謝兆文，王壽昆，林 旋，陳美珍，陳林柳，林 楓，盧海濱

( 1.福建農(nóng)林大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，福建省動(dòng)物藥物工程實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002；2.福建省連江縣官塢海洋開(kāi)發(fā)有限公司，福建 連江 350511 )

高溫脅迫對(duì)仿刺參抗氧化酶等指標(biāo)的影響

謝兆文1，王壽昆1，林 旋1，陳美珍1，陳林柳1，林 楓2，盧海濱2

( 1.福建農(nóng)林大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，福建省動(dòng)物藥物工程實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002；2.福建省連江縣官塢海洋開(kāi)發(fā)有限公司，福建 連江 350511 )

在15、18、21、24、27、30 ℃水溫下，分別制備仿刺參福建連江群體和遼寧大連群體的體腔和內(nèi)臟團(tuán)提取液，測(cè)定超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶活力及丙二醛含量。試驗(yàn)結(jié)果顯示，仿刺參連江群體內(nèi)臟團(tuán)提取液超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和乳酸脫氫酶活力最大時(shí)的水溫比大連群體分別提高了3～9 ℃；高溫(24、27、30 ℃)脅迫下，連江群體體腔和內(nèi)臟團(tuán)提取液超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、乳酸脫氫酶活力均極顯著高于大連群體 (P<0.01)，其內(nèi)臟團(tuán)提取液谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力亦極顯著高于大連群體(P<0.01)，其體腔液谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力在24 ℃和30 ℃時(shí)極顯著高于大連群體(P<0.01)；仿刺參連江群體和大連群體體腔液堿性磷酸酶活性均在15 ℃時(shí)最大，內(nèi)臟團(tuán)提取液的堿性磷酸酶活性則均在18 ℃時(shí)最大；連江群體仿刺參體腔和內(nèi)臟團(tuán)提取液丙二醛含量在18～30 ℃下均顯著低于大連群體(P<0.05，P<0.01)。研究表明，福建連江夏季高溫馴化的仿刺參子二代群體，在高溫脅迫試驗(yàn)中，其體腔和內(nèi)臟團(tuán)提取液中超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶活力顯著高于大連群體，丙二醛含量則顯著低于大連群體，這些酶耐熱性的提高，有利于仿刺參機(jī)體清除因高溫脅迫產(chǎn)生多余的自由基，減少機(jī)體因高溫脅迫造成的損害。

仿刺參；高溫脅迫；超氧化物歧化酶；過(guò)氧化氫酶；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶；乳酸脫氫酶；堿性磷酸酶；丙二醛

仿刺參(Apostichopusjaponicus)主要分布于西太平洋北部沿岸淺海，北起俄羅斯的符拉迪沃斯托克，經(jīng)日本海、朝鮮半島至我國(guó)渤海和黃海，江蘇連云港外的平山島是該物種在我國(guó)分布的南界[1-2]。

仿刺參作為一種珍貴的海味被列為“八珍”之一，具有高蛋白、低脂肪、低膽固醇的特質(zhì)，是具有較高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與保健功能的食物，深受廣大消費(fèi)者的青睞。隨著人們生活水平的不斷提高與消費(fèi)觀念的轉(zhuǎn)變，對(duì)仿刺參的需求也不斷攀升。

水溫是仿刺參分布和養(yǎng)殖的最重要限制性生態(tài)因子。近年來(lái)，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷增大，海參養(yǎng)殖南移福建，安全度夏成為嚴(yán)重問(wèn)題，高溫脅迫等環(huán)境因子對(duì)仿刺參生理生態(tài)學(xué)的影響日益受到人們的關(guān)注[3]。仿刺參生存的水溫為0～28 ℃[4]，最適生長(zhǎng)溫度為15～18 ℃[5]。過(guò)高的水溫會(huì)造成仿刺參體內(nèi)自由基代謝紊亂與大量累積，從而使機(jī)體細(xì)胞和組織正常的生理機(jī)能及免疫防御能力受到損害，同時(shí)導(dǎo)致體內(nèi)其他生理生化指標(biāo)發(fā)生變化，進(jìn)一步表明機(jī)體的受損程度[7]。溫度過(guò)高或過(guò)低均會(huì)使仿刺參生長(zhǎng)受到抑制，當(dāng)溫度超過(guò)仿刺參耐熱上限時(shí)，仿刺參機(jī)體會(huì)出現(xiàn)復(fù)雜的生理反應(yīng)從而導(dǎo)致熱致死現(xiàn)象[5-8]。同時(shí)溫度也影響仿刺參的攝食量及代謝率。Yang 等[9]研究發(fā)現(xiàn)，仿刺參在最適溫度下攝食量最大，高溫使仿刺參的攝食量顯著下降。An 等[10]的研究表明，溫度高于16 ℃時(shí)，仿刺參食物吸收率、轉(zhuǎn)化率及特定生長(zhǎng)率均會(huì)隨溫度升高而降低。

高溫脅迫引起機(jī)體熱應(yīng)激，體內(nèi)氧化代謝增加，過(guò)氧化物增加，膜系統(tǒng)損傷，甚至死亡?？寡趸赶祫t可以起到清除過(guò)量超氧陰離子自由基，減少高溫脅迫對(duì)機(jī)體造成的損傷。超氧化物歧化酶是一種重要的抗氧化蛋白酶，能夠增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的防御能力和機(jī)體的免疫功能[11]，是生物體防御氧毒性的關(guān)鍵[12]。過(guò)氧化氫酶是無(wú)脊椎動(dòng)物的一種重要抗氧化酶，它可以分解過(guò)氧化氫，防止氧代謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體的損傷，是測(cè)定機(jī)體免疫能力的常用指標(biāo)。Dong 等[13]研究了在不同幅度的日變溫處理下，仿刺參體內(nèi)過(guò)氧化氫酶和超氧化物歧化酶活性變化情況。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶在機(jī)體內(nèi)普遍存在，其作用是催化機(jī)體內(nèi)物質(zhì)代謝或藥物代謝過(guò)程中生成的過(guò)氧化物。乳酸脫氫酶作為與能量代謝相關(guān)的一種酶，它廣泛存在于動(dòng)物各組織細(xì)胞中，其活性變化也直接影響著能量的代謝[14]。堿性磷酸酶是巨噬細(xì)胞溶酶體酶的重要組成部分，在體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝，作為代謝調(diào)控酶在免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[15]。丙二醛是氧自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)生的脂質(zhì)過(guò)氧化物。因此，丙二醛的含量不僅可以反映生物機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的程度，還可以間接反映細(xì)胞損傷程度[16]。劉偉等[17]初步探討了溫度驟降和緩降對(duì)仿刺參體腔液中主要免疫酶的影響，另外也有青蛤(Cyclinasinensis)[18-19]、蝦夷扇貝(Patinopectenyessoensis)[20]、貽貝(Mytilusgalloprovincialis)[21]等水生動(dòng)物體內(nèi)相關(guān)免疫酶活性與溫度之間關(guān)系的研究。

本試驗(yàn)在高溫脅迫下進(jìn)行連江群體與大連群體仿刺參抗氧化酶及其他若干酶活性及丙二醛含量研究，通過(guò)抗氧化酶活力變化規(guī)律和丙二醛含量變化，為仿刺參機(jī)體在高溫脅迫下的調(diào)節(jié)適應(yīng)機(jī)制研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

仿刺參連江群體為福建省連江縣經(jīng)高溫馴化的仿刺參子二代幼參，體質(zhì)量(13.67±1.45) g,大連群體為大連的仿刺參幼參，體質(zhì)量為(13.55±1.82) g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

仿刺參連江群體和大連群體均分為6組；水溫梯度為15、18、21、24、27、30 ℃，設(shè)3個(gè)平行組，其中15 ℃為對(duì)照組。所有仿刺參在相應(yīng)溫度海水中浸置2 h，取出，置于15 ℃海水中恢復(fù)1 h后提取仿刺參體腔液，制備內(nèi)臟團(tuán)提取液樣本。

1.3 樣本制備

1.3.1 樣品采集

將經(jīng)過(guò)溫度脅迫恢復(fù)后的仿刺參取出后，用濾紙吸干仿刺參體表水分，置滅菌玻璃培養(yǎng)皿中，用解剖刀在仿刺參腹部切口1 cm ，立即用無(wú)菌注射器收集仿刺參體腔液(0.5～1 mL)， 然后置于1.5 mL離心管中；用解剖剪沿腹面剪開(kāi)，取其內(nèi)臟團(tuán)置于滅菌Eppendorf管中，迅速將采集樣品放入液氮罐內(nèi)而后轉(zhuǎn)入冰箱-80 ℃保存，待制備樣品。

1.3.2 樣品處理

取仿刺參內(nèi)臟團(tuán)樣品，稱量質(zhì)量，剪碎，冰浴研磨，加入預(yù)冷生理鹽水制備10%組織勻漿，收集內(nèi)臟團(tuán)組織研磨液，4 ℃，2000 r/min離心20 min，取上清液分裝待測(cè)。體腔液樣品則先置于冰箱中4 ℃解凍，然后于4 ℃ 下500 r/min 離心10 min ，取上清液置于 Eppendorf管中，分裝待測(cè)。

1.4 堿性磷酸酶等酶活性及丙二醛含量測(cè)定

以羥胺法測(cè)定總超氧化物歧化酶活性，以可見(jiàn)光比色法測(cè)定堿性磷酸酶和過(guò)氧化氫酶活性，以比色法測(cè)定乳酸脫氫酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性，用硫代巴比妥酸法測(cè)定丙二醛含量。測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

各酶活力按下式計(jì)算：

總超氧化物歧化酶活力(U/mg)=總超氧化物歧化酶抑制率(%)/50%×反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)(0.24 mL/0.02 mL)/待測(cè)樣本蛋白質(zhì)量濃度(mg/mL)

體腔液中過(guò)氧化氫酶活力(U/mL)=(ODCom-ODTem)×[(271×1)/(60s×取樣量)]×樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)

組織中過(guò)氧化氫酶活力(U/mg)=(ODCom-ODTem)×[(271×1)/(60s×取樣量)]/待測(cè)樣本蛋白質(zhì)量濃度(mg/mL)

體腔液中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力(U/L)=( ODCom-ODTem)/(ODSta-ODNot)×標(biāo)準(zhǔn)管濃度×稀釋倍數(shù)×樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)

組織中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力(U/mg)=( ODCom-ODTem)/(ODSta-ODNot)×標(biāo)準(zhǔn)管質(zhì)量濃度×稀釋倍數(shù)/反應(yīng)時(shí)間/(取樣量×樣本蛋白含量)

體腔液中丙二醛含量(nmol/mL)=(ODTem-ODCom)/(ODSta-ODNot)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(10 nmol/mL)×樣本稀釋倍數(shù)

組織中丙二醛含量(nmol/mg)= (ODTem-ODCom)/(ODSta-ODNot)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(10 nmol/mL)/待測(cè)樣本蛋白質(zhì)量濃度

體腔液中乳酸脫氫酶活性(U/L)=(ODTem-ODCom)/( ODSta-ODNot)×標(biāo)準(zhǔn)濃度×樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)×1000

組織中乳酸脫氫酶活性(U/g)=(ODTem-ODCom)/( ODSta-ODNot)×標(biāo)準(zhǔn)濃度/勻漿蛋白濃度

體腔液中堿性磷酸酶活力(U/L)=(ODTem/ODSta)×標(biāo)準(zhǔn)管含酚的量

組織中堿性磷酸酶活力(U/mg)=(ODTem/ODSta)×標(biāo)準(zhǔn)管含酚的量(0.003 mg)/[待測(cè)樣本蛋白質(zhì)量濃度(mg/mL)×取樣量(0.03 mL)]

式中，ODTem為樣本組吸光度，ODCom為對(duì)照組吸光度，ODSta為標(biāo)準(zhǔn)液吸光度,ODNot為空白組吸光度。

1.5 數(shù)據(jù)處理

將計(jì)算得到原始數(shù)據(jù)每個(gè)平行組3個(gè)數(shù)據(jù)求平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并用t檢測(cè)分析相同水溫下連江群體和大連群體各指標(biāo)間的差異顯著性。均用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 高溫脅迫對(duì)仿刺參超氧化物歧化酶活力的影響

仿刺參連江群體和大連群體體腔液超氧化物歧化酶活力分別在24 ℃和15 ℃最大，分別為219.03 U/mg和184.21 U/mg；內(nèi)臟團(tuán)提取液的超氧化物歧化酶活力均在24 ℃最大，分別為328.94 U/mg和289.01 U/mg。在15～30 ℃每個(gè)試驗(yàn)水溫下，仿刺參連江群體體腔液超氧化物歧化酶活力極顯著高于大連群體 (P<0.01)；其內(nèi)臟團(tuán)超氧化物歧化酶活力在15～27 ℃均極顯著高于體腔液(P<0.01)。結(jié)果顯示在正常水溫和高溫脅迫下，連江群體體腔和內(nèi)臟團(tuán)提取液超氧化物歧化酶活力普遍高于大連群體(圖1)。

2.2 高溫脅迫對(duì)仿刺參過(guò)氧化氫酶活力的影響

兩群體體腔液和內(nèi)臟團(tuán)提取液過(guò)氧化氫酶活力均隨水溫呈先升后降趨勢(shì)，高溫脅迫時(shí)過(guò)氧化氫酶活力均比適溫時(shí)極顯著降低(P<0.01)。仿刺參連江群體和大連群體體腔液過(guò)氧化氫酶活力均在21 ℃時(shí)最大，分別達(dá)55.77 U/mL和44.66 U/mL；內(nèi)臟團(tuán)提取液的過(guò)氧化氫酶活力分別在24 ℃和21 ℃時(shí)最大，為85.57 U/mg和47.06 U/mg。仿刺參連江群體內(nèi)臟團(tuán)過(guò)氧化氫酶活力在15～30 ℃時(shí)，體腔液過(guò)氧化氫酶活力在15～27 ℃時(shí)均顯著高于大連群體(P<0.05，P<0.01) (圖2)。

圖1 仿刺參體腔液與內(nèi)臟團(tuán)提取液超氧化物歧化酶活力

圖2 仿刺參體腔液與內(nèi)臟團(tuán)提取液過(guò)氧化氫酶活力

2.3 高溫脅迫對(duì)仿刺參谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性的影響

仿刺參連江群體和大連群體體腔液谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力分別在24 ℃和21 ℃時(shí)最大，活力單位分別為80.31 U/L和52.30 U/L；內(nèi)臟團(tuán)提取液的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力分別在27 ℃和18 ℃時(shí)最大，活力單位分別為37.81 U/mg和18.40 U/mg。連江群體體腔液和內(nèi)臟團(tuán)提取液谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力最大時(shí)的溫度均高于大連群體。仿刺參連江群體體腔液谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力在24 ℃和30 ℃時(shí)、內(nèi)臟團(tuán)提取液谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力在21～30 ℃時(shí)，均極顯著高于大連群體(P<0.01)。在高溫脅迫時(shí)，仿刺參連江群體內(nèi)臟團(tuán)提取液的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力均顯著高于大連群體(圖3)。

圖3 仿刺參體腔液與內(nèi)臟團(tuán)提取液谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力

2.4 高溫脅迫對(duì)仿刺參丙二醛含量的影響

仿刺參連江群體和大連群體體腔液丙二醛含量均在21 ℃時(shí)最大，分別為27.46 nmol/mL和39.90 nmol/mL；內(nèi)臟團(tuán)提取液丙二醛含量分別在15 ℃和27 ℃時(shí)最大，為44.49 nmol/mL和48.92 nmol/mL。在15 ℃時(shí)仿刺參連江群體與大連群體體腔液丙二醛含量差異不顯著(P>0.05)；在18～30 ℃時(shí)，仿刺參連江群體體腔液和內(nèi)臟團(tuán)提取液丙二醛含量均顯著低于大連群體(P<0.01，P<0.05)，在高溫脅迫時(shí)，仿刺參連江群體的體腔液和內(nèi)臟團(tuán)提取液中丙二醛含量降低幅度更為顯著(圖4)。

圖4 仿刺參體腔液與內(nèi)臟團(tuán)提取液丙二醛含量

2.5 高溫脅迫對(duì)仿刺參乳酸脫氫酶活性的影響

仿刺參連江群體和大連群體體腔液乳酸脫氫酶活性分別在27 ℃和24 ℃時(shí)最大，為58.72 U/L和42.81 U/L；內(nèi)臟團(tuán)提取液的乳酸脫氫酶活性分別在24 ℃和18 ℃時(shí)最大，為0.0415 U/g和0.0424 U/g。在15、18、24、27 ℃時(shí)，仿刺參連江群體體腔液乳酸脫氫酶活性顯著高于大連群體(P<0.05，P<0.01)；連江群體內(nèi)臟團(tuán)提取液乳酸脫氫酶活性在24、27、30 ℃高溫脅迫時(shí)，極顯著高于大連群體(P<0.01)；在15、18、21 ℃較低溫度時(shí)，則極顯著低于大連群體(P<0.01)(圖5)。

2.6 高溫脅迫對(duì)仿刺參堿性磷酸酶活力的影響

仿刺參連江和大連群體的體腔和內(nèi)臟團(tuán)提取液堿性磷酸酶活力在試驗(yàn)水溫范圍內(nèi)，水溫較低時(shí)堿性磷酸酶活力較高。仿刺參連江群體和大連群體的體腔液堿性磷酸酶活力均在15 ℃時(shí)最大，分別為21.06 U/L和13.49 U/L；內(nèi)臟團(tuán)提取液的堿性磷酸酶活力均在18 ℃時(shí)最大，分別為4.92 U/mg和4.14 U/mg。連江群體體腔液堿性磷酸酶活力在15、18 ℃和24 ℃下顯著高于大連群體(P<0.05、P<0.01)，在21 ℃和27 ℃時(shí)，與大連群體差異不顯著(P>0.05) ，在30 ℃下則顯著低于大連群體(P<0.05)；連江群體內(nèi)臟團(tuán)提取液堿性磷酸酶活力在15、18 ℃和30 ℃下顯著高于大連群體(P<0.05、P<0.01)，在21、24 ℃和27 ℃時(shí)與大連群體差異不顯著(P>0.05)。

圖5 仿刺參體腔液與內(nèi)臟團(tuán)提取液乳酸脫氫酶活性

圖6 仿刺參體腔液與內(nèi)臟團(tuán)提取液堿性磷酸酶活力

3 討 論

在仿刺參抗氧化系統(tǒng)中，超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶是最早和最為重要的防御機(jī)制[21]。超氧化物歧化酶是第一個(gè)對(duì)抗氧自由基的抗氧化酶，參與清除體內(nèi)超氧陰離子自由基，可以預(yù)防機(jī)體損傷和衰老；過(guò)氧化氫酶是生物體內(nèi)過(guò)氧化物酶體系的標(biāo)志酶，能夠催化過(guò)氧化氫分解，防止膜脂過(guò)氧化[22]。本研究結(jié)果顯示，兩群體仿刺參的內(nèi)臟團(tuán)提取液中超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶活力均隨水溫的升高先升后降，高溫脅迫時(shí)超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶活力均顯著降低，這與Dong 等[13,23]的研究結(jié)果一致。說(shuō)明在升溫過(guò)程中，仿刺參能夠通過(guò)提高超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶活力來(lái)清除多余的活性氧，與其他無(wú)脊椎動(dòng)物中超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶活力隨水溫升高變化趨勢(shì)具有一致性[22]。高溫脅迫時(shí)，連江群體體腔液和內(nèi)臟團(tuán)提取液中超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶活力顯著高于大連群體，在正常水溫下，也多有此現(xiàn)象；連江群體體腔液的超氧化物歧化酶活力最大時(shí)的水溫比大連群體高9 ℃，其內(nèi)臟團(tuán)提取液過(guò)氧化氫酶活力最大時(shí)的水溫比大連群體高3 ℃。說(shuō)明仿刺參在福建連江經(jīng)高溫馴化的子二代群體超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶活力和耐熱性比北方的大連群體有顯著提高。

谷胱甘肽過(guò)氧化物酶其功能為與超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶共同在細(xì)胞內(nèi)對(duì)超氧離子及H2O2起還原作用[24]。它能催化谷胱甘肽轉(zhuǎn)化為氧化型谷胱甘肽，使有毒的過(guò)氧化物還原成無(wú)毒的羥基化合物，從而保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)及功能不受過(guò)氧化物的干擾及損害。因此谷胱甘肽過(guò)氧化物酶可作為細(xì)胞內(nèi)抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用的酶保護(hù)系統(tǒng)的主要成分之一。在試驗(yàn)中，仿刺參連江群體的體腔液和內(nèi)臟團(tuán)提取液中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力的最大值水溫比大連群體分別高3 ℃和9 ℃；其內(nèi)臟團(tuán)提取液谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力不論在高溫脅迫還是適溫下均顯著高于大連群體；說(shuō)明仿刺參經(jīng)過(guò)高溫馴化的連江群體該酶活力指標(biāo)的對(duì)高溫耐受性亦高于大連群體。

丙二醛是細(xì)胞膜脂過(guò)氧化反應(yīng)的重要產(chǎn)物，其含量體現(xiàn)了細(xì)胞膜被破壞的程度[16]。試驗(yàn)結(jié)果顯示，連江群體內(nèi)臟團(tuán)提取液丙二醛含量約在15 ℃時(shí)達(dá)到最大值，高溫脅迫時(shí)顯著降低；大連群體約在27 ℃時(shí)達(dá)到最大值，與劉偉等[17]研究結(jié)果相似。連江群體體腔液和內(nèi)臟團(tuán)提取液丙二醛含量在18～30 ℃時(shí)，均顯著低于大連群體，表明在升溫過(guò)程中連江群體仿刺參的機(jī)體細(xì)胞受損程度小于大連群體仿刺參。

乳酸脫氫酶是一種糖酵解酶，能催化乳酸和丙酮相互轉(zhuǎn)化生成乳酸[25]。乳酸脫氫酶作為與能量代謝相關(guān)的一種酶，它廣泛存在于動(dòng)物各組織細(xì)胞中，其活性變化也直接影響著能量的代謝[26]。在本試驗(yàn)中，仿刺參連江群體體腔液與內(nèi)臟團(tuán)提取液中乳酸脫氫酶活性最大值分別出現(xiàn)在27 ℃和24 ℃，大連仿刺參群體分別出現(xiàn)在24 ℃和18 ℃；連江群體體腔液和內(nèi)臟團(tuán)提取液的乳酸脫氫酶活性最大時(shí)的水溫比大連群體高3 ℃和6 ℃，高溫脅迫下連江群體體腔液和內(nèi)臟團(tuán)提取液乳酸脫氫酶活性顯著高于大連群體。說(shuō)明連江群體在這一生理指標(biāo)的耐熱性優(yōu)于大連群體。

堿性磷酸酶作為動(dòng)物代謝過(guò)程中重要的調(diào)控酶，廣泛分布于人體及動(dòng)物組織內(nèi)，對(duì)動(dòng)物的生存具有重要的意義[27-29]。試驗(yàn)顯示，仿刺參連江和大連群體體腔液與內(nèi)臟團(tuán)提取液在水溫較低時(shí)，堿性磷酸酶活力較高，隨著水溫升高，堿性磷酸酶活力快速下降。說(shuō)明在仿刺參上該酶是適應(yīng)較低水溫的，高溫脅迫則顯著降低堿性磷酸酶活力。高溫脅迫會(huì)影響機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)，降低仿刺參水解系統(tǒng)的活性，降低仿刺參的機(jī)體代謝水平，使仿刺參進(jìn)入夏眠狀態(tài)，減少高溫脅迫對(duì)機(jī)體的損害。在30 ℃時(shí)，仿刺參連江群體體腔液及內(nèi)臟團(tuán)提取液中堿性磷酸酶活力顯著低于大連群體(P<0.05)，表明連江群體調(diào)節(jié)能力強(qiáng)于大連群體。

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EffectsofHighTemperatureStressonAntioxidantEnzymeActivitiesinSeaCucumberApostichopusjaponicus

XIE Zhaowen1, WANG Shoukun1,LIN Xuan1,CHEN Meizhen1,CHEN Linliu1,LIN Feng2,LU Haibin2

( 1. Fujian Provincial Animal Medicine Engineering Laboratory, College of Animal Science, Fujian Agriculture and Forestry University，F(xiàn)uzhou 350002,China; 2. Fujian Provincial Lianjiang Guanwu Ocean Development Limited Company, Lianjiang 350511,China )

The activities of superoxide dismutase(SOD), catalase(CAT), glutathione peroxidase(GSH-PX), lactate dehydrogenase(LDH), and alkaline phosphatase(AKP) and the content of malondialdehyde(MDA) in the coelomic fluid and extracting fluid of visceral mass were determined from Lianjiang and Dalian populations of sea cucumber,Apostichopusjaponicus, exposed to different sea water temperature(15, 18, 21, 24, 27 ℃ and 30 ℃). The results showed that the maximal activities of SOD,CAT,GSH-PX and LDH of extracting fluid of visceral mass were observde at 3—9 ℃ higher in Lianjiang population than in Daliang population; under high temperature (24, 27, 30 ℃) stress, the activities of SOD,CAT and LDH of coelomic fluid and extracting fluid of visceral mass population were very significantly higher in Lianjiang than in Daliang population(P<0.01). The activity of GSH-PX of extracting fluid of visceral mass was very significantly higher in Lianjiang population than in Daliang population(P<0.01), and under 24 ℃ and 30 ℃,the activities of GSH-PX of coelomic fluid population were also significantly higher in Lianjiang population than Daliang population(P<0.01); the temperature of highest activity of AKP of coelomic fluid and extracting fluid of visceral mass from the two populations were all at 15 ℃ and 18 ℃; the content of MDA of the coelomic fluid and extracting fluid of visceral mass was significantly lower in Lianjiang population than in Dalian population at 18—30 ℃(P<0.05，P<0.01). The findings of high temperature stress indicated that activities of SOD, CAT,GSH-PX and LDH of coelomic fluid and extracting fluid of visceral mass from the second generation of Lianjiang population of sea cucumber exposed to high temperature during summer in Fujian province，southeast China were significantly higher than Daliang population of sea cucumber; contents of MDA were lower significantly from Lianjiang population than Daliang population of sea cucumber. The increasing enzymes thermostability of the sea cucumber could be favorable to clean out excessive free radicals in the body under high temperature stress, and to protect the organism from high temperature stress damage.

Apostichopusjaponicus; heat stress; superoxide dismutase; catalase; glutathione peroxidase; lactate dehydrogenase; alkaline phosphatase; malonaldehyde

S968.9

A

1003-1111(2016)04-0327-07

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.04.003

2015-08-25；

2015-12-10.

福建省科技重大專項(xiàng)項(xiàng)目(2011NZ0001-1).

謝兆文(1990-)，男，碩士研究生；研究方向：魚(yú)類疾病與保健. E-mail：xiezhaowen@outlook.com. 通訊作者：王壽昆(1956-)，男，教授；研究方向：水產(chǎn)養(yǎng)殖與動(dòng)物寄生蟲(chóng)學(xué). E-mail：wsk138@163.com.