(shù)組織細(xì)胞內(nèi)占主導(dǎo)地位，因此也相對(duì)重要[8]。該基因位于染色體11q13，長(zhǎng)度為120 kb。Cyclin D1作為原癌基因，在調(diào)節(jié)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期中發(fā)揮重要作用[9]。有研究顯示cyclin D1在膀胱癌中呈高表達(dá), 癌旁組織中呈低表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。上述結(jié)果提示cyclin D1在膀胱癌中的異常表達(dá)可能參與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展過程[10]。我們通過生物信息學(xué)預(yù)測(cè)cyclin D1可能是腎癌細(xì)胞系786-0中miR-497發(fā)揮作用的靶基因。Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-497能顯著降低786-0細(xì)胞中cyclin D1蛋白表達(dá)，這一結(jié)果揭示miR-497可能通過靶向抑制cyclin D1從而參與調(diào)控腎癌細(xì)胞增殖和凋亡。研究表明，一個(gè)miRNA可同時(shí)影響多個(gè)基因的表達(dá)，從而調(diào)控細(xì)胞的生物學(xué)特性。由此，我們推測(cè)miRNA-497可能通過影響其它基因的表達(dá)來調(diào)控腎癌細(xì)胞侵襲能力，其具體機(jī)制還有待于深入研究。

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅 森)

Association of miR-497 and prognosis in patients with renal cell carcinoma and its effects on proliferation, apoptosis and invasion of human renal cell carcinoma cell line 786-0

ZHANG Yi-xiao, WU Bin

(DepartmentofUrologySurgery,ShengjingHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang110004,China.E-mail:wub@sj-hospital.org)

AIM: To investigate the association of microRNA-497 (miR-497) and prognosis in the patients with renal cell carcinoma (RCC) and its effects on the proliferation, apoptosis and invasion of human RCC cell line 786-0. METHODS: Paired RCC and adjacent non-tumor tissue specimens were surgically collected from 80 patients who were diagnosed with primary RCC between 2011 and 2015. The expression of miR-497 in the paired RCC and adjacent non-tumor tissue specimens was detected by real-time PCR. Recurrence-free survival was estimated using the Kaplan-Meier method and compared using the log-rank test. The 786-0 cells were transfected with miR-497 mimics or scramble control miRNA. The proliferation, apoptosis and invasion abilities of the transfected cells were assessed by MTT assay, Trypan blue exclusion, flow cytometry and Transwell chamber experiment. The protein expression of miR-497-targeted gene cyclin D1 in the transfected cells was quantified by Western blotting. RESULTS: miR-497 was down-regulated in the RCC specimens compared with the adjacent tissues. miR-497 was down-regulated in the RCC 786-0 cells compared with the HK-2 cells. By the end of the study, 74 cases were followed up. The follow-up rate was 92.5%. Median follow-up was 29 months (ranging from 2 months to 48 months). The 3-year recurrence-free survival rates of the patients with high and low miR-497 expression were 71.2% and 40.1%, respectively. Over-expression of miR-497 resulted in significant suppression effect on RCC cell proliferation, invasion and the expression of cyclin D1. CONCLUSION: Low expression of miR-497 was correlated with poor prognosis in the RCC patients. miR-497 inhibits proliferation and invasion of RCC 786-0 cells and its mechanism is associated with the down-regulation of cyclin D1.

Renal cell carcinoma; MicroRNA-497; Cell proliferation; Prognosis

1000- 4718(2016)11- 1979- 05

2016- 05- 10

2016- 09- 09

R730.23

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.11.010

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△通訊作者 Tel: 96615-34111; E-mail： wub@sj-hospital.org