葛 婧,郭永軍,王慶奎,徐大為,孫學(xué)亮,陳成勛,邢克智
( 天津農(nóng)學(xué)院 水產(chǎn)學(xué)院,天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 300384 )
貫眾、當(dāng)歸、黃芪對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響
葛 婧,郭永軍,王慶奎,徐大為,孫學(xué)亮,陳成勛,邢克智
( 天津農(nóng)學(xué)院 水產(chǎn)學(xué)院,天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 300384 )
在水溫(21±1) ℃和鹽度20±1下,將體質(zhì)量(95.45±5.29) g的半滑舌鰨飼養(yǎng)在78 cm×58 cm×46 cm水槽中,投喂按0、5、10、15 g/kg添加貫眾、當(dāng)歸、黃芪的飼料,每箱20尾,每個(gè)水平3個(gè)重復(fù),7 d、14 d和21 d時(shí)尾柄采血,測(cè)定總超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶活性以及總抗氧化能力、丙二醛、總膽固醇和甘油三酯含量。試驗(yàn)結(jié)果表明,14 d時(shí),貫眾劑量為15 g/kg組的半滑舌鰨血液中總超氧化物岐化酶活力顯著高于對(duì)照組(P<0.05),14 d和21 d時(shí),各劑量組丙二醛含量均低于對(duì)照組;14 d時(shí),當(dāng)歸劑量為5 g/kg組的半滑舌鰨血液中總超氧化物岐化酶活力達(dá)到最高值;21 d時(shí),黃芪劑量為10 g/kg組的丙二醛含量值顯著低于對(duì)照組(P<0.05),21 d時(shí),黃芪劑量為5 g/kg組的半滑舌鰨血液中總超氧化物岐化酶活力達(dá)到最高值,不同劑量的黃芪對(duì)過(guò)氧化氫酶活力有顯著影響,但均低于對(duì)照組(P<0.05);7 d時(shí),各組總抗氧化能力達(dá)到最高值。試驗(yàn)表明,單獨(dú)添加貫眾、當(dāng)歸及黃芪均不同程度地影響半滑舌鰨血液的抗氧化指標(biāo)。
貫眾;當(dāng)歸;黃芪;半滑舌鰨;抗氧化指標(biāo)
隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展,水產(chǎn)動(dòng)物病害頻發(fā),抗生素和化學(xué)藥品的使用量不斷增加,導(dǎo)致水域生態(tài)環(huán)境惡化[1]。研究表明,許多疾病的發(fā)生發(fā)展與自由基及其誘導(dǎo)的氧化反應(yīng)有關(guān)[2-4]。中草藥低毒,無(wú)抗藥性,能促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng),增強(qiáng)抗氧化能力[5-6],有效清除自由基對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體的氧化損傷[7]。研究發(fā)現(xiàn),中草藥作為天然植物,具有防御、清除和修繕多余自由基的系統(tǒng),而超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶等抗氧化酶是其重要組成部分[8]。因此尋求能有效清除水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)自由基、減少疾病發(fā)生、促進(jìn)生長(zhǎng)的中草藥飼料添加劑極其重要。
貫眾(Cyrtomiumrhizome)具有清熱解毒,抗菌等作用[9],當(dāng)歸(Angelicasinensis)具有抗氧化和免疫等功能[10],黃芪(Astragalus)具有免疫和增強(qiáng)造血功能[11]。研究發(fā)現(xiàn),飼料中添加貫眾可顯著提高斑點(diǎn)叉尾(Ictaluruspunctatus)肌肉總超氧化物岐化酶活力[12]。飼料中添加當(dāng)歸多糖能有效提高點(diǎn)帶石斑魚(yú)(Epinephelusmalabaricus)非特異性免疫力和抗病力[13]。飼料中添加黃芪可以明顯提高凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)總超氧化物岐化酶活力[14]。
基于此,將貫眾、當(dāng)歸、黃芪按不同劑量分別添加到飼料中喂食半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis),研究其對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響,為其在半滑舌鰨健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。
貫眾、當(dāng)歸及黃芪原藥(天津市藥材公司)按比例稱量,溫水浸泡50 min,砂鍋3次煎煮(加入20倍量水,湯藥微微沸騰前用武火,沸騰后改用文火,一煎40 min,二煎35 min,三煎30 min,連續(xù)煎煮)后濾除藥渣,湯劑全部添加到半滑舌鰨基礎(chǔ)餌料中。基礎(chǔ)餌料以魚(yú)粉、魚(yú)油、食用淀粉等為原料制成(表1)。
貫眾、當(dāng)歸及黃芪分別按0、5、10、15 g/kg的添加量,配制成等氮等能飼料。飼養(yǎng)周期21 d,每個(gè)水平3個(gè)重復(fù),每箱20尾。馴化7 d 后投喂試驗(yàn)飼料,投喂試驗(yàn)飼料的第7 d、14 d和21 d時(shí)取樣。
采樣前停食24 h,用間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽(100 mg/L)麻醉,每箱隨機(jī)取6尾魚(yú),2 mL無(wú)菌注射器尾柄采血,肝素鈉(50 U/mL)抗凝,4 ℃,5000 r/min離心10 min,取上清液,-80 ℃保存?zhèn)溆?。用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定血液中總超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶活性,總抗氧化能力及丙二醛、總膽固醇和甘油三酯的含量。
表1 飼料配方組成和營(yíng)養(yǎng)組成 %
注:a (mg/kg): Ca(H2PO4)2·H2O, 14673.37; ZnSO4·7H2O, 65.97; CuSO4·5H2O, 10.61; FeSO4·7H2O, 109.54; KI, 32.7; CoCl2·6H2O, 0.2; Na2SeO3, 0.33; MnSO4·H2O, 24.61;其他為碳酸鈣粉. b (mg/kg): 維生素B2, 55; 維生素B6, 15; 維生素B1, 4; 維生素K, 3;葉酸, 25; DL-泛酸鈣,60; 煙酸, 220; 維生素B12, 0.27; 肌醇,1000; 葉酸, 13.5; (IU/kg): 維生素A, 2400; 維生素D, 6600; 維生素E, 675; 維生素C,2700; 膽堿,1%.
數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行作單因素方差分析,LSD和Duncan法比較數(shù)據(jù)間差異顯著性,P<0.05為差異顯著。
喂食14 d時(shí),15 g/kg組半滑舌鰨血液中總產(chǎn)氧化物歧化酶活力達(dá)最高值,顯著高于對(duì)照組(P<0.05);21 d時(shí)過(guò)氧化氫酶活力明顯升高,5 g/kg組顯著高于對(duì)照組(P<0.05);投喂14 d時(shí),由0 g/kg組至15 g/kg組總抗氧化能力活力逐漸升高。14 d和21 d時(shí),不同劑量組半滑舌鰨血液中丙二醛含量值均低于對(duì)照組,但7 d時(shí)高于對(duì)照組。7 d時(shí),不同劑量組半滑舌鰨血液中總膽固醇含量均有影響,15 g/kg組高于對(duì)照組,但貫眾對(duì)甘油三酯含量值無(wú)顯著影響(P>0.05)(表2、表3)。試驗(yàn)結(jié)果表明,不同貫眾含量組半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)均有不同程度的影響,但對(duì)各個(gè)指標(biāo)影響結(jié)果不同,未表現(xiàn)出相同趨勢(shì)。
表2 不同劑量貫眾對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)
表3 不同劑量貫眾對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(差異顯著性)
注:同列數(shù)字肩標(biāo)不同字母的平均值間差異顯著(P<0.05).下表同.
喂食14 d時(shí),不同劑量組半滑舌鰨血液中總超氧化物岐化酶活力最高,5 g/kg組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。7 d時(shí),不同劑量組過(guò)氧化氫酶活力均高于對(duì)照組,但在14 d和21 d時(shí),各組過(guò)氧化氫酶活力均低于對(duì)照組。21 d時(shí),5 g/kg組半滑舌鰨血液中總抗氧化活力顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。21 d時(shí),10 g/kg組丙二醛含量值顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。7 d時(shí),不同劑量組總膽固醇值均高于對(duì)照組, 15 g/kg組最高,但在14 d和21 d時(shí)均低于對(duì)照組。不同劑量當(dāng)歸對(duì)甘油三酯值無(wú)顯著影響(P>0.05)(表4、表5)。試驗(yàn)結(jié)果表明,不同劑量組的當(dāng)歸對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)有不同程度的影響,但對(duì)各個(gè)指標(biāo)的影響趨勢(shì)不同。
表4 不同劑量當(dāng)歸對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)
表5 不同劑量當(dāng)歸對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(差異顯著性)
14 d和21 d時(shí),黃芪不同劑量組半滑舌鰨血液中總超氧化物岐化酶活力均高于對(duì)照組,21 d時(shí)5 g/kg組達(dá)最高值。不同劑量的黃芪對(duì)過(guò)氧化氫酶活力有顯著影響(P<0.05),但均低于對(duì)照組。7 d時(shí),各組總抗氧化能力最高。不同劑量組丙二醛含量均低于對(duì)照組,但無(wú)明顯波動(dòng)。不同劑量組黃芪對(duì)總膽固醇含量和甘油三酯含量均無(wú)顯著影響(P>0.05)(表6、表7)。試驗(yàn)結(jié)果表明,不同劑量組的黃芪對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)有不同程度的影響,但對(duì)各個(gè)指標(biāo)的影響趨勢(shì)不同。
表6 不同劑量黃芪對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)
表7 不同劑量黃芪對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)的影響(差異顯著性)
總超氧化物岐化酶能有力清除機(jī)體超氧陰離子自由基,使機(jī)體免受氧化損傷[15-16]。丙二醛是氧自由基產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化物的分解產(chǎn)物,含量變化可間接反映機(jī)體細(xì)胞損傷的程度[17]。過(guò)氧化氫酶是機(jī)體清除氧自由基的關(guān)鍵酶類,可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的防御能力及機(jī)體的免疫能力[18]??偪寡趸芰?,總膽固醇和甘油三酯含量也是反映血液抗氧化能力的重要指標(biāo)。
貫眾能有效提高水產(chǎn)動(dòng)物抗氧化水平,如降低施氏鱘(Acipenserschrenckii)血漿中丙二醛含量[19]。有研究表明,不同規(guī)格大小的褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)飼料中添加金銀花(Lonicerajaponica)、人參(Panaxginseng)和山楂(Crataeguspinnatifida)等中草藥,飼喂28、56 d和83 d后,結(jié)果顯示,血清中總超氧化物岐化酶活力分別提高了9.53%、9.09%和15.14%[20];黃鱔(Monopterusalbus)飼料中添加茯苓(Wolfiporiacocos)、黃芪及五加皮(Lysionotusaeschynanthoides),研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),可顯著增加其血清總超氧化物岐化酶活力[21]。本試驗(yàn)中,不同劑量貫眾對(duì)半滑舌鰨血液總超氧化物岐化酶和過(guò)化氫酶活力、總抗氧化能力、丙二醛和總膽固醇含量均有顯著影響。14 d和21 d時(shí)不同劑量貫眾均能降低半滑舌鰨血液中丙二醛含量,說(shuō)明對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)有不同程度的影響,能有效地防御、清除和改善半滑舌鰨血液中多余自由基,提高其抗氧化能力。
當(dāng)歸作為水產(chǎn)飼料常用添加劑,可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫水平。飼料中添加當(dāng)歸多糖有效提高了點(diǎn)帶石斑魚(yú)的非特異性免疫力[13]。研究表明,異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)飼料中添加200~300 mg/kg植物提取物,魚(yú)體肝臟內(nèi)總超氧化物岐化酶和過(guò)氧化氫酶活性顯著升高,丙二醛含量顯著降低[22];鏡鯉(Cyprinuscarpio)飼料中添加0.5%、2.5%的大蒜(Alliumsativum)莖粉,連續(xù)投喂56 d后,發(fā)現(xiàn)可顯著提高肝臟中總超氧化物歧化酶活性,顯著降低血清中丙二醛含量[23]。本試驗(yàn)中,不同劑量當(dāng)歸顯著影響了半滑舌鰨血液總超氧化物岐化酶和過(guò)氧化氫酶活力,以及總抗氧化能力,總膽固醇含量,但各指標(biāo)值在不同取樣時(shí)間上并無(wú)一致趨勢(shì),其原因可能是半滑舌鰨養(yǎng)殖環(huán)境的不同,或者添加當(dāng)歸提取物以及當(dāng)歸添加方式的不同對(duì)半滑舌鰨血液抗氧化指標(biāo)有不同影響。
黃芪添加到飼料中能提高水產(chǎn)動(dòng)物的非特異免疫酶活性,增強(qiáng)免疫力。研究發(fā)現(xiàn),黃芪熬制成濃縮液制成飼料對(duì)半滑舌鰨非特異免疫活性較黃芩(Scutellariabaicalensis),魚(yú)腥草(Houttuyniacordata)效果好[24]。仿刺參(Apostichopusjaponicus)攝食含黃芪多糖的飼料時(shí),免疫力提高[25]。也有研究表明,銀杏(Ginkgobiloba)葉提取物可使鯽魚(yú)(Carassiusauratus)血清中總超氧化物岐化酶活力顯著升高,丙二醛含量顯著降低[26];鰻鱺(Anguillajaponica)飼料中分別添加0.5、1.0、1.5 g/kg的復(fù)方中草藥,發(fā)現(xiàn)在連續(xù)投喂60 d后,可顯著提高血清總超氧化物岐化酶活力[27]。本試驗(yàn)中,不同劑量黃芪對(duì)半滑舌鰨血液總超氧化物岐化酶和過(guò)氧化氫酶活性及丙二醛含量有顯著影響,說(shuō)明黃芪可有效清除半滑舌鰨血液中自由基含量,但對(duì)于總膽固醇和甘油三酯含量無(wú)顯著影響。其原因可能如上述研究,黃芪提取物或者黃芪添加方式的不同對(duì)其影響不同。
本試驗(yàn)結(jié)果表明,不同劑量的貫眾、當(dāng)歸和黃芪均能不同程度提高半滑舌鰨的血液抗氧化能力,但三者的最適宜添加量以及適宜的投喂時(shí)間需進(jìn)一步研究。
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EffectofCyrtomiumrhizome,Angelicasinensis,andAstragalusonBloodAntioxidantParametersinHalf-smoothTongue-sole(Cynoglossussemilaevis)
GE Jing, GUO Yongjun, WANG Qingkui, XU Dawei, SUN Xueliang, CHEN Chengxun, XING Kezhi
( College of Fisheries, Tianjin Key Laboratory of Aqua-Ecology and Aquaculture,Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China )
A feeding trial was conducted to evaluate effect ofCyrtomiumrhizome,Angelicasinensis, andAstragaluson blood parameters including activities of total superoxide dismutase (T-SOD), total antioxidant capacity (T-AOC), and catalase (CAT), and levels of malonaldehyde (MDA), triglyceride (TG), and total cholesterol (T-CHO) in half-smooth tongue-sole (Cynoglossussemilaevis). Juvenile half-smooth tongue-sole with body weight of (95.45±5.29) g were reared in tanks of each 78 cm×58 cm×46 cm at a rate of 20 fish/tank and fed diets containingC.rhizome,A.sinensis, orAstragalusat different doses of 0 g/kg diet, 5 g/kg diet, 10 g/kg diet, and 15 g/kg diet for 21 days with triplication at water temperature of (21±1) ℃ and a salinity of 20±1. The activities of T-SOD, T-AOC, and CAT, and levels of MDA, TG, and T-CHO were detected in blood of the half-smooth tongue-sole in 7 days, 14 days and 21 days during the rearing period. It was found that the fish fed the diet supplemented withC.rhizomeat a dose of 15 g/kg diet had significantly higher T-SOD activity than the fish fed the control diet in 14 days, and had significantly lower MDA content than the fish fed the control group in 14 and 21 days (P<0.05). The maximal T-SOD activity was observed in the fish fed the diet supplemented withA.sinensisat a dose of 5 g/kg diet in 14 days. There were significantly lower MDA content in the fish fed the diet supplemented withA.sinensisat a rate of 10 g/kg diet than in the fish in the control group in 21 days (P<0.05). Diet supplemented withAstragalusat a dose of 5 g/kg diet resulted in significantly higher T-SOD activity and significantly lower CAT activity in 21 days compared to the control diet (P<0.05). There was significantly higher T-AOC activity in the fish fed the diet containing different doses ofAstragalusin 7 days. The findings indicated thatC.rhizome,A.sinensis,andAstragalussupplementation affected to some extent on blood antioxidant parameters in half-smooth tongue-sole.
Cyrtomiumrhizome;Angelicasinensis;Astragalus;Cynoglossussemilaevis; antioxidant parameter
10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.05.006
S965.399
A
1003-1111(2016)05-0492-06
2016-01-21;
2016-04-25.
國(guó)家星火計(jì)劃項(xiàng)目(2013GA610002);國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31270456);天津市科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(13ZCZDNC00700);天津市高等學(xué)校創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)基金資助項(xiàng)目(TD12-5018).
葛婧(1989—),女,碩士研究生;研究方向:水產(chǎn)動(dòng)物病害防治與免疫學(xué).E-mail:532462825@qq.com.通訊作者:郭永軍(1969—),男,研究員;研究方向:水產(chǎn)動(dòng)物病害防治與免疫學(xué).E-mail:guoyongjun@tjau.edu.cn.