馬運芳，王建華，陳 跡，任潔如（新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥學部，烏魯木齊 830011）

阿苯達唑納米微粉在大鼠體內(nèi)的藥動學研究Δ

馬運芳＊，王建華，陳 跡#，任潔如（新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥學部，烏魯木齊 830011）

目的：研究阿苯達唑（ABZ）納米化后在大鼠體內(nèi)的藥動學變化，為ABZ納米制劑的進一步研發(fā)奠定基礎。方法：將16只大鼠隨機分為ABZ原料藥組（ABZ原料藥混懸液）與ABZ納米微粉組（ABZ納米微粉混懸液），每組8只，ig給藥，劑量為63 mg/kg。各組大鼠于給藥0.5、1、2、4、8、12、24、36、48、72 h后眼眶采血0.2～0.3 ml，以甲苯咪唑為內(nèi)標，采用反相高效液相色譜法（RPHPLC）測定各時間點藥物血藥濃度，并采用3p97藥動學軟件擬合藥動學參數(shù)。結(jié)果：ABZ原料及納米微粉在大鼠體內(nèi)的藥動學符合二室模型，ABZ原料藥組、ABZ納米微粉組大鼠的cmax分別為（3.20±1.41）、（6.11±0.74）μg/ml，tmax分別為（3.42±0.91）、（3.15±0.27）h，t1/2分別為（7.53±1.20）、（6.26±0.85）h，AUC0-72h分別為（49.90±15.50）、（78.36±8.78）μg·h/ml，AUC0-∞分別為（52.30±10.10）、（80.27±8.26）μg·h/ml。與ABZ原料藥組比較，ABZ納米微粉組大鼠的cmax、AUC0-72h、AUC0-∞均顯著升高（P＜0.05）。結(jié)論：ABZ納米化后在一定程度上提高了藥物的吸收速率，增加了藥物的吸收，提高了ABZ的口服生物利用度。

阿苯達唑；納米微粉；藥動學；大鼠

阿苯達唑（ABZ）為世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的抗棘球蚴病（又稱包蟲?。┑氖走x藥[1]，難溶于水和多數(shù)有機溶劑[2]，生物利用度低[3]，這在一定程度上限制了ABZ抗包蟲病的藥效。針對ABZ的難溶性質(zhì)，筆者前期采用納米技術(shù)制得了ABZ納米微粉[4]，使其溶解度顯著提高，較ABZ原料藥有更廣闊的應用前景。但相關(guān)研究同時顯示，當顆粒的大小進入納米量級，其理化性質(zhì)可能發(fā)生較大甚至根本性的改變[5]。這些理化性質(zhì)的改變使得納米藥物呈現(xiàn)出與原料藥及常規(guī)制劑不同的生物藥劑學和藥動學特點[6]。納米藥物晶型的變化、分散團聚性能的改變、溶解度的增減都可能影響納米藥物在體內(nèi)的藥效學和藥動學過程[7]?；诖?，筆者考察了ABZ原料藥與ABZ納米制劑在大鼠體內(nèi)的藥動學參數(shù)，為ABZ納米制劑的進一步研發(fā)應用奠定基礎。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AD高效液相色譜（HPLC）儀，包括LC Solution色譜數(shù)據(jù)工作站、SPD-20A紫外檢測器（日本島津公司）；FD5-6P冷凍干燥機（美國SIM公司）；FJY 1002-UVF基因研究型超純水機（青島富勒姆科技有限公司）；ZEN3690激光粒度分布儀（英國馬爾文公司）

1.2 試藥

ABZ原料藥（廣西桂林南藥股份有限公司，批號：M-060605，純度：＞99%）；ABZ納米微粉（由新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院臨床藥理教研室自制）；ABZ對照品（批號：081M1540V）、阿苯達唑砜（ABZSO2）對照品（批號：SZBB229XV）均購自美國Sigma公司；阿苯達唑亞砜（ABZSO）對照品（批號：5-ABY-166-1）、甲苯咪唑（MBZ）對照品（批號：4-XJZ-40-1）均購自加拿大Toronto Research Chemicals公司；阿苯達唑氨基砜（ABZSO2-NH2）對照品（美國Santa Cruz公司，批號：sc-207278，純度：≥98%）；甲醇、乙腈均為色譜純；水為超純水。

1.3 動物

Wistar大鼠16只，♂♀各半，體質(zhì)量（220±20）g，來自新疆醫(yī)科大學實驗動物中心[許可證號：SCXK（新）2011-0004]。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-SP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-pH 6.0的磷酸鹽溶液（B），梯度洗脫（程序見表1）；流速：1.2 ml/min；柱溫：35℃；檢測波長：295 nm；進樣量：20 μl。

表1 梯度洗脫程序Tab 1 Gradient elution procedure

2.2 血漿樣品的處理

取大鼠血漿300 μl至10 ml離心管中，依次加入質(zhì)量濃度為20.0 μg/ml內(nèi)標MBZ溶液15 μl、pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液1.5 ml與乙酸乙酯溶液2.4 ml，渦旋振蕩2 min，離心（離心半徑為10 cm，10 000 r/min，下同）10 min；于沉淀中再次加入2.0 ml乙酸乙酯溶液，離心10 min后取上清液，合并2次上清液；于50℃水浴下用氮氣吹干，殘渣用甲醇復溶，復溶液離心10 min后取上清液進樣測定。

2.3 溶液的配制

2.3.1 混合對照品貯備液的制備 精密稱取干燥至恒質(zhì)量的ABZ、ABZSO、ABZSO2、ABZSO2-NH2對照品各約2.0 mg，加甲醇溶解、定容至10 ml量瓶中，制成質(zhì)量濃度為200 μg/ml的混合對照品貯備液，4℃保存，備用。

2.3.2 內(nèi)標貯備液的制備 精密稱取干燥至恒質(zhì)量的MBZ對照品2.0 mg，加甲醇溶解、定容至10 ml量瓶中，制成質(zhì)量濃度為200 μg/ml的溶液，再以甲醇稀釋至20 μg/ml作為內(nèi)標貯備液，4℃保存，備用。

2.4 專屬性考察

按“2.2”項下方法處理大鼠加藥血漿、空白血漿和空白血漿+對照品，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。結(jié)果，理論板數(shù)以ABZ、ABZSO、ABZSO2、MBZ計均大于19 000，分離度均大于1.5，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白血漿；B.空白血漿+對照品；C.加藥血漿；1.ABZSO2-NH2；2. ABZSO；3.ABZSO2；4.MBZ；5.ABZFig 1 HPLC chromatogramA.blank plasma；B.blank plasma+substance control；C.sample plasma；1.ABZSO2-NH2；2.ABZSO；3.ABZSO2；4.MBZ；5.ABZ

2.5 線性關(guān)系考察

取空白血漿300 μl，分別精密加入不同體積的混合對照品貯備液，配成質(zhì)量濃度分別為0.039、0.078、0.156、0.312、0.625、l.25、2.5、5、10、20 μg/ml的標準血漿樣品，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。以對照品質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸。結(jié)果，ABZSO、ABZSO2、ABZ的回歸方程分別為y＝0.076 6x+0.033 9（r＝0.999 6）、y＝0.062 4x+ 0.021 0（r＝0.999 7）、y＝0.058 1x+0.053 2（r＝0.999 7）。ABZ、ABZSO、ABZSO2質(zhì)量濃度在0.078～20 μg/ml范圍內(nèi)，峰面積比與濃度線性關(guān)系良好。

2.6 檢測限與定量下限

按2015年版《中國藥典》（二部）[3]中關(guān)于檢測限與定量下限的要求，分別將ABZSO、ABZSO2、ABZ自標準曲線低濃度0.078 μg/ml向下逐級稀釋，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。結(jié)果，ABZSO、ABZSO2、ABZ的檢測限（信噪比為3）依次為5、10、2 μg/ml，定量下限（信噪比為10）依次為15、30、10 μg/ml。

2.7 精密度試驗

按“2.2”項下方法處理樣品，制備低、中、高（低濃度選取定量下限2倍以內(nèi)，高濃度在檢測限80%以內(nèi)，中濃度為二者中間濃度）3種質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣品各5份，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，結(jié)果表明儀器精密度良好，詳見表2。

表2 阿苯達唑及其代謝物的精密度及提取回收率試驗結(jié)果（±s，n＝5）Tab 2 Results of precision and recovery tests of ABZ and its metabolite（s±s，n＝5）

表2 阿苯達唑及其代謝物的精密度及提取回收率試驗結(jié)果（±s，n＝5）Tab 2 Results of precision and recovery tests of ABZ and its metabolite（s±s，n＝5）

對照品ABZSO ABZSO2ABZ質(zhì)量濃度，μg/ml 0.080 1.280 10.200 0.080 1.300 10.300 0.081 1.310 10.300日內(nèi)精密度RSD，% 6.35 5.19 4.42 6.59 5.56 4.33 7.88 6.83 2.50日間精密度RSD，% 9.85 7.88 6.93 12.74 6.09 5.61 10.07 7.31 3.23提取回收率，% 91.11±6.80 88.67±4.85 87.70±2.89 90.65±7.54 87.40±3.49 86.58±2.26 88.91±7.38 88.08±3.46 86.32±2.11 RSD，% 7.46 5.47 3.30 8.32 3.99 2.61 8.30 3.93 2.44

2.8 提取回收率

取大鼠空白血漿，直接加入低、中、高3種質(zhì)量濃度的ABZSO、ABZSO2、ABZ對照品溶液，按“2.2”項下操作，處理后按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算提取回收率，結(jié)果見表2。

2.9 藥動學研究

2.9.1 分組、給藥與采血 將16只Wistar大鼠按體質(zhì)量隨機分為ABZ原料藥組與ABZ納米微粉組，每組8只。給藥時稱取ABZ原料與納米微粉各13.00 mg，分別加生理鹽水溶解并定容至10 ml，配制成混懸液。依據(jù)《藥理學試驗方法與技術(shù)》，依照ABZ人臨床的給藥劑量換算后的大鼠給藥劑量63 mg/kg，ig給藥。各組大鼠于給藥后0.5、1、2、4、8、12、24、36、48、72 h于眼眶采血0.2～0.3 ml，按“2.2”項下方法處理，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定。

2.9.2 兩組大鼠藥-時曲線與藥動學參數(shù) 兩組大鼠藥-時曲線見圖2。結(jié)果表明，兩組大鼠藥動學均符合二室模型。

圖2 兩組大鼠藥-時曲線（±s，n＝8）Fig 2 Blood concentration-time curves of ABZ in rats of 2 group（s±s，n＝8）

采用3p97藥動學軟件對所得數(shù)據(jù)進行分析，選用PEMS Ver 2.1統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學檢驗。主要藥動學參數(shù)測定結(jié)果見表3。

表3 兩組大鼠主要藥動學參數(shù)測定結(jié)果（±s，n＝8）Tab 3 Results of pharmacokinetic parameters of ABZ in rats of 2 group（s±s，n＝8）

表3 兩組大鼠主要藥動學參數(shù)測定結(jié)果（±s，n＝8）Tab 3 Results of pharmacokinetic parameters of ABZ in rats of 2 group（s±s，n＝8）

注：與ABZ原料藥組比較，＊P＜0.05Note：vs.ABZ raw material group，＊P＜0.05

參數(shù)Ka，h－1AUC0-72h，μg·h/ml AUC0-∞，μg·h/ml CL，L/h tmax，h cmax，μg/ml MRT0-72h，h MRT0-∞，h t1/2，h 0.32±0.09 49.90±15.50 52.30±10.10 1.17±0.45 3.42±0.91 3.20±1.41 13.24±0.48 14.39±0.36 7.53±1.20 0.58±0.0＊78.36±8.78＊80.27±8.26＊1.63±1.46 3.15±0.27 6.11±0.74＊12.99±0.45 13.27±0.29 6.26±0.85 ABZ原料藥組ABZ納米微粉組

由表3可知，與ABZ原料藥組比較，ABZ納米微粉組大鼠的Ka、cmax、AUC0-72h、AUC0-∞均顯著升高（P＜0.05）。

3 討論

動物及人體藥動學研究顯示，ABZ口服最主要的代謝產(chǎn)物為ABZSO，其他代謝產(chǎn)物為ABZSO2、ABZSO2-NH2及其他砜衍生物[8]；ABZ極少以原藥形式排出體外，原藥與其他砜衍生物在血中的濃度極低，且ABZSO2-NH2等其他代謝物的血藥濃度變化很大[9]。ABZSO是ABZ最主要的代謝物，體內(nèi)試驗同時證明其也是ABZ發(fā)揮抗棘球蚴病的主要活性成分[10]，因此，本試驗以ABZSO作為藥動學參數(shù)的檢驗評價標準[11]。與ABZ原料藥比較，ABZ納米微粉最主要活性代謝物ABZSO的峰濃度增大，口服生物利用度提高，分析原因可能是納米微粉粒徑減小，比表面積增大，藥物的溶出吸收速率加快，促進小腸上皮的吸收，從而提高了口服生物利用度；同時表面活性劑的使用，降低了表面張力，更好地促進藥物通過胃腸壁的水化層被吸收，增加了生物利用度[12]，符合納米藥物藥動學特點[13]。

同時，與ABZ原料藥組比較，ABZ納米微粉組的大鼠藥動學參數(shù)tmax減小、CL增加，也符合納米藥物藥動學特點（吸收迅速，達峰時間短，清除加快），但兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），分析可能受到軟件擬合偏倚、動物個體差異、試驗誤差等影響，后續(xù)仍需進一步驗證。

研究資料顯示，納米物質(zhì)的藥動學特點與其自身的性質(zhì)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)[14]。其中，粒徑的大小是納米藥物最關(guān)鍵的參數(shù)之一[15-16]。本研究采用的納米ABZ微粉粒徑在370～500 nm之間，試驗結(jié)果僅表明在此粒徑范圍內(nèi)的ABZ微粉具有以上藥動學特點。隨著ABZ納米化研究的進一步進行，其他粒徑和制備方法所得的納米ABZ微粉性質(zhì)還需進一步研究證實。

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Pharmacokinetics Study of Albendazole Nano-powder in Rats

MA Yunfang，WANG Jianhua，CHEN Ji，REN Jieru（Dept.of Pharmacy，the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China）

OBJECTIVE：To study the pharmacokinetic change of albendazole（ABZ）in rats after nanocrystallization，and to lay a foundation for further study of ABZ nano-preparation.METHODS：16 rats were randomly divided into ABZ raw material（ABZ suspension）group and ABZ nano-powder（ABZ nano-powder suspension）group，with 8 rats in each group.They were given relevant medicine 63 mg/kg intragastrically.0.2-0.3 ml blood samples were collected from orbital cavity 0.5，1，2，4，8，12，24，36，48，72 h after medication，respectively.Using mebendazole as internal standard，blood concentration of ABZ were determined by RP-HPLC，and pharmacokinetics parameters were calculated by using 3p97 software.RESULTS：The pharmacokinetics of ABZ raw material and ABZ nano-powder in rats were in line with two-compartment model.The main pharmacokinetic parameters of ABZ raw material group vs.ABZ nano-powder group were as follows as cmax（3.20±1.41）μg/ml vs.（6.11±0.74）μg/ml；tmax（3.42±0.91）h vs.（3.15±0.27）h；AUC0-72h（49.90±15.50）μg·h/ml vs.（78.36±8.78）μg·h/ml；AUC0-∞（52.30±10.10）μg·h/ml vs.（80.27±8.26）μg·h/ml.Compared with ABZ raw material group，cmax，AUC0-72hand AUC0-∞of ABZ nano-powder group were increased significantly（P＜0.05）.CONCLUSIONS：The nanocrystallization of ABZ can enhance the absorbability rate and improve the absorption of drugs to some extent，and it also improves oral bioavailability of ABZ.

Albendazole；Nano-powder；Pharmacokinetics；Rats

R917

A

1001-0408（2016）34-4797-03

2016-09-19

2016-10-01）

（編輯：劉明偉）

新疆包蟲病重點實驗室項目（No.XJDX0202-2013-5）

＊主管藥師，碩士。研究方向：藥物新制劑與新劑型。電話：0991-4361602。E-mail：yunfang0816@163.com

#通信作者：主任藥師，碩士。研究方向：臨床藥理學、藥物新劑型與新制劑。電話：0991-4361602。E-mail：chenji700318@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.34.14