李江萍，蔣 玲，李 玲

(1貴陽中醫(yī)學(xué)院 第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，貴州 貴陽 550001；2貴州醫(yī)科大學(xué) 機能實驗室，貴州 貴陽 550004)

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消癢洗劑對急、慢性濕疹動物模型的藥效研究*

李江萍1，蔣 玲1，李 玲2▲

(1貴陽中醫(yī)學(xué)院 第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，貴州 貴陽 550001；2貴州醫(yī)科大學(xué) 機能實驗室，貴州 貴陽 550004)

目的：觀察消癢洗劑對急、慢性濕疹小鼠模型的白介素-1β(IL-1β)，白介素-4(IL-4)和白介素-8(IL-8)的表達(dá)影響，以及其抗炎止癢的效果，闡明其治療急、慢性濕疹的作用機制。 方法：分別采用2，4-二硝基氟苯(DNFB)、2，4-二硝基氯苯(DNCB)致敏建立小鼠急、慢性濕疹模型，分別給予消癢洗劑低、中、高劑量(體積濃度分別為10 %、20 %、40 %)及陽性對照藥(復(fù)方苦參洗劑)(濃度為40 %)干預(yù)，比較各組炎癥因子的變化及其抗炎效果；通過磷酸組胺致癢試驗及二甲苯致炎試驗觀察消癢洗劑的止癢、抗炎效果。 結(jié)果：消癢洗劑各劑量組能顯著減輕ACD小鼠模型的耳腫脹度(P<0.01)并能夠減輕ACD小鼠模型血清IL-1β、IL-8(P<0.01)等炎癥因子的水平；能顯著減輕DTH小鼠模型的耳腫脹度(高、中劑量組P<0.01，低劑量組無差異)，而所有劑量組均能夠減輕DTH小鼠模型血清IL-1β、IL-8(P<0.01)的水平。消癢洗劑高、中劑量組能提高磷酸組胺對豚鼠的致癢閾(P<0.05)；消癢洗劑各劑量組均能顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹(P<0.01)。結(jié)論：消癢洗劑通過降低炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-8的水平來治療急、慢性皮炎濕疹，且止癢及抗炎的效果明顯。

消癢洗劑，急慢性皮炎濕疹，IL-1β，IL-8，IL-4，止癢，抗炎

濕疹是臨床常見的皮膚病之一，是一種由多種內(nèi)外因素引起過敏反應(yīng)的慢性炎癥性皮膚病，多由急性、亞急性濕疹反復(fù)發(fā)作遷延而來，屬變態(tài)反應(yīng)性疾病范疇，約占皮膚科門診患者的20 %左右[1]。近年來其發(fā)病率呈上升趨勢。西醫(yī)臨床多采用抗組胺藥及糖皮質(zhì)激素治療，長期使用可暫時取得良好的療效，但對藥物易產(chǎn)生依賴性，停藥易反復(fù)，延續(xù)數(shù)年[2]。中醫(yī)認(rèn)為，本病與臟腑功能失調(diào)、氣血失和、風(fēng)濕熱毒搏結(jié)有關(guān)。病機為內(nèi)有濕毒蘊結(jié)，外顯血癖阻絡(luò)，久病人絡(luò)，久病傷陰?！爸拱W洗劑”為我院自主研發(fā)的醫(yī)院制劑，由苦參、蛇床子等多味藥組成，全方具有清熱燥濕、消炎殺蟲、祛風(fēng)止癢之功效，注重標(biāo)本兼治，臨床主治急、慢性皮炎濕疹。祖國醫(yī)學(xué)對皮炎濕疹的治療有著豐富的經(jīng)驗，針對辨證分型治療，癥狀的改善與綜合療效均有良好效果，且安全，毒副作用少，在臨床上很值得研究和推廣，具有良好的應(yīng)用前景。

1 實驗材料及設(shè)備

1.1 實驗動物

昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g(由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(黔)2012-0001)；豚鼠(貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，合格證號：SCXK(黔)2012-0001)。

1.2 實驗藥物

消癢洗劑由蛇床子、苦參等數(shù)味中藥材混合水提，濃縮而制成(每1 mL消癢洗劑含生藥量0.299 g)(貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部制劑室，生產(chǎn)批號：20150617)；復(fù)方苦參洗劑(浙江中法制藥，生產(chǎn)批號：20150124)。

1.3 實驗試劑

2，4-二硝基氟苯(DNFB)(德國Merck公司，分析純)；2，4-二硝基氯苯(DNCB)(德國Merck公司，分析純)；IL-1β，IL-4及IL-8 ELLSA試劑盒(上海滬鼎生物有限公司)；磷酸組胺(上海士鋒生物，生產(chǎn)批號：A0165-10g)；二甲苯(天津志遠(yuǎn)化學(xué)試劑公司，生產(chǎn)批號：20131116)。

1.4 實驗設(shè)備

AE200S電子分析天平(美國setra公司)；千分尺(新上量量具有限公司，精度10 μm)；打孔器(得力文具)。

2 實驗方法

2.1 消癢洗劑對過敏接觸性皮炎(ACD)的藥效學(xué)研究

取60只昆明種小鼠(雌雄各半)隨機分為6組：空白組、模型組、消癢洗劑高劑量(體積濃度40 %)、中劑量(濃度20 %)、低劑量(濃度10 %)組及陽性藥對照組(復(fù)方苦參洗劑，濃度40 %)，每組10只，腹部脫毛(面積3×3 cm)以1 % DNFB溶液0.05 mL涂擦致敏，實驗藥物干預(yù)從致敏后開始以耳廓外涂給藥，0.05 mL/次，bid，連續(xù)5 d，模型組給予等量蒸餾水處理，5天后再以1 % DNFB涂擦小鼠耳部激發(fā)，測定各鼠左右耳同部位的厚度差值，再用8 mm打孔器取同部位的左右兩耳片稱重計算左右耳片重量之差值，比較各實驗組間的腫脹度差異。摘眼球取血處死實驗動物，同時采用Elisa方法測定血清中IL-1β，IL-4及IL-8炎性細(xì)胞因子的量，比較組間差異。

2.2 消癢洗劑對遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(DTH)的藥效學(xué)研究

取60只昆明種小鼠(雌雄各半)隨機分為6組：空白組、模型組、消癢洗劑高中低3個劑量組(濃度同2.1所述)及陽性藥(復(fù)方苦參洗劑)對照組，每組10只，以7 % DNCB溶液0.05 mL涂擦耳部致敏，隔兩天激發(fā)一次，共激發(fā)4次，藥物干預(yù)從致敏后開始涂搽耳部給藥，0.05 mL/次，bid，連續(xù)10 d，模型組給予等量蒸餾水處理，待末次激發(fā)后觀察各鼠耳厚及耳紅腫情況，并進(jìn)行評分(無水腫無紅斑為0分；輕度水腫或輕微可見紅斑為1分；中度水腫或中度紅斑為2分；重度水腫或重度紅斑為3分；水腫紅斑同時存在為4分)；同時采用Elisa方法測定動物血清樣本中IL-1β，IL-4及IL-8等炎性因子，比較組間差異。

2.3 止癢實驗

采用48只豚鼠，雌雄各半，隨機分為6組：空白組、模型組、消癢洗劑高中低3個劑量組(濃度同2.1所述)及陽性藥(復(fù)方苦參洗劑)對照組，實驗時先將豚鼠后右足背剃毛。試驗當(dāng)日，用粗砂紙擦傷右后足背剃毛處，使之發(fā)紅，但以不出血為度，面積1 cm2，給予實驗用藥1次(0.05 mL)然后開始在創(chuàng)面滴0.01 %磷酸組胺液(0.05 mL)，以后每隔3 min依0.02 %、0.03 %、0.04 %遞增濃度，直至出現(xiàn)豚鼠回頭添有后足，以最后出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足時所給予的磷酸組胺總量為致癢閾，比較各組致癢閾的差異。

2.4 抗炎實驗

取60只昆明種小鼠(雌雄各半)隨機分為6組：空白組、模型組、消癢洗劑高中低3個劑量(濃度同2.1所述)組及陽性藥(復(fù)方苦參洗劑)對照組，每組10只，給鼠右耳涂搽1次實驗用藥(0.05 mL)，1 h后再給鼠耳涂二甲苯致炎(0.05 mL)，左耳作對照。15 min后用打孔器取雙耳相同部位稱重。以左右耳重量之差作為腫脹度，比較各組腫脹度的差異。

2.5 統(tǒng)計學(xué)處理

實驗數(shù)據(jù)以表示，運用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析，采用LSD法行組間比較，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 實驗結(jié)果

3.1 消癢洗劑對小鼠ACD模型的干預(yù)結(jié)果

模型組與空白組相比耳重量差異、耳厚度差異均明顯增加，有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。消癢洗劑高、中、低劑量組和復(fù)方苦參洗劑組均能減輕小鼠耳重量差、耳厚度差值，與模型組相比，有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(高、中劑量組P<0.01，低劑量組P<0.05)(表1)。采用Elisa法檢測血清IL-1β、IL-4、IL-8水平。模型組與空白組比較，IL-1β、IL-8有明顯的升高(P<0.05)，消癢洗劑干預(yù)后，出現(xiàn)劑量依賴性的下降趨勢，從數(shù)據(jù)結(jié)果能明顯看出消癢洗劑能較強抑制IL-1β、IL-8水平；而IL-4水平變化不明顯，表明消癢洗劑能夠減輕小鼠ACD模型血清IL-1β、IL-8等炎癥因子的水平(表2)。

組 別耳重量差/mg耳厚度差/mm空白組0.015±0.0480.004±0.002模型組9.88±0.3580.127±0.005苦參洗劑組5.57±0.371*0.035±0.007*消癢洗劑高劑量5.91±0.412*0.036±0.002*消癢洗劑中劑量6.45±0.375*0.047±0.009*消癢洗劑低劑量8.12±0.274*0.070±0.016*

備注：* 與模型組比較，P<0.01

表2 消癢洗劑對ACD模型小鼠血清炎癥因子水平的影響

備注：* 與模型組比較，P<0.01

3.2 消癢洗劑對DTH動物模型的干預(yù)結(jié)果

結(jié)果表明消癢洗劑中、高劑量組和復(fù)方苦參洗劑組與模型組相比，均具有顯著差異(P<0.05)。這表明消癢洗劑能夠減輕小鼠慢性皮炎模型耳腫脹度及水腫紅斑評分值，且具有劑量依賴性(表3)。模型組與空白組比較，IL-1β、IL-8有明顯的升高(P<0.05)，消癢洗劑干預(yù)后，出現(xiàn)劑量依賴性的下降趨勢，從數(shù)據(jù)結(jié)果能明顯看出消癢洗劑能較強抑制IL-1β、IL-8水平；而IL-4水平變化不明顯，表明消癢洗劑能夠減輕小鼠DTH模型血清IL-1β、IL-8等炎癥因子的水平(表4)。

表3 消癢洗劑對DTH模型小鼠耳腫脹和耳紅斑水腫評分值的影響

備注：* 與模型組比較，P<0.01

表4 消癢洗劑對DTH模型小鼠血清炎癥因子水平的影響

備注：* 與模型組比較，P<0.01

3.3 消癢洗劑止癢試驗結(jié)果

空白對照組和溶媒對照組豚鼠舔體反應(yīng)較為明顯，在給予磷酸組胺過程中僅有1只動物未出現(xiàn)舔體反應(yīng)；陽性對照組有3只動物未出現(xiàn)舔體反應(yīng)；消癢洗劑三個劑量組均有接近半數(shù)動物未出現(xiàn)舔體反應(yīng)。各組計算磷酸組胺總量，與空白對照組和溶媒對照組相比，消癢洗劑高、中劑量組對外源性磷酸組胺均有較為明顯的抑制作用，且高、中劑量組優(yōu)于陽性藥物對照組(表5)。

表5 消癢洗劑抗磷酸組胺止癢試驗豚鼠舔體反應(yīng)情況

備注：* 與空白對照組比較，P<0.05

3.4 消癢洗劑抗炎試驗結(jié)果

消癢洗劑高、中、低劑量組和復(fù)方苦參洗劑組均能減輕二甲苯所致的鼠耳炎性腫脹程度，其耳片重量差值與模型組相比，均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)(表6)。

組 別耳片重量差/mg腫脹抑制率/%空白組0.03±0.012—模型組9.56±0.78—苦參洗劑組5.44±0.46*43.09消癢洗劑高劑量5.8±0.24*39.33消癢洗劑中劑量6.7±0.71*29.92消癢洗劑低劑量8.0±0.1316.32

備注：* 與模型組比較，P<0.01

4 討論

濕疹、皮炎(包括接觸性皮炎、過敏性皮炎、自敏性皮炎、傳染性濕疹樣皮炎等)是臨床常見、多發(fā)的皮膚病，約占皮科門診量的15 %～30 %，其中尤以急性濕疹、皮炎多見，是國內(nèi)外皮膚性病臨床及基礎(chǔ)研究的重點課題之一[3-5]。根據(jù)現(xiàn)代研究認(rèn)為其發(fā)病機理與I、IV型變態(tài)反應(yīng)、細(xì)菌或真菌感染有關(guān)，臨床主要表現(xiàn)為過敏性炎癥和劇烈騷癢癥狀，治療上只能以抗變態(tài)反應(yīng)、抗炎及止癢來說明所研究藥物是否具有治療濕疹的作用。中醫(yī)認(rèn)為皮炎濕疹的病因是以濕邪為主，并可兼風(fēng)挾熱?！帮L(fēng)濕熱邪久滯，耗血傷陰，化燥生風(fēng)，肌膚失養(yǎng)”是本病的病機特點。結(jié)合消癢洗劑其功能主治為清熱燥濕、涼血解毒、祛風(fēng)止癢，主要用于濕疹、銀屑病、丘疹性蕁麻疹、結(jié)節(jié)性癢疹、疥瘡、皮膚瘙癢癥等瘙癢性皮膚病。近年來報道的皮炎濕疹模型大致可分為變態(tài)反應(yīng)性接觸性皮炎及遲發(fā)型濕疹模型、光變態(tài)反應(yīng)性皮炎模型與特應(yīng)性皮炎模型三類[6]，故本實驗主要采用了變態(tài)反應(yīng)性接觸性皮炎及遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)性皮炎濕疹模型來考察消癢洗劑的治療效果及其作用機制，并且針對疾病的常見癥狀瘙癢及炎性紅腫具體觀察了藥物的對癥療效，從標(biāo)本兼治兩方面充分闡明消癢洗劑的藥效。

消癢洗劑方中的君藥取用苦參，有清熱燥濕、殺蟲、利尿的作用，苦參能抑制動物被動和主動皮膚過敏反應(yīng)，并能減少致敏動物血清抗體的形成，對過敏性疾病如蕁麻疹、急性濕疹和陰部濕疹及其它皮炎有一定療效[7]。臣藥黃柏具有調(diào)節(jié)免疫功能，抗菌、抗炎、解熱等作用。臣藥地膚子水提取物能抑制單核巨吞噬功能、從而抑制快發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(ADC)及遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)，臨床常用接觸性皮炎等變態(tài)反應(yīng)性皮膚病[8-10]。本實驗結(jié)果顯示消癢洗劑各劑量組能顯著減輕ADC及DTH小鼠模型的炎性組織腫脹程度，說明其對ADC及DTH所致的皮炎濕疹是有治療效果的。白細(xì)胞介素-1(IL-1)又稱淋巴細(xì)胞激活因子，是急性期免疫反應(yīng)的主要調(diào)節(jié)因子，它分為IL-1α和IL-1β兩種，其中血液中的IL-1主要為單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞所產(chǎn)生的IL-1β，正常人血液中不含IL-1β或者含量很低，其含量升高表明機體內(nèi)有組織損傷或者感染產(chǎn)生。IL-4與IL-3協(xié)同可維持和促進(jìn)肥大細(xì)胞的增殖，在某些過敏反應(yīng)性疾病發(fā)生中具有一定的意義。IL-8是趨化性細(xì)胞因子，可以促進(jìn)炎癥細(xì)胞趨化和誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，參與細(xì)胞免疫及遲發(fā)型超敏型炎癥的發(fā)生。實驗結(jié)果顯示消癢洗劑確實能降低ADC及DTH小鼠模型血清IL-1β和IL-8的含量，證明其作用機制是通過減輕機體急性期免疫反應(yīng)及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的感染程度，進(jìn)而減輕炎癥造成的皮膚組織損傷，屬于對因治療。但是其對IL-4的影響不明顯，考慮是因為IL-4對肥大細(xì)胞的刺激需要有IL-3的配合才能完成，故我們的研究還應(yīng)進(jìn)一步結(jié)合探討消癢洗劑是否能調(diào)節(jié)IL-3的水平才能評價。另外，通過實驗的驗證，消癢洗劑能顯著提高磷酸組胺致癢豚鼠的致癢閾值，并能減輕二甲苯所致的鼠耳炎性腫脹程度，說明其對皮炎濕疹兩大主要臨床表現(xiàn)瘙癢、炎性水腫具有良好的控制效果，屬于對癥治療。

綜上所述，本實驗以中西醫(yī)理論對皮炎濕疹發(fā)病原因為變態(tài)反應(yīng)性炎性皮膚病為依據(jù)對消癢洗劑進(jìn)行藥理學(xué)方面的研究，闡明了其通過調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng)相關(guān)的炎癥因子水平，起到抗炎、止癢、減輕水腫等臨床治療效果，為臨床應(yīng)用消癢洗劑治療急、慢性皮炎濕疹提供基礎(chǔ)理論依據(jù)，促進(jìn)了中醫(yī)藥治療皮炎濕疹的發(fā)展，減輕了患者痛苦。但由于本研究實驗條件和時間限制，僅從抗速發(fā)型過敏反應(yīng)及遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、抗炎及止癢實驗進(jìn)行了研究，尚沒有進(jìn)行抗菌、病理改變等方面的研究，不能充分反映藥物治療該病的其他作用機制，因此還能再開辟新方向，以期為臨床應(yīng)用提供更加充分的實驗依據(jù)。

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▲通訊作者：李 玲，藥理學(xué)碩士，教授，從事藥理學(xué)研究。

Pharmacodynamics study on antipruritic lotion on animal model with acute and chronic eczema*

LI Jiangping1，JIANG Ling1，LI Ling2▲

(1No.2HospitalAffiliatedtoTCMCollegeofGuiyaug，Guiyaug550001，China；2FunctionLaboratoryofGuizhouMedicalUniversity，Guiyaug550004，China)

In order to clarify the cure mechanism of the antipruritic lotion on acute and chronic eczema，we observed the effects of the antipruritic lotion on the expression of interleukin-1β(IL-1β)，interleukin-4(IL-4)and interleukin-8(IL-8)in mice with acute and chronic eczema，and its anti-inflammatory and antipruritic effects.2，4-dinitro Fluor benzene(DNFB)and 2，4-dinitrochlorobenzene(DNCB)were used to establish the mice model with acute and chronic eczema.Then antipruritic lotion(volume concentration of 10 %，20 % and 40 %)and positive control drug(Compound Kushen Lotion，concentration of 40 %)were given to the mice，and the change of inflammatory factors in each group and the anti-inflammatory effect of the lotions were compared.Phosphoric-acid-histamine-induced itch test and xylene-induced inflammation test were carried out to observe the antipruritic and anti-inflammatory effect of the antipruritic lotion.The results showed that，the antipruritic lotion of all doses could significantly reduce the ear swelling of ACD mice(P<0.01)，and could reduce the serum level of IL-1β and IL-8 in ACD mice(P<0.01).The antipruritic lotion of high and medium doses could significantly reduce the ear swelling of DTH mice(P<0.01)，and the lotion of all doses could reduce the serum level of IL-1β and IL-8 in DTH mice(P<0.01).The antipruritic lotion of high and medium doses could rise the histamine-induced itch threshold in guinea pigs(P<0.05).The antipruritic lotion of all doses could significantly inhibit the xylene-induced ear swelling in mice(P<0.01).In conclusion，the antipruritic lotion cured acute and chronic eczema by reducing IL-1β and IL-8 level，and its antipruritic and anti-inflammatory effects were significant.

antipruritic lotion，acute and chronic eczema，IL-1β，IL-8，IL-4，antipruritic，anti-inflammatory

R

B

2016-08-18；

2016-08-31

貴州省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究課題(編號：QZYY-2014-026)。

李江萍，藥學(xué)學(xué)士，副主任藥師，從事臨床藥學(xué)研究。