連慶安，黃陳翠，王濤*，李婧，單世濤，吉紅

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.安康瀛湖生態(tài)旅游區(qū)漁業(yè)局，陜西 安康 725000；3.陜西省安康金諾水產(chǎn)科技有限公司，陜西 安康 725000）

安康地區(qū)翹嘴鱖胚胎及胚后發(fā)育的觀察

連慶安1，黃陳翠1，王濤1*，李婧2，單世濤3，吉紅1

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.安康瀛湖生態(tài)旅游區(qū)漁業(yè)局，陜西 安康 725000；3.陜西省安康金諾水產(chǎn)科技有限公司，陜西 安康 725000）

2015年5～7月于西北農(nóng)林科技大學(xué)安康水產(chǎn)試驗(yàn)示范站進(jìn)行了翹嘴鱖的人工繁殖，并對其進(jìn)行了胚胎及胚后發(fā)育觀察。通過顯微鏡觀察并拍照，記錄并詳細(xì)描述了翹嘴鱖胚胎及胚后發(fā)育各個(gè)階段的時(shí)序和形態(tài)特征。結(jié)果表明，在安康地區(qū)進(jìn)行人工催產(chǎn)后的翹嘴鱖，在水溫20～25℃、溶氧9～11mg/L、pH值7.8～8.4的條件下經(jīng)過48h后產(chǎn)卵，受精后48h左右出膜，受精后134h仔魚開口攝食。

翹嘴鱖；胚胎；安康

翹嘴鱖（Sinipercachuasti） 又名桂花魚，隸屬鱸形目（Perciformes）鱖亞科（Sinipercinae）鱖屬（Siniperca）。翹嘴鱖是經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的名貴魚類，享有“淡水石斑”之美譽(yù)，具有生長快、肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美、營養(yǎng)價(jià)值高等優(yōu)良性狀[1-4]。每年5月中旬至6月上旬，翹嘴鱖于我國長江流域繁殖[5-6]。安康市地處漢江流域，屬長江水系，氣溫和環(huán)境適合翹嘴鱖生長，養(yǎng)殖生產(chǎn)潛力巨大，但該地區(qū)尚無優(yōu)質(zhì)的苗種供應(yīng)。人工繁殖能大大提高翹嘴鱖的產(chǎn)卵率和存活率，可獲得更優(yōu)質(zhì)的翹嘴鱖以供應(yīng)市場，因此，對翹嘴鱖的人工繁殖技術(shù)進(jìn)行深入研究十分必要。本試驗(yàn)旨在通過對翹嘴鱖胚胎及胚后發(fā)育過程及特點(diǎn)做系統(tǒng)的觀察描述，為規(guī)模化全人工繁殖翹嘴鱖提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 親魚

試驗(yàn)在西北農(nóng)林科技大學(xué)安康水產(chǎn)試驗(yàn)示范站進(jìn)行，孵化設(shè)施為站內(nèi)自建孵化環(huán)道，試驗(yàn)用親魚為示范站培育的翹嘴鱖，無病無傷、體格健壯、性腺成熟度好。雌性親魚4尾，為體質(zhì)量在1.0 kg以上的1齡魚；雄性親魚2尾，為體質(zhì)量在0.75 kg以上的1齡魚。試驗(yàn)用胚胎為翹嘴鱖人工催產(chǎn)后的自然受精卵。

1.2 催產(chǎn)藥物、劑量、注射部位

催產(chǎn)藥物和劑量為促黃體素釋放激素A2號(hào)（LHRH-A2） 10～12μg/kg（寧波第二激素廠生產(chǎn)），絨毛膜促性腺激素（HCG）2000 IU/kg（寧波第二激素廠生產(chǎn)），胸鰭基部一次注射。雄魚劑量減半，注射后記錄效應(yīng)時(shí)間。

1.3 產(chǎn)卵、孵化

親魚經(jīng)人工注射催產(chǎn)藥物后，放入充滿水的孵化環(huán)道中自行產(chǎn)卵，待產(chǎn)完卵后用濾網(wǎng)撈出魚卵轉(zhuǎn)入另一孵化環(huán)道內(nèi)進(jìn)行孵化。

1.4 胚胎發(fā)育觀察

參照《組織胚胎學(xué)》[7]方法對翹嘴鱖的胚胎發(fā)育過程進(jìn)行劃分。胚胎發(fā)育時(shí)期劃分標(biāo)準(zhǔn)為同批次樣品中有50%以上的個(gè)體出現(xiàn)該時(shí)期特征為界限。按預(yù)設(shè)時(shí)間采樣，每次樣本數(shù)為30粒受精卵（或胚胎）。在解剖鏡下對樣本進(jìn)行觀察并拍照。

1.5 出膜后魚苗觀察

鱖魚出膜后用體視顯微鏡觀察拍照。

1.6 器材

一次性使用無菌注射器（5mL），直尺（mm），顯微鏡（Phenix鳳凰，MC-D500U(C)），天平。

1.7 稱重

親魚產(chǎn)卵后，及時(shí)收集吸水膨脹后的受精卵100粒，用紗布濾水后稱重計(jì)算受精卵平均重量。

2 結(jié)果與分析

2.1 產(chǎn)卵

翹嘴鱖經(jīng)過人工注射催產(chǎn)劑后，在水溫20～25℃、溶氧9～11mg/L、pH值7.8～8.4的條件下，48小時(shí)后產(chǎn)卵。

2.2 受精卵特點(diǎn)

翹嘴鱖成熟的卵子為非黏性卵，呈淡黃色且透明。卵為沉性卵，比重略大于水，在水流中呈漂浮性，卵膜透明，具有彈性。卵受精后逐漸吸水膨脹形成卵周隙，直徑為1.5～1.8mm，卵均重2.59mg。卵黃囊內(nèi)具有數(shù)個(gè)大小不一的油球。

2.3 胚胎發(fā)育時(shí)序

胚胎發(fā)育時(shí)序見表1。

圖1 翹嘴鱖魚胚胎和胚后發(fā)育圖

2.3.1 胚盤期。卵受精后30min左右吸水膨脹，原生質(zhì)于卵子的動(dòng)物極集中，逐漸在卵黃表面形成隆起的胚盤。

2.3.2 卵裂期。卵受精后1 h，胚盤裂為2個(gè)大小相似的分裂球，此為2細(xì)胞期。胚胎發(fā)育從此進(jìn)入卵裂期，受精后約1h30min，在胚盤兩細(xì)胞中央又出現(xiàn)一條與第1次分裂溝垂直的分裂溝，將2個(gè)細(xì)胞分成大小相等的4個(gè)分裂球，此為4細(xì)胞期。分裂球呈2行4列，此為8細(xì)胞期。分裂球呈4行4列，此為16細(xì)胞期。分裂球呈4行8列，此為32細(xì)胞期。分裂球越來越小，細(xì)胞團(tuán)隆起呈桑葚狀，此為桑葚期。翹嘴鱖的卵裂僅局限于胚盤部分，卵黃不分裂，分裂溝不達(dá)到植物極卵黃部分，為典型的盤狀卵裂（見圖1）。

2.3.3 囊胚階段。卵受精后5～8h左右，可細(xì)分為早、中、晚3期（見圖1），胚盤卵裂球數(shù)目逐漸增多，卵裂球間的細(xì)胞界限逐漸變的模糊，胚盤則一直處于卵黃上，這一階段為囊胚早期。細(xì)胞界限逐漸消失，細(xì)胞數(shù)目進(jìn)一步增加，原胚盤變矮，胚胎發(fā)育至囊胚中期（即中囊胚期）。囊胚表面細(xì)胞向卵黃部分下包，胚盤漸變?yōu)楣瓲?，接觸到中間卵黃，此為囊胚晚期（即低囊胚期），預(yù)示著原腸作用即將開始。

2.3.4 原腸胚期。卵受精后11～20h左右，也可細(xì)分為早、中、晚3期（見圖1），胚胎細(xì)胞逐步包圍卵黃囊，形成胚環(huán)如“帶帽”，胚層逐漸下包，至1/3，進(jìn)入原腸早期。胚層下包約1/2～2/3時(shí)，胚環(huán)明顯，此為原腸中期。胚層下包3/4，背唇明顯，為原腸晚期。

2.3.5 器官形成階段。卵受精后23h左右，首先肌節(jié)出現(xiàn)，胚體前段膨大、隆起。然后在卵黃前端出現(xiàn)點(diǎn)狀黑色素，且胚體頭部兩側(cè)出現(xiàn)一對腎形突起，即眼的原基。隨著眼基膨大，橢圓形眼囊形成，腦開始分化，卵黃囊上的黑色素分布范圍進(jìn)一步擴(kuò)大，此為眼囊期。卵受精后29～35h之間，先進(jìn)入尾芽期，眼囊逐漸變圓形，胚體伸長，包卵黃囊半周，尾芽形成，尾芽末端開始游離，之后再在眼杯口出現(xiàn)圓形的晶體，在耳囊下方出現(xiàn)鰓板，為長橢圓形隆起，尾與胚體的長軸成銳角，此為晶體出現(xiàn)期。卵受精后35h起，胚體開始表現(xiàn)出微弱的肌肉收縮，肌節(jié)出現(xiàn)20～24對，黑色素細(xì)胞由點(diǎn)狀變成星芒狀布滿整個(gè)卵黃囊，此為肌肉效應(yīng)期。受精后38h，胚體伸長，心臟位于卵黃囊前方、頭下方，呈管狀，心臟開始無節(jié)律性搏動(dòng)，此為心跳期。卵受精后38～47h，尾略向背方舉起，胚胎在卵膜內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)，泄殖腔出現(xiàn)，此為出膜前期（見圖1）。

2.3.6 出膜。卵受精后48h左右，胚體劇烈扭動(dòng)，卵膜逐漸變薄，彈性減弱，仔魚陸續(xù)脫膜孵出，其中多數(shù)仔魚是通過強(qiáng)烈的翻滾、扭動(dòng)，以頭部或身體前半部掙脫卵膜而孵出，也有少數(shù)個(gè)體是以尾部先破膜而出（見圖1）。

2.3.7 出膜仔魚。出膜仔魚身體短小，身體前半部分較后半部分粗大，體長為3.5±0.2mm。肉眼可見頭部附近呈一小黑點(diǎn)，其他部分透明無色，無平游能力。通常側(cè)臥或仰臥水底，間歇性的憑借尾部的急劇擺動(dòng)自上而下的螺旋竄動(dòng)。腹部具有一個(gè)較大的近似圓形的卵黃囊，卵黃囊前端有數(shù)個(gè)大小不一的油球。仔魚頭部呈圓鈍形，略向下彎曲緊匐卵黃囊上，眼大透明。鰭褶膜薄而透明。出膜仔魚卵黃囊前端有密集的黑色素群，在卵黃囊后部亦有少量黑色素出現(xiàn)（見圖1）。隨時(shí)間推移，卵黃囊逐漸被消化吸收，頭部特征愈見明顯，由附于卵黃囊逐漸伸展，所占身體比例增大?？诹阎饾u清晰可見（見圖1），眼由一個(gè)小黑點(diǎn)逐漸變大且占有頭部較大比例（見圖1），脊椎骨逐漸拉伸由原來彎曲附于卵黃囊上變直（見圖1）。

2.3.8 開口。卵受精后134h時(shí)，仔魚開口攝食，多數(shù)仔魚從尾端咬住剛出膜的餌料魚，少數(shù)仔魚咬住餌料魚身體中部或頭部，不松口水中拖行。

3 討論與結(jié)論

3.1 討論

在水溫20～25℃、溶氧9～11mg/L、pH值7.8～8.4的條件下，安康地區(qū)翹嘴鱖經(jīng)人工催產(chǎn)后48h產(chǎn)卵。成熟卵為淡黃色，圓球形，沉性，卵徑1.5～1.8mm，卵均重2.59mg。卵黃囊內(nèi)具有數(shù)個(gè)大小不一的油球。在出膜之后，隨著胚胎的發(fā)育，油球逐漸變小。因此可以推測，翹嘴鱖早期胚胎發(fā)育的主要營養(yǎng)是來自脂類。羅仙池等[8]研究顯示，鱖魚仔魚具有較大的卵黃囊，但卵黃囊自出膜起僅能維持4～5d的日糧，至6日齡卵黃囊消失，此時(shí)需要攝食外源性日糧，如鰱、鳙、草魚等出膜魚苗。翹嘴鱖的受精卵經(jīng)過流水刺激48h后孵化出膜，鄭閩泉[9]等研究顯示，當(dāng)水溫為18.5～20℃時(shí)，孵化時(shí)間為63～80h，而當(dāng)水溫升高到25～28.5℃時(shí)，孵化時(shí)間則只需31～35h，本試驗(yàn)的水溫處于20～25℃，孵化時(shí)間為35～63h，與其研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)鱖魚開口時(shí)間為產(chǎn)卵后134h（即出膜后86h），與羅仙池等人研究的結(jié)果相似。相比于翹嘴鱖的餌料魚鰱、鳙、草魚等，翹嘴鱖出膜所需時(shí)間較長。郭永燦研究[10]表明，在21～25℃條件下，鰱、草魚分別在26.5～41h、34～46h之間完成出膜；鳙[11]在24～28℃條件下只需要22～23h就可以完成孵化出膜，并且隨著溫度的升高出膜時(shí)間縮短。為提高鱖魚苗出膜成活率，就需要有足量適口的餌料魚，而往往初次開口攝食成功與否關(guān)系著后期苗種的培育、健康與生長狀況。所以餌料魚的培育需要在翹嘴鱖出膜后36～48h（本試驗(yàn)中餌料魚催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間為12h左右）進(jìn)行第一次人工催產(chǎn)，之后還需進(jìn)行多次催產(chǎn)以滿足鱖魚攝食需要。

3.2 結(jié)論

翹嘴鱖胚胎發(fā)育期間經(jīng)過受精卵、卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期以及器官形成至孵化階段共六個(gè)時(shí)期，各時(shí)期均有較為顯著的形態(tài)特點(diǎn)。其受精卵的卵裂方式與其它硬骨魚類相似，為盤狀卵裂。本試驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)，翹嘴鱖胚胎的黑色素開始形成后逐漸擴(kuò)散覆蓋整個(gè)卵黃囊，黑色素逐漸變化為星芒狀，后期色素則逐漸聚集出現(xiàn)在眼和頭部，在斑鱖、大眼鱖的胚胎發(fā)育過程中也均有這一現(xiàn)象[12-14]。而草魚、鰱、鳙、斑馬魚[15]的胚胎發(fā)育中則沒有類似的色素分布特征。黑色素能夠吸收特定波長的入射光而使魚體呈黑色，這有利于保護(hù)胚胎，從而提高孵化成活率。觀察還發(fā)現(xiàn)，翹嘴鱖胚胎在較長時(shí)間的孵化過程中已完成了口裂、胸鰭、鰓蓋骨等的分化、形成，而在部分其它魚類中是在胚后發(fā)育過程中完成的，如鰱、鳙[14]、草魚等[10]都是在胚后第2～3d口裂才開啟，且相對較小，因此翹嘴鱖開口攝食的時(shí)候相比于剛出膜的餌料魚，其各攝食器官、游泳器官等功能均較強(qiáng)，這表明翹嘴鱖胚胎發(fā)育過程中已經(jīng)為胚后形成這些結(jié)構(gòu)、開口攝食活體餌料魚的功能奠定了基礎(chǔ)。

[1]TANG Jianzhou，ZHANG Dongyi，CHENG Jia，et al.

Comparative analysis of the aminoacid composition and proteomic patterns of the muscle proteins from two teleosts，Sinipercachuatsi L.andHypophthalmichthysmolitrixL.[J]. Journal ofFisheriesofChina，2007，31（3）：361-368.

[2]ZHANG Jianshe，F(xiàn)U Guihong，CHU Wuying，et al.cDNA cloning and expression analysis of myosin heavy chain gene（MHC）of the Mandarin fish Sniperca kneri[J].AquacultureResearch，2009，40（4）：412-418.

[3]ZHANG Guoqiang，CHU Wuying，HU Songnian，et al. Identificationandanalysisof muscle-relatedproteinisoforms expressedinthewhitemuscleof theMandarinfish（Siniperca chuatsi） [J].Marine Biotechnology，2011，13（2）：151-162.

[4]CHU Wuying，CHENJia，ZHOU Ruixue，etal.Characteriztion and ontogenetic expression analysis of themyosin light chains fromthe fast white muscle of mandarin fish Siniperca chuats[J].Journal of FishBiology，2011，78：1225-1238.

[5]曾國清.鱖魚養(yǎng)殖技術(shù)（三）[J].內(nèi)陸水產(chǎn)，2000，17 （6）：32-33.

[6]錢勇，楊衛(wèi)軍，顧才弟.提高鱖魚產(chǎn)卵率、孵化率和苗種培育成活率的幾條措施[J].水產(chǎn)科技情報(bào)，2008，35 （2）：80-81.

[7]樓允東.組織胚胎學(xué)[M].2版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1994．

[8]羅仙池，徐田祥，吳振興，等.鱖魚的胚胎、仔稚魚發(fā)育觀察[J].水產(chǎn)科技情報(bào)，1992（6）：165-168.

[9]鄭閩泉，丁桂枝，黃涵生，等，鱖魚胚胎發(fā)育的觀察[J].江西水產(chǎn)科技，1994，4（3）：21-24.

[10]郭永燦.水溫對鰱魚、草魚胚胎發(fā)育的影響[J].淡水漁業(yè)，1982（3）：35-40.

[11]吳鴻圖，施有琦.鳙魚(Aristi chthysnobilis)的胚胎發(fā)育[J].哈爾濱師范學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），1964（00）：115-126.

[12]蒲德永，王志堅(jiān)，張耀光，等.大眼鱖胚胎發(fā)育的觀察[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2006，28（4）：651-655.

[13]吳立新，鄒波.碧流河水庫斑鱖胚胎發(fā)育的形態(tài)觀察[J].水產(chǎn)科學(xué)，1993，12（9）：5-8.

[14]王丹，李文寬，閆有利，等.鴨綠江斑鱖胚胎及胚后發(fā)育觀察[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，22（6）：415-420.

[15]易伯魯，余志堂，梁秩燊.長江草、青、鰱、鳙及其他產(chǎn)漂流性魚卵魚類胚胎發(fā)育的比較研究[C]//太平洋西部漁業(yè)研究委員會(huì)中國專家辦公室.太平洋西部漁業(yè)研究委員會(huì)第八次全體會(huì)議論文集.北京：科學(xué)出版社，1966：37-53.

【責(zé)任編校 李林霞】

Embryonic and Post-Embryonic Development ofSiniperca chualsi（Basilewsky）in Ankang

LIANQingan1，HUANG Chencui1，WANG Tao1，LI Jing2，SHANShitao3，JI Hong1
（1.CollegeofAnimal Science，NorthwestA＆F University，Yangling712100，Shaanxi，China；2.FisheriesBureauofYinghulake ecological touristareaofAnkang，Ankang725000，Shaanxi，China；3.Aquatic scienceandTechnologyCoLtdofAnkangJinnuo Shaanxi province，Ankang725000，Shaanxi，China）

Sinipercachualsi（Basilewsky）were bred and observed embryonic and postembryonic by artificial reproduction in Northwest A&F University AnkangaquaculturedemonstrationstationinMay toJuly，2015.Theobservationof embryonic and postembryonic development processes of different stages was systematically carried out by microscopic examination.Fry were bred at a water temperature of 20～25℃，dissolved oxygen of 9～11mg/L，pH 7.8～8.4.Hatching taked place about 48 hours after fertilization.The hatched larvae started tofeed about 134 hours after fertilization.This study advances knowledge of the early stages of seed breeding ofSiniperca chualsi （Basilewsky）inAnkangandprovidesareferencetotheresearchforthesustainableutilizationofSinipercachuatsi（Basilewsky）.

Sinipercachualsi（Basilewsky）；embryonic；Ankang

S961.2

A

1674-0092（2016）06-00100-04

10.16858/j.issn.1674-0092.2016.06.022

2016-05-05

西北農(nóng)林科技大學(xué)安康水產(chǎn)試驗(yàn)示范站建設(shè)項(xiàng)目（Z222020704）

連慶安，男，白族，陜西商洛人，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院碩士研究生，主要從事現(xiàn)代生態(tài)漁業(yè)技術(shù)研究。

*通訊作者：王濤，男，山東煙臺(tái)人，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院講師，主要從事水產(chǎn)健康養(yǎng)殖設(shè)施與技術(shù)研究。E-mail：tony wang79@sina.com