鄧龍君，甘維熊，曾如奎，張宏偉

( 雅礱江流域水電開發(fā)有限公司，四川 成都 610051 )

雅礱江鱸鯉的人工繁殖、胚胎及卵黃囊仔魚發(fā)育

鄧龍君，甘維熊，曾如奎，張宏偉

( 雅礱江流域水電開發(fā)有限公司，四川 成都 610051 )

采用不同配伍的外源激素對培育成熟的野生鱸鯉進行人工催產(chǎn)，并對其胚胎和1-10日齡卵黃囊仔魚的發(fā)育進程進行詳細(xì)的觀察和描述。注射促黃體素釋放激素類似物A2、地歐酮和絨毛膜促性腺激素的鱸鯉親魚組的催產(chǎn)效果明顯好于注射鯉魚腦垂體和促黃體素釋放激素類似物A2的親魚組，效應(yīng)時間為58 h，平均受精率和平均孵化率分別為87.33%和90.75%。在水溫(16±2) ℃條件下，鱸鯉胚胎發(fā)育歷時117.83 h，所需積溫為1855.33 ℃·h，出膜10 d后仔魚開始平游。鱸鯉胚胎發(fā)育分為受精卵、卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期、器官形成期和出膜期7個階段，共26個時期。分析發(fā)現(xiàn)，在人工催產(chǎn)配伍激素中添加適量的絨毛膜促性腺激素，有助于鱸鯉親本順利排卵；鱸鯉卵黃囊仔魚在孵化出膜后的前5 d處于內(nèi)營養(yǎng)階段，第6 d起轉(zhuǎn)入混合營養(yǎng)階段，為仔魚培育的第一危險時期。

鱸鯉；人工繁殖；胚胎發(fā)育；卵黃囊仔魚發(fā)育

鱸鯉(Percocyprispingi)主要分布于岷江、青衣江、雅礱江、金沙江和烏江等水系[1]，是四川省、重慶市重點保護魚類之一。鱸鯉也是長江上游特有的兇猛肉食性魚類，具有較高的生態(tài)價值及經(jīng)濟價值。隨著西南水利水電工程的發(fā)展，鱸鯉成為大渡河、雅礱江、金沙江上多個梯級水電站的增殖放流保護魚類之一，其發(fā)展前景良好。國內(nèi)學(xué)者對其開展了一系列研究[2-14]，然而卻未見詳細(xì)描述野生鱸鯉的馴化繁育、胚胎及卵黃囊仔魚發(fā)育完整進程的報道。筆者對在流水池培育成熟的野生鱸鯉進行人工催產(chǎn)、胚胎及1-10日齡卵黃囊仔魚的發(fā)育特征進行詳細(xì)的觀察和描述，旨在為其增殖放流保護和產(chǎn)業(yè)規(guī)?；l(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 親魚收集與馴化

2012年11月，錦屏一級水電站下閘蓄水期間通過網(wǎng)捕收集雅礱江錦屏段的野生鱸鯉成魚，運回錦屏·官地水電站魚類增殖放流站專池暫養(yǎng)，調(diào)節(jié)水溫后浸泡消毒，按體質(zhì)量的10%投喂全長5～10 cm的鮮活鯉魚(Cyprinuscarpio)、鯽魚(Carassiusauratus)，定期觀察并重復(fù)消毒處理。暫養(yǎng)適應(yīng)人工養(yǎng)殖條件后，轉(zhuǎn)入仿生態(tài)環(huán)道式親魚池中流水養(yǎng)殖，繼續(xù)投喂鮮活餌料魚，定期補充。2015年3-4月，發(fā)現(xiàn)鱸鯉雌雄親魚性腺發(fā)育良好，可進行人工催產(chǎn)，雌魚體質(zhì)量2～4 kg，雄魚體質(zhì)量1.5～3 kg。

1.2 親魚催產(chǎn)、人工授精與孵化

鱸鯉親魚分為兩組，第一組注射鯉魚腦垂體(3 mg/kg)和促黃體素釋放激素類似物A2(12 μg/kg)，第二組注射促黃體素釋放激素類似物A2(16 μg/kg)、地歐酮(7 mg/kg)和絨毛膜促性腺激素(1400 IU/kg)。雌魚采取胸鰭基部一次性注射，注射后放入相同大小的不同催產(chǎn)池中流水刺激促產(chǎn)。雄魚發(fā)育良好，不注射。采用干法人工授精，受精卵置于尤先科孵化器中孵化。養(yǎng)殖用水通過循環(huán)水處理系統(tǒng)進行處理，并經(jīng)恒溫控制系統(tǒng)調(diào)節(jié)，水溫始終為(16±2) ℃。

1.3 胚胎發(fā)育和1-10日齡卵黃囊仔魚發(fā)育的觀察

利用顯微鏡、Olympus SZ61解剖鏡對胚胎發(fā)育和1-10日齡卵黃囊仔魚的發(fā)育過程進行連續(xù)活體觀察，每次隨機取受精卵50粒以上、仔魚10尾以上，用Sony數(shù)碼相機、Olympus拍照系統(tǒng)拍攝記錄各階段的形態(tài)特征及發(fā)育時間，發(fā)育時間以50%以上進入該發(fā)育階段為準(zhǔn)。早期的受精卵每隔30 min取樣一次，1 d后每隔1 h取樣一次。受精卵卵徑和仔魚全長均使用數(shù)顯游標(biāo)卡尺測量，獲得的照片使用Adobe Photoshop CS4軟件處理。

2 結(jié) 果

2.1 馴化培育與繁殖孵化

野生鱸鯉經(jīng)馴化后可適應(yīng)人工養(yǎng)殖條件并可正常進入繁殖期。繁殖期鱸鯉雌雄親魚性征區(qū)別不明顯，主要以泄殖孔的形態(tài)特征區(qū)分。成熟雌魚泄殖孔稍大、紅潤突出，腹部膨大而柔軟，輕壓泄殖孔前部有卵粒流出；成熟雄魚無明顯性征，未見珠星，個別個體手感微微粗糙，輕壓腹部有白色精液流出且入水即散。

鱸鯉人工繁殖情況見表1。第二組6尾鱸鯉雌魚一次性全產(chǎn)，而第一組4尾鱸鯉雌魚中2尾一次性全產(chǎn)，另2尾則斷斷續(xù)續(xù)產(chǎn)卵，且效應(yīng)時間均較第二組的58 h長18 h以上。為減少人工擠卵對鱸鯉雌魚的損傷，對非一次產(chǎn)卵的雌魚擠卵2次后轉(zhuǎn)入產(chǎn)后護理池護理。

2.2 胚胎發(fā)育觀察

鱸鯉的卵為沉性卵，外觀呈圓球形，淺黃色，顏色較同一江段生活的短須裂腹魚(Schizothoraxwangchiachii)卵的金黃色淺，卵黃豐富，微黏性，卵徑2.09～2.30 mm，平均卵徑2.20 mm。受精后卵膜開始吸水膨脹，卵徑2.92～3.37 mm，平均卵徑3.19 mm。在水溫(16±2) ℃下，鱸鯉胚胎發(fā)育從受精卵到出膜歷時117.83 h，所需積溫為1855.33 ℃·h。

根據(jù)鱸鯉胚胎發(fā)育的各階段變化和特征，分為受精卵、卵裂、囊胚、原腸胚、神經(jīng)胚、器官形成和出膜7個階段，共26個時期，每個發(fā)育時期的特征和所需時間見表2。

表1 不同配伍激素誘導(dǎo)鱸鯉產(chǎn)卵的效果

表2 鱸鯉胚胎發(fā)育進程

2.3 1-10日齡卵黃囊仔魚的發(fā)育

1-10日齡卵黃囊仔魚各日齡的發(fā)育特征見表3。

表3 1-10日齡卵黃囊仔魚的發(fā)育進程

圖1 鱸鯉胚胎發(fā)育注：a.受精卵；b.胚盤隆起；c.2細(xì)胞期；d.4細(xì)胞期；e.8細(xì)胞期；f.16細(xì)胞期；g.32細(xì)胞期；h.64細(xì)胞期；i.多細(xì)胞期；j.囊胚早期；k.囊胚中期；l.囊胚晚期；m.原腸早期；n.原腸中期；o.原腸晚期；p.神經(jīng)胚期；q.胚孔封閉期；r.體節(jié)出現(xiàn)期；s.眼囊出現(xiàn)期；t.聽囊出現(xiàn)期；u.尾芽期；v.肌肉效應(yīng)期；w.耳石出現(xiàn)期；x.心跳期；y.出膜前期；z.正在出膜的仔魚.

3 討 論

3.1 鱸鯉人工繁殖

魚類的生殖行為以生殖內(nèi)分泌機理調(diào)控為主，但其性腺發(fā)育成熟并要順利產(chǎn)卵尚需適宜的外部環(huán)境條件[15]。本研究通過采取仿生態(tài)專池培育、流水刺激、投喂活魚等措施，充分滿足野生鱸鯉的原有生活習(xí)性需求，繁殖期檢查發(fā)現(xiàn)其性腺發(fā)育良好，同自然環(huán)境中的性腺成熟時間基本一致。人工催產(chǎn)的原理是通過注射外源激素刺激下丘腦-垂體-性腺軸,以增強促性腺激素釋放激素和促性腺激素持續(xù)對性腺的作用,并抑制促性腺激素釋放抑制因子的作用,以達到人工繁殖的目的[16]，從而誘導(dǎo)魚類排卵。從催產(chǎn)結(jié)果看，兩組鱸鯉親魚均全部產(chǎn)卵，但注射促黃體素釋放激素類似物A2+地歐酮+絨毛膜促性腺激素(第二組)的催產(chǎn)效果明顯優(yōu)于注射促黃體素釋放激素類似物A2+鯉魚腦垂體(第一組)，雌魚無斷斷續(xù)續(xù)產(chǎn)卵現(xiàn)象，研究結(jié)果表明,在注射催產(chǎn)激素中添加適量的絨毛膜促性腺激素能幫助鱸鯉雌魚順利排卵。分析本研究中兩組催產(chǎn)效果差異顯著的一種可能原因為,第二組選擇了直接作用于性腺且具有誘導(dǎo)排卵功效的絨毛膜促性腺激素和多巴胺抑制劑地歐酮，且組內(nèi)的促黃體素釋放激素類似物A2作用于垂體并可補償繁殖期低水溫對絨毛膜促性腺激素活性的影響[17]；另一種可能原因為鱸鯉親魚對鯉魚腦垂體的敏感性不及其他幾種激素。

圖2 1-10日齡鱸鯉卵黃囊仔魚發(fā)育

3.2 鱸鯉受精卵及胚胎發(fā)育

鱸鯉受精卵卵徑較大，比中華倒刺鲃(Spinibarbussinensis)[18]稍大，與白甲魚(Onychostomasima)相近或略大[19]，但比常見的淡水鯉科魚類[20]大得多。卵的大小對鱸鯉早期發(fā)育和成活具有重要的生態(tài)學(xué)意義，大卵在孵化時有利于度過低溫環(huán)境，豐富的卵黃在仔魚孵化出膜后能延長從內(nèi)源性轉(zhuǎn)向外源性營養(yǎng)的時間，有利于仔魚建立初次攝食、生長、避敵并提高成活率[21]。適宜的水溫是鱸鯉胚胎良好發(fā)育的重要條件，本研究通過恒溫控制系統(tǒng)穩(wěn)定水溫，以免水溫變化幅度過大對鱸鯉胚胎發(fā)育產(chǎn)生不利影響。相同水溫下，鱸鯉胚胎發(fā)育時間比同期增殖放流站內(nèi)的短須裂腹魚(Schizothoraxwangchiachii)提前了63.17 h。相比賴見生等[11-12]報道的鱸鯉胚胎發(fā)育水溫(18±0.5) ℃相對偏低，但孵化出膜時長卻提前了8.63 h。分析原因可能為循環(huán)水系統(tǒng)中早期裂腹魚受精卵孵化時所分泌的孵化酶含量較高，導(dǎo)致鱸鯉受精卵孵化出膜提前，具體原因有待進一步探明。

3.3 鱸鯉卵黃囊仔魚的生長發(fā)育

鱸鯉初孵仔魚的全長大于中華倒刺鲃[18]和白甲魚[19]，但相比其他研究[8-12]鱸鯉初孵仔魚的全長偏小，究其原因可能與親魚培育有關(guān)。本研究中鱸鯉可見口張合和腸道雛形的時間分別為出膜后的第5 d、第7 d，晚于中華倒刺鲃的第3 d、第4 d和白甲魚的第3 d、第6 d。鱸鯉仔魚出膜早，但建立初次攝食的時間晚，這樣其仔魚個體較大、體質(zhì)強壯，有利于捕食，這也是自然選擇的結(jié)果。研究還發(fā)現(xiàn)，0-10日齡鱸鯉卵黃囊仔魚生長總體呈直線上升趨勢，同何勇鳳等[4]對鱸鯉仔魚(0-60日齡)異速生長模式曲線前段相似。其中0-4日齡卵黃囊仔魚生長迅速，體長每天增加0.49 mm以上，特別是1日齡仔魚較剛孵化出膜時體長增加了1.04 mm，5日齡后生長勢頭放緩，該過程與卵黃囊吸收程度保持一致。同時，0-4日齡卵黃囊仔魚的心率逐漸升高，后基本穩(wěn)定。這說明在最初的5 d內(nèi)，內(nèi)源性營養(yǎng)主要用于仔魚快速生長和旺盛的代謝，以后則用于器官的分化和運動[22]。研究結(jié)果表明，鱸鯉卵黃囊仔魚在出膜后的第6 d起便轉(zhuǎn)入混合營養(yǎng)階段，此階段是鱸鯉仔魚培育的第一危險時期，需要適時投喂開口餌料，否則會造成仔魚大量死亡。

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ArtificialPropagation,andEmbryonicandYolk-sacLarvalDevelopmentinPercocyprispingiinYalongRiver

DENG Longjun, GAN Weixiong, ZENG Rukui, ZHANG Hongwei

( Yalong River Hydraulic Development Company Ltd., Chengdu 610051, China )

The wildPercocyprispingiwas reared to spawn induced by injection of hormone to obtain fertilized eggs in this study. The results showed that females injected with LHRH-A2+DOM+HCG ovulated more fluently, with the response time of 58 h, mean fertilization rate of 87.33% and mean hatching rate of 90.75%. Furthermore,the embryonic and yolk-sac larval development were described in detail. Under the water temperature of (16±2) ℃, fertilized eggs were hatched in 117.83 hours with the accumulative temperature of 1855.33 ℃·h.The embryonic development was divided into 7 stages including 26 subphases： fertilized egg, cleavage stage, blastula stage, gastrula stage, neurula stage, organogenesis stage and hatching stage. The yolk-sac larva grew rapidly and endogenously by in the first five days after hatching, turned into the stage of mixed nutrition, a critical stage, since the sixth day, and started to swim horizontally ten days later.

Percocyprispingi; artificial propagation; embryonic development; yolk-sac larval development

S965.199

A

1003-1111(2016)04-0393-05

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.04.014

2015-07-22；

2015-12-07.

雅礱江流域水電開發(fā)有限公司項目(JPIA-201226).

鄧龍君(1982-)，男，工程師，碩士；研究方向：魚類增殖放流.E-mail：dlgdeng@126.com.通訊作者：甘維熊(1984-)，男，工程師.研究方向：魚類增殖放流.E-mail：ganweixiong@ylhdc.com.cn.